Test de Hormona Estriol Libre

Unconjugated Estriol

For use on IMMULITE 2000 systems

IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol

2 IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIL2KUE3-4, 2010-07-29)

English

Intended Use: For in vitro diagnostic use with the IMMULITE 2000 Systems Analyzers for the quantitative measurement of unconjugated (free) estriol in serum, as an aid in monitoring fetal maturity and well-being in the context of high-risk and poorly dated pregnancies. Catalog Numbers: L2KUE32 (200 tests), L2KUE36 (600 tests), L2KUE33M (3000 tests) Test Code: UE3 Color: Light Blue

Summary and Explanation Most of the estriol circulating or excreted during the third trimester of pregnancy is the joint product of fetus and placenta, originating from a precursor synthesized in the fetus by the adrenal glands, and transformed by the fetal liver and the placenta into estriol. On traversing the placenta, this is rapidly metabolized, primarily in the maternal liver, to conjugated forms: the estriol sulfates and glucuronides. As a result, "free" estriol, the unconjugated form, accounts for barely nine percent of the total estriol in circulation; the estriol sulfates, which are relatively long-lived, account for roughly half. Urinary estriol consists entirely of conjugated forms since only free estriol enters the maternal circulation while only the conjugated forms are excreted. Normally, as the fetus develops, estriol production increases, resulting in a nearly three-fold rise in circulating estriol levels during the final trimester, and a corresponding increase in urinary levels. There is typically a surge at about the 36th week. According to the literature, free and total estriol concentrations reach approximately 15 and 250 ng/mL at term, while the urinary output climbs to approximately 45 mg/day. After 40 weeks, estriol levels gradually subside, declining by roughly 12 percent per week.9

There is considerable patient-to-patient variability: the reference range for a given gestational age may encompass estriol levels from 50 to 200 percent of the

median for that age. Hence the pattern generated by serial determinations is ordinarily of greater significance than the results of isolated measurements. Persistently low or rapidly falling estriol levels suggest fetal distress. However, because estriol concentrations are subject to diurnal and episodic variation, it is common practice to refer serum measurements to a baseline, defined for the patient as either the average or the highest of her three most recent estriol results. A drop of 40 percent or more relative to this baseline is likely to be significant. In combination with other techniques for fetal surveillance, serial determinations have been used in the management of pregnancies complicated by diabetes,7,9 hypertension, prolonged gestation and uncertain dates. These clinical applications have been recently reviewed.7,9,10,14

Principle of the Procedure IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol is a solid phase, enzyme-labeled chemiluminescent competitive immunoassay. The solid phase (bead) is coated with polyclonal rabbit anti-estriol antibody. The liquid phase consists of alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to estriol. The patient sample and the reagent are incubated together with the coated bead for 30 minutes. During this time, unconjugated estriol in the sample competes with enzyme-conjugated estriol in the reagent for a limited number of antibody binding sites on the bead. Unbound patient sample and enzyme conjugate are then removed by centrifugal washes. Finally, chemiluminescent substrate is added to the reaction tube containing the bead and the signal is generated in proportion to the bound enzyme. Incubation Cycles: 1 30 minutes Time to First Result: 35 minutes.

Specimen Collection The use of an ultracentrifuge is recommended to clear lipemic samples.

IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol (PIL2KUE3-4, 2010-07-29) 3

Hemolyzed samples may indicate mistreatment of a specimen before receipt by the laboratory; hence the results should be interpreted with caution. Centrifuging serum samples before a complete clot forms may result in the presence of fibrin. To prevent erroneous results due to the presence of fibrin, ensure that complete clot formation has taken place prior to centrifugation of samples. Some samples, particularly those from patients receiving anticoagulant therapy, may require increased clotting time. High patient samples can be manually diluted with an appropriate diluent. Blood collection tubes from different manufacturers may yield differing values, depending on materials and additives, including gel or physical barriers, clot activators and/or anticoagulants. IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol has not been tested with all possible variations of tube types. Volume Required: 40 L serum. Storage: 7 days at 28C or 6 months at 20C. Avoid multiple freeze thaw cycles. Although serum samples have been reported to be stable at 20C, unpublished observations suggest a small increase of approximately 1015% may occur during storage at this temperature. Therefore it is preferable to transport and store samples at 28C and assay within one week of collection. It is important that all samples drawn for serial monitoring of a patient's unconjugated estriol level be measured using the same assay system, and that all be subjected to the same storage conditions.

Warnings and Precautions For in vitro diagnostic use. Reagents: Store at 28C. Dispose of in accordance with applicable laws. Follow universal precautions, and handle all components as if capable of transmitting infectious agents. Source materials derived from human blood were tested and found nonreactive for syphilis; for antibodies to HIV 1 and 2; for hepatitis

B surface antigen; and for antibodies to hepatitis C. Sodium azide, at concentrations less than 0.1 g/dL, has been added as a preservative. On disposal, flush with large volumes of water to prevent the buildup of potentially explosive metal azides in lead and copper plumbing. Chemiluminescent Substrate: Avoid contamination and exposure to direct sunlight. (See insert.) Water: Use distilled or deionized water.

Materials Supplied Components are a matched set. Labels on the inside box are needed for the assay.

Unconjugated Estriol Bead Pack (L2UE312) With barcode. 200 beads, coated with polyclonal rabbit anti-estriol antibody. Stable at 28C until expiration date. L2KUE32: 1 pack. L2KUE36: 3 packs. L2KUE33M: 15 packs.

Unconjugated Estriol Reagent Wedge (L2UE3A2) With barcode. 11.5 mL alkaline phosphatase (bovine calf intestine) conjugated to estriol in buffer. Stable at 28C until expiration date. L2KUE32: 1 wedge. L2KUE36: 3 wedges. L2KUE33M: 15 wedges. Before use, tear off the top of the label at the perforations, without damaging the barcode. Remove the foil seal from the top of wedge; snap the sliding cover down into the ramps on the reagent lid.

Unconjugated Estriol Adjustors (LUE3L, LUE3H) Two vials (Low and High), 4 mL each, of unconjugated estriol in a processed human serum matrix, with preservative. Stable at 28C for 30 days after opening, or for 6 months (aliquotted) at 20C L2KUE32: 1 set. L2KUE36: 2 sets. L2KUE33M: 3 sets. Before making an adjustment, place the appropriate Aliquot Labels (supplied with the kit) on test tubes so that the barcodes can be read by the on-board reader.


Kit Components Supplied Separately L2SUBM: Chemiluminescent Substrate L2PWSM: Probe Wash L2KPM: Probe Cleaning Kit LRXT: Reaction Tubes (disposable) Tri-level, multi-constituent Lyphochek Maternal Serum Control available from Bio-Rad. Also Required Distilled or deionized water; test tubes; controls.

Assay Procedure Note that for optimal performance, it is important to perform all routine maintenance procedures as defined in the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual. See the IMMULITE 2000 Systems Operator's Manual for: preparation, setup, dilutions, adjustment, assay and quality control procedures. Recommended Adjustment Interval: 2 weeks. Quality Control: To monitor system performance and chart trends, as a minimum requirement, quality control materials with at least two levels (low and high) of unconjugated estriol should be assayed on each day that samples are analyzed. Quality control samples should also be assayed when performing adjustment. Treat all quality control samples the same as patient samples. Siemens Healthcare Diagnostics recommends the use of commercially available quality control materials with at least 2 levels (low and high). A satisfactory level of performance is achieved when the analyte values obtained are within the Acceptable Control Range for the system, or within an established range determined by an appropriate internal laboratory quality control scheme.

Expected Values A reference range study was performed using the IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay (L2KUE3) on a cross-section of 199 third-trimester serum (SST) samples collected in Becton Dickinson SST tubes, with gestational ages fairly evenly distributed from 27 to 40 weeks.

Tabulated below, in both mass and molar units, are the medians and central 95% ranges for each gestational week, estimated by a global nonparametric method. The statistics show, as expected, a clear trend towards higher values as a function of gestational age.

Unconjugated Estriol, ng/mL

Gestational Week n Median

Central 95% Range

27 15 4.1 2.3 6.4

28 15 4.2 2.3 7.0

29 15 4.5 2.3 7.7

30 15 4.9 2.4 8.6

31 15 5.5 2.6 9.9

32 15 6.2 2.8 11.4

33 15 7.2 3.0 >12

34 15 8.4 3.3 >12

35 15 10.2 3.9 >12

36 15 >12 4.7 >12

37 15 >12 5.6 >12

38 15 >12 6.6 >12

39 15 >12 7.3 >12

40 4 >12 7.6 >12

Unconjugated Estriol, nmol/L

Gestational Week n Median

Central 95% Range

27 15 14 8 22

28 15 15 8 24

29 15 16 8 27

30 15 17 8 30

31 15 19 9 34

32 15 21 10 40

33 15 25 10 >42

34 15 29 11 >42

35 15 35 14 >42

36 15 >42 16 >42

37 15 >42 19 >42

38 15 >42 23 >42

39 15 >42 25 >42

40 4 >42 26 >42

Consider these limits as guidelines only. Each laboratory should establish its own reference ranges.


Limitations Heterophilic antibodies in human serum can react with the immunoglobulins included in the assay components causing interference with in vitro immunoassays. [See Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Samples from patients routinely exposed to animals or animal serum products can demonstrate this type of interference potentially causing an anomalous result. These reagents have been formulated to minimize the risk of interference; however, potential interactions between rare sera and test components can occur. For diagnostic purposes, the results obtained from this assay should always be used in combination with the clinical examination, patient medical history, and other findings.

Performance Data See Tables and Graphs for data representative of the assays performance. Results are expressed in ng/mL. (Unless otherwise noted, all were generated on serum samples collected in tubes without gel barriers or clot-promoting additives.) Conversion Factor: ng/mL 3.467 nmol/L Reportable Range: 0.07 12 ng/mL (0.24 42 nmol/L). The assay calibration was determined based on the measurement of unconjugated estriol in pregnancy serum (SST) samples by a gas chromatography-mass spectroscopy method (GC-MS) (see Method Comparison 1). Analytical Sensitivity: Limit of Blank (highest value expected for a sample with no analyte; determined in accordance with CLSI EP17-A26): 0.01 ng/mL (0.04 nmol/L). Limit of Detection (lowest detectable concentration; determined in accordance with CLSI EP17-A26): 0.04 ng/mL (0.14 nmol/L). Functional Sensitivity: (concentration with 20% coefficient of variation (CV) determined in accordance with CLSI EP5-A227): 0.15 ng/mL (0.52 nmol/L).

