Szakmai Gyakorlat

Srajner Péter Ferenc (IUVE92)

2011.08.20.

1

Nyári szakmai gyakorlatomat az Országos Epidemiológiai Központ (OEK), Mikológia

részlegén töltöttem el, ahol 6 hetet, július 27-től augusztus 7-ig voltam. A hat hét alatt

azonban többször voltam a Táptalajkonyhán is, így az ott dolgozók munkájába is betekintést

nyerhettem.

Az OEK egy épület együttes, amely Budapest IX. kerültet Gyáli út 2-6 címen

helyezkedik el. Az intézményben a Mikológia osztálynak egy labor ad helyet az E. épület első

emeletén. Az osztály főleg különböző orvosi diagnosztikai vizsgálatokkal foglalkozik, de azok

mellett még rengeteg egyéb dologgal is dolgoznak.

Az orvosi diagnosztikai vizsgálatokhoz, a betegtől való minták nagyon sok formában

jöhetnek. Például légzőszervi váladékok, vizelet és peritoneális folyadék, emésztőszervi

váladékok, genitális váladékok, idegrendszeri minták hemokultúra, dermatológiai minták,

kenetek, szövettani metszet és vér, vérsavó. A kapott mintából tenyészeteket készítenek,

majd ezek és az így nyert minták vizsgálatával határozzák meg az egyes gombákat.

Candida albicans PLT táptalajon

A különböző tenyészeteket majd mikroszkópos vizsgálatoknak vetik alá és különböző

jellegzetességeket keresnek (klamidospóra képzés, pseudomicéliumok, a spórák alakja…). A

hagyományos mikroszkóp mellett sztereó mikroszkópot is használnak a gombatelepek

felületi vizsgálatára. A különböző mikroszkópok mellett a vizsgálatokhoz használnak egyéb,

2

speciális táptalajokat, melyek a bennük lévő különleges anyagok miatt segítenek a gombák

felismerésében. Ilyen például a ChromAgar, amely a különböző Albicans fajok

felismerésében segít. Az ilyen agaron tenyésző telepek különböző színt produkálnak, így

könnyítve meg a fajok differenciálását.

ChromAgar

Ha a mikroszkópos és ChromAgaros vizsgálat eredménytelenül végződik, akkor különböző a

gombák vizsgálatát különböző „kit”-ekkel folytatják. Itt rendszerint az úgynevezett Auxacolor

kiteket használják. Ezek a kitek a gombák anyagcsere folyamataira épülnek és így tudják

meghatározni az eredményt. Az Auxacolor eredményét egy kód adja, amit aztán egy

adatbázissal egyeztetve megtudhatjuk, hogy mely gombáról van szó.

Az azonosításon kívül, rezisztencia vizsgálatot is végeznek az osztályon. Ilyen

módszerek például a korongteszt és az E-teszt. Ezek során antimikotikumot juttatnak a

tenyészetbe, és a tenyészet antimikotikumra való reagálásából tudják megállapítani az adott

gomba faj rezisztenciáját az adott szerre. Minél jobban szegényedik a tenyészet az anyag

hatására, a gomba annál kevésbé rezisztens az adott szerrel szemben.

3

E-test Korongteszt

Korongteszt alkalmával, az előírt inkubálás után kapott körök átmérőjének leolvasása kapunk

adatot a rezisztenciáról. Míg az E-teszt folyamán, a tesztcsík tartalmaz egy skálát, melyen az

adott antimikotikum helybeni koncentrációját tüntetik fel. Azt a helyet megkeresve, ahol már

nem nő gomba és ott leolvasva a koncentrációt, kaphatjuk meg az eredményt és

határozhatjuk meg a gomba ellenállóságát. A rezisztencia mértéke fontos adat az

orvosoknak, hogy a megfelelő gyógyszert és a megfelelő mennyiségben tudják felírni a

betegeknek. A legfontosabb antimikotikumok: amphotericin B, voriconazol, fluconazol,

itraconazol, ketoconazol, miconazol, nystatin, econazol, clotrimazol.

