Archiv ffir Dermatologie und Syphilis, Bd. 193, S~ 63--67 (!951). :

Aus der Universit/its-Hautklinik Tiibingen (Direktor: Prof. Dr. H. A. GOTTRON).

Ober den EinfluI~ von Hyaluronidase auf den trypanociden Salvarsaneffekt.

Von G.W. KORTING und I~. H. FRIDERICH.

Mit 1 Textabbildung.

(Eingegangen am 31: Mdrz 1951.)

I n einer vorangehenden M_itteilung wurde yon uns de r Nachweis e rbracht , daI3 - - wie his tologisch aus dem Leberb i ld der Sa]varsan- versuchst iere ersicht l ich war - - die organotrope Sa lva r sanwi rkung in ganz wesent l icher Abh~ngigkei t yon der App] ika t ionsa r t dieses ~ i t t e l s s teh t und im besonderen bei subcu tane r Anwendung hoher p r i m e r toxischer Sa lvarsandosen der ZuSatz yon Hya lu ron idase eine Verst~r- kung des Leberschadens he rvor ru f t 1. Gegens tand der w e i t e r e n Unter - suchungen war es nun, aus p r a k t i s c h 4 h e r a p e u t i s c h e m InteresSe zu pra- fen, ob durch die gleichzeit ige Verwendung yon t t y a l u r o n i d a s e a u c h die i~tiotrope W i r k u n g subcuCaner Sa lvarsangaben gesteiger~ w/irde, so dab sich ira Hinb l i ck au f die ve r s tg rk te Leberbe las tung un te r U m s t ~ n d e n eine kle inere Salvarsandosis als die sons~ erforderl iche zur Erz ie lung des gleichen cura t iven Effekts als ausre ichend erweisen ~viirde.

Zur K l a r u n g dieser F r a g e wurde die the rapeu t i sche W i r k s a m k e i t lyon lqeosalvarsan mi t und ohne Hya lu ron idasezusa t z auf T r y p a n o s o m a rhodesiense* in v i t ro und in vivo untersucht .

Die Bestimmung des tIeflwertes yon Salvarsan-Pr/iparaten auf Grund deren trypanociden Eigenschaften geht auf die Arbeiten yon I-IALBEI~STAEDTER ~, GOI~- DER 3, CASTI]LLI 4, MOLDOVANS~ KOL~ER~ SCKAMBERG und l~AIZISS 6 u . a . zuruok, Die Wahl dieser Methodik ergibt sich einerseits aus arbeitstechnischen Griinden und zum anderen aus der Tatsache, dab die %rypanociden und spirochae~iciden Eigenschaften yon Salvarsan-Priiparaten in der l~egel weitgehend iibereinstimmen (vgl. dagegen It. SCHLOSSBEROE~7).

Versuche in vitro.

MethodiIc. Als .Reaktionsansatz wurde in ein ReagenzrShrchen 0,25 cm a Neosalvarsan-

15sung, 0,25 cm a HyaluronidaselSsung und 0,25 cm a Trypanosomenaufschwemmung zusammengebracht.

Die Verdiinnung der aus Trockenampu]len der Firma ,,Hoechs~" herges~ellten Neosalvarsanl5sung betrug 1:84000 bzw. 1:252000. Der ttyaluronidasezusatz

* Fiir die freundliche Uberlassung des Trypanosomenstammes sind wit Herrn Dr. reed. e~ phil ~CSSG~GE~ (Farbwerke ,,]:[oechst") zu besonderem Dank ver- pflich~et.

6~ G . W . KORTING und H. H. FRIDERICH:

wurde aus Trockenampullen des Schering-Pr~parates ,,Kine~in" im Verh~ltnis yon 10 Schering-Einheiten auf 100cm 3 physiologische Kochs~lzl5sung zubereite~ (1 cm 3 = 0,1 Schering-Einheiten).

Zur Herstellung der Trypanosomenaufschwemmung wurde das Blut einer hochinfizierten Maus in eine physiologische Kochsalzl5sung yon 37 ° W~rme und 0,1% Nat r ium citricum-Geh~]t aufgefangen. Der vollsti~ndige Reaktions~nsatz (0,75 cm 3) enthiel t 3 - -4 Trypanosomen im Gesichtsfeld.

