TRANSAMINAZELE SERICE

Transaminazele serice acioneaz la nivel intracelular, cataliznd reacia de transfer a unei grupri amino (-NH2) de la un -aminoacid la un -cetoacid. Actiunea lor nu se manifest n plasm, putnd fi considerate enzime plasmatice nefuncionale.

Reactia de transaminare reprezint una dintre cile gemerale de catabolizare a aminoacizilor n organism, alturi de decarboxilare i de dezaminare. Ea are importan n metabolismul intermediar n sinteza aminoacizilor neeseniali proprii organismului, utiliznd aminoacizi i cetoacizi n exces din rezerva metabolic (pool). Tot prin aceast reacie se stabilete corelaia dintre metabolismul protidic cu cel glucidic prin intermediul -cetoacizilor rezultai din ciclul Krebs.

Exist dou transaminaze serice cu aplicaii clinice importante:

a) glutamat-oxaloacetat transaminaza (COT sau TGO) sau aspartat-aminotransferaza (AST) catalizeaz transferul gruprii amino de la acidul L-aspartic la acidul -cetoglutaric rezultnd acidul oxalilacetic i acidul L-glutamic.

Ea exist n concentraii mari n miocard i ficat i n concentraii mai redus n muchiul scheletic, rinichi i esutul cerebral.

b) glutamat-piruvat transaminaza (GPT sau TGP) sau alanina-aminotransferaza (ALT) catalizeaz transferul gruprii amino de la L-alanin la acidul -cetoglutaric, rezultnd acidul piruvic i acidul L-glutamic.

Ea exist n ficat, concentraia fiind mai redus n miocard i n muchiul scheletic, rinichi.Nivelele crescute din ficat i localizarea sa exclusive citoplasmatic explic relativa sa specificitate n bolile hepatice.

Determinarea activittii enzimatice a transaminazelor serice prin metoda colorimetric cu 2,4-dinitro-fenil-hidrazin (DNFH)

Principiul metodei: Se incubeaz substrat GOT sau GPT cu ser nehemolizat. Acidul piruvic eliberat n reacie reacioneazcu 2,4-dinitro-fenilhidrazina n mediu bazic formnd dinitrofenilhidrazona, colorat n rou-crmiziu.Intensitatea culorii este proporional cu acitivitatea enzimei din proba analizat.

Calcul:

Concentraia de piruvat rezultat din reacia enzimatic este proproional cu concentraia enzimei din ser i depinde de durata incubrii.

Activitate GOT:

EP/ES x CS x 10-3x 1/t=EP/ES x 2x 10-3 x 1/60 =EP/ESx33,3mol/l/min/ml ser

Activitate GPT:

EP/ES x CS x 10-3 x 1/t =EP/ES x2x10-3x1/30 =EP/ES x 66,6mol/l/min/ml ser

CS = 20mM = 2x10-3 mol

Valori normale:

GOT: copii sub 3 luni maxim 40UI

copii 3 luni-5ani 2-28 UI

aduli 2-20UI

GPT copii sub 5 ani 0,2-13 UI

aduli 2-16,5UI

Semnificaie diagnostic:

a) GOT exist n cantiti mari n miocard i esutul hepatic i mai puin n muchii striai, rinichi, pancreas, plmni, eritrocite.Creteri ale activitii enzimatice ale GOT apar n:

1. infarct miocardic

2. infarct pulmonar creterile sunt uoare pn la moderate, persistnd pn la 3-5 zile de la atacul de durere;

3. insuficiena cardiac dreapt cu congestie (staz hepatic);

4. operaii pe cord;

5. distrofii musculare progresive sau boli traumatice musculare;

6. sindromul de zdrobire, arsuri;

7. infarcte renale, splenice i intestinale;

8. pancreatit acut;

9. leziuni necrotice ale sistemului nervos central;

10. toxemie gravidic.

11. afeciuni heaptice nivelul ca i durata creterii transaminazelor sunt paralele cu extinderea leziunii (aidc cu modificarea permeabilitii celulare i necroza); determinrile de GOT sau de GPT sunt deosebit de utile n urmrirea evoluiei hepatitei cornice sau acute, dar interpretarea valorilor anormale trebuie fcut cu pruden i innd seama de contextual clinic.

b) GPT creterile acestei enzime reprezint un semn precoce n hepatitele virale, aceste determinri putnd fi utilizate ca martor al leziunii hepatocitelor i astfel s se poat face o difereniere ntre afectarea hepatic i cea produs prin colestaz.

Creteri de 100 de ori peste valoarea normal apar n;

Afeciuni hepatice

Hepatita viral acut (naintea apariiei icterului);

Hepatita toxic (chloroform, CCl4, compui organici ai fosforului)

Afeciuni pancreatice

Pancreatit acut

unele tipuri de tumori

Creteri moderate de 1-9 ori valoarea normal apar n:

Colestaz hepatic cronic

ciroz

ictere mecanice (pn la 7-10 ori valorile normale);

tumori hepatice;

leziuni ale musculaturii.

