Tinción de ADN con ADN marcador (Procedimiento de Laboratorio)

Examen 3. ¿Cómo puede el ADN hacerse visible?

• ¿De qué color era el ADN antes de agregar colorante de carga?

Dado que el ADN es, naturalmente, incoloro, no es inmediatamente visible en el gel. El examen visual sin ayuda de la electroforesis en gel solo indica las posiciones de los tintes de carga y no las posiciones de los fragmentos de ADN. Los fragmentos de ADN se visualizan tiñendo el gel con una mancha azul llamado Explosión ADN mancha. Las moléculas que se tiñen de azul tienen carga positiva y tienen una alta afinidad por el ADN. Estas moléculas de colorante azul fuerte se unen a los fragmentos de ADN y este se hace visible. Estas bandas visibles de ADN pueden ser rastreadas, fotografiadas, dibujadas, o retenidas en forma de gel permanentemente secas para el análisis.

Hay dos protocolos para el uso rápido chorro de ADN mancha en el aula. Utilice la opción 1 para una rápida tinción de los geles y para visualizar las bandas de ADN en 12-15 minutos, y la opción 2 para pasar la noche tiñéndose. Dependiendo de la cantidad de tiempo disponible, su profesor decidirá cuál es el protocolo a utilizar. Dos equipos de estudiantes tiñen los geles por bandeja de tinción (es posible que desee hacer muescas en las esquinas de gel para la identificación). Marcamos las bandejas de tinción con las iniciales y el periodo de clase antes de comenzar esta actividad.

ADVERTENCIA

Aunque la rápida explosión de ADN mancha no es tóxico ni cancerigeno, debemos utilizar guantes de látex o vinilo durante la manipulación de los geles. Debemos utilizar bata para evitar manchas.

Protocolo n ° 1: Rápida tinción de los geles de agarosa en ráfaga rápida 100x ADN Marcador

Este protocolo permite una rápida visualización de las bandas de ADN en geles de agarosa en 15 minutos. Para la tinción rápida, rápida ráfaga de ADN mancha (500x) debe diluirse a una concentración 100 veces. Recomendamos el uso de 120 ml de Blast rápido 100x para teñir dos 7 x 7 cm o 7 cm x 10 geles de agarosa en bandejas individuales. Como alternativa se utilizan bandejas de tinción, añadir un volumen suficiente de solución de tinción para sumergir completamente los geles.

Tras la electroforesis, los geles de agarosa deben ser sacados de sus bandejas del gel antes de ser colocado en la solución de tinción. Debido a que el gel es frágil, se debe prestar especial atención en su manipulación. Le recomendamos que use una espátula de gran tamaño o superficie de apoyo de otros para transferir el gel a partir de un recipiente a otro. El decolorante requiere el uso de al menos un contenedor de gran capacidad, capaz de mantener por lo menos 500 ml, en cada estación de trabajo del estudiante. Cada equipo de estudiantes pueden utilizar por separado recipientes de lavado para cada etapa de lavado, o simplemente usar un solo recipiente que se vacía después de cada lavado y rellenado para el lavado siguiente.