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الديمقراطية الشعبيةالجمهورية الجزائرية REPUBLIQUE ALGERIENNE DEMOCRATIQUE ET POPULAIRE
وزارة التعليم العالي والبحث العلمي
MINISTERE DE L’ENSEIGNEMENT SUPERIEUR ET DE LA RECHERCHE
SCIENTIFIQUE
ورقلة-مرباحجامعة قاصدي
UNIVERSITE KASDI MERBAH – OUARGLA
FACULTE DES SCIENCES APPLIQUEES
DEPARTEMENT DE GENIE DES PROCEDES
THÈSE EN VUE DE L’OBTENTION D’UN DIPLÔME DE DOCTORAT (LMD)
Spécialité : GENIE DES PROCEDES ET ENVIRONNEMENT
Intitulé
Présentée et Soutenue publiquement Par :
BENCHEIKH Salah Eddine
Le : 06 /07 / 2017
Devant le jury composé de :
- Mr. Ammar MESSAITFA Professeur U.K.M. Ouargla Président - Mr. Noureddine Gherraf Professeur U. Oum Elbougui Examinateur - Mr. Mohamed redha OUAHRANI Professeur U. Elouad Examinateur - Mr. Segni Ladjel Professeur U.K.M. Ouargla Rapporteur
Etude de l’activité des huiles essentielles de la
plante Teucrium polium ssp Aurasianum Labiatae
.
Dédicace
A ma chère famille du petit au grand
A mes enseignants et professeurs du primaire à l’université
A toutes mes amies
Je dédie ce modeste travail
Salah Eddine
Remerciements
En premier lieu, je remercie mon DIEU, notre Créateur pour m’avoir donné la force pour
accomplir cette thèse
J'ai eu la chance d'effectuer ce travail de thèse dans le Laboratoire de recherche de génie des
procédés (LGP) de l'Université KASDI Merbah OUARGLA, sous la direction de professeur
Segni LADJEL, C’est l’homme de sciences que j’adresse mes remerciements Vous avez initié
et dirigé ce présent travail avec la rigueur scientifique, l’enthousiasme et la persévérance qui
sont les vôtres Soyez assurée que j’ai bénéficié de vous l’éducation qui doit animer un chercheur
Ce que vous nous avez toujours fait savoir. Aux tribulations diverses qui auraient pu
compromettre la réalisation de ce travail, Vous avez toujours trouvé les solutions qui
s’imposaient. Aussi grande que puisse être ma gratitude, soyez assurée qu’elle ne sera jamais à
la hauteur de tous les efforts que vous avez déployés. Puisse Dieu me permettre de vous imiter.
Monsieur le Professeur Pr. Mokhtar HAMDI et Mr. Abdeljalil ABID, de INSAT (Tunisie)
: je tenais à vous remercier chaleureusement pour votre soutien scientifique pour faire les
analyses et l’identification des huiles essentielles
Une grande part de ma reconnaissance s'adresse à Pr. CHAHMA Abd Elmadjid pour
son aide matériel qui m’a permis de mener à bien la partie antibactérienne de ce travail
Sans oublier, mes camarades doctorants de l’équipe du laboratoire génie des procédés
Mes sincères remerciements vont également à mes amis Mohamed Bilal GOUDJIL, Mahdi
BELGUIDOUM, Abdeljalil ABID, Amel RAMDANI, Hibatallah MEZZAR Souad
ZIGHMI, Soumia BECHAR, Zineb MAHCENE et Siham MEFLAH
مــــلــــخـــــــــص
اسةدرب مهتمون ونحن العالجية، بخصائصها المعروفة الجزائرية الطبية النباتات تثمين من جزء هو العمل هذا
السكان قبل من المستخدمة الفعالة الموادب غناهاب المعروف Teucrium polium aurasianum الخياطة نبات
العالجات مختلف في المحليين
مردود على الظل في التجفيف وتأثير العطرية، الزيوت الستخراج ،أوال ناحيتين من العمل هذا ويكرس
ادالمض النشاط ذلك في بما البيولوجية األنشطة دراسة هدفب وذلك الكيميائي التركيب وتحديد ستخراجالا
Teucrium الطبي النبات من المستخرجة األساسية زيوتلل لألكسدة المضاد والنشاط للفطريات مضاد للجراثيم،
polium aurasianum ، األنشطة هذه على الضوء لتسليط وثانيا.
الناتج راجستخالامردود . بالبخار التقطير تقنية بواسطة نباتلل هوائيال الجزء من األساسية الزيوت ستخراجا تم
.٪0.585 هو
منها كانت المكونات؛نوع من 35 تحديد وتم GC / MS بواسطة للزيوت األساسية الكيميائي التركيب تحليل تم
، β-Pinèneمن مركب α-pinène ، (8.59٪)من مركب limonène، (25.42٪)من مركب (34.72٪)
.ةمركبات غالبة في الزيوت األساسي α-elemolومن مركب (4.21٪)
لتثبيط حساسية األكثر هي staphylococcus aureus بكتيريا أنواع من ثمانية ضد تم للبكتيريا المضاد النشاط
.ملم 21 قطرها بمساحة
diphenyl-1-picrylhydrazyl-2,2 تجربة باستخدام تقييمها تم العطري الزيت لألكسدة المضادة النشاط
(DPPH) وréduction de fer (FRAP) كاآلتي النتائج: IC50 58.6336 ±0، 7207 و مل/ ميكروغرام
EC50 :48.1936 ± 0.5628 مل/ ميكروغرام
Alternaria arborescens, fusarium salani, Fusarium على للفطريات المضادة دراسة
moniliforme, Fusarium oxysporum, et Stemphylium solani ، ضعيفة نتائج ت الى وجودوأفاد.
ضد الفعالية ; االكسدة ضد الفعالية ; الجراثيم ضد الفعالية ; األساسية المفتاحية: الزيوتالكلمات
; Teucrium polium aurasianum ; GC/MS الفطريات
Abstract
This work is part of the valuation of the Algerian medicinal plants known for their therapeutic
properties; we are interested in the study of the plant Teucrium polium Labiatae known for its
richness in active material used by the local population in various therapies
This work is dedicated on the one hand, to the extraction of essential oils, the influence of
drying in the shade on the extraction yield and the identification of the chemical composition
of which the objective is to study biological activities including antimicrobial activity,
antifungal activity and the antioxidant activity of essential oils from medicinal plant Teucrium
polium Labiatae, and secondly to highlight these activities.
We performed the extraction of essential oils from the aerial part of the plant by the technique
of steam distillation. The resulting extraction yield is 0.585%. The essential chemical
composition of the oil was analyzed by GC / MS and 35 components were identified; limonene
(34.72%), the α-pinene (25.42%), the β-pinene (8.59%), the α-elemol (4.21%) were the
majority components
The antibacterial activity was measured against eight bacteria Staphylococcus aureus is the
most sensitive to inhibition of 21 mm diameter. The antioxidant activity of the essential oil was
evaluated using 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) test and power reduction iron
antioxidant (FRAP) results give : IC50 of 58.6336 ± 0, 7207 mcg / ml and EC50 48.1936 ±
0.5628
The antifungal study on stem Alternaria arborescens, fusarium salani, Fusarium moniliforme,
Fusarium oxysporum, et Stemphylium solani, also reported a weak results.
Keywords: Essential oils; Teucrium Polium Labiatae; GC / MS; antibacterial activity;
antifungal activity; Antioxidant Activity.
Résumé
Ce travail s’inscrit dans le cadre de la valorisation des plantes médicinales algériennes réputées
pour leurs vertus thérapeutiques, nous sommes intéressés à l’étude de la plante Teucrium polium
Labiatae connue par sa richesse en matière active utilisée par la population locale dans
différents thérapies
Le présent travail est consacré d’une part, à L’extraction des huiles essentielles, l’influence du
séchage à l’ombre sur le rendement d’extraction et l’identification de la composition chimique
dont l’objectif visé est d’étudier les activités biologiques dont l’activité antimicrobienne,
l’activité antifongique et l’activité antioxydante des huiles essentielles de la plante médicinale
Teucrium polium Labiatae, et de l’autre part de mettre en évidence ces activités.
Nous avons procédé l’extraction des huiles essentielles de la partie aérienne de la plante par la
technique d’hydrodistillation. Le rendement d’extraction obtenu est de 0,585 %. La
composition chimique de l'huile essentielle a été analysé par GC / MS et 35 composants ont été
identifiés ; le limonène (34,72 %), l’α-pinène (25,42 %), le β-Pinène (8,59 %), le α-Elemol
(4,21 %) sont les composants majoritaire
L’activité antibactérienne, a été dosée contre huit bactéries le staphylococcus aureus est le plus
sensible de 21 mm de diamètre d’inhibition. L'activité antioxydante de l'huile essentielle a été
évaluée en utilisant 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl (DPPH) essai et le pouvoir antioxydant de
réduction de fer (FRAP) les résultats donnent : IC50 de 58,6336±0,7207 µg/ml et EC50
48.1936±0.5628
L’étude antifongique sur les souches Alternaria arborescens, fusarium salani, Fusarium
moniliforme, Fusarium oxysporum, et Stemphylium solani, a signalée des faibles résultats.
Mots clés : Huiles essentielles ; Teucrium Polium Labiatae; GC/MS ; Activité antibactérienne ;
Activité antifongique ; Activité antioxydante.,
Liste des Tableaux
Tableau 1 Place dans la classification systématique botanique 27
Tableau 2 Propriétés organoleptiques de l'HE de Teucrium polium aurasianum. 48
Tableau 3 Analyses physico-chimique de HE de Teucrium polium aurasianum. 48
Tableau 4 Composition chimique de HE de Teucrium polium ssp aurasianum 51
Tableau 5 Activité antioxydante par la méthode de DPPH 54
Tableau 6 Activité antioxydante par la méthode de FRAP 56
Tableau 7 Activité antibactérienne des huiles essentielles de Teucrium polium
aurasianum
56
Liste des figures
Figure 1 Provenance des huiles essentielles en fonction des différentes parties de
plantes.
07
Figure 2 Structure chimique de quelques monoterpènes extraits des H.E. 08
Figure 3 Structure chimique de quelques sesquiterpènes extraits des H.E. 09
Figure 4 Structure chimique de quelques composés aromatiques extraits des
H.E.
09
Figure 5 Montage d'extraction par Hydrodistillation. 14
Figure 6 Montage d'extraction par entraînement à la vapeur d'eau. 14
Figure 7 Montage d'extraction par hydrodiffusion 15
Figure 8 Montage d'extraction par L'expression à froid 16
Figure 9 Montage d'extraction par micro- ondes 18
Figure 10 Organigramme d’identification des huiles essentielles par CPG et
CPG-SM
21
Figure 11 Sites d’action des huiles essentielles sur la cellule bactérienne 23
Figure 12 Teucrieum polium ssp aurasianum 29
Figure 13 Plan général de la partie expérimentale 34
Figure 14 La plante étudiée Teucrieum polium ssp aurasianum 35
Figure 15 Protocole expérimental de l’essai d’activité antifongique de chaque
huile essentielle de Teucrium polium aurasianum
44
Figure 16 Variation du rendement des huiles essentielles et la perte de poids de la
plante Teucrium polium aurasianum au cours du temps de séchage.
46
Figure 17 Chromatogramme en GC/SM de HE de Teucrium polium ssp
aurasianum
50
Figure 18 Distribution des composants majoritaire de HE de Teucrium polium
ssp aurasianum
52
Figure 19 les composants majoritaires de L’HE de Teucrium polium ssp
aurasianum
52
Figure 20 Activité antiradicalaire des huiles essentielles Teucrium polium
aurasianum et l’acide ascorbique
54
Figure 21 Réduction du fer par huile essentielle de Teucrium polium aurasianum
et l’acide ascorbique
55
Figure 22 Exemples des mécanismes de résistance aux antibiotiques 58
Figure 23 Effet d’huile essentielle de Teucrium polium ssp. aurasianum Labiatae
sur les souches fongiques.
59
Figure 24 Cinétique de croissance mycélienne en fonction de temps et de la
concentration des huiles essentielles de Teucrium polium ssp.
aurasianum Labiatae
60
Figure 25 Taux d’inhibition des souches en fonction de la concentration 60
Figure 26 Vitesse de la croissance mycélienne sous l'effet de l'augmentation de
la concentration d’huile essentielle de Teucrium polium ssp.