Az osztályon szerológiai vizsgálatokat is végeznek. A szerológia vizsgálatok végzéséhez

használt módszerek az immundiffúzió, Counter (ellenáramú) immunelektroforézis (CIE),

ELISA, immunfluoreszcencia, latex agglutináció. Az osztályon leggyakrabban használt

módszer az ellenáramú immunoelektroforézis. A módszer alapja az a jelenség, hogy az

antigének, amennyiben az izoelektromos pontjuk alacsonyabb, mint a puffer pH-ja, az anód

felé, míg az antitestek az endoozmózis révén a katód felé áramlanak. A CIE előnye, hogy

gyors, gazdaságos és érzékeny. Hátránya viszont, hogy mivel a komponensek nem a

koncentráció-gradiensüknek megfelelően áramlanak, precipitáció csak akkor képződik, ha az

antigén és az antitest egyenlő mennyiségben van a lyukak közötti térségben. Szekunder

precipitátumok felhalmozódására a rövid futtatási idő miatt nincs lehetőség. Az antitestekkel

egy irányban áramló antigének nem tudnak precipitációt adni. A vizsgálat értékelése során

megvizsgáljuk a tárgylemezt. Az antigén és a szérum között megjelenő csík egyértelmű

4

pozitív eredményt jelent. A CIE értékelése nagyban függ a reakció körülményeitől, ezért a

laboratóriumban belső standardizálás az egyik legfontosabb teendő.

Festett, pozitív CIE lemez

A CIE értékelése nagyban függ a reakció körülményeitől, ezért a laboratóriumban belső

standardizálás az egyik legfontosabb teendő.

A labor rendelkezik egy mintavételi szolgáltatással is, így gyakran járnak oda betegek,

hogy mintát vegyenek tőlük (a legtöbbször a köröm tájékáról). Ilyenkor általában a

dermatofiton gombák jelenlétét vizsgálják. Az így kapott mintát feldolgozzák. Egy részét

elteszik tenyésztésre, míg a másik részéből egy káliumhidroxidos kenetet készítenek. Ezt

mikroszkóppal megvizsgálva tudják megerősíteni, hogy a beteg tényleg fertőzött-e valamely

gombával (megtalálható-e a gombafonal a mintában, vagy sem). Majd az eltett tenyészet

inkubációja után, a kifejlődött mintából és annak vizsgálatából tudnak pontos információt az

adott gombáról.

Onychomycosis, Körömgomba

5

A laborban végeznek még különböző környezethigéniás vizsgálatokat. Ezek során

mintát az előírt helyen a kültéri és beltéri levegőből, az ott található tárgyakról, felületekről

és vizsgálják azok gombaszennyezettségét. A vizsgálatok kvalitatív, kvantitatív és

szemikvantitatív módszerekkel történnek. A minták különböző lakóterekből, üzemi és ipari

környezetből, kórházakból, fürdőkből és egyéb helyekről származnak. A vizsgálatok során

információt kaphatunk az adott hely gombaszennyezettségének mértékéről.

Rudas fürdő, folyosó Rudas fürdő, kupola

Persze a környezetünkben mindenhól megtalálhatóak a gombák, így egy adott helyet csak

akkor lehet gombaszennyezettnek minősíteni, ha a beltéri levegő spórakoncentrációja jóval

meghaladja a kültéri levegő spórakoncentrációját.

Az osztályon egyéb tevékenységeket is végeznek. Egyik feladatuk például egyes

patogén gombákat tartalmazó törzsgyűjtemény fenntartása. Más feladatok, például felületek

penészállóságának vizsgálata. A penészállóság vizsgálata fontos lehet az építészetben, azon

belül is a gyorsépítésű házak gipszkarton borításában. Ugyanis a gipszkarton rendkívül

könnyen penészedik, ezért fontos lenne egy olyan felületkialakítása, amelyen nem tudnak

megtelepedni a különböző penészgombák.

Az osztály egyéb feladatai közé tartoznak még egyes ritka mikózisok vizsgálata,

diagnosztikája, valamit az oktatás és továbbképzés és akkreditációs minősítések vizsgálata és

szakmai felügyelet.

A szakmai gyakorlat egy idejét az intézmény táptalajkonyháján töltöttem el, így oda is

kaptam egy kis betekintést.

A táptalajkonyha feladata, hogy elkészítse a legkülönfélébb táptalajokat, melyre az

intézmény osztályainak szükségük lehet. Vannak olyan táptalajok, melyeket több száz literes

nagyságrendben készítenek, de egyes különleges táptalajok elkészítése rengeteg időt és

6

odafigyelést igényel, ezeket a táptalajokat kisebb mennyiségben és ritkábban készítik el,

mint társaikat. A konyha manapság csak az OEK számára szolgáltat táptalajokat, ám

régebben az egész ország területére szállították a termékeiket.