Un parametru important legat de activitatea transaminazelor este raportul GOT/GPT numit raport de Rittis care in condiii fiziologice normale este egal cu 1,3. n afeciunile hepatice acest raport este mai mic dect 1,3. Cnd GOT are valori crescute, iar GPT are valori normale este posibil suspectarea prezenei unui infarct miocardic, iar raportul de Rittis devine mai mare dect 1,3.

Gama glutamil tranferaza (GGT sau -GT)

GGT catalizeaz transferul gruprii -glutamil de la peptide ctre ali aminoacizi. Este o protein heterodimeric, fiecare subunitate constnd dintr-un singur lan polipeptidic. Este localizat la nivelul membranei citoplasmatice a numeroase celule, centrul activ al enzimei fiind situat n exterior. GGT are un rol important att n sintezele proteice i n reabsorbia proximal tubular a aminoacizilor din filtratul glomerular, ct i n metabolimul mediatorilor inflamaiei (ca de exemplu, leucotrienele), al substanelor carcinogene i toxice.

GGT msurat n ser provine n special din ficat. Cea mai mare parte este legat de lipoproteine, n special HDL, dar i de LDL. GGT este ndeprtat din plasm prin bil, activitatea enzimei n bil fiind de 10 ori mai mare dect cea plasmatic. O parte din ea este degradat de rinichi i eliminat prin urin. Sinteza GGT poate fi indus n ficat de colestaz, de consumul cronic de alcool sau de dozele terapeutice ale unor medicamente.

Scopul determinrii GGT:

1. depistarea alcoolismului - este cel mai sensibil indicator, fiind enzima a crei cretere depete celelalte enzime hepatice dozate n mod curent. La alcoolici, nivelul seric al GGT poate ajunge la valori de peste 50 ori valoarea normal, gradul de cretere depinznd att de cantitatea de alcool consumat, ct mai ales de persistena ndelungat a consumului; practic, este enzima-marker pentru alcoolism. Este foarte util n diagnosticarea alcoolismului ascuns i n evidenierea valorilor crescute ale fosfatazei alcaline de origine osoas sau hepato-biliar.

2. monitorizarea abstinenei de la alcool.

3. diagnosticul bolilor hepatice i biliare n astfel de afeciuni, valorile GGT se coreleaz cu cele ale fosfatazei alcaline.

4. diagnosticul unei hepatopatii n prezena unei afeciuni osoase, a sarcinii sau n perioada copilriei sunt condiii n care valorile fosfatazei alcaline cresc, n timp ce valorile GGT se ncadreaz n valorile de referin.

Determinarea activitii GGT se face pe probe de snge recoltate prin puncie venoas n vacutainere fr anticoagulant, probe prin a cror centrifugare se obine cantitatea de ser necesar (minim 0,5ml). Serurile hemolizate, lipemice sau cele contaminate bacterian conduc la valori nu sunt utilizate la determinarea GGT deoarece pot duce la erori de diagnostic. Stabilitatea enzimei n ser este de 7 zile la temperatura camerei, 7 zile la 4-80C, 1 an la 200C.

GGT are valori considerate fiziologic normale: La femeile nsrcinate i la copiii de peste 3 luni.

n afeciunile osoase n cazul persoanelor aflate n perioada de cretere (copii i adolesceni).

n afeciuni renale i n efortul fizic intens.

Semnificaie diagnostic valori crescute:

n afeciunile hepatice creterile ei sunt paralele cu cele ale fosfatazei alcaline, leucinaminoppetidazei, 5-nucleotidazei, dar este un indicator mai sensibil dect ele. n hepatita acut, creterile ei sunt mai puin marcate dect ale altor enzime hepatice, dar ca dinamic valorile ei sunt ultimele care revin la normal i de aceea ea este util n indicarea refacerii organismului. n hepatita cronic, GGT crete mai mult dect n hepatita acut, valorile ei fiind mai mari dect cele ale GOT i GPT.

GGT prezint creteri marcate (impresionante) n serul bolnavilor cu retenie biliar. Astfel, n timp ce fosfataza alcalin crete de 3-5 ori fa de limita superioar a normalului, GGT depete aceast limit de 10-30 ori. n ciroza biliar primar, creterea ei este marcat.

n cazurile de ficat grsos (steatoz hepatic), creterile ei sunt paralele cu cele ale TGP i TGO, dar sunt mai marcate.

GGT este ntotdeauna crescut n pancreatita acut.

GGT este crescut la 50% din pacienii cu IMA creterea ei ncepe n a 4-a, a 5-a zi dup debutul IMA, atingnd un maxim dupa 8-12 zile.

n cancerul de prostat, creterile ei sunt paralele cu cele ale fosfatazei acide.

GGT crete de 3-10 ori peste limita normalului n neoplasmul primitiv sau metastatic al ficatului, n insuficiena cardiac congestiv cu staz hepatic, dup administrarea de barbiturice.

GGT este uor crescut de 1,5-2 ori peste limita superioar a normalului i n serul pacienilor cu hipertrigliceridemie, aceasta sugernd o stimulare a proteosintezei hepatice.