aurasianum Labiatae
61
Liste des abréviations
AFNOR Association française de normalisation
EC50 Concentration efficace qui réduite le Fer dans une absorbance de 0,5
Cm Centimètre
CMI Concentration minimale inhibitrice
DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazil
DMSO Dimethyl sulfoxide
FRAP Ferrique reducing antioxydant power
GC/MS Chromatographie en phase gazeuse couplée au spectromètre de masse
°C Degrés Celsius
G Gramme
HE Huile essentielle
Ia Indice d’acide
IC50 Concentration inhibitrice à 50%
IR Indice de rétention
MHA Mueller–Hinton
Min Minute
Ml Millilitre
Mm Millimètre
PDA Potato dextrose agar
pH Potentiel d’Hydrogène
Tr Temps de rétention
UFC Unité Formant Colonie
µ Micro
Sommaire
Introduction 01
Partie I Synthèse bibliographique
Chapitre I : Les huiles essentielles
I - Huiles essentielles Généralités 4
I.1- Définition et historique 4
I.1.1- Définition 4
I.1.2- Historique 4
I.2- Localisation des huiles essentielles 6
I.3- Rôle des huiles essentielles 7
I.4- Composition des huiles essentielles 8
I.4.1- Les terpénoïdes 8
I.4.2- Les composés aromatiques 9
I.4.3- Les composés d'origines diverses 10
I.4.4- Les chémotypes 10
I.5- Biosynthèse des huiles essentielles 11
I.5.1- Voie des Terpenoïdes 11
I.5.2- Voie des Phenylpropanoïdes 11
I.6- Facteurs de variabilité 11
I.6.1 Origine botanique 12
I.6.2 L’organe producteur 12
I.6. 3 Origine géographique 12
I.7- Obtention des huiles essentielles 12
I.7.1- Principales méthodes d'extraction 12
I.7.1.1- L'entraînement à la vapeur d'eau 13
I.7.1.2- L'hydrodistillation 13
I.7.1.3- La distillation à vapeur saturée (La méthode de Parnas-Wagner) 14
I.7.1.4- L'hydrodiffusion 15
I.7.1.5- L'expression à froid 15
I.7.2.6- Extraction par solvants 16
I.7.2.7- Extraction par les corps gras 17
I.7.2.8- Extraction par micro- ondes 17
I.8- Méthodes d'analyse et contrôle de la qualité 18
I.8.1- Analyses des caractéristiques physico-chimiques 18
I.8.2- Analyse de la composition chimique 19
I.8.2.1- Principe de fonctionnement de la chromatographie en phase gazeuse (CPG). 19
I.8.2.2- Chromatographie en phase gazeuse/Spectrométrie de masse (CPG/SM) 20
I.9- Utilisation des huiles essentielles 21
I.9.1- La voie orale 21
I.9.2- La voie respiratoire 21
I.9.3- La voie cutanée 22
I.10- Action biologique, effets thérapeutiques 22
I.10.1- Activité antimicrobienne des huiles essentielles 22
I.10.2- Activité antifongique 24
I.10.3- Activité antioxydante 24
I.11- Toxicité des huiles essentielles 25
I.11.1- Toxicité par voie orale : 26
I.11.2- Toxicité dermique 26
I.11.3- Cytotoxicité 26
I.11.4- Neurotoxicité : 26
Chapitre II : Etude botanique sur la plante Teucrium polium aurasianum
II.1- Données botaniques et pharmacologiques de l’espèce étudiée 27
II.1.1- Place dans la classification systématique botanique 27
II.1.2- Les Lamiales 27
II.1.3- La famille des Lamiacées 28
II.1.4 - Caractères généraux des Lamiacée 28
II.1.5- Description botanique 29
II.1.6- Synonymes 30
II.1.7- Répartition géographique 30
II.1.8-Propriétés d’utilisations traditionnelles et médicales 30
II.2- Travaux antérieurs 31
II.2.1- Composition chimique 31
II.2.2- Les activités biologique 31
II.2.2.1-Anti-nociceptive, antispasmodique 31
II.2.2.2-Antidiabétique 32
II.2.2.3-Antifongique 32
II.2.2.4-Antipyrétique, Antimicrobien 32
II.2.2.5-Cytotoxique 32
Deuxième partie : Partie expérimentale
Chapitre III : Matériels et méthodes
III.1- Cadre d’étude 33
III.2- Matériel végétal 35
III.3- Extraction des huiles essentielles 35
III.4- Caractérisation des huiles essentielles 36
III.4.1- Analyses physico-chimiques 36
III.4.1.1- Le rendement 36
III.4.1.2- Indice de réfraction 36
III.4.1.3- Indice d'acide 37
III.4.1.4- Variation de la Densité 38
III.4.1.5- Potentiel d’hydrogène (pH) 38
III.4.2- Analyses par chromatographie en phase gazeuse couplé à spectromètre de
masse GC/MS
38
III.5- Activités biologique 39
III.5.1- Activité antibactérienne 39
III.5.1.1- Souches bactériennes 39
III.5.1.2- Tests d’activités antimicrobiennes 39
III.5.1.3- Principe de l'antibiogramme : 39
III.5.1.4- Préparation des boîtes de gélose (J-24H) 39
III.5.1.5- Détermination de CMI 40
III.5.2- Activité antioxydante 41
III.5.2.1- Méthode de DPPH 41
III.5.2.2- Méthode de la réduction du fer FRAP (Ferric reducing antioxidant power) 42
III.5.3- Activité antifongique 42
III.5.3.1- Souches fongiques testées 42
III.5.3.2- Méthode de contact direct 42
III.5.3.3- Paramètres étudiés dans l’activité antifongique 44
Chapitre IV : Résultats et discussions
IV.1- Rendement d’extraction 46
IV.2- Effet du séchage sur le rendement des huiles essentielles 46
IV.3- Analyses physico-chimique et organoleptiques 48
IV.3.1- Caractéristiques organoleptiques 48
IV.3.2- Caractéristiques physico-chimiques 48
IV.4- Détermination de la composition chimique de HE 49
IV.5- Activités biologiques 53
IV.5.1- Activité antioxydante 53
IV.5.1.1- Mesure du pouvoir de piégeage du radical DPPH* 53
IV.5.1.2- Méthode de la réduction du fer FRAP 55
IV.5.2- Activité antibactérienne 56
IV.5.3- Activité antifongique 59
IV.5.3.1- Les croissances mycéliennes 59
IV.5.3.2- La cinétique de croissance mycélienne 60
IV.5.3.3-Taux d'inhibitions (TI) 60
IV.5.3.3- Vitesse de la croissance mycélienne 61
Conclusion 63
Références bibliographiques 65
Annexes 72
Publications 85
----------------------------------------------------------------------Introduction
1
Introduction
La plupart des grands médecins du passé sont des phytothérapeutes[1]. C’est pour ça l'Homme
est toujours soigné par les plantes, de manière empirique, guidé par la tradition ou les coutumes.
L’utilisation thérapeutique des plantes (phytothérapie) est très ancienne mais elle connaît
actuellement un regain d’intérêt auprès du public. Il est possible d’utiliser les plantes entières
ou les extraits qu’elles fournissent.
Selon l’organisation mondiale de la santé (O.M.S); la médecine traditionnelle se définit comme
l’ensemble de toutes les connaissances pratiques explicables ou non pour diagnostiquer ou
éliminer un déséquilibre physique, mental en s’appuyant exclusivement sur l’expérience vécue
et l’observation, transmises de génération en génération (oralement ou par écrit)[2].Selon
(OMS), 60 % de la médecine traditionnelle en Afrique utilise plus de 4000 plantes médicinales,
et près de 6377 espèces de ces plantes.
La flore Algérienne est caractérisée par sa diversité florale, plus de 3000 espèces appartenant
à plusieurs familles botaniques, distribué comme suit : méditerranéenne, saharienne et une
flore subtropicale. Ces espèces sont pour la plupart spontanées avec un nombre non
négligeables (15%) d'espèces endémiques[3]. L'investigation de ces espèces représente un
potentiel inestimable pour la découverte de nouvelles substances.
Chacune de ces plantes peut contenir des centaines voire des milliers de métabolites
secondaires, ou de principes actifs qui peuvent produire différentes actions physiologiques sur
le corps humain[4].
La popularité dont jouissent depuis longtemps les huiles essentielles et les plantes aromatiques
en général reste liée à leurs propriétés médicinales en l'occurrence les propriétés anti-
inflammatoires, antiseptiques, antivirales, antifongiques, bactéricides, antitoxiques,
insecticides et insectifuges, tonifiantes, stimulantes, calmantes, etc.[5, 6].
Les mots nature ou naturellement ne sont pas forcément signifier la sécurité. Les huiles
essentielles sont des substances très actives et par ailleurs elles peuvent être toxiques. Leur
toxicité est liée à la présence de certains sites fonctionnels oxygénés[7]
----------------------------------------------------------------------Introduction
2
Selon Hostettmann[8], connaître une plante ayant des vertus médicinales suppose pouvoir
décrire sa morphologie et son anatomie, connaître son origine et son mode d'action, apprécier
l'incidence de ceux-ci sur sa qualité, analyser sa composition chimique et les facteurs qui
peuvent la faire varier, aussi bien que leur activité pharmacologique, savoir apprécier la qualité
par des éléments objectifs et mettre en œuvre des méthodes pour la contrôler,
La maîtrise de tous ces paramètres ne peut se faire qu'avec un concours de plusieurs disciplines,
chacune apportant une contribution suivant sa spécialité.
Cette étude s’intègre dans le contexte global de la mise en valeur de la biodiversité des plantes
aromatiques et médicinales Algérienne en général, et de l’espèce du genre Teucrium Polium
ssp aurasianum en particulier, pour leurs propriétés médicinales, alimentaires et conservatrices.
Le travail qui nous a été confié consiste à approfondir la connaissance de cette espèce et à la
valoriser.
Pour cela, nous avons attachez une étude chimique consiste à des analyses (physico-chimiques,
composition chimique) et étude biologique représenté dans les différentes activités
(antimicrobiennes, antifongiques et antioxydantes)
Le travail présent est composé de deux parties :
Dans la première partie, nous avons abordés, l'état des connaissances bibliographiques incluant
une généralité sur les huiles essentielles et une présentation botanique de la famille de Lamiacée
et de l’espèce Teucrium polium aurasianum et leur usages
- La première partie passe en revue les généralités sur les huiles essentielles et la description
botanique d’espèce étudiée,
La deuxième partie s'articule au matériel et méthodes utilisées, tel que :
L’extraction de l’huile essentielle d’espèce végétale étudiée Teucrium polium ssp
aurasianum
L’analyses physico-chimiques et détermination de la composition chimique des huiles
essentielles par GC/MS
Les activités biologiques telles que les tests antibactériennes, les tests antifongiques et
détermination de leur CMI et tests antioxydantes qui font par deux méthodes
----------------------------------------------------------------------Introduction
3
Et en fin résultats et discussions et interprétations scientifiques de ces résultats et une
conclusion générale.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
4
I - Huiles essentielles : Généralités
I.1- Définition et historique
I.1.1- Définition
Il y a plusieurs définitions disponibles d'une huile essentielle convergent sur le fait que les huiles
essentielles, Une huile essentielle est définie comme un produit obtenu à partir d’une matière
première d’origine végétale, après séparation de la phase aqueuse par des procédés physiques.
La pharmacopée européenne[9] défini les huiles essentielles comme : « Produit odorant,
généralement de composition complexe, obtenu à partir d’une matière première végétale
botaniquement définie, soit par entraînement par la vapeur d’eau, soit par distillation sèche, ou
par un procédé mécanique approprié sans chauffage. L’huile essentielle est le plus souvent
séparée de la phase aqueuse par un procédé physique n’entraînant pas de changement
significatif de sa composition »
Selon l’AFNOR (l’Association Française de Normalisation ), [10]ce sont des produits
généralement odorants, obtenus soit par entraînement à la vapeur d’eau, de végétaux ou de
parties de végétaux, soit par expression du péricarpe frais de certaines citrus. Cette définition
excluant les essences obtenues par d’autres procédés d’extraction.
Les huiles essentielles sont des mélanges de nombreux composés qui sont des molécules peu
complexes comme les terpènes, les phénols, les méthyle-éthers, les oxydes, les esters, et les
cétones…[11]
Elles ont des applications importantes en médecine soit par leur qualité odorante soit pour
soulager la douleur ou pour leur efficacité physiologique [12]
I.1.2- Historique
L'utilisation des huiles essentielles sont des fins diverses depuis des millénaires, les plantes
aromatiques ont toujours été tenues en haute estime par les thérapeutes du monde entier.
L’histoire des (P.A.M.) plantes aromatiques et médicinales est lie à l’évolution des
civilisations. L’histoire des peuples montre que ces plantes ont toujours une importance en
médecine, dans la composition des parfums et dans les préparations culinaires.
Les premières preuves de fabrication et d’utilisation des huiles essentielles H.E datent de l’an
3000 avant J.C [13]
Il semble donc que les huiles essentielles accompagnés la civilisation humaine depuis ses
premières genèses.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
5
Les grands berceaux géographiques de la civilisation aromatique sont l'Inde, la Chine et le
bassin méditerranéen. Ces berceaux ont donné à l'humanité des connaissances dans le domaine
des huiles essentielles dont la validité est toujours d'actualité.
dans l'ouvrage " Aromathérapie ", de GATTEFOSSE En 1931, a décrit ses expériences et ses
découvertes, il fut le premier à démontrer les relations entre la structure et l’activité des
molécules aromatiques et à établir les grandes propriétés des arômes naturels comme étant
antitoxiques, antiseptiques, tonifiantes, stimulantes, calmantes, etc [14].
A cette époque Il a prédit que les huiles essentielles réserve un rôle important dans cette thérapie
à l'avenir ; c'est bien ce que l'on constate aujourd'hui.
Selon NTEZURUBANZA [15], l'histoire de l'aromathérapie, qui est celle des huiles
essentielles, peut se résumer en quatre époques suivantes :
- L'époque au cours de laquelle étaient utilisées des plantes aromatiques telles quelles ou sous
forme d'infusion ou de décoctions.
- Celle dans laquelle les plantes aromatiques étaient brûlées ou mises à infuser ou à macérer
dans une huile végétale. A cette époque, intervient la notion d'activité liée à la substance
odorante
- La troisième correspond à la recherche de l'extraction de cette substance odorante. Il apparaît
le concept " Huile essentielle " qui aboutit à la création et au développement de la distillation.
- En fin, la dernière qui est la période moderne dans laquelle les connaissances des composants
des huiles essentielles intervient et explique les effets physiques, chimiques, biochimiques, et
physiologiques.
Au cours des dernières années, l'Amérique du Nord a montré un grand intérêt à l'utilisation des
plantes médicinales pour plusieurs raisons :
- Elles sont moins coûteuses par rapport aux médicaments de synthèse.
- La médecine moderne n'arrive pas à trouver des remèdes à tous les maux. Voilà ce qui rend
le public se sent déçu et recourir aux plantes médicinales.
- Enfin, les preuves scientifiques de la valeur médicinale des plantes constituent d'ailleurs un
argument de taille pour leur usage en médecine.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
6
En 1990, le livre "Aromathérapie exactement " de FRACHOMME et PENOËL[16] évoque
le terme de "la médecine aromatique" qui contenant les chémotypes et les indications
thérapeutiques reposant sur les bases scientifiques.
Ainsi, l'industrie des plantes médicinales est devenue, en peu de temps, le secteur de l'industrie
pharmaceutique connaissant la plus forte croissance annuelle, soit 15 à 20%[17]
I.2- Localisation des huiles essentielles
Les huiles essentielles se rencontrent dans tout le règne végétal. Cependant elles sont
particulièrement abondantes chez certaines familles [18]: Conifères, Rutacées, Ombellifères,
Myrtacées, Lamiacées, Poacées. Tous les organes peuvent en renfermer, surtout les sommités
fleuries (lavande, menthe...), mais on en trouve dans les racines ou rhizomes (vétiver,
gingembre), dans les écorces (cannelles), le bois (camphrier), les fruits (poivres), les graines
(Muscade).
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
7
Figure 1: Provenance des huiles essentielles en fonction des différentes parties de
plantes.
I.3- Rôle des huiles essentielles
Les plantes les utilisent pour se protéger contre les virus et tous pensent qu’il s’agit d’hormones
végétales. D’autres considèrent que les huiles sont des messagers entre sorte de parasites et de
microbes[19] ; des travaux ont montré que les monoterpènes et les sesquiterpènes peuvent jouer
des rôles importants dans la relation des plantes avec leur environnement. Par exemple, le 1,8-
cinéole et le camphre inhibent la germination des organes infectés ou la croissance des agents
pathogènes issus de ces organes[20, 21]
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
8
I.4- Composition des huiles essentielles
L'étude de la composition chimique des huiles essentielles montre qu'il s'agit de mélanges
complexes et variables de constituants est due exclusivement à deux groupes caractérisés par
des origines biogénétiques sont : les terpénoïdes et les composés aromatiques dérivés du
phenylpropane[22].
I.4.1- Les terpénoïdes
Le terme terpène rappelle la toute première extraction de ce type de composé dans l'essence de
térébenthine. Les terpénoïdes Dans les huiles essentielles, sont celles qui ont la masse
moléculaire n'est pas élevée c'est à dire, ceux dont les molécules les plus volatils. Ils portent
dans la plupart des cas la formule générale (C5H8)n. Suivant les valeurs de n, on a les
hémiterpènes (n =1), les monoterpènes (n=2), les sesquiterpènes (n=3), les triterpènes(n=6), les
tétraterpènes (n=8) et les polyterpènes. Les constituants des huiles essentielles sont très
variés .On y trouve en plus de terpènes, des hydrocarbures, des esters, des lactones, des
aldéhydes, des alcools, des acides, des cétones, des phénols, des oxydes et autres[22].
Figure 02 : Structure chimique de quelques monoterpènes extraits des H.E.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
9
Figure 03 : Structure chimique de quelques sesquiterpènes extraits des H.E.
I.4.2- Les composés aromatiques
Contrairement aux dérivés terpéniques, les composés aromatiques sont moins de présence dans
les huiles essentielles. Mais il est considéré comme un ensemble important car ils sont
généralement responsables des caractères organoleptiques des huiles essentielles. Très souvent,
il s'agit d'allyle et de propénylphénol. Nous pouvons citer comme exemple l'eugénol qu’est
responsable de l'odeur du clou du girofle[22].
Figure 04 : Structure chimique de quelques composés aromatiques extraits des H.E.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
10
I.4.3- Les composés d'origines diverses
Compte tenu de leur mode d'extraction, les huiles essentielles peuvent renfermer divers
composés aliphatiques, généralement de faible masse moléculaire, entraînables lors de l'hydro
distillation. Ces produits peuvent être azotés, soufrés, des carotènes ou des acides gras [22].
