Bi 1. TRCH DNA T THC VT1. Mc ch

Mc ch ca bi thc hnh ny gip sinh vin hiu r nhng nguyn tc cn bn trong k thut ph v v t bo v phn lp c ton b DNA ca m t bo thc vt. kim tra cht lng ca DNA sau khi phn lp, mt lng nh DNA s c chy trn gel agarose, nhum vi ethidium bromide v xem di nh sng n UV.2. Vt liu v phng php

a. Dng c, thit b

Micropipet, my ly tm, u tip, tube 1.5ml v 2ml, ko dao ct mu, ci v chy s, nc nhuyn, my nhit.

b. Ha cht

Tris-HCl (pH=8), EDTA, dung dch trch, Isopropanol, SDS, Rnase, CTAB, chloroform, isoamyl alcohol, ethanol.c. Phng php

Phng php lu trch ADN t m thc vt c th thay i ph thuc vo vt liu s dng. V c bn cc phng tin my mc ph v v t bo v mng t bo cho php phn lp vt liu nhn nhng khng lm phn hy n l rt quan trng. Thng thng giai on nghin mu vi ni-t lng c s dng ph v v t bo v cho php thu ly ADN, ni-t lng gip c ch cc hot ng lm bin tnh ADN ca cc enzyme t bo. Ngay sau giai on nghin mu, bc k tip l chuyn vt liu ny sang mt dung dch m ph hp, nh CTAB, tinh sch ADN, vt liu c trn vi Chloroform v sau ly tm tch cc ADN khi protein v cc vt liu khc. ADN sau c kt ta v ra tht k loi b tt c cc mui. ADN sau khi tinh sch phi c ha tan v tr trong dung dch m TE hoc nc ct v trng. Quy trnh ly trch ADN c th nh sau:Ngm l v cc dng c nghin trong nit lng trong 10 pht

Nghin mu vi nit lng cho n khi thnh bt mn

Chuyn phn bt vo tube 2.2ml

Thm 1ml dung dch trch ADN thc vt, sau thm 50l SDS 10%, trn u (trnh lc mnh).

65C trong 30 pht, khong 5 pht o nh tube trn u mu

Ly tm 13.000 vng/pht trong 10 pht

Chuyn phn trong vo tube mi v thm mt lng tng ng Isopropanol, 10-30 pht trn khay nc (hoc -20C)Ly tm 13.000 vng/pht trong 10 pht, ha tan ADN trong 400 l TE 1XThm 400 l dung dch m CTAB v 65C trong 15 pht, thnh thong o ngc ng tube trn u.

Thm 800 l Chloroform/Isoamyl alcohol v trn u. Ly tm 13.000 vng/pht trong 10 pht.

Chuyn phn dung dch trong tube 2.2 ml mi, thm 1ml Ethanol 100% v nhit phng trong 15 pht.Ly tm 13.000 vng/pht trong 10 pht, b phn trong v ra phn ta vi Ethanol 70% bng 500 l (2 ln)

Ly tm ln na loi b Ethanol

Phi kh AND 37C qua m hoc ly tm chn khng nhit 45C trong 10-15 phtHa tan ADN trong 100 l TE 0.1X hay trong 100 l nc ct 2 ln v trngKim tra cht lng ADN (o nng ADN bng my o quang ph bc sng 260nm)

3. Kt qu trch DNA bng phng php chy din di

Nhn xt kt qu:Tr li cu hi:

1. Ti sao phi nghin mu trong ni-t lng?

Tr li: Ni-t lng gip lm cho vch cellulose tr nn gin hn, d v hn, ng thi bo v ADN phng thch t nhn khng b tiu hy bi cc protease trong t bo.2. Hy cho bit chc nng ca SDS 10% thm vo trong bc 4 nhm mc ch g?Tr li: SDS (Sodium Dodecyl sulfate) c tc dng ph v mng t bo, gip ADN thot ra mi trng ngoi.

3. Ti sao phi thm Rnase vo mu trong bc th 9?Tr li: 4. Hy cho bit chc nng ca CTAB thm vo trong bc 10 nhm mc ch g?Tr li: CTAB c chc nng chnh l loi b Polysaccharide v lipid c trong hn hp mu.5. Theo bn th quy trnh trch ADN ny c th s dng trch ADN ca l la, l xoi c khng?