Precision: Samples were assayed in duplicate in 40 runs for a total of 80 replicates. (See Precision table.) Linearity: Serum (SST) samples were assayed under various dilutions. (See "Linearity" table for representative data.) Recovery: Samples spiked 1 to 19 with 3 unconjugated estriol solutions (12.5, 25 and 50 ng/mL) were assayed. (See "Recovery" table for representative data.) Specificity: The antibody is highly specific for unconjugated estriol. (See "Specificity" table.) Bilirubin: Presence of bilirubin in concentrations up to 200 mg/L has no effect on results, within the precision of the assay. Hemolysis: Presence of hemoglobin in concentrations up to 500 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Lipemia: Presence of triglycerides in concentrations up to 3,000 mg/dL has no effect on results, within the precision of the assay. Method Comparison 1: The IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay was compared to GC-MS on 58 pregnancy serum (SST) samples. (Concentration range: approximately 0.4 to 11 ng/mL; see graph 1.) By Weighted Deming regression: (IML 2000) = 0.98 (GC-MS) + 0.02 ng/mL r = 0.980

Means: 3.3 ng/mL (IMMULITE 2000) 3.2 ng/mL (GC-MS)

Method Comparison 2: The IMMULITE 2000 Unconjugated Estriol assay was compared to an Access Unconjugated Estriol assay, commercially available from Beckman Coulter, on 150 pregnancy serum (SST) samples. (Concentration range: approximately 0.07 to 9.79 ng/mL; see graph 2.) By Weighted Deming regression: (IML 2000) = 1.01 (Beckman) 0.01 ng/mL r = 0.954

Means: 2.7 ng/mL (IMMULITE 2000) 2.6 ng/mL (Beckman)

References 1) Alexander S, et al. Renal clearance of estriol


and its conjugates in normal and abnormal pregnancies. J Clin Endocrinol Metabol 1979;49:588-93. 2) Bagger PV, Jacobsson K, Gullberg B. Early prediction of individual total estriol curves in pregnancy. Acta Obstet Gynecol Scand 1981;60:187-90. 3) Bashore RA, Westlake JR. Plasma unconjugated estriol values in high risk pregnancy. Amer J Obstet Gynecol 1977;128:371-80. 4) Buster JE. Clinical applications of steroid assay tests of fetal-placental function. In: Abraham GE, editor. Radioassay systems in clinical endocrinology. New York: Marcel Dekker, 1981; 349-72. 5) Buster JE, et al. Subhourly variability of circulating third trimester maternal steroid concentrations as a source of sampling error. J Clin Endocrinol Metabol 1978;46:907-10. 6) Buster JE, et al. Time trend analysis of unconjugated estriol concentrations in third-trimester pregnancy. Obstet Gynecol 1980;56:743-47. 7) Buster JE, Freeman AG, Hobel CJ. An algorithm for determining gestational age from unconjugated estriol levels. Obstet Gynecol 1980;56:649-55. 8) Chard T. Normality and abnormality. In: Klopper A, editor. Plasma hormone levels in evaluation of fetal wellbeing. Edinburgh: Churchill Livingstone, 1976; 1-19. 9) Distler W, et al. Estriol in pregnancy. V: Unconjugated and total plasma estriol in the management of pregnant diabetic patients. Amer J Obstet Gynecol 1978;130:424-31. 10) Gauthier RJ, Griego BD, Goebelsmann U. Estriol in pregnancy. VII: Unconjugated plasma estriol in prolonged gestation. Amer J Obstet Gynecol 1981;139:382-89. 11) Gibbons JM, Nagle M. Assessing fetal health when the mother is diabetic. Contemp Obstet Gynecol 1980;15:115-24. 12) Goebelsmann U. The uses of oestriol as a monitoring tool. Clin Obstet Gynecol 1979 Aug;6(2):223-44. 13) Katagiri H, et al. Estriol in pregnancy. IV: Normal concentrations, diurnal and/or episodic variations, and day-to-day changes of unconjugated and total estriol in late pregnancy plasma. Amer J Obstet Gynecol 1976;124:272-80. 14) Klopper A. Criteria for the selection of steroid assays in the assessment of fetoplacental function. In: Klopper A, editor. Plasma hormone levels in evaluation of fetal wellbeing. Edinburgh: Churchill Livingstone, 1976; 20-35. 15) Klopper A. Choice of hormone assay in the assessment of fetoplacental function. In: Fuchs F, Klopper A, editors. Endocrinology of pregnancy. 2nd Edition. Hagerstown, Md: Harper and Row, 1977; 350-64. 16) Klopper A. Criteria for the selection of assays in the assessment of fetoplacental function. In: Abraham GE, editor. Radioassay systems in clinical endocrinology. New York: Marcel Dekker, 1981; 387-401. 17) Peterson L, Kundu N. Endocrine assessment of high risk pregnancies. Obstet Gynecol Ann 1980;9:169-94. 18) Scommegna A, Bieniarz J. Integrated use of physical and endocrine parameters in perinatal medicine. In: Klopper A, editor. The human placenta. New York: Academic Press, 1980; 181-89. 19) Tulchinsky D. Use of

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Tables and Graphs

Precision (ng/mL)

Within-Run1 Total2

Mean3 SD4 CV5 SD CV

1 0.14 0.0209 14.9% 0.0275 19.6%

2 0.32 0.0327 10.2% 0.0427 13.3%

3 0.64 0.0510 8.0% 0.0680 10.6%

4 1.17 0.0840 7.2% 0.1150 9.8%

5 2.96 0.1690 5.7% 0.2580 8.7%

6 5.97 0.3460 5.8% 0.4720 7.9%

7 10.42 0.5420 5.2% 0.7610 7.3%

Linearity (ng/mL)

Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 8 in 85 1.29

7 in 8 1.21 1.13 107% 6 in 8 1.07 0.97 110% 5 in 8 0.90 0.81 111% 4 in 8 0.73 0.65 112% 3 in 8 0.55 0.48 115% 2 in 8 0.35 0.32 109% 1 in 8 0.17 0.16 106%

2 8 in 8 2.43 7 in 8 2.04 2.13 96% 6 in 8 1.80 1.82 99% 5 in 8 1.49 1.52 98% 4 in 8 1.26 1.22 103% 3 in 8 0.98 0.91 108% 2 in 8 0.63 0.61 103% 1 in 8 0.29 0.30 97%





Dilution1 Observed2 Expected3 %O/E4


Recovery (ng/mL)

Solution1 Observed2 Expected3 %O/E4

1 1.67

A 1.79 2.21 81%

B 2.48 2.84 87%

C 3.08 4.09 75%

2 2.42

A 3.08 2.92 105%

B 3.60 3.55 101%

C 4.48 4.80 93%

3 4.55

A 4.90 4.95 99%

B 5.58 5.57 100%

C 6.44 6.82 94%

4 5.59

A 5.36 5.94 90%

B 5.72 6.56 87%

C 6.76 7.81 87%

5 6.94

A 7.21 7.22 100%

B 8.05 7.84 103%

C 9.25 9.09 102%

6 8.13

A 8.03 8.35 96%

B 8.61 8.97 96%

C 8.75 10.22 86%

Specificity

Compound1

Added2ng/mL

Apparent ng/mL3

% Cross reactivity4

Estriol-3-Sulfate 10 ND ND 50 0.07 0.14%

Estriol-3-glucuronide 10 ND ND

50 ND ND

Estriol-16-glucuronide 10 0.25 2.50%

50 0.66 1.32%

Estriol-17-glucuronide 1 ND ND

5 ND ND 25 ND ND 50 0.15 0.30% 500 1.49 0.30% Estradiol 10 0.10 1.00% 50 0.52 1.04% Estrone 10 ND ND 50 0.16 0.32%

Estrone--glucuronide 1 ND ND

10 ND ND 50 ND ND Estrone-3-Sulfate 1 ND ND 10 ND ND 50 ND ND 16-Epiestriol 1 0.08 8.00% 10 0.49 4.90% 50 1.28 2.56% 17-Epiestriol 1 ND ND 10 ND ND 50 0.09 0.18% Cortisol 50 ND ND 500 ND ND 11-Deoxycortisol 50 ND ND 1,000 ND ND

5-Dihydrotestosterone 1 ND ND

10 ND ND 50 ND ND Progesterone 50 ND ND 500 ND ND Testosterone 5 ND ND 50 ND ND ND: not detectable.5


Method Comparison 1

0

4

8

12

0 4 8 12Unconjugated Estriol by GC-MS, ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

Unc

onju

gate

d Es

trio

l, ng

/mL

(IML 2000) = 0.98 (GC-MS) + 0.02 ng/mL r = 0.980

Method Comparison 2

0

4

8

0 4 8Beckman Unconjugated Estriol, ng/mL

IMM

ULI

TE 2

000

Unc

onju

gate

d Es

trio

l, ng

/mL

(IML 2000) = 1.01 (Beckman) 0.01 ng/mL r = 0.954

Deutsch. Precision: 1Intra-Assay, 2Gesamt, 3Mittelwert, 4S (Standardabweichung), 5CV (Variationskoeffizient). Linearity: 1Verdnnung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E, 58 in 8. Recovery: 1Lsung, 2Beobachtet (B), 3Erwartet (E), 4% B/E. Specificity: 1Verbindung, 2zugesetzte Menge, 3Gemessene Konzentration, 4% Kreuzreaktivitt, 5NN: Nicht nachweisbar. Method Comparison: Unconjugated Estriol: Unkonjugiertes Oestriol.

Espaol. Precision: 1Intraensayo, 2Total, 3Media, 4DS, 5CV. Linearity: 1 Dilucin, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 en 8. Recovery: 1Solucin, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E. Specificity: 1Compuesto, 2Cantidad aadida, 3Concentracin aparente, 4% Reaccin cruzada, 5ND: no detectable. Method Comparison: Unconjugated Estriol: Estriol Libre.

Franais. Precision: 1Intraessai, 2Total, 3Moyenne, 4SD, 5CV. Linearity: 1Dilution, 2Observ (O), 3Attendu (A), 4%O/A, 58 dans 8. Recovery: 1Solution, 2Observ (O), 3Attendu (A), 4%O/A. Specificity: 1Compos, 2ajout, 3Concentration apparente, 4Raction croise %.

5ND: non dtectable. Method Comparison: Unconjugated Estriol: Estriol non conjugue.

Italiano. Precision: 1Intra-serie, 2Totale, 3Media, 4SD (Deviazione Standard), 5CV (Coefficiente di Variazione). Linearity: 1Diluizione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A, 58 in 8. Recovery: 1Soluzione, 2Osservato (O), 3Atteso (A), 4%O/A. Specificity: 1Composto, 2quantit aggiunta, 3Concentrazione apparente, 4Percentuale di Crossreattivit, 5ND: non determinabile. Method Comparison: Unconjugated Estriol: Estriolo non conjugato.

Portugus. Precision: 1Entre-ensaios, 2Total, 3Mdia, 4Desvio padro, 5Coeficiente de variao. Linearity: 1Diluio, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E, 58 em 8. Recovery: 1Soluo, 2Observado (O), 3Esperado (E), 4%O/E. Specificity: 1Composto, 2Quantidade adicionada, 3Apparent Concentration, 4Percentagem de reaco cruzada, 5ND: no detectvel. Method Comparison: Unconjugated Estriol: Estriol nao-conjugado.