Alcools : Menthol, géraniol, linalol,...
Aldéhydes : Géranial, citronellal,...
Cétones : Camphre, pipéritone
Phénols: Thymol, carvacrol ...
Esters : Acétate de géranyle,...
Acides : Acide géranique,...
Oxydes : 1,8-cinéole,...
Phénylpropanoïdes ; Eugénol.
Terpènes : Limonène, para-cymène,...
Autres : Ethers, composés soufrés, composés azotés, sesquiterpène,...
I.4.4- Les chémotypes
La connaissance des chémotypes d'une huile essentielle et leur comportement est nécessaire car
elle permet de concevoir l'activité pharmacologique, de prévoir aussi la pharmacocinétique et
la biodisponibilité.
La composition chimique de l'huile essentielle pour une même espèce botanique n'est pas
immuable. Les huiles essentielles sont élaborées par les plantes aromatiques au sein des cellules
sécrétrices. Leur élaboration est dépend entièrement du rayonnement solaire Son absence
affecte le rendement des produits aromatiques et leur nature. En sa présence, et tout
particulièrement en fonction de la présence de tel ou tel rayonnement, les types de composants
pourront varier considérablement au sein d'une même espèce. Par exemple, le basilic cultivé en
pleine lumière à Madagascar a un taux de chavicol de 57% alors que la même plante cultivée à
l'abri de la lumière en contient 74%[16]. Cette variabilité peut être influencée également par la
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
11
composition du sol et la position géographique; le Lippia mutiflora récoltée au Togo a révélé
les chémotypes à citral, à thymol (acétate de thymyle), à para-cymène, à 1 -8 cinéole[23].
I.5- Biosynthèse des huiles essentielles
La biosynthèse des huiles essentielles se fait suivant deux principales voies[18] :
I.5.1- Voie des Terpenoïdes
Le matériau de base est l'IPP (isopentylpyrophosohate), molécule à cinq atomes de carbones
ayant une structure semi- alvéolaire. Il est dérivé de l'Acétyl CoA (carrefour important), lui-
même issu du PEP (phosphoenolpyrivate) provenant directement du fructose. La construction
des squelettes hydrocarbonés a lieu de la même manière par la juxtaposition "tête à queue"
d'unités isopréniques, unités pentacarbonés ramifiées assemblées enzymatiquement. Ainsi on
trouve des squelettes hydrocarbonés à dix carbones (monoterpènes), puis à quinze carbones
(sesquiterpènes) et plus rarement, à vingt carbones (diterpènes). Le processus peut se poursuivre
mais dans d'autres buts que la synthèse des essences.
I.5.2- Voie des Phenylpropanoïdes
La synthèse des huiles essentielles par la voie des phenylpropanoïdes commence par un
métabolite du fructose, le PEP (phosphoenolpyrivate). Elle aboutit à un très grand nombre de
substances aromatiques, via une série d'acides, dont l'acide shikimique (d'où son nom, voie
shikimique) et l'acide cinnamique. Les métabolites terminaux, importants en thérapeutique, sont
les acides aromatiques suivants: acides salicylique, cinnamique et benzoïque et leurs esters dont
la salicylate de methyle, les cinnamates, les benzoates, certains phénols (eugénol) ainsi que les
coumarines,... Quelques grandes familles chimiques de molécules non volatiles, comme les
tannoïdes et les flavonoïdes, se trouvent incluse dans cette voie[24]
I.6- Facteurs de variabilité
Des travaux de recherche ont preuvé que la composition chimique des huiles essentielles est
très fluctuante. En effet, elle dépend de deux grands axes; ordre naturel (génétique, localisation,
maturité, sol, climat, etc…) ou technologiques (mode de culture ou d’extraction d’huile
essentielle de la plante), dont nous citons les plus importants:
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
12
I.6.1 Origine botanique
La composition d’une H.E varie en fonction de l’espèce productrice. En effet, l’extraction de
l’H.E d’un même organe de deux plantes différentes ne donne pas la même composition
chimique[25, 26] ,par exemple deux espèces de sauge : la sauge officinale (Salvia officinalis)
et la sauge sclarée (Salvia sclarea), Et cela peut être vendu à la fois sous le nom de l'huile de
sauge. La première, riche en cétones neurotoxiques, peut provoquer des crises d’épilepsie, alors
que la seconde possède des esters aromatiques anti-épileptisants[27].
I.6.2 L’organe producteur
La composition et le rendement d’une huile essentielle varient selon la partie de la plante à
partir de laquelle est extraite[28].
I.6. 3 Origine géographique
Cela permet de connaître l’environnement dans lequel grandit la plante et de caractériser ainsi
l’huile essentielle obtenue. Il y a des différences de composition chimique selon le pays
d’origine.
La composition chimique des huiles essentielles d’une même plante grandissant dans des lieux
différents avec changement de situation géographique (altitude et latitude), avec variation de la
nature du sol peut être différente [29]. Par exemple, le thym vulgaire à géraniol ne produit cette
molécule de géraniol qu’en hiver alors que l’acétate de géranyl la remplacera en été[30].
I.7- Obtention des huiles essentielles
Plusieurs méthodes existent pour extraire les huiles essentielles. Elles sont basées
principalement sur l'entraînement à la vapeur, l'expression, la solubilité et la volatilité. Le choix
de la méthode la mieux adaptée se fait en fonction de plusieurs paramètres tel que la nature de
la matière végétale à traiter, des caractéristiques physico-chimiques de l'essence à extraire, et
l'usage de l'extrait et l'arôme du départ au cours de l'extraction[31].
I.7.1- Principales méthodes d'extraction
Il existe plusieurs méthodes de distillation dont voici les principales :
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
13
I.7.1.1- L'entraînement à la vapeur d'eau
La plupart des composés volatils contenus dans les végétaux sont entraînables par la vapeur
d'eau; parce que leur point d'ébullition est relativement bas et a partir de leur caractère
hydrophobe ; Nous pouvons utiliser Les méthodes d'extraction par l'entraînement à la vapeur
d'eau. Sous l'action de la vapeur d'eau introduite ou formée dans l'extracteur, l'essence se libère
du tissu végétal et entraînée par la vapeur d'eau. Le mélange de vapeurs est condensé sur une
surface froide et l'huile essentielle se sépare par décantation[32].
En fonction de sa densité, elle peut être recueillie à deux niveaux:
- Au niveau supérieur du distillat, si elle est plus légère que l'eau.
- Au niveau inférieur, si elle est plus dense que l'eau.
Les principales variantes de l'extraction par l'entraînement à la vapeur d'eau sont
l'hydrodistillation, la distillation à vapeur saturée et l'hydrodiffusion.
I.7.1.2- L'hydrodistillation
Le principe de l'hydrodistillation (La méthode de Moritz) est celui de la distillation des
mélanges binaires non miscibles. Elle consiste à immerger la biomasse végétale dans un
alambic rempli d'eau, que l'on porte ensuite à l'ébullition. La vapeur détruit la structure des
cellules végétales, libère les molécules contenues et entraîne les plus volatiles en les séparant
du substrat cellulosique. La vapeur, chargée de l’essence de la matière première distillée, se
condense dans le serpentin de l’alambic avant d'être récupérée dans un essencier (vase de
décantation pour les huiles essentielles). Les parties insolubles dans l’eau de condensation
sont décantées pour donner l’huile essentielle surnageant. La partie contenant les composés
hydrosolubles est appelée eau de distillation (ou hydrolat).
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
14
Figure 05 : Montage d'extraction par Hydrodistillation.
I.7.1.3- La distillation à vapeur saturée (La méthode de Parnas-Wagner)
La distillation à vapeur saturée est la méthode la plus utilisée à l'heure actuelle dans l'industrie
pour l'obtention des huiles essentielles à partir de plantes aromatiques ou médicinales. Dans
cette méthode, la matière végétale n'est pas en contact avec l'eau. La vapeur d'eau est injectée
au travers de la masse végétale disposée sur des plaques perforées. En général, elle est pratiquée
à la pression atmosphérique ou à son voisinage et à 100°C, température d'ébullition d'eau.
Les principes volatils sont entrainés par les vapeurs d’eau puis refroidis et enfin séparés de la
phase par décantation[33, 34].
Figure 6: Montage d'extraction par entraînement à la vapeur d'eau.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
15
I.7.1.4- L'hydrodiffusion
Elle a été développée par la firme Suisse Schmidt [35] qui consiste à pulser de la vapeur d’eau
à très faible pression (0,02-0,15 bar) à travers la masse végétale, du haut vers le bas. la méthode
permet d'extraire des produits avec de composition sensiblement identique à celle des produits
obtenus par les méthodes classiques. Le procédé permet aussi un gain de temps et d’énergie,
et évite un grand nombre d'artéfacts liés à une température excessive. En fait, ce procédé
correspond à la percolation en phase vapeur.
Figure 7: Montage d'extraction par hydrodiffusion
I.7.1.5- L'expression à froid
L'extraction par expression est souvent utilisée pour extraire les huiles essentielles des agrumes
comme le citron, l'orange, la mandarine, etc. Son principe consiste à rompre mécaniquement
les poches à essences. L'huile essentielle est séparée par décantation ou centrifugation. D'autres
machines rompent les poches par dépression et recueillent directement l'huile essentielle, ce qui
évite les dégradations liées à l'action de l'eau.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
16
Figure 8: Montage d'extraction par L'expression à froid
I.7.1.6- Extraction par solvants
Cette méthode est utilisée pour les organes végétaux présentant une faible concentration en
essence ou pour les essences que l’on ne peut extraire par distillation. Les essences étant de
nature huileuse, ils sont solubles dans les solvants organiques. Un épuisement des plantes est
effectué à l’aide d’un solvant volatil dont l’évaporation laisse un résidu cireux, très coloré et
très aromatique appelé «concrète»[36, 37]. On utilise comme solvant organique volatil
l’hexane, qui est le plus utilisé actuellement; le benzène très utilisé dans le passé mais interdit
pour des raisons de toxicité ; le propane ; le toluène, etc... [38, 39]. L’extraction passe par
plusieurs étapes, on lave la matière avec le solvant deux à trois fois. Il semble que la presque
totalité des produits odorants passe en solution dès la première extraction. Mais, il est nécessaire
de pratiquer des dilutions successives avec de nouvelles charges de solvant (lavages) car la
matière traitée retient une forte proportion de la solution. La matière épuisée retient une
proportion importante de solvant. Il faut donc concentrer la solution en évaporant le solvant qui
est recyclé pour d'autres lavages. La récupération du solvant atteint couramment
94 à 96 % de la quantité retenue[40]. De ce fait une proportion résiduelle de solvants reste dans
les concrètes d’où un risque de toxicité non négligeable[41]. Pour cette raison, cette technique
est limitée à l’industrie des parfums.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
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I.7.1.7- Extraction par les corps gras
La méthode d'extraction par les corps gras est utilisée en fleurage dans le traitement des parties
fragiles de plantes telles que les fleurs, qui sont très sensibles à l'action de la température. Elle
met à profit la liposolubilité des composants odorants des végétaux dans les corps gras. Le
principe consiste à mettre les fleurs en contact d'un corps gras pour le saturer en essence
végétale. Le produit obtenu est une pommade florale qui est ensuite épuisée par un solvant
qu'on élimine sous pression réduite. Dans cette technique, on peut distinguer l'enfleurage où la
saturation se fait par diffusion à la température ambiante des arômes vers le corps gras et la
digestion qui se pratique à chaud, par immersion des organes végétaux dans le corps gras[42].
I.7.1.8- Extraction par micro- ondes
Le procédé d'extraction par micro-ondes appelée Vacuum Microwave Hydrodistillation
(VMHD) Consiste à extraire l'huile essentielle à l'aide d'un rayonnement micro-ondes d'énergie
constante et d'une séquence de mise sous vide. Seule l'eau de constitution de la matière végétale
traitée entre dans le processus d'extraction des essences. Sous l'effet conjugué du chauffage
sélectif des micro-ondes et de la pression réduite de façon séquentielle dans l'enceinte de
l'extraction, l'eau de constitution de la matière végétale fraîche entre brutalement en ébullition.
Le contenu des cellules est donc plus aisément transféré vers l'extérieur du tissu biologique, et
l'essence est alors mise en oeuvre par la condensation, le refroidissement des vapeurs et puis la
décantation des condensats. Cette technique présente les avantages suivants: rapidité, économie
du temps d'énergie et d'eau, extrait dépourvu de solvant résiduel[42, 43].
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
18
Figure 9: Montage d'extraction par micro- ondes
I.8- Méthodes d'analyse et contrôle de la qualité
En raison de l'importance industrielle des huiles essentielles, leur qualité s'impose depuis le
producteur, en passant par l'industriel jusqu'au consommateur. Cette exigence se traduit
nécessairement par l'établissement de normes de qualité, élaborées pour des considérations de
santé et de sécurité dans différents domaines d'applications des huiles essentielles.
Normalement, les normes de qualité sont établies par les instances gouvernementales et servent
de référence. Dans le cas des huiles essentielles, ces normes ont été définies par l'Association
Française de Normalisation (AFNOR) et " Essential Oils Association" (EOA). Ainsi l'analyse
des huiles essentielles porte sur les caractéristiques physico-chimiques et la composition
chimique (AFNOR, 1999).
I.8.1- Analyses des caractéristiques physico-chimiques
Ces analyses concernent essentiellement les paramètres suivants :
- La densité,
- L'indice de réfraction,
- L'indice d'acide et l'indice d'ester.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
19
A ces paramètres, on peut aussi ajouter les caractéristiques organoleptiques telles que l'aspect,
la couleur et l'odeur.
Nous pouvons confirmer que les huiles essentielles sont généralement liquides à la température
ambiante d'odeurs aromatiques rarement colorées quand elles sont fraîches. Leur densité est
plus souvent inférieure à celle de l'eau. Elles ont un indice de réfraction élevé et, le plus souvent,
sont doués d'un pouvoir rotatoire. Elles sont volatiles et entraînables par la vapeur d'eau, elles
lui communiquent leur odeur. Elles sont solubles dans l'alcool, l'éther, les huiles fixes et la
plupart de solvants organiques[44].
I.8.2- Analyse de la composition chimique
La connaissance de la composition chimique des huiles essentielles est très importante parce
qu'elles considérées comme une matière première destinée à divers secteurs d’activités tels que
la parfumerie, la cosmétique, l’industrie pharmaceutique et de l’agroalimentaire.
Plusieurs techniques et méthodes nous permet d'analyser quantitativement et qualitativement
les huiles essentielles. Parmi ces méthodes nous parlons sur les méthodes micro analytiques qui
permettent l’identification et le dosage des produits même à l’état de traces. Ces méthodes
consistent en l’utilisation des techniques de séparation et d’analyse des structures chimiques.
On peut utiliser les méthodes suivantes : CG, GC/MS, HPLC, RMN, IR, etc. ces méthodes
concernent l'identification qualitative et quantitative des différents constituants d'une huile
essentielle.
Parmi les méthodes d'analyse chromatographiques la méthode la plus utilisée dans le domaine
des huiles essentielles est La chromatographie en phase gazeuse. C'est une méthode de
séparation des composés gazeux ou susceptibles d'être vaporisés par chauffage sans subir une
décomposition dont voici le principe ci-après :
I.8.2.1- Principe de fonctionnement de la chromatographie en phase gazeuse (CPG).