I m KontrolIansatz wurde an Stelle der Hyaluronidasel5sung 0,25 cm ~ physio]o- gische KochsalzlSsung verwendet. E r enthiel t also 0,25 cm 3 I~eosalvarsanlSsung, 0,25 cm ~ physiologische ITaC1-LSsung und 0,25 cm a Trypanosomenaufschwemmung.

I m Blindansatz wurde - - zur Pri ifung einer eventuellea Beeintrachtigung der Trypanosomenbeweglichkeit durch die Hyaluronidase - - an Stelle der Iqeosalvarsan- 15sung 0,25 cm 3 physiologische NaC1-L5sung zugeffig~. Er enthiel t demnach 0,25 cm 3 Hyaluronidasel5sung, 0,25 cm 3 NaC1-L5sung und 0,25 cm a Trypanosomenauf- schwemmung.

S~mtliche Rghrchen wurden nach Zusammenstel lung der Ans~tze im Thermo- s ta t bei 37 ° gehalten. Die Beobachtung der aus den l%eagenzgl~sern en tnommenen Proben erfolgte im Objek~triiger-Deckglas-Nativpr~parat. Von jedem Ansa~z kamen jewefls 5 RShrchen zur Untersuchung.

Ergebnisse :

E i n u n t e r s c h i e d l i c h e s V e r h a l t e n d e r T r y p a n o s o m e n d u r c h d e n E i n f l u l i

d e r H y a l u r o n i d a s e w a r n i ch~ e r k e n n b a r . So hSr~e d ie B e w e g l i c h k e i ~

d e r T r y p a n o s o m e n i n ( ~ b e r e i n s t i m m u n g m i t d e n y o n I ~ I S C ~ R u n d

H ~ I T ~ s g e f u n d e n e n W e r t e n s o w o h l i m R e a k t i o n s a n s a t z wie i m K o n t r o l l -

a n s a t z be i e i n e r S a l v a r s a n k o n z e n t r a t i o n y o n 1 : 8 4 0 0 0 n a c h 11 m i n u n d

be i e i n e r S a l v a r s a n k o n z e n ~ r a t i o n y o n 1 : 252 000 n a c h e i n e r R e a k t i o n s -

zei~ y o n 22 r a i n auf . I m B l i n d a n s a ~ z w a r d ie T r y p a n o s o m e n b e w e g l i c h k e i t

n o c h n a c h 90 r a i n unges~Sr t .

Y e r s u e h e in v ivo .

Methodilc.

Insgesamt wurden 75 weii~e und durchschnit t l ich 20 g schwere MiSuse beiderlei Geschlechts in Kollek~iven zu jeweils 15 Tieren mi~ je 0,2 cm a Blu~ einer schwer schlafkranken Maus mi~ Hflfe einer Glascapill~re subcutan beiml0ft. Besonderes Augenmerk wurde bei s~mtlichen Versuchen auf eine gleichbleibende Erregerz~hl im Schwanzvenenblut der Tiere gelegt (Blickfeld 3 - -4 Trypanosomen), da dieser Fak to r weitgehend die erforderliche Menge des Chemotherapeuticums bestimm~ (ScHLOSSBE~¢EE~). Nach durchschni~tlich dreit~gigem Infektionsgang wurde das Tierkollektiv dann mit Neosalvarsan subcutan in der von Mo~coEes und B O ~ - STEDT 9 angewandten Dosis yon 0,5 cm ~ einer Verdiinnung yon 1 : 7000 pro 20 g Maus behandelt .