Deutsch

IMMULITE 2000 Freies striol Anwendung: Zur in vitro-Diagnostik unter Verwendung der IMMULITE 2000 Systeme - zur quantitative Bestimmung von freiem striol im Serum, als eine Hilfe beim Monitoring der fetalen Reife, des fetalen Wohlbefindens, bei Hoch-Risikoschwangerschaften und bei ungenauer Kenntnis der Schwanger-schaftsdauer. Artikelnummern: L2KUE32 (200 Tests), L2KUE36 (600 Tests), L2KUE33M (3000 Tests) Testcode: UE3 Farbe: hellblau

Klinische Relevanz Der grte Anteil des produzierten striols whrend des dritten Trimenons ist ein gemeinsames Produkt des Fetus und der Plazenta. In der fetalen Nebennierenrinde wird ein Vorlufer gebildet, der in der fetalen Leber und in der Plazenta zu striol umgewandelt wird. Nach der Passage durch die Plazenta wird in der Leber der Mutter der grte Teil davon zu striol-Sulfaten und Glucuroniden konjugiert. Daraus resultiert, dass das freie striol, d.h. die unkonjugierte Form, nur 9% des Gesamt-striols in dem Blutkreislauf ausmacht.


Die langlebigen striol-Sulfate machen dagegen ca. die Hlfte des Gesamt-striols aus. Nur das freie striol kann in den mtterlichen Kreislauf gelangen, whrend im Urin ausschlielich nur striol-Konjugate ausgeschieden werden. Normalerweise steigen mit der fetalen Entwicklung die striol-Spiegel an, so dass im letzten Trimenon ein fast dreifacher Anstieg der striol-Konzentrationen sowohl im Serum als auch im Urin beobachtet werden kann. In der 36. Woche gibt es normalerweise einen steilen striol-Anstieg. Gem Literaturangaben steigen bis zur Geburt die Konzentrationen an freiem striol bis auf 15 ng/ml und an Gesamt-striol bis auf 250 ng/ml, whrend sich die striol-Ausscheidung im Urin bis auf ca. 45 mg/Tag erhht. Nach 40 Wochen sinken die striol-Spiegel allmhlich um ca. 12% pro Woche.9 Da es erhebliche individuelle Unterschiede geben kann, kann der Referenzbereich fr ein bestimmtes Gestationsalter zwischen 50 und 200% des Medians fr dieses Alter umfassen. Daher ist eine Verlaufkontrolle wesentlich aussagekrftiger als eine einzelne Bestimmung. Anhaltend niedrige oder schnell abfallende striol-Spiegel weisen aus fetale Komplikationen hin. Da striol-Spiegel diurnalen und episodischen Schwankungen unterliegen, werden die Serumbestimmungen blicherweise auf einen Basiswert bezogen, der fr jede Patientin entweder als der durchschnittliche oder der hchste der letzten drei striol-Bestimmungen definiert ist. Ein Abfall von 40% oder mehr, bezogen auf diesen Basiswert, ist signifikant. Bei der Kontrolle von Risiko-schwangerschaften (Diabetes,7,9 Hypertonie, lange Schwangerschaftsdauer und ungenauer Kenntnis der Schwangerschaftsdauer) werden Verlaufsbestimmungen des striols in Verbindung mit anderen Methoden zur berwachung des Fetus empfohlen. Diese klinischen Anwendungen sind krzlich publiziert worden.7,9,10,14

Methodik IMMULITE 2000 Freies striol ist ein festphasengebundener kompetitiver Chemilumineszenz Enzymimmunoassay.

Die Festphase (Kugeln) ist mit Anti-striol-Antikrpern (polyklonal, Kaninchen) beschichtet. Die Flssigphase enthlt alkalische Phosphatase (Kalb), das an striol konjugiert ist. Die Patientenprobe und das Reagenz werden zusammen mit der beschichteten Kugel 30 Minuten inkubiert. Whrend dieser Zeit konkurieren freies striol der Probe mit Enzym-konjugiertem striol des Reagenz um eine begrenzte Anzahl von Antikrperbindungsstellen auf der Kugel. Ungebundene Patientenprobe und Enzymkonjugat wird durch zentrifugales Waschen entfernt. Zuletzt wird Chemilumineszenz-Substrat in das Reaktionsrhrchen zugegeben und ein Signal erzeugt, das proportional der Menge des gebundenen Enzyms ist. Inkubationszyklen: 1 30 Minuten Zeit zum ersten Ergebnis: 35 Minuten

Probengewinnung Der Einsatz einer Ultrazentrifuge wird zur Klrung von lipmischen Proben empfohlen. Bei hmolysierten Proben besteht die Mglichkeit einer unsachgemen Handhabung vor Eintreffen im Labor, daher sind die Ergebnisse mit Vorsicht zu interpretieren. Die Zentrifugation der Serumproben vor dem vlligen Abschluss der Gerinnung kann zu Fibringerinnseln fhren. Um fehlerhaften Analysenergebnissen infolge von Gerinnseln vorzubeugen, ist sicherzustellen, dass die Gerinnung vor der Zentrifugation der Proben vollstndig abgeschlossen ist. Insbesondere Proben von Patienten unter Antikoagulantien-therapie knnen eine verlngerte Gerinnungszeit aufweisen. Patientenproben mit hohen Werten sollten mit einem geeigneten Diluenten manuell verdnnt werden. Blutentnahmerhrchen von verschiedenen Herstellern knnen differierende Werte verursachen. Dies hngt von den verwendeten Materialien und Additiven (Gel oder physische Trennbarrieren, Gerinnungsaktivatoren und /oder Antikoagulantien) ab. IMMULITE 2000 Freies striol ist nicht mit allen mglichen Rhrchenvariationen ausgetestet worden. Erforderliche Menge: 40 l Serum.


Lagerung: 7 Tage bei 28C oder 6 Monate bei 20C. Mehrmaliges Einfrieren und Auftauen sollte vermieden werden. Obwohl Serumproben bei 20C stabil sind, kann gem unverffentlichten Beobachtungen ein geringer Anstieg von ca. 1015% durch Lagerung bei dieser Temperatur beobachtet werden. Es ist daher zu empfehlen, individuelle Proben bei 28C zu lagern und innerhalb einer Woche zu messen. Bei einem Langzeitmonitoring einer Patientin ist es wichtig, den gleichen Assay zu verwenden und alle Proben gleich zu lagern.

Hinweise und Vorsichtsmanahmen Zur In-vitro-Diagnostik. Reagenzien: Bei 28C lagern. Die Entsorgung muss nach den jeweils gltigen Gesetzen erfolgen. Die generell geltenden Vorsichtsmanahmen sind einzuhalten und alle Komponenten als potenziell infektis zu behandeln. Alle aus menschlichem Blut gewonnenen Materialien wurden auf Syphilis, Antikrper gegen HIV-1 und HIV-2, Hepatitis-B-Oberflchenantigen und Hepatitis-C-Antikrper untersucht und negativ befundet. Bestimmten Komponenten wurde Natriumazid (


Ebenfalls bentigt Destilliertes bzw. deionisiertes Wasser; Testrhrchen; Kontrollen.

Testdurchfhrung Fr eine optimale Funktion des Gertes ist unbedingt zu beachten, dass die Wartungen, wie im Handbuch fr IMMULITE 2000 Systeme beschrieben, regelmig durchgefhrt werden. Die Angaben zur Vorbereitung, Einrichtung, Verdnnung, Kalibration, Test- und Qualittskontrollverfahren entnehmen Sie bitte dem Handbuch fr IMMULITE 2000 Systeme. Empfohlenes Kalibrationsintervall: 2 Wochen. Qualittskontrolle: Um die Systemperformance zu berwachen und Vernderungen darzustellen, sollte jeden Tag, an dem Patientenproben analysiert werden, Qualittskontrollmaterial in mindestens zwei Konzentrationen (niedrig und hoch) von freiem striol bestimmt werden. Mit der Durchfhrung einer Kalibration sind ebenfalls Qualittskontrollproben zu analysieren. Qualittskontrollproben sind identisch wie Patientenproben zu behandeln. Siemens Healthcare Diagnostics empfiehlt die Verwendung von kommerziell verfgbaren Qualittskontrollen in mindestens zwei Konzentrationen (niedrig und hoch). Eine zufriedenstellende Performance ist erreicht, wenn die ermittelten Analytenwerte innerhalb des zulssigen Kontrollbereichs fr den Assay sind, oder innerhalb des zulssigen Bereichs sind, der mittels eines geeigneten laborinternen Qualittskontrollschema ermittelt wurde.

Referenzwerte Die Referenzwerte wurden mit dem IMMULITE 2000 Freies striol Assay (L2KUE3) in einer reprsentativen Studie mit 199 Serumproben (SST) aus dem dritten Trimenon (relativ gleichmig verteilt 27. bis 40 Schwangerschafts-woche) ermittelt. In den unten aufgefhrten Tabellen sind die mit Hilfe einer non-parametrischen Methode ermittelten Mediane und die 95%-Bereiche fr jede Schwangerschaftswoche sowohl in ng/ml als auch in nmol/l angegeben. Die

Statistiken zeigen, wie erwartet, eine eindeutige Tendenz zu hheren Werten mit zunehmendem Schwangerschaftsalter.

Freies striol, ng/ml

SSW n Median 95% Bereich

27 15 4,1 2,3 6,4

28 15 4,2 2,3 7,0

29 15 4,5 2,3 7,7

30 15 4,9 2,4 8,6

31 15 5,5 2,6 9,9

32 15 6,2 2,8 11,4

33 15 7,2 3,0 >12

34 15 8,4 3,3 >12

35 15 10,2 3,9 >12

36 15 >12 4,7 >12

37 15 >12 5,6 >12

38 15 >12 6,6 >12

39 15 >12 7,3 >12

40 4 >12 7,6 >12

Freies striol, nmol/l

SSW n Median 95% Bereich

27 15 14 8 22

28 15 15 8 24

29 15 16 8 27

30 15 17 8 30

31 15 19 9 34

32 15 21 10 40

33 15 25 10 >42

34 15 29 11 >42

35 15 35 14 >42

36 15 >42 16 >42

37 15 >42 19 >42

38 15 >42 23 >42

39 15 >42 25 >42

40 4 >42 26 >42

Diese Grenzwerte sind lediglich als Richtlinien aufzufassen. Jedes Labor sollte seine eigenen Referenzbereiche etablieren.

Grenzen der Methode Heterophile Antikrper in Humanseren knnen mit Immunglobulinen aus den Assaykomponenten reagieren und


Interferenzerscheinungen innerhalb des in vitro Immunoassays verursachen. (Clin. Chem. 1988:34:27-33) Proben von Patienten, die hufig mit Tier- bzw. Tierserumprodukten zu tun haben, knnen die erwhnten Interferenzen verursachen und zu anomalen Resultaten fhren. Die verwendeten Reagenzien sind so konzipiert, dass das Risiko einer Interferenz mit den zu messenden Proben minimiert ist. Dennoch knnen potentiell Interaktionen zwischen seltenen Seren und den Testkomponenten auftreten. Zu diagnostischen Zwecken sollten die mit dem Assay erhaltenen Ergebnisse immer in Kombination mit der klinischen Untersuchung, der Patientenanamnese und anderen Befunden gesehen werden.