La CPG est basée sur le principe de la chromatographie de partage[45]. La phase stationnaire
étant un liquide non volatil réparti ou greffé sur un support inerte. La phase mobile est
constituée de gaz inerte (H2, N2, He). La solution est injectée au moyen d'une seringue soit
manuellement, soit avec un injecteur automatique qui permet d'obtenir une meilleure
reproductibilité. La température de La chambre d'injection est réglée telle que la vaporisation
de l’échantillon se fasse dans un temps le plus court possible. Type de colonne utilisée et de la
polarité de la phase stationnaire qui contrôlent La séparation des composés.
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
20
Après avoir choisi le type de colonne appropriée et un programme de température adéquat, la
détection des composés élués est obtenue par un détecteur FID (flamme ionisation détector -
détecteur à ionisation de flamme). Dans le cas des huiles essentielles, le FID est le détecteur le
plus cité dans la littérature. Pour d’autres applications particulières, recherche de pesticides par
exemple, les détecteurs de type ECD (détecteur à capture d’électron) ou TSD (détecteur termo-
ionique spécifique) sont les plus adaptés. Ces détecteurs sont très rarement utilisés pour
l'analyse des huiles essentielles en raison de leur grande sensibilité envers les atomes de chlore,
d’azote ou de phosphore, atomes qui sont peu fréquemment rencontrés dans celles-ci.
I.8.2.2- Chromatographie en phase gazeuse/Spectrométrie de masse (GC/SM)
La chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectrométrie de masse est une méthode
d'analyse qui combine la séparation et l'identification (les performances de la chromatographie
en phase gazeuse et de la spectrométrie de masse) afin d'identifier et/ou de quantifier
précisément de nombreuses substances. La méthode est basée sur la séparation des constituants
à l’aide de la CPG et leur identification par la spectrométrie de masse.
Les spectres de masse obtenus sont ensuite comparés avec ceux des produits de référence
contenus dans les bibliothèques informatisées disponibles, commerciales (NIST/EPA/NIH
Mass Spectral Library[46], Wiley Registry of Mass Spectral Data[47], contenant plusieurs
milliers de spectres, Konig-Joulain, intitulée « Terpenoids and Related Constituents of Essential
Oils » contenant plus de 1200 composés) ou identifies au laboratoire. Il y a une bibliothèque
nommée « Arômes » elle contient près de 500 spectres de composés essentiellement
terpéniques. Il y a plusieurs spectres de masse expérimentaux peuvent aussi être comparés à des
spectres contenus dans des bibliothèques non informatisées (Figure 10)[48, 49]. Ces spectres
sont de constituants de l’huile essentielle inconnus dans les bibliothèques de comparaison et
qu’ils ne sont pas décrits dans la littérature. Il est alors nécessaire de les purifier par distillation
fractionnée ou par des techniques chromatographiques préparatoires telles la Chromatographie
sur Couche Mince (CCM), la Chromatographie liquide sur Colonne ouverte (CC), la
Chromatographie Liquide Haute Pression (CLHP) ou encore la Chromatographie en Phase
Gazeuse Préparatoire (CGP).
Pour se rendre à l’identification structurale on utilise les techniques spectroscopiques suivantes
: Résonance Magnétique Nucléaire du proton (RMN-1H) et du carbone-13 (RMN-13C), SM,
IRTF,… [50].
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
21
Figure 10 : Organigramme d’identification des huiles essentielles par GC et GC-SM.
I.9- Utilisation des huiles essentielles
Il existe plusieurs voies d’utilisations des H.Es nous pouvons les avales, les respires ou les
utilisés en application directes sur la peau :
I.9.1- La voie orale
Elle doit être utilisée uniquement sur conseils du médecin d’aromathérapie. Il faut jamais
prendre une huile pure dans la bouche peut se produire des brûlures. Aussi, nous conseillons de
ne jamais prendre plus de trois gouttes[51, 52]
I.9.2- La voie respiratoire
Les H.Es sont, très vite, absorbées par toutes les petites cellules ciliaires qui tapissent notre
arbre respiratoire depuis les fosses nasales jusqu’au bout de nos alvéoles pulmonaires.
GC/MS
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
22
I.9.3- La voie cutanée
C’est la voie idéale car sans danger et très efficace. Généralement, les huiles sont utilisées à des
concentrations très diluées. Il peut être utilisé de plusieurs façons soit massage ou simplement
en application selon la zone et l’affection à traiter. D’autres formes sont aussi possibles :
pommades, bain, etc.[53].
Dans tous les cas, les H.E pénètrent dans notre corps pour atteindre la circulation sanguine afin
pour être transporté jusqu’au site malade[54].
I.10- Action biologique, effets thérapeutiques
Les huiles essentielles sont utilisées pour leurs différentes propriétés et effets thérapeutiques
divers[55]
Depuis des millénaires, L'emploi d'huiles essentielles destiné au guérison et la prévention des
maladies.
Les être Humains ont pu constater l’efficacité de ces petites gouttes, de manière empirique dans
un premier temps et scientifique plus tard. A mesure que les études, les expériences et les
témoignages s’accumulaient, des principes communs se sont dessinés[56, 57].
Plusieurs études ont prouvé que l’activité biologique d’une huile essentielle liée avec sa
composition chimique, les groupes fonctionnels des composés majoritaires[58], et les effets
synergiques entre les composants. Ainsi la nature des structures chimiques qui la constituent,
mais aussi leurs proportions jouent un rôle déterminant[59].
I.10.1- Activité antimicrobienne des huiles essentielles
Les propriétés thérapeutiques des huiles essentielles se résument ou : antispasmodiques,
rafraîchissant, diurétique, antiseptique….
Cependant, dans ce travail, nous allons nous limiter à leurs propriétés antimicrobiennes,
antifongiques et antioxydant qui constitueront l’essentiel de notre étude de recherche.
Les propriétés antimicrobiennes des huiles essentielles sont bien connues et bien documentées.
En effet, de nombreux travaux de recherche ont mis en évidence leur puissante activité
antiseptique agissant aussi bien sur les bactéries, les champignons pathogènes que les virus[60,
61], Et ainsi leur donner diverses indications thérapeutiques..
L’activité antibactérienne des huiles essentielles a été la plus étudiée. On distingue deux sortes
d’effets des huiles essentielles sur ces microorganismes :
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
23
- Effet bactéricide (bactéricidie) : exerçant une activité mortelle
- Effet bactériostatique (bactériostase) : entraînant une inhibition de la croissance.
Ces actions des huiles essentielles sur la cellule bactérienne demeure encore insuffisamment
élucidée[62]. Plusieurs mécanismes seraient mis en jeu[63]:
- Précipitation des protéines et des acides nucléiques[64].
- Inhibition de la synthèse des macromolécules (ADN, ARN, protéines et peptido-
glycanes)[65].
- Inhibition de la perméabilité membranaire sélective[66] et détérioration membranaire.
- Inhibition de la glycolyse et déplétion potassique[67].
- Modification de la morphologie de la cellule bactérienne[68].
- Absorption et formation d’un film autour de la cellule bactérienne avec inhibition des
processus de respiration, d’absorption et d’excrétion[64].
Figure 11: Sites d’action des huiles essentielles sur la cellule bactérienne (Burt, 2004).
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
24
I.10.2- Activité antifongique
Les infections fongiques sont d'une actualité criante aujourd'hui. En effet, leur extension est
largement favorisée par l'utilisation abusive et parfois trop légère des antibiotiques.
Ici les groupes moléculaires cités en priorité pour leurs actions antibactériennes Elles sont
également active sur les champignons. Néanmoins, la durée de ce type de traitement pendant
une période plus longue que pour le traitement antibactérien.
Par exemple, les huiles essentielles de Cannelle, de Palmarosa, de Clou de girofle et de Niaouli
sont des antifongiques.
Le pouvoir antifongique est attribué aussi à la présence de certains groupements fonctionnels
chimiques dans la composition des HEs. Plusieurs travaux montrent que le pouvoir inhibiteur
était essentiellement dû à la réactivité de la fonction aldéhyde avec le groupement thiol des
acides aminés impliqués dans la division cellulaire[69].
D’autres auteurs ont démontré que la formation d’un complexe entre le donneur d’électrons et
l’aldéhyde Aboutir à un changement de l’état ionique de la membrane traduisant par un
déséquilibre d’échange avec le milieu extérieur. Ce déséquilibre entraîne la destruction
cellulaire[13]
Cependant, les phénols (eugénol, chavicol 4-allyl-2-6- diméthoxyphénol) sont plus
antifongiques que les aldéhydes testés [70].
I.10.3- Activité antioxydante
Les antioxydants sont des substances capables de protéger l’organisme contre les effets
de stress oxydatif[71].
Il existe trois types d’antioxydants : les antioxydants enzymatiques, les enzymes de réparation,
et les antioxydants non enzymatiques. Les substances naturelles dont les huiles essentielles sont
classées entant qu’antioxydants non enzymatiques.
L’activité antioxydante peut être primaire ou préventive (indirecte), cette dernière est capable
de retarder l’oxydation par des mécanismes indirects tels que la réduction
d’oxygène[72].
Par contre les antioxydants à action directe sont capables de donner des électrons à l’oxygène
radicalaire afin qu’ils puissent le piéger, empêchant ainsi la destruction des structures
biologiques. Ils peuvent agir comme agents réducteurs capables de passer leurs électrons aux
ROS et les éliminer[73].
Quelques travaux ont rapporté que certaines huiles essentielles sont plus efficaces que les
antioxydants synthétiques[74].
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
25
Les effets antioxydants d'huiles essentielles et d'extraits des plantes en raison principale de la
présence des groupes d'hydroxyle dans leur structure chimique[75]
On conclusion la composition chimique des huiles essentielles est directement responsable sur
les activités biologiques
Nous pouvons citer les composants suivants comme des molécules antibactériennes les plus
puissantes: le Carvacrol, le Thymol et l'Eugénol, le Géraniol, le Linalol, Térpineol menthol, etc.
Cette activité antivirale se retrouve surtout dans les huiles essentielles contenant des cétones,
des monoterpenols ou certains aldéhydes.
Les effets calmants et antispasmodiques; les aldéhydes (citral de la verveine,...), les
esters (salicylate de méthyle,...).
Les effets antiparasitaires; surtout les phénols.
Les effets anti-inflammatoires; selon le type de douleurs, on peut utiliser les esters, des
alcools (menthol) ou des aldéhydes (cuminal).
Les huiles essentielles sont de même utilisées pour traiter des aphtes, gingivites et maux de
gorge en faisant les gargarismes et les bains de bouche. Le massage aux huiles essentielles
constitue un traitement curatif puissant, stimulant et relaxant. Les huiles essentielles sont
incorporées dans les crèmes, les lotions, gels et shampooings. Les huiles essentielles possèdent
également des propriétés insecticides et insectifuges : c'est le cas de l'huile essentielle de
Cymbopogon schoenanthus, un biopesticide efficace contre collasobruchus maculatus F.,
prédateur de niébé[76].
L'huile essentielle de Bétula lenta (betula aleghaniensis), composée de 98,5% de salicylate de
méthyle naturel est très recherchée par son excellente activité antirhumatismale[30].
I.11- Toxicité des huiles essentielles Bien que les huiles essentielles sont des substances naturelles, mais cela ne signifie pas qu'il
est sans danger pour la santé humaine. Il est ainsi important de connaître le produit, le choisir
selon des critères qualificatifs rigoureux, de respecter avec précision les doses et de choisir le
mode d’administration adéquat, et pour éviter la survenue d’effets indésirables, et les
interactions avec d’autres médicaments.
Ainsi, les huiles essentielles peuvent s’avérer allergisants, photosensibilisants, cytotoxiques,
irritants, néphrotoxiques, hépatotoxiques, neurotoxiques…
On distingue les toxicités suivantes :
Chapitre I----------------------------------------------------------Les huiles essentielles
26
I.11.1- Toxicité par voie orale :
La majorité des huiles essentielles couramment utilisées présentent une toxicité par voie orale
faible avec des doses létales à 50% (DL50) supérieures à 5 g/kg. Cependant, la Sarriette et
l’Origan présentent une toxicité élevée autour des 1.4 g/kg (données observées chez l’animal),
tandis que les plus toxiques sont les huiles essentielles de Boldo (0,13 g/kg), de
Chénopode (0,25 g/kg), de Thuya (0,83 g/kg), ainsi que l’essence de moutarde (0,34 g/kg)[41].
L’eugénol, l’un des constituants du Thym, peut s’avérer hépatotoxique et même entraîner une
insuffisance rénale chez l’enfant à doses élevées (10 ml)[77].
I.11.2- Toxicité dermique :
L’usage des huiles essentielles en parfumerie ou en cosmétique, Elle nous oblige à utiliser en
application locale sur la peau, peut générer des irritations, allergies voire photosensibilisation.
C’est le cas de l’huile essentielle de Thym, d’Origan, de la Sarriette qui sont connues pour leur
pouvoir irritant et agressif, les essences d’agrumes (pamplemousse, citron…) qui sont
photosensibilisantes par des réactions épidermiques après exposition au soleil[78].
I.11.3- Cytotoxicité :
Quelques huiles essentielles peuvent être cytotoxiques sur les cellules animales et humaines.
En effet, il a été démontré que les huiles essentielles d’Origan, de différentes variétés,
présentent une forte cytotoxicité sur des cellules humaines cancéreuses[79, 80].
Egalement, il a été démontré que les huiles essentielles de Thym et de Lavande, selon la phase
dans laquelle elles sont mises en contact (phase liquide ou gazeuse), sont cytotoxiques sur des
cellules animales (hamster)[81].
I.11.4- Neurotoxicité :
Certaines huiles essentielles peuvent être convulsivantes et abortives suite à une utilisation
prolongée. C’est le cas des huiles essentielles à thuyones (Thuya, Absinthe, Sauge officinale)
qui sont neurotoxiques[16, 78].
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
27
II.1- Données botaniques et pharmacologiques de l’espèce étudiée
Ce travail a porté sur la plante Tucrium polium ssp aurasianum labiatae de la famille lamiacée
La plante est de la famille lamiacée
II.1.1- Place dans la classification systématique botanique
Tableau 1 : Place dans la classification systématique botanique
Classification APG III (2009) selon NCBI
Règne Plantae
Embranchement Spermatophyta
Sous embranchement Angiospermes
Classe Astéridées
Sous classe Lamiidées
Ordre Lamiales
Famille Lamiaceae
Genre Teucrium
Espèce Polium
Sous espèce aurasianum
II.1.2- Les Lamiales
La place des Lamiales dans la classification systématique botanique APG II (Angiosperm
Phylogeny Group) est la suivante [82-84] :
Embranchement des Spermaphytes (plantes à graines), encore appelés Phanérogames
Sous-embranchement des Angiospermes (graines protégées) ou plantes à fleurs
Clade des Eudicotylédones (Eudicots) ou dicotylédones vraies : plantes à grains de
pollen tri-apertirés ou d'un type dérivé, toujours dicotylédonées, toujours sans cellule à essence
dans les tissus parenchymateux.
Clade des Eudicotylédones centrales (Core Eudicots) : plantes ne combinant pas à la
fois la production d’alcaloïdes et une placentation marginale (contrairement aux
Eudicotylédones basales), à fleurs ayant des caractères apomorphiques (évolués) : périanthe
souvent hétérochlamydé (c’est-à-dire composé d’une corolle et d’un calice différenciés),
soudure des pièces, disposition verticillée, pentamérie, parfois apétalie.
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
28
Les étamines ne sont jamais laminées, le filet des anthères est généralement bien différencié.