I m einzelnen erhielten zur Einhal~ung der gleichen Injek~ionsmenge yon 1 cm a jeweils 5 Tiere 0,5 cm ~ 1Neosalvarsan zusammen mit 0,5 cm ~ physiologischer NaC1- LSsung, 5 Tiere 0,5 cm 3 Neosalvarsun-L5sung zusammen mit 0,5 cm a Hyaluronidase- 15sung (1 cm ~ = 0,1 Schering-Einhei~). Bei 2 Tierkollek~iven wurde nur die halbe Salvarsanmenge ( ~ 0,25 cm a der Neosalvarsankonzentrat ion 1 : 7000) verabfolgt, stets a b e r die gleiche Gesamtinjektionsmenge yon 1 cm a durch Erh5hung des NaC1- bzw. ttyaluronidasezusa~zes au f 0,75 cm a gew~lu't. Fi inf Tiere blieben inner- halb jedes Tierkollek~ivs unbehandel~ und dienten als Kontrollen. In Anbetrach~

EinfluB yon Hyaluronidase auf den trypanoCiden Salvarsaneffekt. 65

der durch den in vitro-Versuch festgestellten Indifferenz yon Hyaluronidase auf Trypanosoma rhodesiense wurde auf einen Leerversueh mit Hyaluronidase allein verziehtet. Der trypanocide Effekt wurde an Hand des Zeitpunktes des Verschwin- dens der Trypanosomen aus der Zirkulation und gem/~B tier erh6hten Lebensdauer tier Versuehstiere beurgeilt.

Ergebnisse:

Eine Ubersicht fiber das Verschwinden der Trypanosomen aus dem Blu$, je nach der Ar t der Neosalvarsan-Darreichung, bringt, unter dem Gesich~spunkt der Zeit geordnet, Tab. 1:

Tabelle 1.

Tier* Anzahl der negat i~en Tiere nach Stunden In jekt ionsmit te l zahl

24 / insges.

Neo-Salvarsan . . . . . Neo- Salvarsan u. Hyal.

Neo.Salv. u. H y a l . . . Kon~rol]en . . . . . . .

(unbehandel~)

1 2 3 5

0 2 3 7 3 4 13 13 0 1 2 4 0 0 0 0

11 t 11 13 20 7 6 6 ~

Demgegenfiber is~ in Abb. 1 die Lebensdauer der infizier~en M~use graphisch darges~ell~. Hierbei ist hinzuzufiigen und dementsprechend bei Lesung zu berficksiehtigen, da$

25 in der 3. Kurvenlinie (Salvarsan und ,, "'.. I J

die Versuehsergebnisse ~ ~ 2s - \ " t I Hyaluronidase) '..%

mi~ ganzer und halber Satvarsandosis i~ 21 , ,.. zusammengefaBt Bind. Am 16. Ver- 19 " suchstag lebten yon den 15 mit voller " \ r - 77 Salvarsandosis behandel ten Mi~usen 9, "..., yon den 10 mit halber Salvarsandosis is " .... beh~ndelten Tieren noeh 4. 13 t ~ " . . . . . ""

11 ' \

Bespreehung. Es ist uns bewuB~, dab man die

vorliegenden Versuchsergebnisse im Hinblick auf die verh~l~nism~gig ge- t inge Tierzah] als nicht absolut b indend betrach~en kann. Gr5Bere Versuchs: reihen durchzuffihren, ist uns aber zur Zeit nicht m6glich. Umgekehr t er- scheinen uns aber die Versuchsergeb- nisse eindeut ig genug und werden

9

7 I

5

3\f I! 3 5 7 9 11 13 15 17

Tuq'e nach Beilandlun,,qs6effinn Abb. 1. Lebensdauer der infizierten :H~use in Tagen. Unbehandel te Kon~rolltiere : - - Neo-Salvarsan-Tiere : - - - - Neo-Salversan-

deshalb mi~ete i l t , una t{yal.-Tiere: ..... #

Wichtig ist die l~eststellung, dab dutch tI inzuffigung yon I tya luro- nidase der ~tio~roloe (trypanooide) Effekt einer subcutanenNeosa lvarsam Injekt ion nioht nur erhal~en bleibt; sondern sogar deutlich gesteigert

_&xchiv f. Dermatologie u. Syphilis, ]3d. 198. 5

66 G.W. KOl~a~ und It. H. F~IDm~ICI~:

wird. Dabei handelt es sich ffaglos um keine chemische Umwandlung, sondern, wie aus einem Vergleieh unserer Versuche in vitro mit denen'an der weil~en Laboratoriumsmaus hervorgeht, um eine Leistung dos leben- den Gewebes, die hSchstwahrscheinlich fiber eine Steigerung der Auf- nahmefi~higkeit der Bindegewebe ffir Flfissigkeiten (sogenannte Binde- gewebspermeabilit~t) und - - wie aus einigen neueren Mitteilungen fiber die Art und Weise der tty~luronidasewirkung zu ersehen ist (vgl. hierzu die umfassende ~bersicht yon GIBIA~ i° - - darfiber hinaus aueh fiber eine Beeinflussung der terminalen Stromb~hn vonstatten geht.