Leistungsdaten Siehe Tabellen und Grafiken mit reprsentativen Daten fr den Assay. Die Ergebnisse sind als ng/ml ausgedrckt. (Alle Daten wurden - sofern nicht anders angegeben - aus Serumproben in Rhrchen ohne Gelbarrieren oder gerinnungsfrdernde Zustze gewonnen.) Umrechnungsfaktor: ng/ml 3,467 nmol/l Messbereich: 0,07 12 ng/ml (0,24 42 nmol/l). Die Assay-Kalibration wurde basierend auf der Bestimmung von freiem striol in Seren von Schwangeren (SST) mittels Gaschromatographie-Massenspektroskopie (GC-MS) bestimmt. (siehe Methodenvergleich 1). Analytische Sensitivitt: Untere Nachweisgrenze (entspricht der hchsten zu erwartenden Konzentration fr analytfreie Proben; Bestimmung gem CLSI EP17-A26): 0,01 ng/ml (0,04 nmol/l). Nachweisgrenze (niedrigste nachweisbare Konzentration; Bestimmung gem CLSI EP17-A26): 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l). Funktionelle Sensitivitt: (Konzentration mit einem Variationskoeffizient von 20%, Bestimmung gem CLSI EP5-A227): 0,15 ng/ml (0,52 nmol/l). Przision: Die Proben wurden in 40 Anstzen in Doppelbestimmung, ingesamt also in 80 Tests, gemessen. (Siehe Tabelle Przision.)

Linearitt: Serum (SST) Proben wurden in verschiedenen Verdnnungen getestet. (Reprsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Linearitt.) Wiederfindung: Die getesteten Proben wurden mit drei Freies striol-Lsungen 1:19 versetzt (12,5, 25 und 50 ng/ml). (Reprsentative Daten entnehmen Sie bitte der Tabelle Recovery.) Spezifitt: Hochspezifischer Anti-Unkonjugiertes striol-Antikrper. (siehe Tabelle Spezifitt.) Bilirubin: Bilirubin hat in Konzentrationen bis zu 200 mg/l keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der grer als die Imprzision des Assays selbst ist. Hmolyse: Hmoglobin hat in Konzentrationen bis zu 500 mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der grer als die Imprzision des Assays selbst ist. Lipmie: Triglyceride hat in Konzentrationen bis zu 3 000 mg/dl keinen Einfluss auf die Ergebnisse, der grer als die Imprzision des Assays selbst ist. Methodenvergleich 1: Der IMMULITE 2000 Freies striol Assay wurde unter Verwendung von 58 Proben von Schwangeren (SST) mit der GC-MS verglichen. (Konzentrationsbereich: etwa 0,4 bis 11 ng/ml; siehe Grafik 1). Durch gewichtete Deming Regression: (IML 2000) = 0,98 (GC-MS) + 0,02 ng/mL r = 0,980

Mittelwerte: 3,3 ng/mL (IMMULITE 2000) 3,2 ng/mL (GC-MS)

Methodenvergleich 2: Der IMMULITE 2000 Freies striol Assay wurde unter Verwendung von 150 Serumproben (SST) von Schwangeren mit dem Access Freies striol Assay, kommerziell verfgbar ber Beckman Coulter. (Konzentrationsbereich: etwa 0,07 bis 9,79 ng/ml; siehe Grafik 2), verglichen. Durch gewichtete Deming Regression: (IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/mL r = 0,954

Mittelwerte: 2,7 ng/mL (IMMULITE 2000) 2,6 ng/mL (Beckman)


Anwendungsberatung Bei Rckfragen wenden Sie sich bitte an Ihre Niederlassung. www.siemens.com/diagnostics

Das Qualittsmanagement-System der Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. ist zertifiziert nach DIN EN ISO 13485:2003.

Espaol

IMMULITE 2000 Estriol no conjugado Utilidad del anlisis: Para el diagnstico in vitro con los analizadores IMMULITE 2000 para la medida cuantitativa del estriol no conjugado (libre) en suero, como ayuda en la monitorizacin de la madurez y buen estado fetal en el contexto de embarazos de alto riesgo y embarazos recientes. Referencia: L2KUE32 (200 tests), L2KUE36 (600 tests), L2KUE33M (3000 tests) Cdigo del Test: UE3 Cdigo de Color: Azul claro

Resumen y Explicacin del Test La mayora del estriol circulante o excretado durante el tercer trimestre de embarazo es producido por la placenta y el feto, originado a partir de un precursor sintetizado por las glndulas adrenales del feto, y transformado por la placenta y el hgado del feto en estriol. Al atravesar. la placenta, ste es rpidamente metabolizado, en primer lugar en el hgado materno, en formas conjugadas: estriol sulfato y glicosilado. Como resultado, el estriol libre, la forma no conjugada, supone apenas un nueve por ciento del total de estriol circulante; el estriol sulfato, que relativamente tiene una larga vida, supone aproximadamente la mitad. El estriol urinario corresponde a las formas no conjugadas debido a que slo el estriol libre pasa a la circulacin materna mientras que las formas slo conjugadas son excretadas. Normalmente, a medida que el feto se desarrolla, la produccin de estriol

aumenta, casi triplicdose los niveles de estriol circulante durante el ltimo trimestre, y con un correspondiente aumento de los niveles urinarios. Tpicamente hay una subida sobre la trigsimosexta semana. De acuerdo con la literatura, las concentraciones de estriol libre y total alcanzan aproximadamente 15 y 250 ng/ml al trimestre, mientras que la subida del urinario aumenta 45 mg/da aproximadamente. Pasadas 40 semanas, los niveles de estriol bajan gradualmente, disminuyendo ms o menos un 12 por ciento por semana.9 Existe una variabildad considerable de paciente a paciente: el rango de referencia para una determinada edad gestacional puede abarcar niveles de estriol desde el 50 al 200 por ciento de la mediana para esa edad. De aqu, que el patrn generado mediante determinaciones seridas tenga mayor significado que la medida de resultados aislados. Una cada persistente o rpida de los niveles de estriol sugieren sufrimiento fetal. Sin embargo, debido a que las concentraciones de estriol estn sujetas variaciones diurnas y episdicas, es una prctica comn referir las medidas en suero a una linea de base, definida tanto por el promedio como por el ms alto de sus tres resultados de estriol ms recientes. Una cada de un 40 por ciento o ms con respecto a esta linea de base ser muy probablemente significativo. En combinacin con otras tcnicas para el vigilancia fetal, se han utilizado determinaciones consecutivas en el control de embarazos complicados por diabetes,7,9 hipertensin, gestacin prolongada y de fecha no determinada. Estas aplicaciones clnicas han sido recientemente revisadas.7,9,10,14

Principio del anlisis Estriol no conjugado IMMULITE 2000 es un inmunoanlisis quimioluminiscente competitivo de fase slida marcado con enzima. La fase slida (bola) est recubierta con anticuerpo anti-estriol policlonal de conejo. La fase lquida contiene fosfatasa alcalina (intestino bovino) conjugada con estriol. La muestra del paciente y el reactivo se incuban junto con la bola recubierta durante 30 minutos. Durante este tiempo,


el estriol no conjugado de la muestra compite con el estriol conjugado con la enzima del reactivo por un nmero limitado de sitios de unin de anticuerpo de la bola. La muestra del paciente no unida y el conjugado con la enzima se eliminan despus mediante lavados por centrifugacin. Finalmente, se aade el sustrato quimioluminiscente al tubo de reaccin que contiene la bola y la seal es generada en proporcin a la cantidad de enzima unida. Ciclos de incubacin: 1 30 minutos Tiempo hasta el primer resultado: 35 minutos

Recogida de la muestra Se recomienda el uso de una ultracentrfuga para aclarar las muestras lipmicas. Las muestras hemolizadas podran indicar una mala manipulacin de la muestra antes de ser recibida por el laboratorio; en este caso, los resultados deben interpretarse con precaucin. La centrifugacion de las muestras de suero antes de que se forme el coagulo puede ocasionar la presencia de fibrina. Para evitar resultados erroneos debidos a la presencia de fibrina, asegurarse que se ha formado el coagulo completamente antes de centrifugar las muestras. Algunas muestras, particularmente aquellas de pacientes sometidos a terapia anticoagulante, pueden requerir mayor tiempo de coagulacion. Las muestras de pacientes altas pueden diluirse manualmente con un diluyente adecuado. Los tubos para recoger sangre de distintos fabricantes pueden producir valores diferentes, dependiendo del material del tubo y de los aditivos, incluyendo barreras de gel o barreras fsicas, activadores de la coagulacin y/o anticoagulantes. El Estriol no conjugado IMMULITE 2000 no ha sido chequeado con todas las posibles variaciones de tubos. Volumen requerido: 40 l suero. Almacenamiento: 7 das a 28C o 6 meses a 20C. Evitar mltiples ciclos de congelacin/descongelacin.

Aunque se ha comprobado que las muestras de suero son estables a 20C, observaciones sin publicar sugieren que puede darse un pequeo incremento aproximadamente del 1015%, durante el almacenamiento a esta temperatura. Por lo tanto, es preferible transportar y almacenar las muestras a una temperatura entre 28C y analizarlas la semana siguiente de la recogida. Es importante que todas las muestras extradas para monitorizaciones seriadas de los niveles de estriol no conjugado de los pacientes se midan utilizando el mismo sistema de anlisis, y que todas estn sujetas a las mismas condiciones de almacenamiento.

Advertencias y precauciones Para uso diagnstico in vitro. Reactivos: Mantener a 28C. Desechar de acuerdo a la legislacin en vigor. Siga las precauciones universales y manipule todos los componentes como si fueran capaces de transmitir agentes infecciosos. Los materiales derivados de sangre humana han sido analizados y son negativos para sfilis; para anticuerpos frente al HIV 1 y 2; para el antgeno de superficie de hepatitis B y para los anticuerpos de hepatitis C. Se ha usado Azida sdica, en concentraciones menores a 0,1 g/dl, como conservante. Para su eliminacin, lavar con grandes cantidades de agua para evitar la formacin de residuos de azidas metalicas, potencialmente explosivas, en las caeras de cobre y plomo. Sustrato quimioluminiscente: Evite la contaminacin y exposicin a la luz directa del sol. (Ver el prospecto.) Agua: Use agua destilada o desionizada.

Materiales suministrados Los componentes representan un juego completo. Las etiquetas incluidas en la caja son necesarias para el ensayo.

Cartucho de bolas de Estriol no conjugado (L2UE312) Con cdigo de barras. 200 bolas, recubiertas con anticuerpo anti-estriol policlonal de conejo. Estable a 28C hasta la fecha de caducidad.


L2KUE32: 1 cartucho. L2KUE36: 3 cartuchos. L2KUE33M: 15 cartuchos.

Vial de Reactivo de Estriol no conjugado (L2UE3A2) Con cdigo de barras. 11,5 ml fosfatasa alcalina (intestino bovino) conjugada con estriol en buffer. Estable a 28C hasta la fecha de caducidad. L2KUE32: 1 vial. L2KUE36: 3 viales. L2KUE33M: 15 viales. Antes de usar, cortar la parte superior de la etiqueta en la perforacin, sin daar el cdigo de barras. Quitar el precinto del orificio del vial; encajar la cubierta deslizante en las rampas de la tapa del reactivo.