La placentation est rarement marginale, souvent axile ou pariétale, moins souvent basale ou
apicale. Elles sont très souvent productrices de tanins, de bétalaïnes, d'huiles sinapiques ou de
composés iridoïdiques.
Classe des Asteropsida ou grade des Asterideae : plantes à ovules ordinairement
tenuinucellés et à fleurs gamopétales, moins fréquemment dialypétales ; étamines généralement
isomères des lobes de la corolle ou moins nombreuses, verticille d’étamines le plus externe
toujours alterne des pétales ; ovaire supère ou infère, ovules fréquemment unitéguminés, parfois
bitéguminés, ovules crassinucellés et bitéguminés extrêmement rares, placentation axile ou
pariétale ; semences albuminées ou fréquemment exalbuminés ; composés iridoïdiques ou
d’autres sortes de répulsifs fréquents, tanins rares, bétalaïnes et huiles sinapiques absentes.
Groupe des Euastéridées I, caractérisé par une sympétalie tardive et des fleurs assez
régulières à préfloraison tordue ou valvaire éventuellement tétracycliques.
Super-ordre des Lamianeae, qui regroupe Gentianales, Lamiales, Solanales et des
familles telles que les Borraginacées.
II.1.3- La famille des Lamiacées
La famille des lamiacées connue également sous le nom des labiées, comporte environ 258
genres pour 6900 espèces plus ou moins cosmopolites; mais dont la plupart se concentrent
dans le bassin méditerranéen tel que le thym, la lavande et le romarin[85].
Elle est divisée en deux principales sous-familles: les Stachyoideae et les Ocimoideae.
Les lamiacées sont des herbacées ayant la consistance et la couleur de l’herbe, parfois
sous-arbrisseaux ou ligneuses[85]. Une grande partie de ces plantes sont aromatiques riches
en l’huile essentielle d’où leur intérêt économique et médicinal. Entre autres, un grand
nombre de genres de la famille des Lamiaceae sont des sources de terpènoides, flavonoïdes et
iridiodes glycosylés.
II.1.4 - Caractères généraux des Lamiacée[86, 87]
- les tiges sont quadragulaires, au moins dans leur jeune âge, et sont à rameaux opposés,
- les feuilles opposées sont simples, parfois amplexicaules, toujours sans stipule et à limbe
penninerve,
- les inflorescences formées par de faux verticilles axillaires ou glomérules proviennent de la
réunion de 2 cymes bipares,
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
29
- Les fleurs hermaphrodites ou unisexuées sont accompagnées de bractéoles et ont évolué vers
l’adaptation à la pollinisation par les insectes (entomophilie),
- Le calice est gamosépale persistant à 5 sépales soudés,
- la corolle est gamopétale et zygomorphe. Elle comprend un tube plus ou moins long, droit
ou incurvé, souvent poilu. Le limbe est bilabié, partagé en 5 lobes (2 pour la lèvre
supérieure, 3 pour la lèvre inférieure)
- Les étamines sont au nombre de 4 : 2 grandes et 2 petites (sauf pour le genre Mentha qui en
compte 5),
- Le gynécée est formé de 2 carpelles formant un ovaire biloculaire reposant sur un disque
glanduleux et possédant 2 ovules par loge. Chaque loge se subdivise par une fausse cloison en
2 logettes uniovulées. Les ovules sont anatropes ascendants à raphé interne,
- Le fruit est un tétrakène formé de 4 nucules secs enveloppés par le calice.
II.1.5- Description botanique
C'est une plante vivace recouverte de poils ligneux qui lui donne une couleur grise bleutée.
L'aspect de la plante est très variable en général on la rencontre en touffe dense[88] . C'est une
plante herbacée, ramifiée dès la base, et à feuilles linéaires, vert – grisâtres fortement révolutées
sur les marges. Le calice est vert-grisâtre, la corolle est blanche. Les inflorescences en têtes
compactes, les capituliformes sont situées au sommet des tiges[3]. Teucrium polium est une
plante à fleur (sauvage) qui se trouve abondamment dans le sud-ouest de l'Asie, en Europe, et
en nord-africain[89].
Figure 12 : Teucrieum Polium ssp Aurasianum
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
30
II.1.6- Synonymes[90] :
Nom en Italie : Camedrio polio, Canitola, Polio.
Nom en espagnol : Poleo montano, Timo mascle, Tomillo terrero, Zamarilla.
Nom en français : Polio des montagnes, Germandrée tomenteuse.
Nom commun : El-Djaada. El-khayata
II.1.7- Répartition géographique
Pareillement, Teucrium est originaire du Sud-Ouest d’Asie, d’Europe et d’Afrique du Nord
(abandonnément trouvée dans le secteur Irano-Turanien principalement méditerranéen et
occidental). Elle pousse dans les pelouses arides, les rocailles de basse altitude, collines et les
déserts arides[91].
II.1.8-Propriétés d’utilisations traditionnelles et médicales
Des espèces de T. polium ont été employées en tant qu'herbes médicinales pendant plus de 2000
années comme diurétique, inotropique et chronotropique[92], tonique, antipyrétique,
cholagogue et anorexiques[93]. Le feuillage de T. polium légèrement poivré, était couramment
utilisé pour relever les salades ou parfumerles fromages de chèvres.Une infusion des feuilles
et des fleurs était ainsi consommée comme boisson régénératrice[94]. En médecine
traditionnelle, Teucrium est employée comme analgésique, antispasmodique et
hypolipidémique. Cette plante peut avoir quelques intérêts d’ordre cliniques: cas de désordres
stomacaux[95, 96] et gastro-intestinaux tels que la colite. Ces résultats le soutiennent également
pour son emploi folklorique pour soulager ces douleurs[91].
L’utilisation de l’extrait éthanolique de T. polium sur des milieux de culture de Saccharomyces,
in vitro, a mené à diminuer letaux des acides gras et bloquent la peroxydation au niveau des
érythrocytes, ainsi il à montrer des effets antibactériens et antifongiques[97]. Cette plante est
largement distribuée comme agent hypoglycémiant.
Sa décoction dispose un effet hypoglycémiant chez les rats normoglycémiques par rapport aux
modèles hyperglycémiques induits par le streptozotocine[98]. Cependant, des épreuves de
sûreté sont exigées pour confirmer son action hypoglycémiante.
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
31
II.2- Travaux antérieurs
II.2.1- Composition chimique
Plusieurs travaux ont été réalisés sur le genre Teucrium et quelques-uns sur l'espèce Teucrium
polium. L'étude menée par[99], montre que les huiles essentielles de la partie aérienne des deux
variétés de Teucrium polium (album et pilosum) sont caractérisées par une richesse en
sesquiterpènes, de 78.61% à 92.07% respectivement pour les deux variétés. D'autre part,[100]
, rapportent que l'huile essentielle de Teucrium polium poussant à l'état spontané en Jordanie, a
donné un faible rendement et contient une forte teneur en 8-cedron-13-oi. D'autres composés
sont également présent en quantités appréciables : le J3-caryophyllène, le D- germacrène et le
sabinène. L'huile essentielle de Teucrium polium spp aurasiacum, récoltée en Algérie a révélé
un rendement important, et a donné une composition chimique caractérisée par la présence de
l'α-cadinol, le 3,13-hydroxy-a- muurolène, l'α-pinène et le J3-pinène essentiellement[101].
Deux diterpénoïdes ont été isolés de la partie aérienne du Teucrium polium, qui sont deux néo-
clérodanes de formule C20H26O7 [102].
II.2.2- Les activités biologiques
Plusieurs recherches ont démontré certains effets pharmacologiques attachés à l’utilisation de
Teucrium, parmi lesquelles on invoque l’action antibactérienne, antiinflammatoire, anti-
ulcerogène, anti-nociceptive, antispasmodique, antidiabétique, diurétique, hypolipidémique,
antifongique, antagoniste du calcium et cytotoxique[91, 103-105]. Récemment, quelques
rapports dans la littérature dévoilent des effets antioxydants des extraits
bruts de T. polium[106] . Par conséquent, d'autres investigations sont nécessaires maintenant
pour élucider le mécanisme de l'action pharmacologique et identifier les composants bioactifs
responsables de telles actions afin d'expliquer leur efficacité thérapeutique.
II.2.2.1-Anti-nociceptive, antispasmodique :
L’extrait aqueux des parties aériennes de T. polium a montré des effets antispasmodiques et
anti-nociceptifs. D’autres études affirment des propriétés antiviscérales de son extrait
éthanolique contre la douleur comparables à ceux de l’hyoscine et de l'indométhacine ; et
suggère son emploi en thérapies antispasmodiques chez l’homme. La présence des flavonoïdes
et des stérols pourrait être responsable de l'activité anti-inflammatoire de cette plante[91, 96].
Chapitre II---------------------------------------------------------------Etude botanique
32
II.2.2.2-Antidiabétique :
L'extrait aqueux de T. polium a montré un effet hypoglycémiant chez les rats.
La propriété insulinotropique de cet extrait a été encore évaluée, in vitro, en utilisant des îlots
pancréatiques de rat[105]. Les données ont indiqué l’extrait brut aqueux est capable de réduire
le taux du glucose sérique principalement en augmentant la sécrétion d'insuline par le pancréas
par comparaison aux îlots témoins. Cependant, les composés responsables de l'activité
hypoglycémique ne sont pas encore élucidés[97, 107].
II.2.2.3-Antifongique :
L’extrait de T. polium a été employé dans le traitement des abcès fongiques[105].
II.2.2.4-Antipyrétique, Antimicrobien :
L’extrait éthanolique deT. polium présente un effet antipyrétique contre la levure et le pyrexia
de carragénine. Le mécanisme du l’hyperthermie de carragénine a été liée à un dégagement des
prostaglandines au site de l'injection par l'irritant en inhibant la synthèse de prostaglandines au
niveau périphérique[108]. Cette hypothèse est renforcée par le fait que cet extrait peut empêcher
la formation d'œdème. Cependant, l’extrait de T. polium a montré une remarquable activité
antibactérienne contre les bactéries Gram positive et Gram négative. D'autre part, il présente
des degrés élevés de résistance à nombreux agents antimicrobiens[103, 109].
II.2.2.5-Cytotoxique :
Les résultats montrent que l’extrait éthanolique de T. polium dispose un potentiel antitumoral
très efficace par l’inhibition, in vivo, de la génération de colonies de quelques lignées
cellulaires en milieu d’agarose et la suppression leurs croissance[110]. Toutefois, l’extrait
aqueux de T. polium augmente la cytotoxicité négociée contre N-méthyl-N-nitro-N-
nitrosoguanidine sur des cultures de cellules primaires des hépatocytes des rats et réduit
significativement les index mitotiques et les cellules nécrotiques[111].
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
33
III.1- Cadre d’étude
Ce travail a été effectué au sein du laboratoire de recherche génie des procédés du département
de génie des procédés, à la faculté des sciences appliqués de l’Université Ouargla. Ce dernier
qui s'occupe de l'extraction et de la caractérisation des huiles essentielles, ainsi que d'autres
extraits totaux des plantes médicinales. Ce travail se repose sur le protocole expérimental
suivant
- L’extraction de l’huile essentielle d’espèce végétale étudiée
- Analyses effectuées sur l’extrait :
- Analyses physico-chimiques
- Séparations chromatographiques et caractérisation de l’huile essentielle par
chromatographie en phase gazeuse couplée à la spectromètre de masse
- Tests antibactériennes :
- Etude de l’activité antibactérienne vis-à-vis de quelques souches bactriennes
- Détermination de la concentration minimale inhibitrice CMI
- Tests antioxydants :
- Etude de pouvoir antioxydant de l’huile essentielle par deux méthodes
- DPPH (1,1-diphényl-di-picrylhydrazyl)
- FRAP (ferrique reducing antioxydant power).
- Tests antifongiques :
- Etude de l’activité antifongique
- Détermination de la CMI
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
34
Figure 13 : Plan général de la partie expérimentale
Activités antifongique
Extraction des huiles essentielles
Analyses Activités biologiques Effet du séchage
Identification de la
composition chimique par
GC/MS
Analyses physico-chimiques
Rendement
Indice de réfraction
Indice d’acide
pH
Densité
Activité
antibactérienne
Activités antioxydant
CMI
Diffusion sur milieu gélosé
FRAP
DPPH
CMI
Contact directe
Teucrium polium ssp aurasianum
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
35
III.2- Matériel végétal
La plante est récoltée au niveau de la région des Aurès dans la wilaya de Batna au mois de Mai
2013 à une altitude de 1547 m (35°10'0" N; 6°10'0" E). Spécimen bons sont déposés dans
l'herbier de l'Institut National d'Agronomie (INA), El-Harrach, Algérie, sous la référence AC-
AS3. La partie récoltée est constituée de feuilles, tiges et fleures (partie aérienne).
Figure 14 : La plante étudiée Teucrium polium ssp aurasianum
III.3- Extraction des huiles essentielles
L’extraction de l’huile essentielle est effectuée par hydrodistillation au moyen d’un dispositif
d’extraction type Clevenger. L’opération consiste à introduire 100 g de masse végétale séchée
dans un grand ballon de 2 litres, on y ajoute une quantité d’eau distillée correspondant à 2/3
du volume du ballon. L’opération d’extraction est réalisée en trois heures à partir du début
d’ébullition. Enfin l’huile obtenue est conservée dans des flacons fumé et bien scellés à une
température de 5°C, et pour éliminer les gouttes d’eaux on ajoute, une spatule de sulfate de
magnésium anhydre: le sulfate anhydre capte les traces d’eau qui pourraient encore rester
dans la phase organique (les huiles essentielles).
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
36
III.4- Caractérisation des huiles essentielles :
III.4.1- Analyse physico-chimique :
III.4.1.1- Le rendement
Le rendement est le rapport de la quantité d'huile recueillie après distillation sur la quantité de
la biomasse, exprimée en pourcentage. Les quantités d'huile essentielle proviennent du cumul
suivre l'effet de séchage sur le rendement d'extraction.
R : Rendement en HE en (%)
Mhe : Masse de l’huile essentielle
Mvg : Masse végétale sec
100 × Mvg
MheR
III.4.1.2- Indice de réfraction
Les indices de réfraction sont mesurés à l'aide d'un refractomètre[112] (AFNOR, 2000) à la
température ambiante puis ramenés à 20°C par la formule : N20 = Nt+ 0,00045 (T-20°C) où
N20 : indice à 20°C,
Nt : indice à la température ambiante ou de mesure
T : température ambiante ou de mesure
Les produits étalons de qualité pour réfractométrie servant à ajuster le réfractomètre sont les
suivants (les indices de réfraction à 20°C sont donnés dans la parenthèse) :
- Eau distillée (1,333)
- p-cymène (1,4906)
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
37
- benzoate de benzyle(1,5685)
- Bromo-1 naphtalène(1,6585)
III.4.1.3- Indice d'acide
Définition
Il donne une évaluation sur la quantité d'acides gras libres. Ces acides sont responsables d'une
plus grande facilité au rancissement.
On appelle indice d'acide d'une huile, le nombre de milligramme d'hydroxyde de potassium
alcoolique nécessaire pour neutraliser les acides gras libres contenus dans un (1) gramme (g)
de matière grasse.
Principe
Les matières grasses s'altèrent par vieillissement en donnant naissance par hydrolyse des acides
gras libres. Cette acidité peut être mesurée par alcalimétrie en milieu éthéro-alcoolique, à l'aide
de l'hydroxyde de potassium alcoolique titrée.
