PRÀCTICA 04 MICROBIOLOGIA

TÉCNICAS DE COLORACIÓN DIFERENCIAL

OBJETIVOS:

Aplicar y distinguir técnicas de coloración diferencial en bacterias.

Clasificar algunas especies bacterianas en gran positivas y en gran negativas de

acuerdo a la tinción de gram.

PROCEDIMIENTO

MATERIALES

EQUIPOS: MATERIALES: REACTIVOS:Microscopio compuesto con objetivo 100X

Asa de Siembra Aceite de inmersión

Papel lente Acetona-alcoholIodo

láminas portaobjetos Cristal violeta láminas cubreobjeto (laminillas), Agua destilada Mechero con alcohol SafraninaEncendedorHisopos

Coloración al gram

A. Muestra de Frotis

1. Colocar con el asa de siembra ya

esterilizada (para evitar cualquier

contagio), una muestra del Frotis en

una láminas portaobjetos

Después colocar en la muestra una gota de H2O + Mta (culivo), y

empezar a

homogeneizar.

2. Fijar el frotis al calor,

pasándolo

hasta secar sin que se

carbonice por completo

3. Después de haberlo eliminado las bacterias de la muestra

Con mucho cuidado tratar de cubrir la muestra con el Cristal Violeta

durante un minuto, después lavarlo con H2O y dejar secarlo bien.

4. Cubrirlo con Iodo y cubrir toda la muestra durante un minuto, luego

lavarlo bien con H2O y dejar secarlo.

5. Decolorar por 20 segundos con alcohol acetona agitándolo suavemente,

lavarlo bien con H2O y dejar secarlo.

6. Por último Cubrir la muestra con la safranina por 20 segundos, lavarlo

con H2O y dejar secarlo.

Observar por el microscopio objetivo

RESULTADO

Primero se pudo observar la muestra en 10x se observo solamente

pequeños puntos azules, en 40x, se observo manchas o trazos rojizos

extendidas en la superficie del portaobjeto. A este nivel de observación

no se pudo distinguir la estructura de la bacteria inoculada.

Luego observamos la

muestra con una

potencia de 100x. Esta

observación se

Fig. 1. Muestra del Frotis en microscopio 40x

realizo empleando el aceite de inmersión para mejorar la capacidad del

objeto.

En esta observación la imagen obtenida nos permitió ver miles de

diminutas estructuras circulares agrupadas en forma de racimos de uva

identificada como una colonia de bacterias Estafilococos caracterizadas

por su forma circular.

Fig.2. muestra del Frotis en microscópico 100x

En la tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de tinción 

diferencial empleado en que utiliza tanto para poder referirse a la morfología

celular bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la

diferenciación bacteriana, considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias

que se visualizan de color azules y Bacteria Gram negativa a las que se visualizan

de color rosa o rojo o grosella como en el caso de la Fig. 2.

CONCLUSIONES:

Gran cantidad de los estreptococos, enterococos y el resto de grupos o

géneros microbianos algunos son patógenos y no patógenos de los

cuales se pueden preparar fermentaciones, que por medio de un largo

proceso, llegan a ser elaboradas en productos para consumo humano.

El procedimiento seguido nos dio en cada muestra elaborada por

nosotros resultados en el cual las bacterias eran gram positivo y gram

negativo diferenciadas principalmente por su color de cada una.

Para concluir, se pudo observar por medio del microscopio las

diferencias que hay entre las bacterias de tipo gram positivo y gram

negativo, las cuales son notables por el color de cada una.