Ajustadores de Estriol no conjugado (LUE3L, LUE3H) Dos viales (Alto y Bajo), de 4 ml cada uno, de estriol no conjugado en una matriz procesada de suero humano, con conservante. Estable a 28C durante 30 das despus de la apertura, o 6 meses a 20C (alicuotados) L2KUE32: 1 juego. L2KUE36: 2 juegos. L2KUE33M: 3 juegos. Antes de hacer un ajuste, colocar las etiquetas a las alcuotas apropiadas (suministradas con el kit) sobre tubos de ensayo, de forma tal que los cdigos de barras puedan ser ledos por el lector.

Componentes del kit que se suministran por separado L2SUBM: Sustrato quimioluminiscente L2PWSM: Lavado de sonda L2KPM: Kit de limpieza de sonda LRXT: Tubos de reaccin (desechables) 3 niveles de control multi-constituente Lyphochek Maternal Serum Control disponible en Bio-Rad. Tambin necesarios Agua destilada o desionizada; tubos de ensayo; controles.

Ensayo Ntese que para una ptima ejecucin, es importante realizar los procedimientos de mantenimiento rutinario definidos en el

manual del operador de los sistemas IMMULITE 2000. Consulte el Manual del Operador de los sistemas IMMULITE 2000 para: la preparacin, instalacin, diluciones, ajuste, ensayo y procedimientos de control de calidad. Intervalo de ajsute recomendado: 2 semanas. Control de Calidad: Para monitorizar el funcionamiento del sistema y tendencia de la grfica, como requisito mnimo, deberan analizarse al menos 2 niveles (bajo y alto) de materiales de control de calidad de estriol no conjugado cada da que se analicen muestras. Las muestras del control de calidad deberan tambin analizarse cuando se realice un ajuste. Tratar todas las muestras de control de calidad igual que las muestras de pacientes. Siemens Healthcare Diagnostics recomienda el uso de materiales de control de calidad disponibles comercialmente con al menos 2 niveles (bajo y alto). Un nivel de funcionamiento satisfactorio se consigue cuando los valores obtenidos del analito estn dentro del rango de aceptacin del control para el sistema, o dentro del rango establecido determinado por un programa de control interno de laboratorio apropiado.

Valores esperados Se realiz un estudio de rangos de referencia utilizando el procedimiento Estriol no conjugado IMMULITE 2000 (L2KUE3) con una muestra representativa de 199 muestras de suero (SST) de mujeres en el tercer trimestre de embarazo, con edades gestacionales distribuidas uniformemente desde la semana 27 a la 40. En la tabla, en unidades de masa y molares, estn las medianas y el rango central del 95% para cada semana gestacional, estimadas mediante un mtodo no paramtrico global. La estadstica muestra, tal como se esperaba, una clara tendencia a valores ms altos en funcin de la edad gestacional.


Estriol no conjugado, ng/ml

Edad Gestacional n Mediana

Rango Central 95%

27 15 4,1 2,3 6,4

28 15 4,2 2,3 7,0

29 15 4,5 2,3 7,7

30 15 4,9 2,4 8,6

31 15 5,5 2,6 9,9

32 15 6,2 2,8 11,4

33 15 7,2 3,0 >12

34 15 8,4 3,3 >12

35 15 10,2 3,9 >12

36 15 >12 4,7 >12

37 15 >12 5,6 >12

38 15 >12 6,6 >12

39 15 >12 7,3 >12

40 4 >12 7,6 >12

Estriol no conjugado, nmol/l

Edad Gestacional n Mediana

Rango Central 95%

27 15 14 8 22

28 15 15 8 24

29 15 16 8 27

30 15 17 8 30

31 15 19 9 34

32 15 21 10 40

33 15 25 10 >42

34 15 29 11 >42

35 15 35 14 >42

36 15 >42 16 >42

37 15 >42 19 >42

38 15 >42 23 >42

39 15 >42 25 >42

40 4 >42 26 >42

Estos lmites han de considerarse slo como una gua. Cada laboratorio deber establecer sus propios intervalos de referencia.

Limitaciones Los anticuerpos heteroflicos en el suero humano pueden reaccionar con las inmunoglobulinas de los componentes del ensayo provocando interferencias con los

inmunoanlisis in vitro. [Ver Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Las muestras de los pacientes que frecuentemente estn expuestos a animales o a productos sricos animales pueden presentar este tipo de interferencia que potencialmente ocasione un resultado anmalo. Estos reactivos han sido formulados para minimizar el riesgo de interferencia, no obstante, pueden darse interacciones anmalas entre sueros conflictivos y los componentes del ensayo. Con fines de diagnstico, los resultados obtenidos con este ensayo siempre deben ser usados en combinacin con el examen clnico, la historia mdica del paciente y cualquier otro dato clnico relevante.

Caractersticas analticas Para ver resultados representativos de las cualidades del ensayo, consulte las tablas y los grficos. Los resultados se expresan en ng/ml. (A no ser que se indique lo contrario, todos los resultados fueron generados en muestras de suero recogidas en tubos sin geles o activadores de la coagulacin.) Factor de Conversin: ng/ml 3,467 nmol/l Rango informable: 0,07 12 ng/ml (0,24 42 nmol/l). La calibracin del anlisis fue determinada basndose en la medicin del estriol no conjugado en muestras de suero (SST) de embarazadas mediante un mtodo de cromatografa de gas con espectrometra de masa (GC-MS) (ver Comparacin de Mtodos 1). Sensibilidad analtica: El Lmite del Blanco (valor ms alto esperado para una muestra que no contiene el analito; determinado de acuerdo con CLSI EP17-A26): 0,01 ng/ml (0,04 nmol/l). Lmite de Deteccin (concentracin minima detectable; determinado de acuerdo con CLSI EP17-A26): 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l). Sensibilidad Funcional: (concentracin con un 20% de coeficiente de variacin (CV) determinada de acuerdo con CLSI EP5-A227): 0,15 ng/ml (0,52 nmol/l).


Precisin: Las muestras fueron analizadas por duplicado en 40 tandas para un total de 80 replicados. (Vase la tabla "Precisin".) Linealidad: Suero (SST) Las muestras fueron analizadas con varias diluciones. (Vase la tabla "Linealidad" para resultados representativos.) Recuperacin: Se analizaron las muestras 1 a 19 enriquecidas con tres soluciones de estriol no conjugado (12,5, 25 y 50 ng/ml). (Ver la tabla "Recuperacin" para resultados representativos). Especificidad: El anticuerpo es altamente especfico para estriol no conjugado. (Vase la tabla "Especificidad".) Bilirrubina: La presencia de bilirrubina, en concentraciones hasta 200 mg/l, no tienen ningn efecto sobre los resultados en trminos de precisin. Hemlisis: La presencia de hemoglobina, en concentraciones hasta 500 mg/dl, no tienen ningn efecto sobre los resultados en trminos de precisin. Lipemia: La presencia de triglicridos en concentraciones hasta 3 000 mg/dl no tiene efecto alguno en los resultados, en lo correspondiente a la precisin del ensayo. Comparacin de Mtodos 1: El procedimiento Estriol no conjugado IMMULITE 2000 se compar con GC-MS en 58 muestras de suero (SST) de embarazadas. (Rango de concentracin: aproximadamente 0,4 a 11 ng/ml; ver grfica 1). Segn la regresin Weighted de Deming: (IML 2000) = 0,98 (GC-MS) + 0,02 ng/ml r = 0,980

Medias: 3,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 3,2 ng/ml (GC-MS)

Comparacin de Mtodos 2: El procedimiento Estriol no conjugado IMMULITE 2000 se compar con el procedimiento Estriol no conjugado Access, comercialmente disponible de Beckman Coulter en 150 muestras de suero (SST) de embarazadas. (Rango de concentration: aproximadamente 0,07 a 9,79 ng/ml; ver grfica 2). Segn la regresin Weighted de Deming:

(IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/ml r = 0,954

Medias: 2,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,6 ng/ml (Beckman)

Asistencia tcnica Pngase en contacto con el distribuidor nacional. www.siemens.com/diagnostics

El Sistema de Calidad de Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. est certificado por la ISO 13485:2003.

Franais

IMMULITE 2000 striol Non conjugu Domaine d'utilisation : Dosage quantitatif de l'striol non-conjugu (libre) dans le srum. Rserv un usage diagnostique in vitro avec les Analyseurs des systmes IMMULITE 2000, ce test constitue une aide pour le contrle de la maturit et de la sant du ftus dans le contexte d'une grossesse risque ou d'un ge gestationnel incertain. Rfrence catalogue : L2KUE32 (200 tests), L2KUE36 (600 tests), L2KUE33M (3000 tests) Code produit : UE3 Code couleur : bleu clair

Introduction La majeure partie de l'striol circulant ou excrt au cours du premier trimestre de la grossesse, est le produit commun du ftus et du placenta, avec l'origine, un prcurseur synthtis dans le ftus par les glandes surrnales et transform en par le foie ftal et le placenta en striol. En franchissant le placenta, ce dernier est rapidement mtabolis, essentiellement dans le foie maternel, en formes conjugues : sulfates d'striol et glycuroconjugus. Par consquent, l'striol libre (la forme non-conjugue) ne reprsente qu' peine 9 % de l'striol total circulant ; les sulfates d'striol, dont la demi-vie est relativement longue, en reprsentent environ la moiti. L'striol


urinaire est exclusivement form de formes conjugues puisque seul de l'striol libre parvient dans la circulation maternelle cependant que seules des formes conjugues sont excrtes. Normalement, mesure que se dveloppe le ftus, la production d'striol augmente, rsultant en un quasi-triplement du taux d'striol circulant au cours du dernier trimestre et un accroissement correspondant du taux urinaire. On note habituellement une forte augmentation aux environs de la 36me semaine. D'aprs la littrature, les concentrations d'striol libre et total atteignent terme environ 15 et 250 ng/ml, respectivement, cependant que l'excrtion urinaire atteint 45 mg/j environ. Aprs 40 semaines, les concentrations d'striol diminuent d'environ 12 % par semaine.9

Il existe une grande variabilit d'un sujet l'autre : l'intervalle de rfrence pour un ge de la grossesse donn peut comprendre des valeurs allant de 50 200 % de la mdiane correspondant cet ge. Aussi, le statut rvl par des dosages sris est habituellement plus significatif que des mesures isoles. Des taux d'striol constamment bas ou diminuant rapidement sont vocateurs de souffrance ftale. Cependant, les concentrations d'striol tant sujettes des variations diurnes et pisodiques, il est frquent de rapporter les mesures sriques un niveau de base, dfini chez le patient comme tant la moyenne ou la valeur la plus leve des trois dernires mesures du taux d'striol. Une baisse de 40 % par rapport cette valeur de base est vraisemblablement significative. Associs d'autres techniques de surveillance ftale, les dosages sris ont t utiliss dans la prise en charge des grossesses compliques de diabte,7,9 d'hypertension, de gestation prolonge et d'ge gestationnel incertain. Ces applications cliniques ont fait l'objet de synthses rcentes.7,9,10,14

Principe du test IMMULITE 2000 striol Non conjugu est un immunodosage enzymatique chimiluminescent par comptition, en phase solide. La phase solide (bille) est revtue d'anticorps polyclonaux de lapin

anti-striol. La phase liquide est compose de phosphatase alcaline (intestins de veau) associe lstriol. Lchantillon du patient et le ractif sont mis incuber avec la bille revtue pendant 30 minutes. Pendant ce temps, lstriol non conjugu de lchantillon entre en contact sur la bille avec lstriol associ aux enzymes du ractif, en des points prcis de fixation des anticorps. Lchantillon non li du patient et le conjugu enzymatique sont ensuite limins par lavages avec centrifugation. Pour finir, le substrat chimiluminescent est ajout au godet ractionnel qui contient la bille et le signal est gnr proportionnellement l'enzyme lie. Cycles dincubation : 1 30 minutes Temps de rendu du premier rsultat : 35 minutes.