Mode Opératoire
Une prise d'essai de 10g d'huile est solubilisée dans un erlenmeyer contenant préalablement un
mélange d'ether diéthylique/éthanol dans les proportions 1/1. Le titrage des acides gras libres
en solution est éffectué avec une solution à 0,1N d'hydroxyde de potassuim (KOH) dans de
l'éthanol 95°, en utilisant la phénolphtaléine comme indicateur coloré et cela sous agitation
jusqu'au virage au rose.
Expression des résultats
Le résultat est exprimé en mg de KOH par g d'huile.
Indice d'acide = [(V*T*56.1) / P]
Avec : V= volume de KOH
T= titre de la solution de KOH
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
38
P= prise d'essai en g
III.4.1.4- Variation de la Densité
La densité est le rapport de la masse volumique d’un liquide à celle de l’eau.
Cependant, la mesure des densités de ces huiles à été effectué par le moyen d’un densimètre
type DMA 35N
La densité est mesuré à l'aide d'un densimètre[112] (AFNOR, 2000) à la température ambiante
puis ramenés à 20°C par la formule : D20 = Dt+ 0.00068 (T-20°C) où
D20 : densité à 20°C,
Dt : densité à la température ambiante ou de mesure
T : température ambiante ou de mesure
III.4.1.5- Potentiel d’hydrogène (pH) :
Cette mesure est effectuée par un pH-mètre
III.4.2- Analyses par chromatographie en phase gazeuse couplé à spectromètre de masse
GC/MS
L’analyse de l’huile essentielle de Teucrium polium ssp aurasianum Labiatae a été réalisée, au
INRAP (institue nationale de recherche et d’analyse physico-chimique) Tunisie, par
chromatographie en phase gazeuse type HP 6890 couplée à une spectroscopie de masse type
HP 5975B avec ionisation par impact électronique (70 eV), équipée par une colonne capillaire
HP-5MS (5%-phenyl- methylpolysiloxane) (30 m x 0,25 mm, épaisseur du film : 0,25 cm)
programmé de 50° C jusqu’à 300° C, maintenue à 300° C pendant 10 min de 2° C/mn. Le gaz
vecteur était l'hélium avec un débit fixe de 0,8 mL / min.
L’huile essentielle (1 μL) a été injectée automatiquement et Le mode d’injection est Split.
L’appareil est piloté par un système informatique gérant une bibliothèque de spectres de masse
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
39
III.5- activités biologique :
III.5.1- activité antibactérienne
III.5.1.1- Souches bactériennes
L’activité antimicrobienne de l’huile essentielle de Teucrium polium ssp aurasianum a été
évaluée sur plusieurs souches bactériennes
Ces souches sont : Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Leisteria, Proteus, Pseudomonas
aeruginosa, salmonella, Staphyloccous aureus et Staphyloccous Sp
Elles proviennent du laboratoire de microbiologie de l’hôpital Mohamed BOUDIAF Ouargla
et du laboratoire de microbiologie de l’Université Kasdi Merbah, Ouargla.
III.5.1.2- Tests d’activités antimicrobiennes
Les tests d’activités antimicrobiennes sont réalisés par la technique par contact direct (méthode
de diffusion sur milieu gélosé)[113].
III.5.1.3- Principe de l'antibiogramme :
L'antibiotique présent dans le disque migre dans la gélose qui a été ensemencée par la souche
bactérienne à étudier. Il se forme une zone circulaire autour du disque de gélose imbibée
d'antibiotique dont la concentration décroit quand on s'éloigne du disque. Dans cette zone, la
croissance des bactéries est ou n'est pas inhibée par la concentration d'antibiotique à laquelle
elles sont soumises. Les bactéries qui peuvent se multiplier forment des colonies visibles à l'oeil
nu après quelques heures de développement.
III.5.1.4- Préparation des boîtes de gélose (J-24H)
Préparation zone stérile :
Désinfecter la paillasse à l'eau de javel diluée
Utiliser un bec bunsen ou un bec électrique pour réaliser une zone stérile.
Fusion de la gélose :
Réchauffer le contenu des bouteilles de Mueller Hinton :
Au bain marie. Remuer régulièrement pour homogénéiser
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
40
Au micro-onde. Remplacer le bouchon métallique par du coton cardé ou de la gaze stérile.
Réchauffer à faible puissance : 7 min puissance 150 W.
Couler la gélose dans les boites : Couler la gélose dans les boites organisées dans la
zone stérile limitée aux 15 cm autour du bec. (20 à 25 mL par boite soit une hauteur de 3 à 4
mm) Laisser refroidir couvercle entre-ouvert pour éliminer la vapeur d'eau.
Une fois solidifiées, les boîtes de gélose peuvent être stockées quelques jours au réfrigérateur
(couvercle vers le bas).
Cette méthode consiste à déposer des disques de papiers filtres imprégnés d’huile essentielle
sur la surface des géloses ensemencées par le germe à tester et de mesurer les diamètres
d’inhibition en millimètre (mm) après incubation de 24 h à 37° C.
Les disques de papiers chromatographiques de 6 mm de diamètre , préalablement stérilisés sont
déposés à la surface de gélose ensemencée après avoir été chargé de 5 µl d’huile essentielle on
utilise des témoins négatifs utilisant uniquement des disques placés sur gélose inoculée sans
huile essentielle
La sensibilité des différentes souches vis-à-vis d’huile essentielle étudiée est classée selon le
diamètre d'inhibition selon les critères suivants[114]:
Non sensible (-) pour Ø<8 mm;
Sensible (+) pour 9-14 mm;
Très sensible (++) pour Ø 15-19 mm et
extrêmement sensible (+++) pour Ø >20 mm.( Ponce et el., 2003)
III.5.1.5- Détermination de CMI
Sur la base des résultats, la concentration minimale inhibitrice correspond à la plus faible
concentration d'huile qui est corrélée à une absence de croissance[115].
Pour déterminer les CMI (concentration minimale inhibitrice), nous avons suivi les mêmes
étapes que pour l'évaluation de l'activité antibactérienne selon la méthode de diffusion sur
milieu gélosé, en variant les concentrations des huiles essentielles.
La suspension bactérienne (108UFC/mL) est ensemencée en surface par écouvillonnage sur
milieu gélosé (Mueller-Hinton) dans une boîte de Pétri. Le contact avec les solutions à tester se
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
41
fait par l’intermédiaire d’un disque de papier (6 mm de diamètre) sur lequel 10 L de solution
(huile essentielle à différentes dilutions, 1, ½, ¼, 1/8, 1/16 ….
Les boites ont été ensuite retournées et incubées à 37°C pendant 24 heures.
Un disque contenant du DMSO est utilisé comme blanc. Chaque test est réalisé en triplé.
III.5.2- Activité antioxydante
III.5.2.1- Méthode de DPPH :
Pour évaluer l’activité antioxydante de l’huile essentielle nous avons utilisé la méthode du
DPPH (1,1-diphényl-di-picrylhydrazyl) proposée par[116, 117] avec des modifications.
La solution de DPPH est obtenue en dissolvant 4 mg de la poudre dans 100 ml de l’éthanol.
L’huile essentielle a été préparée par dissolution dans l’éthanol absolu. Le test s’effectue en
mélangeant 1 ml de la solution précédente de DPPH avec 1ml de l’huile à tester à différentes
concentrations. Après une période d’incubation de 30 minutes à la température du laboratoire,
l’absorbance est lue à 517 nm
L’antioxydant de référence ou le contrôle positif (Ascorbic acid) a été aussi préparé selon la
même méthode avec des mêmes concentrations pour la comparaison
Selon[116, 117], l’inhibition du radical libre de DPPH en pourcentage (I%) est calculé de la
manière suivante
𝐼 % = (𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘 − 𝐴𝑠𝑎𝑚𝑝𝑙𝑒
𝐴𝑏𝑙𝑎𝑛𝑘 ⁄ ) × 100
Avec A blanc est l’absorbance du témoin (contenant tous les réactifs sans le produit à tester) et
A échantillon est l’absorbance du test.
Le graphique de la variation du pourcentage d’inhibition en fonction de la concentration de
l’huile essentielle permet de déterminer le IC 50 correspondant à 50 % d’inhibition et qui
constitue l’activité antioxydant de l’huile essentielle. Cette valeur est comparée à celle trouvée
pour le composé de référence.
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
42
III.5.2.2- Méthode de la réduction du fer FRAP (Ferric reducing antioxidant power)
L’activité réductrice du fer de nos extraits est déterminée selon la méthode décrite par[118]
(Oyaizu, 1986), basée sur la réduction du Fe3+ présent dans le complexe K3Fe(CN)6 en Fe2+
Un millilitre de l’huile essentielles à différentes concentrations est mélangé avec 2,5ml d’une
solution tampon phosphate 0,2 M (pH 6,6) et 2,5ml d’une solution de ferricyanure de potassium
K3Fe(CN)6 à 1%. L’ensemble est incubé au bain marie à 50°C pendant 20 minutes, ensuite
2,5ml d’acide trichloroacétique à 10% sont ajoutés pour stopper la réaction. Les tubes sont
centrifugés à 3000 rpm pendant 10 minutes
2,5ml du surnageant sont mélangés à 2,5ml d’eau distillée et 0,5ml d’une solution de chlorure
ferrique fraîchement préparé à 0,1%.
La lecture de l’absorbance du milieu réactionnel se fait à 700nm contre un blanc
semblablement préparé, en remplaçant l’huile essentielle par de l’éthanol distillée qui permet
de calibrer l’appareil (UV-VIS spectrophotomètre). Le contrôle positif est représenté par une
solution d’un antioxydant standard ; l’acide ascorbique dont l’absorbance a été mesuré dans les
mêmes conditions que les échantillons. Une augmentation de l’absorbance correspond à une
augmentation du pouvoir réducteur d’huile essentielle testée[119].
III.5.3- Activité antifongique
L’activité antifongique de l’HE étudiée a été testée sur deux souches pures issues de
Laboratoire de Microbiologie de la Faculté des Sciences de la nature,
Université Kasdi Merbah, ouargla. Les souches sont : Alternaria arborescens, fusarium salani,
Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum, et Stemphylium solani.
III.5.3.1- Souches fongiques testées
Les souches fongiques choisies dans cette étude sont isolés à partir des feuilles de tomate, de
poivrons et feuilles de blé.
L’identification des espèces a été réalisée par macro- et microscope
Les espèces ont été identifiées par Mr. Bensaci Messaoud, laboratoire de Protection des
Ecosystèmes en Zones Arides et Semi-Arides. Université de Ouargla, Algérie.
III.5.3.2- Méthode de contact direct
La méthode adaptée est la méthode de contact direct qui permet la mise en évidence de l’activité
antifongique (fongistatique ou fongicide) des huiles essentielles.
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
43
Compte tenu de la non miscibilité des huiles à l’eau et par conséquence au milieu de culture,
une mise en émulsion de ces huiles a été réalisée par le tween 20 afin d’obtenir dans le milieu
une répartition homogène des composés à l’état dispersé[120, 121]. Les milieux de différentes
concentrations de 0,05% - 0,25%- 0,5% et 0,75% en huile essentielles avec le tween 20, sont
incorporées dans le milieu de culture PDA (Potato Dextrose Agar) après autoclavage à 121° C,
1 bar de pendant 30 min. Ces concentrations sont préparées de la façon suivante :
- Milieu 1(Témoin): 100 ml PDA + sans HE .
- Milieu 2: 100 ml PDA + 50µl HE + 0,5ml tween 20. Concentration en % (v/v) = 0,05
- Milieu 3: 100 ml PDA + 250µl HE + 0,5ml tween 20. Concentration en % (v/v) = 0,25
- Milieu 4: 100 ml PDA + 500µl HE + 0,5ml tween 20. Concentration en % (v/v) = 0,5
- Milieu 5: 100 ml PDA + 750µl HE + 0,5ml tween 20. Concentration en % (v/v) = 0,75
Le mélange de chaque un milieu, est coulé à raison de 5,5 ml dans des boites de Pétri de
60mm de diamètre.
A l’aide d’un embout stérile, nous découpons un fragment de culture fongique d’environ 0,8
cm de diamètre à partir d’un tapis mycélien âgée de 7 jour, est déposé au centre de la boite de
pétri.
Nous opérons de la même façon pour chaque champignons et chaque concentration d’huile
essentielle, les boites de pétri sont ensuite fermées hermétiquement par le para film et incubées
à 25°C, pendant 7 jours.
Pour chaque concentration, trois répétitions sont préparées de la même façon, afin de minimiser
l’erreur expérimentale.
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
44
Figure 15 : Protocole expérimental de l’essai d’activité antifongique de chaque huile
essentielle de Teucrium polium aurasianum
III.5.3.3- Paramètres étudiés dans l’activité antifongique
Evaluation de la croissance mycélienne
On a déterminé l’influence, des huiles essentielles sur la croissance mycélienne. Dans le but
d’estimer l’évolution de la croissance mycélienne qui est effectuée quotidiennement, par la
mesure du diamètre de la colonie mycélienne du champignon. Cette lecture est toujours réalisée
en comparaison avec celles des témoins, qui sont démarrés dans les mêmes conditions et le
même jour du test.
Toute pousse même légère de chaque champignon sera considérée comme action négative c'est-
à-dire que l’huile essentielle en question n’est pas inhibitrice vis-à-vis de la croissance fongique.
Témoin 0 %
Alternaria arborescens
fusarium solani
Milieu de culture
(PDA)
TWEEN 20 + HE %
0,05 0,75 0,5 0,25
Chapitre III--------------------------------------------------------Matériels et méthodes
45
Taux d’inhibition (TI%)
D’après[122] les taux d’inhibition de la croissance par rapport témoin, sont ensuite calculés
selon la formule suivante :
TI(%) = Taux d’inhibition exprimé en pourcentage.
dC : Diamètre de la zone de croissance du témoin
dE : Diamètre de la zone de croissance de l’essai (huiles essentielles)
Détermination de la vitesse de croissance mycélienne (VC)
Selon (Cahagnier et Molard, 1998)[123] la vitesse de la croissance mycélienne de chaque
concentration est déterminée par la formule :
D = Diamètre de la zone de croissance du chaque jour (mm).
Te = Temps d’incubation (jour).
TI(%)=100 x (dC-dE)/dC
VC = [D1/Te1]+[(D2-D1)/Te2]+ [(D3-D2)/Te3]+… + [(Dn-Dn-1)/Ten]
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
46
IV.1- Rendement d’extraction :
Les extractions sont réalisées par deux méthodes à savoir l'hydrodistillation qui est fourni des
huiles essentielles de couleur jaunâtre avec une très forte et persistante odeur.
Le rendement en huile essentielle de la partie aérienne de Teucrium polium ssp aurasianum est
0,585 % (w/w) ce rendement est plus faible comparativement à ceux obtenu résultats obtenu
qui est de 1.7 % (w/w) et 0.75 % (w/w) par[101, 124]
Par rapport aux autres espèces de la même famille étudiées, notre rendement est considéré
comme fort comparé à celui obtenu par[125] qu’est de l’ordre de 0.1% (w/w)
On peut déduire que le rendement en huile essentielle d'une même espèce peut varier, et ceci
en fonction de plusieurs paramètres, telle que : l’espèce de la plante le temps de récolte la
méthode d’extraction.
IV.2- Effet du séchage sur le rendement des huiles essentielles
Figure 16 : Variation du rendement des huiles essentielles et la perte de poids de la plante
Teucrium polium ssp aurasianum au cours du temps de séchage.