Az osztály több helységből áll. Az egyik legfontosabb a méregszoba, ahol találhatóak azok a

legkülönfélébb vegyszerek és egyéb anyagok, melyek a táptalajok kikeveréséhez

szükségesek. Minden egyes táptalajhoz tartozik egy megfelelő recept, ami alapján

elkészíthető az adott táptalaj. Másik helyiség a „konyha” ahol az agart főzik. A főzés után az

agart kiöntik, és bekerül a sterilizálóba. Onnan a táptalajt átviszik a steril szobába, ahol azt

kiöntik a megfelelő formába, és a csomagolják őket. Ezek után a táptalajokat elszállítják a

megfelelő helyükre.

Hat hetes szakmai gyakorlatom során sokat tanulhattam az intézmény működéséről

az ott dolgozó emberek munkájáról és feladataikról. Remélem, hogy az ott szerzett

tapasztalatok hasznosak lesznek későbbi tanulmányaim, majd a munkavállalásom során.

7

Sabouraud-dextróz (glükóz)-agar SDAglükózpepton 10,0 gagar-agar 20,0 gdeszt. víz 1000 mlSterilezés: 120°C-on, 10 perc, pH=5,6

Dextróz-pepton-agar DPAglükóz 10,0 gpepton 20,0 gNaCl 5,0 gagar-agar 15,0 gdeszt. víz 1000 mlSterilezés: 120°C-on, 10 perc, pH=7

Csillag-féle melaszos-agarmelasz (cukorgyári) 100,0 gKH2PO4 5,0 gMgSO4.7H2O 2,0 gCaHPO4.2H2O 0,5 g(NH4)2PO4 0,5 gagar-agar 20,0 gdeszt. víz 800 mlSterilezés: 110°C-on, 60 perc, pH=5,0

Czapek-Dox-agar (penészgombák identifikálásához)NaNO3 3,0 gK2HPO4 1,0 gMgSÓ4.7H2O 0,5 gKCl 0,5 gFeSO4 0,01 gdeszt. víz 1000 mlszaharóz 30,0 gagar-agar 20,0 gA karamellizáció elkerülésére a cukrot csak a végső sterilezés előtt adjuk hozzá.Sterilezés: 120°C, 20 perc, pH=6,8

Sabouraud-cycloheximide-chloramphenicol-agarglükóz 20,0 gpepton 10,0 gagar-agar 20,0 gchloramphenicol 40,0 mgcycloheximide (actidion) 0,5 gdeszt. víz 1000 mlAz antibiotikumokat 5 ml alkoholban oldva csak közvetlen lefejtés előtt adagoljuk a táptalajhoz.Sterilezés: 120°C-on, 10 perc, pH=6,6

Malátakivonat-agarmalátakivonat 30,0 gpepton 5,0 gagar-agar 15,0 gSterilezés: 121°C-on, 10 perc, pH=5,6

Kukoricaliszt-agarkukoricaliszt 40,0 gagar-agar 20,0 gTween 80 10 mldeszt. víz 1000 mlSterilezés: 121°C-on, 15 perc

Burgonya-glükóz-agarburgonyakivonat 200 g burgonyábólglükóz 20,0 gagar-agar 15,0 gdeszt. víz 1000 mlSterilezés: 110°C-on, 15 perc, pH=5,7

Pagano-Levin-Trejo-agarpepton 10,0 gglükóz 40,0 gagar-agar 20,0 gdeszt. víz 1000 mlAz egészet felfőzzük, 110°C-on autoklávozzuk 30 percig. Utána lehűtjük 50°C-ra, majd hozzáadjuk a következő anyagokat:yeast extract 1,0 gneomycin 0,2 gTTC 0,013 gpH=7,2

Nigermagos-agardextróz 20,0 gKH2PO4 1,0 gMgSO4 0,5 gKreatinin 1,0 gagar-agar 15,0 gnigermag 50,0 gdeszt. víz 1000 mlA porított nigermagot keverjük el a víz egy részében, a maradék vízben az egyéb komponenseket oldjuk fel, majd a két részt keverjük össze.Autoklávozás (110°C, 30 perc) után 50°C-ra hűtve adjuk hozzá az alábbi adalékokat:Penicillin 20 000 NEStreptomycin 40 000 NEChloramphenicol 0,1 gDifenil (20 ml absz. alkoholban)1,0 g

8