Recueil des chantillons Il est recommand de clarifier les chantillons hyperlipmiques par ultracentrifugation. Des chantillons hmolyss peuvent tre rvlateurs dune prparation inadquate du prlvement avant son envoi au laboratoire ; il faudra donc interprter les rsultats avec prudence. La centrifugation des chantillons sriques avant la formation complte du caillot peut entraner la prsence de fibrine. Pour viter les rsultats errons dus la prsence de fibrine, s'assurer de la formation complte du caillot avant de centrifuger les chantillons. Certains chantillons, en particulier ceux provenant de patients sous anticoagulants, peuvent ncessiter un temps plus long pour la formation du caillot. Les chantillons trs concentrs, provenant du patient, peuvent tre dilus manuellement avec un diluant appropri. Des tubes pour prlvements sanguins provenant de fabricants diffrents peuvent donner des rsultats diffrents, selon les matriaux et additifs utiliss, y compris gels ou barrires physiques, activateurs de la coagulation et/ou anticoagulants. Le coffret IMMULITE 2000 striol Non conjugu n'a pas t test sur tous les types de tubes possibles. Volume ncessaire : 40 l de srum.


Conservation : 7 jours entre 2 et 8C ou 6 mois 20C. viter les cycles de conglation/dconglation multiples. Bien que les chantillons sriques soient tenus pour tre stables 20C, des observations non publies suggrent qu'une lgre augmentation, de 10 15 % environ, est susceptible de se produire au cours de la conservation cette temprature. Il est donc prfrable de transporter et de conserver les chantillons entre 2 et 8C et de les doser dans la semaine qui suit leur recueil. Il est capital que tous les chantillons prlevs, dans le cadre dune surveillance rgulire du taux d'striol non conjugu du patient, soient traits avec le mme protocole de dosage et quils soient tous soumis aux mmes conditions de conservation.

Prcautions demploi Rserv un usage diagnostique in vitro. Ractifs : Conserver les ractifs +2/ +8C. liminer les dchets conformment aux lois en vigueur. Respecter les prcautions demploi et manipuler tous les composants du coffret comme des produits potentiellement infectieux. Les ractifs drivs de produits humains et utiliss dans ce coffret ont subi un test srologique pour la syphilis et des tests de dpistage pour les anticorps anti-VIH1 et 2, anti-HCV et pour lantigne de surface de lhpatite B, qui se sont tous avrs ngatifs. De lazide de sodium des concentrations infrieures 0,1 g/dl a t ajout comme conservateur ; lors de llimination, lvacuer avec de grandes quantits deau pour viter une accumulation dazides mtalliques explosifs dans les canalisations. Substrat chimiluminescent : viter les contaminations et lexposition directe la lumire solaire (voir la fiche technique). Eau : utiliser uniquement de leau distille ou dsionise.

Matriel fourni Les composants de la trousse ne peuvent tre utiliss que conjointement. Les tiquettes lintrieur du coffret sont ncessaires au dosage.

Cartouche de billes striol Non conjugu (L2UE312) Avec code-barres. 200 billes revtues d'un anticorps polyclonal de lapin anti-striol. Stable +2/ +8C jusqu' la date de premption. L2KUE32: 1 cartouche. L2KUE36: 3 cartouches. L2KUE33M: 15 cartouches.

Cartouche ractif striol Non conjugu (L2UE3A2) Avec code-barres. 11,5 ml d'striol marqu la phosphatase alcaline (intestins de veau) dans un tampon. Stable +2/ +8C jusqu' la date de premption. L2KUE32: 1 cartouche. L2KUE36: 3 cartouches. L2KUE33M: 15 cartouches. Avant lemploi, retirer la partie suprieure de ltiquette au niveau des perforations en ayant soin de ne pas endommager le code-barres. Retirer le film protecteur situ sur la partie suprieure de la cartouche-ractif ; insrer le couvercle coulissant entre les glissires sur le dessus de la cartouche-ractif.

Ajusteurs striol Non conjugu (LUE3L, LUE3H) 2 flacons ( bas et haut ) contenant chacun 4 ml d'striol libre dans une matrice de srum humain prtrait, avec conservateur. Stables +2C/ +8C pendant les 30 jours suivant l'ouverture, ou 6 mois (aliquot) 20C. L2KUE32: 1 jeu. L2KUE36: 2 jeux. L2KUE33M: 3 jeux. Avant de procder un ajustement, placer les tiquettes correspondant laliquot (fournies avec le coffret) sur des tubes en verre de sorte que les codes-barres soient lisibles par le lecteur.

Composants du coffret fournis sparment L2SUBM : Substrat chimiluminescent L2PWSM : Solution de lavage L2KPM : Coffret de dcontamination de laiguille de prlvement LRXT : Godets ractionnels (jetables) Lyphochek, contrle srique maternel multi-analyte, est disponible chez Bio-Rad en 3 concentrations diffrentes.


galement requis Eau distille ou dsionise ; tubes essai ; contrle.

Protocole de dosage Noter que pour des performances optimales, il est important de raliser toutes les procdures de maintenance de routine selon les instructions du Manuel de loprateur des systmes IMMULITE 2000. Voir le Manuel de loprateur des systmes IMMULITE 2000 pour : la prparation, le dmarrage du systme, la dilution, les ajustements, le dosage et les procdures de contrle de qualit. Intervalle d'ajustement recommand : 2 semaines. Contrle de qualit : Pour surveiller les performances du systme et tablir des tendances (niveau de contrle minimum), il est recommand de doser au moins 2 niveaux d'chantillon de contrle qualit (bas et haut) dstriol non conjugu, chaque jour danalyse des chantillons. Les chantillons de contrle qualit devraient galement tre doss lors des ajustements. Les chantillons de contrle de qualit et ceux du patient doivent tous tre traits de la mme faon. Siemens Healthcare Diagnostics recommande d'utiliser du matriel de contrle de qualit disponible dans le commerce et comprenant au moins 2 niveaux (bas et haut). Un niveau de performance satisfaisant est atteint lorsque les valeurs d'analyse obtenues se trouvent dans l'intervalle de contrle acceptable du systme, ou dans votre intervalle ; tel que dtermin par un schma de contrle de qualit interne au laboratoire.

Valeurs de rfrence Une tude portant sur lintervalle de rfrence a t conduite avec le dosage IMMULITE 2000 striol Non conjugu (L2KUE3) sur un panel de 199 chantillons sriques (SST) prlevs au cours du 3me trimestre de la grossesse et correspondant des ges gestationnels assez bien rpartis de 27 40 semaines. Les valeurs mdianes et les intervalles centraux 95 % sont repris dans le tableau ci-dessous, exprims la fois en

densit et en concentration molaire pour chaque ge gestationnel (exprim en semaine) ; et estims par le biais dune mthode globale non paramtrique. Les statistiques montrent, comme on sy attendait, une nette tendance la hausse des valeurs parallle celle de lge gestationnel.

striol non conjugu en

ng/ml

Semaines de gestation n

Valeur mdiane

Intervalle central 95 %

27 15 4,1 2,3 6,4

28 15 4,2 2,3 7,0

29 15 4,5 2,3 7,7

30 15 4,9 2,4 8,6

31 15 5,5 2,6 9,9

32 15 6,2 2,8 11,4

33 15 7,2 3,0 >12

34 15 8,4 3,3 >12

35 15 10,2 3,9 >12

36 15 >12 4,7 >12

37 15 >12 5,6 >12

38 15 >12 6,6 >12

39 15 >12 7,3 >12

40 4 >12 7,6 >12

striol non conjugu en

nmol/l

Semaines de gestation n

Valeur mdiane

Intervalle central 95 %

27 15 14 8 22

28 15 15 8 24

29 15 16 8 27

30 15 17 8 30

31 15 19 9 34

32 15 21 10 40

33 15 25 10 >42

34 15 29 11 >42

35 15 35 14 >42

36 15 >42 16 >42

37 15 >42 19 >42

38 15 >42 23 >42

39 15 >42 25 >42

40 4 >42 26 >42


Utiliser ces valeurs titre indicatif uniquement. Chaque laboratoire devra tablir ses propres valeurs de rfrence.

Limites Les anticorps htrophiles du srum humain peuvent ragir avec les immunoglobulines faisant partie des composants du coffret et interfrer avec les immunodosages in vitro. [Voir Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Les chantillons provenant de patients frquemment exposs aux animaux ou aux produits sriques d'origine animale peuvent prsenter ce type d'interfrence pouvant potentiellement donner un rsultat anormal. Ces ractifs ont t mis au point afin de minimiser le risque d'interfrence, cependant des interactions potentielles entre des srums rares et les composants du test peuvent se produire. Dans un but diagnostique, les rsultats obtenus avec ce dosage doivent toujours tre utiliss en association avec un examen clinique, l'histoire mdicale du patient et d'autres rsultats.