0
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
110
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9
ren
de
me
nt
d'e
xtra
ctio
n(%
)
pe
rte
de
po
ids
(g)
jours
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
47
Les rendements d’extraction de l’huile essentielle de Teucrium polium subissent une variation
notable en fonction du temps de séchage de la matière végétale. En effet, à l’état frais, le
rendement est de 0,368 % et passe à 0,585% après 24 heures de séchage est le rendement
maximal. On remarque une baisse de rendement au reste des jours de séchage
Le rendement augmente d'abord jusqu'à atteindre un optimum puis diminue à la comparaison
de l’évolution de la teneur en eau ou la perte de poids pendant le séchage et celui du rendement,
il semble que les deux phénomènes sont totalement indépendants l’un de l’autre.
Le séchage de la plante, avant sa mise en distillation, est un traitement qui a des effets très nets
sur le rendement en huile essentielle. Plusieurs travaux ont été menés sur cette question et ont
confirmé un phénomène général. Le rendement en huile essentielle, exprimé par rapport à la
matière sèche, évolue durant le séchage du matériel végétal avant sa distillation ; ce rendement
commence, dans une première phase, par augmenter très nettement. Il atteint un maximum.
Puis dans une deuxième phase, il baisse régulièrement. La durée de la première phase et le
niveau du rendement optimal dépendent de l’espèce végétale concernée et des conditions de
séchage mises en œuvre (séchage naturel à l’ombre ou au soleil). Cette règle a été confirmée
pour l’eucalyptus[126, 127], pour la verveine[128, 129], pour les lavandes[130] [12], pour la
tanaisie annuelle[131, 132] et pour le romarin[132, 133]. Ces travaux réalisés sur cette question
au niveau de laboratoire des plantes aromatiques, à l’I.A.V. Hassan II, seule une espèce a
échappé à cette règle. Dans ce cas, le rendement des huiles essentielles reste constant pendant
plusieurs semaines[134]. Au Québec, la même observation est faite dans les cas des feuillages
du sapin baumier (Abies balsamea (L.) Mill.), de l’épinette noire (Picea mariana (Mill.) B.S.P)
et du bois de Thujaoccidentalis[135].
Zrira[127] [9] a cherché à comprendre l’origine de ce phénomène. Après avoir vérifié plusieurs
hypothèses, elle a conclu qu’il s’agit d’un phénomène biologique. La plante, après sa récolte
continue à vivre et son activité de biosynthèse des terpènes et dérivés s’accentue. Il paraît s’agir
pour la plante d’un moyen de défense contre le stress hydrique. C’est ce qui expliquerait
l’augmentation des rendements en huiles essentielles pendant les premières phases. Après la
mort définitive de la plante, toute l’activité de biosynthèse s’arrête et les pertes d’huiles
essentielles par évaporation ne sont plus compensées, d’où les baisses des rendements de
distillation.
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
48
IV. 3- Analyses physico-chimique et organoleptiques :
Les propriétés organoleptiques et physico-chimiques constituent un moyen de vérification et de
contrôle de la qualité de l’HE. Nos essais ont été effectués selon un protocole précis et obéissent
aux normes édictées par l’ISO. Pour l’HE Teucrium polium aurasianum, c’est la norme NF
ISO 4731 :2006 (NF T 75-212) qui est en vigueur.
IV.3.1- Caractéristiques organoleptiques :
A l’issue des distillations, l’HE obtenue est de couleur jaune avec une odeur prononcée
citronnée.
Les paramètres organoleptiques de notre HE sont en accord avec ceux répertoriés dans les
normes AFNOR
Tableau 2 : Propriétés organoleptiques de l'HE de Teucrium polium aurasianum.
Paramètre AFNOR Teucrium polium aurasianum
Aspect Liquide mobile, limpide Liquide
Couleur Jaune ambré à jaune verdâtre Jaune
Odeur Rosée, ± menthée Rosée, légèrement citronnée
IV.3.2- Caractéristiques physico-chimique
Tableau 3 : Analyses physico-chimique de HE de Teucrium polium aurasianum.
Paramètre Teucrium polium aurasianum Norme AFNOR
Densité 𝒅𝟐𝟎𝟐𝟎 0,867 Norme NF T 75 - 111
Indice de réfraction 𝒏𝒅𝒕 1,465 Norme NF T 75– 112
pH 5,49 5 - 6.5
Indice d’acide 3,276 Norme NFT-60 -2000
La densité relative et le potentiel d’hydrogène pH sont dans les normes
Cependant et malgré ces fluctuations, nous remarquons que les paramètres physico-chimiques
de nos HE sont en accord avec ceux mentionnés par les normes.
Pour les constantes chimiques, l'indice d'acide donne une idée sur le taux d'acides libres. Dans
notre étude, cet indice, certes dans les normes, demeure relativement élevé. Cela peut trouver
une explication dans la dégradation de l'HE (hydrolyse des esters) durant sa conservation, ce
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
49
qui est à terme préjudiciable. Inversement, un indice d’acide inférieur à 2 est une preuve de
bonne conservation de l’essence (faible quantité d'acides libres)[136].
Un indice de réfraction variant essentiellement avec la teneur en monoterpènes et en dérivés
oxygénés. Une forte teneur en monoterpènes donnera un indice élevé. Pour certains
auteurs[136], le faible indice de réfraction de l'HE indique sa faible réfraction de la lumière ce
qui pourrait favoriser son utilisation dans les produits cosmétiques.
La détermination des propriétés physico-chimiques est une étape nécessaire mais demeure non
suffisante pour caractériser l'HE. Il sera donc primordial de déterminer le profil
chromatographique de l'essence aromatique. Cette dernière analyse donne la composition
chimique de substances trouvées dans l’huile essentielle de Teucrium polium aurasianum.
IV.4- Détermination de la composition chimique de HE
Les résultats des analyses par et CG/SM de l’huile essentielle extraite de la plante Teucrium
polium ssp aurasianum sont présentés dans le Tableau 4. Trente-cinq constituants sont
identifiés représentant un total de 99,99 % de cette essence
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
50
Fig
ure 1
7: C
hro
mato
gram
me en
GC
/SM
de H
E d
e Teu
crium
poliu
m ssp
au
rasia
nu
m
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
51
Tableau 4 : composition chimique de HE de Teucrium polium ssp aurasianum
pic Compound RI (%)
1 α-thuiene 742 0.48
2 α-Pinene 782 25.42
3 Camphene 822 0.23
4 n-Butylbenzene 846 0.09
5 β-Pinene 953 8.59
6 β-Myrcene 1032 5.19
7 D-Limonene 1240 34.72
8 β-Ocimene 1323 0.30
9 α-Terpinolene 1621 0.21
10 Isopinocarveol 1832 0.18
11 Myrtenal 2188 0.17
12 Carvone 2502 0.35
13 acetate 2763 0.25
14 Copaene 3310 0.17
15 Elemene 3421 0.17
16 Caryophyllene 3976 2.66
17 α-Caryophyllene 3954 0.64
18 β-Farnesene 3849 0.89
19 Germacrene D 3775 1.74
20 α -Selinene 3580 0.50
21 1,5-Heptadiene 4038 0.87
22 Amorphene 4145 0.22
23 ϒ-cadinene 4158 0.53
24 Cubenene 4220 2.36
25 α-Elemol 4383 4.21
26 Spathylenol 4510 0.42
27 caryophyllene oxide 4530 0.45
28 Cubenene 4792 0.28
29 ϒ-Eudesmol 4817 0.81
30 Naphthalene 4877 2.40
31 β-Eudesmol 4917 0.75
32 α -Eudesmol 4935 0.74
33 α-Cadinol 4961 1.28
34 Ledene 5022 1.08
35 Thujol 5079 0.64
totale 99,99
Le tableau de composition chimique de l'huile essentielle de Teucrium polium est caractérisé
par la présence de quatre composés majoritaires, qui représentent à eux seul 56,11 % de la
composition chimique de cette l'huile essentielle.
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
52
Figure 18: Distribution des composants majoritaire de HE de Teucrium polium ssp
aurasianum
Trente-cinq constituants sont identifiés représentant un total de 99,99 % de cette essence. Cette
huile essentielle présente comme composés majoritaires le D-limonène (34,72 %), l’α-pinène
(25,42 %), le β-Pinène (8,59 %), le α-Elemol (4,21 %)
D-limonène α-pinène β-Pinène
Figure 19 : les composants majoritaires de HE de Teucrium polium ssp aurasianum
α-Pinene;
25,42
D-Limonene;
34,72
β-Pinene;
8,59
α-Elemol;
4,21
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
53
La composition chimique de notre huile essentielle extraite de la plante Teucrium polium ssp
aurasianum est différente de celle de[101] dont la teneur en α-cadinol est beaucoup plus
importante (46,8 %).
Et différente aussi de[124] qui l’α-pinène est produit majoritaire de (12,52%) et de[137] de
(31.24%) de patchouli alcohol comme produit majoritaire
C'est la première fois que l'huile de T. polium s'est avéré contenir le limonène à de tel
pourcentage élevé, malgré[138] trouve le limonène comme produit majoritaire mais de faible
pourcentage (11.18%) . Cette différence de composition dans de nombreux travaux sur la
même espèce Cette différence de composition est due probablement à diverses conditions
notamment l’environnement, le génotype, l’origine géographique, la période de récolte, le lieu
de séchage, la température et la durée de séchage, les parasites et la méthode
d’extraction[139].
IV.5- Activités biologiques
IV.5.1- Activité antioxydante
Dans le but de déterminer l'activité antioxydante des fractions obtenues pour l’espèce étudiée,
on a utilisé deux méthodes :
La méthode du piégeage du radical libre DPPH (2,2-diphényl- I -picrylhydrazyl).
L'essai est basé sur la réduction du DPPH dissout dans du méthanol ce qui cause une diminution
de l'absorbance mesurée à 517 nm.
Méthode de la réduction du fer FRAP (Ferric reducing antioxidant power)
IV.5.1.1- Mesure du pouvoir de piégeage du radical DPPH*
La capacité de donation des électrons par les huiles essentielles est mise en évidence
par une méthode spectrophotométrique, en suivant la disparition de la couleur violette d’une
solution méthanolique contenant le radical libre DPPH + (1,1-Diphenyl-2
picryhydrazyl)[140].
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
54
Tableau 5 : Activité antioxydante par la méthode de DPPH
DPPH IC50 (µg/ml)
Teucrium polium aurasianum 58.6336 ± 0.7207
l’acide ascorbique 6.4584 ± 0.4256
Figure 20 : Activité antiradicalaire des huiles essentielles Teucrium polium aurasianum
et l’acide ascorbique
Les résultats semblent que le pourcentage d’inhibition du radical libre augmente avec
l’augmentation de la concentration soit pour l’acide ascorbique ou pour l’huile essentielle de
Teucrium polium aurasianum
On remarque que le pourcentage d’inhibition du radical libre pour l’huile essentielle est
inférieur à celui de l’acide ascorbique pour toutes les concentrations utilisées.
L’IC50 est inversement lié à la capacité antioxydante d'un composé, car il exprime la quantité
d'antioxydant requise pour diminuer la concentration du radical libre de 50 %. Plus la valeur
d’IC50 est basse, plus l'activité antioxydante d'un composé est grande.
L’huile essentielle de Teucrium polium pouvait ramener le radical libre stable 2.2 diphenyl-1-
picrylhydrazyl (DPPH) au diphenyl-picrylhydrazine jaune-coloré avec un IC50 de
58,6336±0,7207 µg/ml montrant une activité antioxydante inférieure à celle de l’acide
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100
Po
uv
oir
an
tira
dic
ala
ire
(%
)
Concentration (µg/ml)
Teucrium polium ssp.
aurasianum Labiatae
Acide ascorbique
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
55
ascorbique. Il semble d’après ces résultats que l’antioxydant le plus efficace avec un IC50 de
6,4584±0,4256 µg/ml par rapport à l’huile essentielle étudiée.
[141] ont trouvé une valeur d’IC50 de 95 µg/ml en étudiant l’effet antioxydant de l’huile
essentielle de Teucrium polium de (Bejaïa Algérie), ce qui est inférieur au pouvoir antioxydant
de l’huile essentielle de Teucrium polium aurasianum malgré même espèce. D’autre part à
comparer avec autre espèce Teucrium marum (Lamiaceae) de[142] ils trouvent une valeur
d’IC50 de 13.13 µg/ml ce qui est supérieur par rapport à notre étude
D'une manière générale, notre espèce possède une activité antioxydante très faible en
comparaison avec celle de l'acide ascorbique qui est un antioxydant puissant.
IV.5.1.2- Méthode de la réduction du fer FRAP
Figure 21 : Réduction du fer par huile essentielle de Teucrium polium aurasianum et
l’acide ascorbique
Ces résultats montrent que le pouvoir réducteur dépendant à la concentration de l’huile
essentielle.
D’après la figure 17, on constate que l’huile essentielle possède une bonne action vis-à-vis de
Fe3+ présent dans la solution testée.
La figure 17 montre que les concentrations de l’huile essentielle de 10 jusqu’à 70 µg/ml où l’on
enregistre une augmentation de l’absorbance de 0,196 à 0,613. Par contre mêmes
concentrations de l’acide ascorbique augmentent l’absorbance de 0,069 à 0,539 qui présente un
pouvoir de réduction nettement supérieure à celui de l’acide ascorbique.
Le tableau 6 montre les valeurs de EC50
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
56
Tableau 6 : Activité antioxydante par la méthode de FRAP
FRAP EC50 (µg/ml)
Teucrium polium aurasianum 48.1936±0.5628
l’acide ascorbique 66.3561±0.3471
L’activité antioxydante de l’huile essentielle serait probablement liée aux composants
majoritaires une étude de[143] a signalé les deux composées on l'occurrence le limonène et le
β-Pinène ont présenté des propriétés importante
Limonène est un monoterpène présent dans les agrumes utilisé comme agents aromatisants
d'aliments. Il est prouvé que les monoterpènes possèdent une activité antioxydante[144].
IV.5.2- Activité antibactérienne
Tableau 7 : Activité antibactérienne des huiles essentielles de Teucrium polium
aurasianum
Microrganism Inhibition zone (mm) MIC (mg/ml)
E.coli 0 /
Leisteria 0 /
salmonella 14,76±0,25 0,66
Proleus 11,23±0,25 /
staphylococcus aureus 21,46±0,55 0,33
staphylococcus SP 20,6±0,53 0,33
Pseudomonas aeruginosa 9,73±0,25 /
Klebsiellapneumonia 14,9±0,17 0,5
Le tableau 7 indique Les résultats qui montrent clairement l’effet significatif du Teucrium
polium aurasianum sur certaines souches étudiées, On peut le voir dans le tableau 7,
staphylococcus aureus et staphylococcus SP sont les micro-organismes les plus sensibles avec
la zone d'inhibition le plus élevé (21,46 mm) et (20,6 mm) respectivement et plus faible
valeur MIC (0,33 pl / ml). D'autre part, on remarque à partir du tableau 7 que E.coli et
Leisteria étaient résistants à cette huile essentielle.
Selon la bibliographie disponible, il n’existe pas de travaux déjà réalisés sur l’activité
antimicrobienne de l’huile essentielle de Teucrium Polium aurasianum, pour cela, les
résultats de cette étude sont comparés à ceux obtenus pour d autre espèce de Teucrium
polium
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
57
Les résultats obtenus par[138] montrent une activité sur E.coli et une résistance de la
Pseudomonas par contre nos résultats présentent pas une activité sur E.coli et active sur
Pseudomonas de diamètre d’inhibition de 10 mm
Selon Derwich et al[145] l’activité antimicrobienne des monoterpènes est expliquée par la
présence des groupes d'hydroxyles phénoliques capables de former des liaisons hydrogènes
avec les emplacements actifs des enzymes de la cellule ciblée.
