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SEMINÁRIO VIROLOGIA
CAROLINE CARNIEL HILLER
UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SULFACULDADE DE VETERINÁRIA
VIROLOGIA BÁSICA
Astrovírus
◦ Vírus pequenos
◦ Circulares
◦ Não envelopados
◦ Morfologia “like star”
◦ Diâmetro: 25-35 nm.
◦ Genoma linear
◦ RNA positivo (7 kb)
Astrovírus
◦ Classificação
◦ Família Astroviridae
◦ Gênero Avastrovirus
◦ Dividido em espécies de acordo com o hospedeiro que se originou: ◦ Perus: turkey astrovirus tipo 1 (TAstV-1) e tipo 2 (TAstV-2)
◦ Galinhas: avian nephritis virus (ANV) e o chicken astrovirus (CAstV)
◦ Patos: DAstV tipo 1 (DAstV-1) e tipo 2 (DAstV-2)
◦ Atual (estrutura do aminoácido do capsídeo viral)◦ Três espécies de Avastrovirus: tipo 1,2 e 3.
Astrovírus◦ Enterites � várias espécies
◦ Aves � enterite + queda no crescimento + alta mortalidade◦ Descrito em lotes saudáveis de aves e perus
◦ Chicken astrovirus (CAstV)
◦ Distribuição mundial
◦ Nem sempre associado a sintomas
◦ Galinhas◦ RSS (Runting-Stunting Syndrome)
◦ “pintos brancos”
Objetivo
◦ Reportar o isolamento de CAstV e suas características patológicas em ovos embrionados de galinhas (CEE) de aves SPF proveniente de lotes com diarreia e RSS (runting–stunting syndrome).
Aves SPFOvos embrionados
(CEE)
Lotes comerciais com RSS
RSS
◦ Primeira semana de vida
◦ Queda no ganho de peso◦ Aumento conversão alimentar
◦ Redução da uniformidade
◦ Diarréia
◦ Infecções secundárias
Cepas virais• 280 amostras (conteúdo intestinal de frangos de corte ou matrizes com sinais de doenças
entéricas ou RSS) 2008 a 2010• SP/RS/SC
Diagnóstico molecular para vírus entéricos• CAstV, ANV, REO, ROTA, ADENO Grupo I (FAdV-1), IBV e parvovirus de galinhas
(ChPV)
Confirmação • 14 amostras positivas paras CAstV � RT pcr e sequenciamento
Inoculação em CEE de SPF
Materiais e métodos
Materiais e métodos
◦ CAstV inóculo
◦ Primeira passagem: ◦ Mesma suspensão da prova molecular◦ Adição de ATB e antifúngico
◦ Segunda e terceira passagem: PBS + macerado de gema e embrião
◦ Ovos embrionados de aves SPF◦ 07 dias de incubação SPF White Leghorn◦ Incubadora automatizada◦ Controle de temperatura e umidade
Materiais e métodos◦ Isolamento viral
◦ Primeiro grupo: 07 dias (formação e diferenciação embrionária do intestino)
◦ Segundo grupo: 14 dias (intestinos mais desenvolvidos e funcionais)
◦ Inoculo de 0.2 mL via saco da gema
◦ Controle negativo: PBS
◦ Triplicata
◦ Viabilidade embrionária: diária por 05 dias◦ Descarte de ovos com mortalidade embrionária 24h pós-inoculação
◦ Após 24h: necropsia
◦ Ovos viáveis até o quinto dia: “eutanásia”� necropsia
◦ Remoção da cabeça, asas e pernas � macerado para a próxima passagem � inoculo
Materiais e métodos
◦ Caracterização macroscópica
◦ Presença de lesões características de infecções virais◦ Deformidades
◦ Nanismo
◦ Enrolamento
◦ Hemorragias
◦ Edemas
◦ Aspecto gelatinoso
Classificação em positivo ou negativo
Resultados
◦ Confirmação do isolamento viral◦ PCR e RTpcr
◦ electron microscopy negative staining (ME) “Microscopia eletrônica de coloração negativa”
◦ Lesões
CAstV
Resultados
◦ Isolamento viral◦ Visualização de partículas virais na ME
◦ Lesões macroscópicas nos embriões
◦ PCR e RT PCR
◦ Todas as amostras foram testadas: CAstV, ChPV, ANV, IBV, FAdV-I, ROTAVIRUS, REOVIRUS e NDV.◦ 08 amostras positivas para CAstV e negativas para os demais vírus.
◦ 07 e 14 dias dos CEE
◦ 07 dias � lesões significativas / 14 dias � sem lesões
◦ Primeira passagem
Resultados
◦ Lesões nos embriões Grupo 01 (07 dias)
◦ Não houve mortalidade embrionária
◦ Grupo 02 (14 dias): não houve lesões e nem mortalidade
Discussão
◦ Doenças entéricas relação com CAstV � isolamento em aves com problemas entéricos
◦ Inoculação aos 07 e 14 dias � bons resultados para CAstV
◦ Isolamento de CAstV de fezes � vírus circulante no Brasil ◦ Não há relatos em outros países de América Latina
◦ Inoculação via saco da gema � efetiva no isolamento
◦ Não houve mortalidade em nenhuma das passagens nos dois grupos � CAstV não produz letalidade embrionária.
◦ Técnicas moleculares – auxiliam na identificação
◦ Primeiro isolado no Brasil de CAstV em ovos embrionados de aves SPF provenientes de galinhas com sintomatologia entérica.
Obrigada!