Performances du test Consulter les tableaux et graphiques pour obtenir les donnes reprsentatives des performances de ce test. Les rsultats sont donns en ng/ml. (En l'absence d'indication contraire, tous les rsultats ont t obtenus sur des chantillons sriques recueillis en tubes, sans gel ni activateur de la coagulation.) Facteur de conversion : ng/ml 3,467 nmol/l Domaine de mesure : 0,07 12 ng/ml (0,24 42 nmol/l). Le calibrage du dosage a t tabli sur la base de la mesure de l'striol non conjugu contenu dans des chantillons sriques (SST) prlevs sur des femmes enceintes, grce la technique associant chromatographie en phase gazeuse et spectroscopie de masse (CPG-SM) (voir comparaison des mthodes n 1). Sensibilit analytique : Limite de lchantillon tmoin (valeur maximale attendue pour un chantillon sans analyte, tablie conformment au protocole EP17-

A26 du CLSI) : 0,01 ng/ml (0,04 nmol/l). Limite de dtection (correspond la plus basse concentration dtectable, tablie conformment au protocole EP17-A26 du CLSI) : 0,04 ng/ml (0,14 nmol/l). Sensibilit fonctionnelle : (concentration ayant un coefficient de variation (CV) de 20 %, tablie conformment au protocole EP5-A227 du CLSI) : 0,15 ng/ml (0,52 nmol/l). Prcision : Les chantillons ont t doss en double essai lors de 40 sries soit un total de 80 rsultats. (Voir le tableau Prcision .) Test de dilution : Srum (SST). Des chantillons ont t doss diffrentes concentrations. (Voir le tableau Linearity pour des donnes reprsentatives.) Test de rcupration : Les chantillons tests ont t surchargs dans un rapport de 1 19 avec trois solutions striol non-conjugu (12,5, 25 et 50 ng/ml) (Voir le tableau Recovery pour des donnes reprsentatives.) Spcificit : Lanticorps utilis est hautement spcifique de lstriol non conjugu. (Voir le tableau Specificity .) Bilirubine : La prsence de bilirubine ne prsente aucun effet sur les rsultats ni sur la prcision du dosage, si la concentration ne dpasse pas 200 mg/l. Hmolyse : La prsence d'hmoglobine ne prsente aucun effet sur les rsultats ni sur la prcision du dosage, si la concentration ne dpasse pas 500 mg/dl. Lipmie : La prsence de triglycrides jusqu' une concentration de 3 000 mg/dl n'interfre ni sur la prcision du dosage, ni sur les rsultats. Comparaison des mthodes n 1 : Le dosage effectu par IMMULITE 2000 striol Non conjugu a t compar la mesure par CPG-SM de 58 chantillons sriques (SST) prlevs sur des femmes enceintes. (cart de concentration : approximativement de 0,4 11 ng/ml ; voir graphique 1). laide dune rgression de Deming pondre : (IML 2000) = 0,98 (CPG-SM) + 0,02 ng/ml r = 0,980


Moyennes : 3,3 ng/ml (IMMULITE 2000) 3,2 ng/ml (CPG-SM)

Comparaison des mthodes n 2 : Le dosage effectu par IMMULITE 2000 striol Non conjugu a t compar un dosage par Access striol Non conjugu, disponible dans le commerce chez Beckman Coulter, sur 150 chantillons sriques (SST) prlevs sur des femmes enceintes. (cart de concentration : approximativement de 0,07 9,79 ng/ml ; voir graphique 2). laide dune rgression de Deming pondre : (IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/ml r = 0,954

Moyennes : 2,7 ng/ml (IMMULITE 2000) 2,6 ng/ml (Beckman)

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Le Systme Qualit de Siemens Healthcare Diagnostics Products Ltd. est certifi ISO 13485:2003.

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IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato Uso: Ad uso diagnostico in vitro con i Sistemi IMMULITE 2000 per la determinazione quantitativa dell'estriolo (libero) non coniugato nel siero, quale ausilio nel monitoraggio della maturit e del benessere fetale nel contesto di gravidanze ad elevato rischio e con problemi di datazione. Codice: L2KUE32 (200 test), L2KUE36 (600 test), L2KUE33M (3000 test) Codice del Test: UE3 Colore: blu chiaro

Riassunto e Spiegazione del Test La maggior parte dell'estriolo circolante o escreto durante il terzo trimestre di gravidanza il prodotto combinato del feto e della placenta, che ha origine da un precursore sintetizzato nelle ghiandole

surrenaliche del feto e trasformato dal fegato fetale e dalla placenta in estriolo. Attraversando la placenta, viene rapidamente metabolizzato, principalmente nel fegato materno in forme coniugate: i solfati di estriolo ed i glucuronidi. Ne risulta che l'estriolo libero, la forma non coniugata, rappresenta solo il 9% dell'estriolo totale in circolo; i solfati di estriolo che presentano un'emivita piuttosto lunga, ne rappresentano circa la met. L'estriolo urinario formato interamente dalle forme coniugate poich solo l'estriolo libero entra nel circolo materno mentre vengono escrete solo le forme coniugate. Normalmente, con lo sviluppo del feto, la produzione di estriolo aumenta, fino ad arrivare ad un incremento di tre volte nei livelli di estriolo circolante durante il trimestre finale ed un corrispondente aumento nei livelli urinari. Si verifica un tipico aumento intorno alla 36 settimana. Secondo i dati presenti in letteratura, le concentrazioni di estriolo libero e totale raggiungono circa i 15 e 250 ng/mL alla fine della gravidanza, mentre il rilascio urinario ha un picco di circa 45 mg/giorno. Dopo 40 settimane, i livelli di estriolo gradualmente diminuiscono di circa il 12% la settimana. 9 Esiste una considerevole variabilit da paziente a paziente: il range di riferimento per una data et gestazionale pu comprendere livelli di estriolo dal 50 a 200% del valore mediano per quell'et. Quindi, l'andamento generato da determinazioni seriali normalmente molto pi significativo dei risultati di misurazioni isolate. Livelli di estriolo persistentemente bassi o che decadono rapidamente sono indice di sofferenza fetale. Tuttavia, poich le concentrazioni di estriolo sono soggette a variazioni diurne ed episodiche, pratica comune riferire le misurazioni di siero a valori di base, definiti per il paziente sia come la media o il valore pi elevato dei suoi tre valori di estriolo pi recenti. Una diminuzione del 40% o pi in relazione a questi dati di base rappresenta un dato significativo. In combinazione con altre tecniche per la sorveglianza del feto, sono state utilizzate determinazioni seriali nella gestione di gravidanze complicate dal diabete, 7,9 dall'ipertensione, da una gestazione prolungata e da datazioni incerte. Queste


applicazioni cliniche sono state recentemente riviste. 7,9,10,14

Principio del Dosaggio IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato un immunodosaggio competitivo in fase solida in chemiluminescenza. La fase solida (biglia) coattata con anticorpo policlonale di coniglio anti-estriolo. La fase liquida costituita da estriolo coniugata alla fosfatasi alcalina (da intestino di vitello). Il campione del paziente ed il reagente vengono messi in incubazione insieme alla biglia coattata per 30 minuti. Durante questo tempo, lestriolo non coniugato presente nel campione compete con lestriolo coniugato con lenzima del reagente per un numero limitato di siti di legame dellanticorpo coattato alla biglia. Il campione del paziente e il coniugato enzimatico che non si legato vengono rimossi attraverso lavaggi centrifughi. Infine, viene aggiunto il substrato chemiluminescente alla provetta I reazione contenente la biglia per la generazione di un segnale chemiluminescente inversamente proporzionale allenzima legato. Cicli dincubazione: 1 30 minuti Tempo al Primo Risultato: 35 minuti.

Raccolta dei campioni Si consiglia l'utilizzo di un'ultracentrifuga per schiarire i campioni lipemici. I campioni emolizzati possono indicare il trattamento non idoneo del campione prima dellarrivo al laboratorio; per questo motivo, i risultati devono essere interpretati con prudenza. La centrifugazione dei campioni di siero prima che la coagulazione sia completa pu produrre fibrina. Per evitare risultati errati dovuti alla presenza di fibrina, assicurarsi che il processo di coagulazione sia completo prima di centrifugare i campioni. Alcuni campioni, in modo particolare quelli di pazienti sottoposti a terapia con anticoagulanti, possono richiedere tempi di coagulazione pi lunghi. I campioni ad elevate concentrazione possono essere diluiti manualmente con il diluente appropriato.

Provette per il prelievo di sangue di produttori diversi possono dare valori differenti, a seconda dei materiali e degli additivi usati, incluso gel o barriere fisiche, attivatori di coaguli e/o anticoagulanti. L'IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato non stato verificato con tutti i tipi di provette in commercio. Volume Richiesto: 40 L di siero. Conservazione: 7 giorni a 28C o 6 mesi a 20C. Evitare cicli multipli di congelamento/scongelamento. Bench i campioni di siero siano stabili a 20C, osservazioni non pubblicate suggeriscono che un lieve aumento di circa il 1015% pu verificarsi durante la conservazione a questa temperatura. Quindi preferibile trasportare e conservare i campioni a 28C e dosarli entro una settimana dalla raccolta. E importante che tutti i campioni relative ad un moonitoraggio seriale dellestriolo non coniugato siano dosati con lo stesso sistema e che siano conservati allo stesso modo.

Avvertenze e precauzioni Per uso diagnostico in vitro. Reagenti: Conservare a 28C. Eliminare secondo le normative di legge vigenti. Seguire le precauzioni universali, e maneggiare tutti i componenti come se fossero capaci di trasmettere agenti infettivi. Sono stati analizzati i materiali di sorgente dal sangue umano e sono stati trovati non reattivi per sifilide; per anticorpi ad HIV 1 e 2; per lantigene di superficie dellepatite B; e per anticorpi allepatite C. E' stata aggiunta Sodio Azide a concentrazioni inferiori a 0,1 g/dL come conservante. Al momento dello smaltimento, irrorare con molta acqua per evitare la formazione di azidi metalliche potenzialmente esplosive nelle tubature di piombo e di rame. Substrato chemiluminescente: Evitare la contaminazione e lesposizione alla luce del sole diretta. (Vedere linserimento). Acqua: Utilizzare acqua distillata o deionizzata.


Materiali forniti I componenti costituiscono un unico set. Le etichette all'interno della confezione sono necessarie per eseguire i dosaggi.

Contenitore di Sferette Estriolo Non Coniugato (L2UE312) Con codice a barre. 200 sferette coattate con un anticorpo policlonale di coniglio anti-estriolo. Stabile a 28C fino alla data di scadenza. L2KUE32: 1 Confezione. L2KUE36: 3 Confezioni. L2KUE33M: 15 Confezioni.

Porta Reagente Estriolo Non Coniugato (L2UE3A2) Con codice a barre. 11,5 mL di estriolo coniugato con fosfatasi alcalina (da intestino di vitello) in matrice tamponata. Stabile a 28C fino alla data di scadenza. L2KUE32: 1 porta reagente. L2KUE36: 3 porta reagenti. L2KUE33M: 15 porta reagenti. Prima dellutilizzo rimuovere la parte superiore dell'etichetta lungo la perforazione senza danneggiare il codice a barre. Togliere il foglio protettivo dalla parte superiore del flacone. Far scattare nella corretta posizione il coperchio scorrevole lungo le guide del coperchio del reagente.

Aggiustatori Estriolo Non Coniugato (LUE3L, LUE3H) Due flaconi (Basso ed Alto), 4 mL ciascuno, di estriolo non coniugato in una matrice di siero umano, con conservanti. Stabile a 28C per 30 giorni dopo l'apertura, o per 6 mesi (aliquotato) a 20C. L2KUE32: 1 set. L2KUE36: 2 set. L2KUE33M: 3 set. Prima di ricalibrare collocare le etichette corrette (fornite col kit) sulle provette delle aliquote cosicch i codici a barre possano essere registrati dal lettore.

Componenti dei kit forniti separatamente L2SUBM: Substrato Chemiluminescente L2PWSM: Tampone di Lavaggio dellAgo L2KPM: Kit di Pulizia dell'Ago LRXT: Tubi di Reazione (monouso)

Controllo: Lyphochek Maternal Serum Control multi-analita, a tre livelli, disponibile da Bio-Rad. Materiali richiesti Acqua distillata o deionizzata; provette; controlli.