Pour une même plante aromatique on a une composition différente en huiles essentielles,
suivant les parties utilisées, la période de cueillette, la localisation géographique et même
suivant le protocole d'extraction[146]. Cela s’explique par la notion de chemotype qui présente
de grandes variabilités, quantitatives et qualitatives ce qui confirme les divergences des résultats
rapportés pour une plante donnée[147].
Trois grands mécanismes permettent aux bactéries de résister face à un antibiotique.
Le premier mécanisme consiste pour la bactérie à modifier la cible de l’antibiotique.
Cette modification peut être soit directement due à une modification de la structure de la
cible soit due à une modification de la voie de synthèse de cette cible pour lui conférer une
nouvelle structure tridimensionnelle. Ce mécanisme va jouer sur différents composants
cellulaires. Prenons l’exemple des macrolides qui agissent en se fixant aux ribosomes des
bactéries. Pour contourner cet effet, une mutation génétique permet de synthétiser un
nouveau ribosome qui ne sera pas reconnu par l’antibiotique.
Ce mécanisme est globalement utilisé contre la majorité des antibiotiques notamment chez les
bactéries Gram négatives qui, en modifiant les cibles des antibiotiques, développent un haut
degré de résistance.
Les antibiotiques d’une même famille ayant généralement la même cible, ce mécanisme
confère aux bactéries une résistance croisée pour toutes les molécules de la même famille
Cliniquement, cette résistance ne se traduit pas toujours par un échec thérapeutique. En effet,
certaines familles d’antibiotiques conservent une efficacité car leur CMI n’est pas
forcément proportionnellement augmentée[148-150]
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
58
Le deuxième mécanisme consiste à détruire ou modifier l’antibiotique par une inactivation
enzymatique l’empêchant alors de reconnaître sa cible. Ce mécanisme se rencontre
surtout contre les bêta-lactamines, les macrolides, le chloramphénicol et les aminosides.
Une résistance croisée est également possible mais moindre que pour le premier mécanisme
[148-150]
Enfin, les bactéries peuvent également rendre leurs cibles inaccessibles. Ce
mécanisme consiste soit à diminuer la perméabilité membranaire à la pénétration de
l’antibiotique soit à rejeter l’antibiotique par phénomène actif d’efflux.
La diminution de la perméabilité membranaire est rendue possible grâce à une mutation des
gènes codant les porines membranaires, portes d’entrée des antibiotiques, réduisant leur
diamètre et empêchant leur passage dans le milieu intracellulaire.
Le phénomène d’efflux est un mécanisme actif rejetant directement les antibiotiques à l’aide de
pompes membranaires spécifiques[148-150]. La figure 22 illustre ces différents
mécanismes.
Figure 22 : Exemples des mécanismes de résistance aux antibiotiques (d’après
l’Encyclopedia Britannica 2009)
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
59
IV.5.3- Activité antifongique
Pour étudier l’activité antifongique, nous allons discuter les résultats de deux espèces de
champignon fusarium solani et Alternalia arborescens car les huiles essentielles sont active
contre fusarium solani et ne sont pas active sur les autres souches donc on prend Alternalia
arborescens comme exemple aléatoire
IV.5.3.1- Les croissances mycéliennes :
L’utilisation des témoins pour faire une comparaison de l’effet des huiles essentielles contre
les champignons.
Figure 23 : Effet d’huile essentielle de Teucrium polium ssp. aurasianum Labiatae sur
les souches fongiques.
Les résultats de la croissance mycélienne montrés dans la figure 23 Nous observons l’effet
des différentes concentrations d’huile sur les souches fongiques
En l'absence des huiles essentielles on remarque un diamètre de croissance de 4,71 cm pour
Alternalia arborescens et 6,5 cm pour fusarium solani après l’augmentation de la
concentration des huiles essentielles on observe une décroissance mycélienne de fusarium
solani et n’est pas totale jusqu’à 3 cm
Par contre on remarque une stabilité de croissance mycélienne de Alternalia arborescens
4,7
1
4,6
0
4,4
6
3,6
5
4
6,5
0
5,0
2
4,4
9
4
3
0 . 0 0 % 0 . 0 5 % 0 . 2 5 % 0 . 5 % 0 . 7 5 %
Alternaria arborescens fusarium solani
Dia
mèt
re d
e cr
ois
san
ce
my
céli
ènn
e (c
m)
Concentration d'HE (%)
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
60
IV.5.3.2- La cinétique de croissance mycélienne :
Figure 24 : Cinétique de croissance mycélienne en fonction de temps et concentration
des huiles essentielles de Teucrium polium ssp. aurasianum Labiatae
La figure 24 résume les résultats enregistrés sur la croissance mycélienne des souches
fongiques sous l’effet de l’huile essentielle de Teucrium polium aurasianum.
On remarque une croissance mycélienne de toutes les souches fongiques à la différente
concentration et sa commence après 72h de l’incubation, ce qui est marqué par leurs témoins.
IV.5.3.3-Taux d'inhibitions (TI)
Les taux d’inhibition de l’huile essentielle de Teucrium polium aurasianum sont consignés
dans les Figure ci-dessous :
Figure 25 : Taux d’inhibition des souches en fonction de la concentration
0
1
2
3
4
5
48 72 96 120 144 168 192
Dia
mèt
re d
e cr
ois
san
ce
my
céli
ènn
e (c
m)
Temps D'incubation (h)
Alternalia arborescens
0,00%
0,05%
0,25%
0,50%
0,75%
0,00
10,00
20,00
30,00
40,00
50,00
60,00
0.05% 0.25% 0.5% 0.75%
TI
(%)
Concentration d'HE (%)
Alternaria arborescens
fusarium solani
0
1
2
3
4
5
6
7
48 72 96 120 144 168 192
Dia
mèt
re d
e cr
ois
san
ce
my
céli
ènn
e (c
m)
Temps D'incubation (h)
Fusarium solani
0.00
%0.05
%0.25
%0.5%
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
61
L’analyse des résultats de la figure 25 montre que les huiles essentielles, présentent une activité
inhibitrice différente, le taux d’inhibition a augmenté avec l’augmentation de la concentration
des huiles
Pour Alternalia arborescens, , Fusarium moniliforme, Fusarium oxysporum, et Stemphylium
solani. on remarque une très faible inhibition
Pour Fusarium solani on remarque un taux d’inhibition de 52,17% est considérable par rapport
les autres souches
IV.5.3.3- Vitesse de la croissance mycélienne
Les rsultats présentés dans la figure 26 est de la vitesse de la croissance mycélenne en
fonction de différentes concentration des huiles essentielles on remarque une diminution de la
croissance de la vitesse par l’augmantation de la concentration des huiles essentielles cette
diminution claire on fusarium solani
Figure 26 : Vitesse de la croissance mycélienne sous l'effet de l'augmentation de la
concentration d’huile essentielle de Teucrium polium ssp. aurasianum Labiatae
Les résultats du test antifongique sur les souches fongique montrent que l’huile essentielle de
Teucrium Polium Aurasianum a exercé un effet inhibiteur généralement très faible vis-à-vis
ces souches
La difficulté de développer une molécule antifongique est liée, d’une part à l’ultrastructure de
la cellule fongique qui présente trois barrières (la paroi cellulaire chitineuse, les ergostérols
membranaires et le noyau eucaryote) et d’autre part aux molécules antifongiques elles-mêmes
qui sont soit fongistatiques, toxiques, ou qui peuvent engendrer des résistances[151, 152].
0,00
0,01
0,02
0,03
0,04
0,05
0,06
0,07
0,08
0.00% 0.05% 0.25% 0.5% 0.75%
Vit
esse
de
cro
issa
nce
(cm
/h)
Concentration d'HE
Alternaria arborescens
fusarium solani
Chapitre IV------------------------------------------------------Résultats et discussion
62
Selon BELMEKKI[153] est étudié l’effet inhibiteur d’huile essentielle de Teucrium polium de
Tlemcen sur les souches Fusarium oxysporium, aspergillus flavus, Penicillium spp, Rhizopus
stolonfer les résultats ont montré que l’activité antifongique est très faible sauf contre
Penicillium spp qui présente un taux d’inhibition de 70% mais les autres souche une résistance
très forte cette huiles essentielle et de composition majoritaire suivante D-germacrène
(24.98%), B-germacrène (12.59%), β-pinène (11.32%) et en carvacrol (8.64%)
D’après PATTNAIK et al [154] l’activité antifongique d’une HE est à mettre en évidence avec
sa composition chimique, les groupes fonctionnels des composés majoritaires (alcools, phénols,
composés terpéniques et cétoniques) et les possibles effets synergiques entre les composants.
Ainsi, la nature des structures chimiques qui la constituent, mais aussi leurs proportions jouent
un rôle déterminant. Il est cependant probable que les composants minoritaires agissent de
manière synergique[155, 156].
Donc l'activité antifongique décroît selon le type de fonctions chimiques:
Phénols >Alcools> Aldéhydes> Cétones> Ethers> Hydrocarbures.
Un germe est dit résistant à un agent antimicrobien quand la CMI de celui-ci est supérieure à la
concentration sanguine maximale médicamenteuse à une posologie standard. Cette résistance
peut être naturelle ou acquise. On parle de résistance naturelle lorsque toutes les souches d’une
même espèce sont résistantes à l’antibiotique parce que la cible d’action de celui-ci est absente
ou inaccessible. La résistance est dite acquise quand une certaine proportion (parfois très
élevée) des souches d’une espèce normalement sensible à l’antibiotique devient résistante à son
action. Pour ce dernier type de résistance, 3 stratagèmes principaux sont connus chez les
bactéries, les virus et les champignons : le brouillage, le blindage et le camouflage. On parle de
brouillage quand le germe synthétise des protéines qui peuvent dégrader l’antibiotique et le
rendre inefficace par complexation. Il s’agit de camouflage lorsque le germe peut modifier la
cible de l’antibiotique si bien que celle-ci n’est pas reconnue, ce qui rend la cellule insensible à
cet antibiotique.
Enfin, quand le germe empêche l’accès de l’antibiotique aux cibles intracellulaires soit par
modification de la perméabilité membranaire, soit par mise en place d’un système d’expulsion
de l’antibiotique via une pompe membranaire qui refoule ce dernier, on parle de blindage.
Quatre mécanismes de résistance sont connus:
1. Altération du transport des molécules antifongiques
2. Modification moléculaire de la cible des antifongiques
3. Utilisation de voie métabolique compensatrice
4. Présence de structures multicellulaires complexes (biofilms)
63
L'exploitation du potentiel biologique des espèces végétales revêt un intérêt important, ainsi les
nouvelles démarches consistent à s'intéresser à la recherche des principes actifs dans les
produits naturels d'origines végétales.
Dans le but de la valorisation d’une des plantes de la famille Lamiacées issue de la région de
BATNA, en l’occurrence Teucrium polium aurasianum, nous avons effectué un travail
permettant pour contribuer à la mise en évidence de l’activité biologique des huiles essentielles.
Notre travail a porté sur la partie aérienne d’une espèce de la famille de Lamiaceae, une des
familles les plus importantes dans la flore de l'Algérie.
Une identification botanique détaillée a été effectuée sur la partie aérienne l’espèces végétale
de Teucrium polium aurasianum Cette contribution porte sur l’étude et la mise en évidence des
activités biologique et l’évaluation des potentialités bioactives de l’huile essentielle de la plante
médicinale Teucrium polium ssp aurasianum de la famille Labiatae
Quelque expérience effectués sur la plante étudiée dont :
Extraction des huiles essentielles et identification de sa composition chimique par la technique
de GC/MS
Evaluation de l’activité antioxydante par deux méthodes (DPPH et FRAP)
Test de l’activité antibactérienne de l’extrait sur les souches bactérienne suivantes : Escherichia
coli, Klebsiella pneumoniae, Leisteria, Proteus, Pseudomonas aeruginosa, salmonella,
Staphyloccous aureus et Staphyloccous Sp
Et la détermination de l’activité antifongique sur les souches suivantes : Stemphylium solani,
Fusarium moniliforme, Fusarium solani, Fusarium oxysporum et Alternalia arborescens.
Le rendement en huile essentielle de la partie aérienne de la plante Teucrium polium ssp
aurasianum est de 0,585 % (w/w). Cette valeur est inférieur aux rendements obtenus chez
d’autres espèces du même genre et supérieur à d’autres espèces
Ce rendement a été obtenu dans le deuxième jour de l’extraction après la récolte, donc pour un
meilleur rendement d'extraction des huiles essentielles ; l'extraction doit être effectuée au bout
d'une journée de séchage
64
Ce résultat permettra aux utilisateurs une meilleure gestion de la biomasse de cette espèce pour
espérer un rendement maximale.
D’aprs les résultats de l’évaluation de l’activité antioxydante (IC50= 58.6336 ± 0.7207 et EC50
48.1936±0.5628) (µg/ml)
On constate que l’huile essentielle possède une bonne activité antioxydante avec des faibles
concentrations
Les tests antimicrobiens effectués dans ce travail montrent que l’effet antibactérien de l’huile
essentielle de la plante Teucrium polium ssp aurasianum sur différentes souches bactériennes,
Gram positif et négatif est significatif sur certain souches bactériennes comme salmonella,
staphylococuis aureus, proleus, pseudomonas ; Et inactive sur deux souches bactériennes E.coli,
Leisteria.
L'étude de l'activité antifongique est réelisée par la technique de contact directe
malheureusement donnes de très faibles résultats
L'ensemble de ces résultats obtenus in vitro ne constitue qu'une première étape dans la
recherche de substance de source naturelle biologiquement active.
Des essais complémentaires seront nécessaires telque:
Un fractionnement des huiles essentielles de Teucrium polium aurasianum et l'étude de l'effet
des composés majoritaires
Détermination des autres activités biologiques de cette plante, à savoir les propriétés anti-
inflammatoires, antivirales……
Evaluation de la toxicité de ces huiles essentielles
A la lumière des résultats obtenus on peut conclure que l’huile essentielle de la plante Teucrium
polium ssp aurasianum présente un pouvoir antioxydant et antimicrobien très puissant sur les
souches pathogène et donne une nouvelle alternative dans la lutte biologique par les huiles
essentielles.
Nous invitons enfin les populations à une utilisation à rationnel des plantes médicinales, car un
usage abusif de ces plantes conduira sans doute à une raréfaction, voire leur totale disparition.
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--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
72
Annexe 01 : Montage d’extraction des huiles essentielles
Extraction des huiles essentielle par Hydrodistillation (moyen de Clevenger)
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
73
Annexe 02 : matériels d’analyse physico-chimique
Réfractomètre pH mètre
Densimètre matériels utilisés pour la mesure d’indice d’acide
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
74
Annexe 03 : Analyse chromatographique (GC/MS)
Chromatographe Agilent 6890, couplé avec un spectromètre de masse type Agilent
5975B
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
81
Composition chimiques de l’huile essentielle de Teucrium polium aurasianum
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
82
Annexe 04 : Activité antioxydants
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
83
Annexe 05 : Activité Antibactérienne
Coulage des Boites pétri en milieu de culture
Préparation de l’inoculum
Placement des disques Incubation 24H à 37°C
--------------------------------------------------------------------------------------Annexes
84
Annexe 06 : Activité antifongique
Identification Microscopiques des souches
Détermination de l’activité antifongique par méthode de contact direct
----------------------------------------------------------------------------------Publications
85
ISSN : 0975-413X
CODEN(USA) : PCHHAX
Journal for Medicinal Chemistry, Pharmaceutical
Chemistry and Computational Chemistry