TD 1les ckis et la différenciation des

entérocytes

Rappel

MigrationDifférenciation

Rôle important de la Matrice extracellulaire dans la différenciation intestinale.

Mais elle n’est certainement pas le seul stimulus de différenciation

Autre hypothèse: le processus est dirigé par une horloge moléculaire intracellulaire.

  p27(Kip1) is an inducer of intestinal epithelial

cell differentiation.

Quaroni A, Tian JQ, Seth P, Ap Rhys C.

● Section of Physiology, Cornell University, Ithaca, New York 14853, USA

● Am J Physiol Cell Physiol. 2000 Oct;279(4):C1045-57.

balance

prolifération différenciation

Cyclin-dependent kinase inhibitors (CKI)

Il en existe plusieurs: p27 Kip1 (p27), p21 Cip1/WAF1 (p21), p16…

Corrélation entre l’expression de cki et le degré de différenciation.– surexpression de p21 dans les cellules intestinales différenciées

– p27 dans les kératynocytes: l’augmentation de l’expression de p27 est concomittant avec la différenciation. Un oligonucléotide antisens de p27 inhibe la différenciation.

– Rôle de p27 dans la différenciation des cellules intestinales?

Méthode

● Utilisation de la lignée HIEC6: cellules issues de cryptes

● Surexpression par infection de:● Vecteur seul Adnull● p16 Adp16● p21 Adp21● p27 Adp27

Analyse de la prolifération, des différentes phases du cycle cellulaire,de la morphologie des cellules, de l’expression de marqueurs de différenciation

Contrôle de l’expression des ckis

Les cellules sont infectées à différentes concentrations d’adenovirus.Après 24 heures analyse des différentes protéines par Western blot

Contrôle de l’expression des ckis

• Analyse par immunocytochimie de l’expression des ckis

Conclusions

● L’infection des cellules par l’adenovirus + cDNA exogène induit l’expression des ckis

● La surexpression de P21 entraine l’expression de P27 (P27 sous le contrôle de p21?)

Ckis et prolifération

Incorporation de thymidine tritiée 24 heures après infection

Utilisation de la BrdU

Brdu (bromodeoxyuridine)

Ac X-Brdu

Ac X-Ac X-Brdu

Ckis et prolifération

B: effet dose de l’adenovirus C étude cinétiquesur la prolifération

Conclusions

● P16, P21 et P27 inhibent la prolifération● de façon dose-dépendante.● Plus d’efficacité pour P27, p21 puis P16● L’effet de P27 est irréversible

Surexpression des cki et cycle cellulaire

Pic G1-G0

Pic S

Intensité de fluorescenceContenu en ADN

Nom

bre

de c

ellu

les

Cki et cycle cellulaire

Conclusions

● P16, P21 et P27 augmentent la quantité des cellules en phase G0/G1et diminue le nombre de cellules en phase S

Cki et morphologie

Conclusions

● L’expression des CKI entraîne:● p16: cellules polygonales mais pas de

microvillosité● p27: cellules polygonales avec présence de

nombreuses microvillosités.● p21: 20-40% des cellules sont polygonales avec

des microvillosités.● p27 induit une différenciation morphologique

cki et expression de la DPP IV

Protéine

ARNm

Activité enzymatique

cki et expression de la DPP IV

Conclusions

● p27et dans une moindre mesure p21 induisent l’expression de la DPPIV fonctionnelle. Localisation a la membrane plasmique.

cki et expression de l’APN

cki et expression de l’APN

Conclusions

● p27et dans une moindre mesure p21 induisent l’expression de l’APN.

En conclusion

Autres systèmes cellulaires...Premier article montrant le rôle de p27 dans la différenciation des cellules epithéliales. Et en 2009?Même rôle dans les cellules épithéliales bronchiques

Comment peut on aller plus loin dans l'étude?

• In vivo…Il existe d’autres facteurs que les CKI. Souris KO pour P21… l’intestin est normal.

• Cancer: dans les carcinomes la P27 est souvent sous-exprimée. Cette sous expression est associée à une augmentation de l’agressivité des cancers.Mêmes résultats pour prostate et estomac.

Pourquoi la surexpression de P21 induit la différenciation