Procedura del Dosaggio Attenzione: per ottenere prestazioni ottimali, importante effettuare tutte le procedure di manutenzione di routine come definite nel Manuale dell'Operatore dei Sistemi IMMULITE 2000. Consultare il Manuale dellOperatore dei Sistemi IMMULITE 2000 per: preparazione, messa a punto, diluizione, calibrazione, dosaggio e procedure di controllo di qualit. Intervallo di Calibrazione Consigliato: 2 settimana. Controllo di Qualit: Per monitorare le prestazioni del sistema, i materiali del controllo di qualit con almeno due livelli (basso e alto) di estriolo non coniugato dovrebbero essere dosati ogni volta che si dosano dei campioni e che si eseguono delle calibrazioni. I campioni del controllo di qualit devono essere trattati come se fossero campioni di pazienti. Siemens Healthcare Diagnostics raccomnda luso di materiali di controllo disponibili in commercio con almeno 2 livelli (basso e alto). Un livello soddisfacente di prestazioni si raggiunge quando i valori dellanalita rientrano nei range di accettabilit del Controllo per il sistema o nei range stabiliti allinterno del laboratorio attraverso un programma appropriato di valutazione del controllo di qualit.

Valori attesi Uno studio sui range di riferimento stato realizzato usando il dosaggio IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato (L2KUE3) su 199 campioni sierici (SST) di donne gravide la terzo trimestre, con unet gestazionale distribuita tra le 27 e le 40 settimane. Tabulati di seguito, sia in unit di misura molare che di massa, sono riportate le mediane ed I range centrali al 95% per ciascuna settimana gestazionale, stimata in base ad un metodo globale non parametrico. Le statistiche mostrano, come ci si aspettava, una chiara tendenza


verso valori pi elevate in funzione allet gestazionale.

Estriolo Non Coniugato

ng/mL

Settimana di Gestazione n Mediana

Range Centrale 95%

27 15 4,1 2,3 6,4

28 15 4,2 2,3 7,0

29 15 4,5 2,3 7,7

30 15 4,9 2,4 8,6

31 15 5,5 2,6 9,9

32 15 6,2 2,8 11,4

33 15 7,2 3,0 >12

34 15 8,4 3,3 >12

35 15 10,2 3,9 >12

36 15 >12 4,7 >12

37 15 >12 5,6 >12

38 15 >12 6,6 >12

39 15 >12 7,3 >12

40 4 >12 7,6 >12

Estriolo Non Coniugato,

nmol/L

Settimana di Gestazione n Mediana

Range Centrale 95%

27 15 14 8 22

28 15 15 8 24

29 15 16 8 27

30 15 17 8 30

31 15 19 9 34

32 15 21 10 40

33 15 25 10 >42

34 15 29 11 >42

35 15 35 14 >42

36 15 >42 16 >42

37 15 >42 19 >42

38 15 >42 23 >42

39 15 >42 25 >42

40 4 >42 26 >42

Considerare questi limiti soltanto come linee guida. Ogni laboratorio dovrebbe stabilire i propri range di riferimento.

Limitazioni Gli anticorpi eterofili presenti nel siero umano possono reagire con le immunoglobuline presenti nelle componenti del dosaggio provocando un'interferenza con i dosaggi in vitro. [Vedi Boscato LM, Stuart MC. Heterophilic antibodies: a problem for all immunoassays. Clin Chem 1988:34:27-33.] Campioni di pazienti routinariamente esposti agli animali o a prodotti derivati da siero di animali possono presentare questo tipo di interferenza causa potenziale di risultati anomali. Questi reagenti sono stati formulati per minimizzare il rischio di interferenze, tuttavia, possono verificarsi interazioni potenziali tra sieri rari e componenti del test. A scopo diagnostico, i risultati ottenuti da questo dosaggio devono sempre essere utilizzati unitamente all'esame clinico, all'anamnesi del paziente e ad altre indagini di laboratorio.

Prestazioni del Dosaggio Vedere le tabelle e le grafiche per i dati rappresentativi delle prestazioni della prova. I risultati sono espressi in ng/mL. (Se non indicato diversamente, tutti i risultati sono stati generati su campioni di siero raccolti in provette senza barriere di gel o additivi che favoriscono la coagulazione.) Fattore di Conversione: ng/mL 3,467 nmol/L Range di Riferimento: 0,07 12 ng/mL (0,24 42 nmol/L). La calibrazione del dosaggio stata determinata basandosi sulla determinazione dellestriolo non coniugato in campioni sierici (SST) di donne gravide con la gas cromatocrafia- spettrometria di massa (GC-MS) (vedere Confronto fra Metodi 1). Sensibilit analitica: Limite Bianco (il valore pi alto atteso per un campione non contenete lanalita; determinato secondo CLSI EP17-A26): 0,01 ng/mL (0,04 nmol/L). Limite di rilevazione (concentrazione rilevabile pi bassa; determinata secondo CLSI EP17-A26): 0,04 ng/mL (0,14 nmol/L). Sensibilit Funzionale: (intesa come concentrazione con cloefficiente di


varizione (CV) 20% determinato secondo CLSI EP5-A227): 0,15 ng/mL (0,52 nmol/L). Precisione: I campioni sono stati dosati in duplicato in 40 sedute per un totale di 80 replicati. (Vedere la tabella "Precisione".) Linearit: i campioni di siero (SST) sono stati provati sotto varie diluzioni. (Vedere la tabella Linearit" per i dati rappresentativi.) Recupero: Sono stati dosati campioni cui sono state aggiunte tre soluzioni 1:19 di Estriolo Non Coniugato (12,5, 25 e 50 ng/mL). (Vedi tabella Recovery per dati rappresentativi). Specificit: Lanticorpo molto specifico per lestriolo non coniugato umano. (Vedere la tabella "Specificit".) Bilirubina: La presenza di bilirubina in concentrazioni fino a 200 mg/L non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Emolisi: La presenza di emoglobina in concentrazioni fino a 500 mg/dL non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Lipemia: La presenza di trigliceridi in concentrazioni fino a 3 000 mg/dL non ha nessun effetto sui risultati entro il range di precisione del dosaggio. Confronto fra Metodi 1: Il dosaggio IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato stato confrontato con GC-MS su 58 campioni sierici (SST) di donne gravide. (range di concentrazione: circa da 0,4 a 11 ng/mL; vedere grafico 1.) Per regressione Weighted Deming : (IML 2000) = 0,98 (GC-MS) + 0,02 ng/mL r = 0,980

Valore medio: 3,3 ng/mL (IMMULITE 2000) 3,2 ng/mL (GC-MS)

Confronto fra Metodi 2: Il dosaggio IMMULITE 2000 Estriolo Non Coniugato stato confrontato con il dosaggio Access Estriolo Non Coniugato, disponibile in commercio da Beckman Coulter, su 150 campioni sierici (SST) di donne gravide. (range di concentrazione: circa da 0,07 a 9,79 ng/mL; vedere grafico 2). Per regressione Weighted Deming : (IML 2000) = 1,01 (Beckman) 0,01 ng/mL r = 0,954

Valore medio: 2,7 ng/mL (IMMULITE 2000) 2,6 ng/mL (Beckman)

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IMMULITE 2000 Estriol Livre Utilizao: Para o diagnstico in vitro com os Analisadores dos Sistemas IMMULITE 2000 para a quantificao do estriol livre (no conjugado) no soro como ajuda na monitorizao da maturidade e bem estar fetal no contexto da gravidez de alto risco e mal documentada. Nmeros de catlogo: L2KUE32 (200 testes), L2KUE36 (600 testes), L2KUE33M (3000 testes) Cdigo do teste: UE3 Cor: Azul claro

Sumrio e explicao do teste A maior parte do estriol circulante ou excretado durante o terceiro trimestre da gravidez o resultado da produo do feto e da placenta, originrio de um percursor sintetizado no feto pelas clpsula supra-renais e transformado pelo fgado fetal e placenta em estriol. Ao transpor a placenta este rapidamente metabolizado, de incio no fgado materno em formas conjugadas: sulfatos de estriol e glucoronidos. Como resultado obtemos, o estriol livre, forma no conjugada, que representa cerca de nove por cento do estriol total em circulao;os sulfatos de estriol, que tm uma vida mdia relativamente longa, representam aproximadamente metade desse valor. O estriol urinrio apenas pelas formas conjugadas, dado que o estriol livre entra na circulao materna; s as formas conjugadas so excretadas. Em geral, medida que o feto se desenvolve a produo de estriol


aumentano ltimo trimestre o nvel de estriol em circulao aumenta cerca de trs vezes; h tambm um aumento dos nveis de estriol urinrio. H um pico caracterstico a partir da 36 semana. De acordo com a literatura as concentraes de estriol livre e total atingem aproximadamente 15 e 250 ng/mL no termo, enquanto que a excreo urinria alcana aproximadamente 45 mg/dia. Aps as 40 semanas os nveis de estriol decrescem gradualmente cerca de 12% por semana.9 Ocorre uma variao considervel de grvida para grvida: os valores de referncia do estriol para uma determinada idade gestacional podem variar entre 50 a 200% do valor das medianas dessa idade gestacional. Embora as tabelas obtidas atravs de muitas determinaes em srie serem muito mais significativas do que os resultados obtidos isoladamente. Nveis persistentemente baixos ou com acentuada queda de estriol sugerem problemas fetais. Contudo dado que as concentraes de estriol esto sujeitas a variaces episdicas e diurnas, comum referir os valores no soro em relao a uma referncia, definida para a grvida, em funo da mdia do valor mais alto dos seus trs mais recentes resultados de estriol. Uma queda de 40% ou superior desta referncia j considerada significativa. Em conjunto com outras tcnicas de monitorizao fetal, determinaes em srie tm sido usadas no controlo da gravidezcom complicaes de diabetes,7,9 hipertenso, gestao prolongada e data incerta. Estas aplicaes clinicas tm sido recentemente revistas.7,9,10,14

Princpio do Procedimento O IMMULITE 2000 Estriol Livre um imunoensaio competitivo, quimioluminescente, de fase slida. A fase slida (esfera) revestida com anticorpo de coelho policlonal anti- estriol. A fase lquida consiste em fosfatase alcalina (intestino de vitela) conjugada com estriol. A amostra do doente e reagente so incubadas com a esfera revestida durante 30 minutos. Durante esse perodo, o estriol livre da amostra compete com a

enzima conjugada do estriol do reagente por um nmero limitado de ligaes na esfera. O estriol no ligado da amostra e da enzima so eliminados por sucessivas lavagens. Por ltimo adicionado o substrato quimioluminescente cuvete de reaco com a esfera, sendo produzido um sinal proporcional quantidade de enzima ligada. Ciclos de incubao: 1 30 minutos Tempo para o Primeiro Resultado: 35 minutos.

Colheita Recomenda-se o uso de uma ultra centrfuga para clarear amostras lipmicas. Amostras hemolisadas podem indicar tratamento incorrecto de uma amostra antes do envio para o laboratrio; portanto os resultados devem ser interpretados com cui

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Test de Hormona Estriol Libre