Die durch den Hyaluronidasezusatz hervorgerufene ErhShung der Salvarsanheilwirkung kommt demgem~Lli besonders sinnf~llig als Frfih- effekt zum Ansdruek (Tab. 1) und erreicht ein solches Ausmal~ an ehemo- therapeutischer Leistungssteigerung , dab selbst bei Anwendung der halben Neosalvarsandosis als Gemiseh zusammen mit Hyaluronidase ein der vollen ~eosalvarsanmenge ohne Hyaluronidasezusatz vergleiehbarer curativer Effekt zustande kommt. Dieser Umstand is~ desh~lb yon be- sonderer Wiehtigkeit, weft dutch Hinzuffigung yon Hyaluronidase gleich- zeitig mit dem ~Ltiotropen auch der organotrope Effekt, vornehmlich also die Belastung der Leber merldieh gesteigert wird i. Allerdings warden in einer vorausgehenden Untersuehnng yon uns zum Studium dieser Frage mit Absicht hohe, primir-toxische Salvarsandosen gewghlt, wi~hrend ulngekehrt bei den ¥orliegenden Untersuehungen fiber den eurativen Effekt yon Salvarsan-tiyaluronidase-Gemisehen zu besseren Beurteflung (vgl. Fxsc~l~ und H~ITE s) ~uBerst geringe Salvarsan-Dosierungen an- gewandt wurden, die zur vSlligen Infektausheihng unzureichend, jedoch eine auBerhalb jeglicher l%hlergrenze ]iegende Verl~ngerung der Lebens- dauer der Tiere herv0rzurufen imstande sind.

Mit groBer" Wahrscheinlichkeit kanm weiterhin nach unseren bis- herigen tierexperimentellen Versuchsergebnissen angenommen werden, dab beim Menschen dor~, wo infolge schleehter Venenverh£1tnisse eine subcutane Verabfolgung yon ~Teos~lvarsan (in grSBerer LSsungsmenge zur Verbesserung der 5rtlichen Gewebsvertr~glichkeit) unter Hyaluro- nidasezusatz in Frage kommen wfirde, eine, evtl. gegeniiber der intra- venSsen ~ormdosis reduzierte, Oosismenge gefunden werden kann, dig sowohl hinsichtlich ihrer Heflwirkung wie auch der Belastung der Innen- organe (Leber) den ldinischen Erfordernissen entspreehen kSnnte.

Zusammenfassung. Die ]3eweglickkeitsdauer yon Trypanosoma rhodesiense wh'd in vitro

dureh,Zusatz v ~ Hya]uronidase nieht ver~ndert. Hingegen wird bei der weiBen Laboratoriumsmaus der trypanoeide Effekt einer subcutanen NeosabTarsan-Injektion durch Zusatz yon Hyaluronidase wahrseheinlich dutch Steigerung der Bindegewebspermeabilitat und Beeinflussung der

EinfluB yon t tyaluronidase auf den ~rypanociden Salvarsaneffek~. 67

t e r m i n a l e n S t r o m b ~ h n - - b e s o n d e r s s innf~ l l ig i n d e n e r s t e n S t u n d e n

n a c h d e r I n j e k t i o n - - i n s o l c h e m MaBe g e s t e i g e r t , d a b d e r c u r a t i v e

E f f e k t d e r h a l b e r t N e o s a l v a r s a n m e n g e i n V e r b i n d u n g m i t e i n e r g y a l u -

r o n i d a s e l 6 s u n g a n n / ~ h e r n d a n d ie H e i l w i r k u n g d e r N e o s a l w a r s a n - V o l l -

dos is h e r a n k o m m t .

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5*