UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI INFUSA

UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI

INFUSA DAUN SALAM (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) DAN DAUN

SISIK NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price).

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Desty Sandy Oktoviana Liunokas

NIM: 168114106

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2020

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI

i

UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI INFUSA

DAUN SALAM (Syzygium polyanthum (Wight) Walp.) DAN DAUN SISIK

NAGA (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price).

SKRIPSI

Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat

Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S.Farm.)

Program Studi Farmasi

Oleh:

Desty Sandy Oktoviana Liunokas

NIM: 168114106

FAKULTAS FARMASI

UNIVERSITAS SANATA DHARMA

YOGYAKARTA

2020


iv

HALAMAN PERSEMBAHAN

“Sebab Aku ini mengetahui rancangan-rancangan apa yang ada pada-Ku

mengenai kamu, demikianlah firman TUHAN, yaitu rancangan damai

sejahtera dan bukan rancangan kecelakaan, untuk memberikan kepadamu

hari depan yang penuh harapan”

(Yeremia 29:11)

Skripsi ini aku persembahkan untuk :

Tuhan Yesus Kristus yang telah memberikan kekuatan, pengetahuan, hikmat dan

akal budi sehingga dapat menyelesaikan skripsi ini.

Kedua orang tua tercinta yang tidak pernah berhenti mendukung dalam doa dan

memberi semangat

Semua keluarga dan sahabat yang selalu memberi semangat dalam penyusunan

skripsi ini

Almamater tercinta Universitas Sanata Dharma Yogyakarta


x

DAFTAR ISI

HALAMAN JUDUL ................................................................................... i

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ......................................... ii

HALAMAN PENGESAHAN .................................................................... iii

HALAMAN PERSEMBAHAN.................................................................. iv

HALAMAN PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ................................ v

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI ..................... vi

PRAKATA .................................................................................................. vii

DAFTAR ISI ............................................................................................... x

DAFTAR TABEL ....................................................................................... xii

DAFTAR GAMBAR .................................................................................. xiii

DAFTAR LAMPIRAN ............................................................................... xiv

ABSTRAK .................................................................................................. xv

ABSTRACT .................................................................................................. xvi

PENDAHULUAN....................................................................................... 1

METODE PENELITIAN ............................................................................ 4

Alat dan Bahan ......................................................................................... 4

Pengumbulan Tumbuhan ......................................................................... 4

Determinasi Tumbuhan ............................................................................ 4

Pembuatan Simplisia ................................................................................ 5

Pembuatan Infusa ..................................................................................... 5

Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode Kromatografi Lapis Tipis .... 5

Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase ........................................................... 6

Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5 ............................................ 6

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase 0,1 unit/mL ................... 6

Pembuatan Larutan Substrat Xantin .................................................... 6

Pembuatan Larutan Asam Klorida 1 N................................................ 7

Penentuan Panjang Gelombang Maksimum ........................................ 7

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Blanko ................................ 7

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Blanko ............................................. 7

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol 1000 µg/mL ........................ 7

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Standar Allopurinol ............ 8

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Standar Allopurinol ......................... 8

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Infusa Daun Sisik Naga ............. 8

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Infusa Daun Salam .................... 9

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Kombinasi ................................. 9

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Sampel................................ 9

Pengujin Efek Inhibisi Larutan Sampel ............................................... 9


xi

Perhitungan Nilai IC50 ......................................................................... 10

Analisis Data Statistik ......................................................................... 10

HASIL DAN PEMBAHASAN ................................................................... 12

Penyiapan Bahan ...................................................................................... 12

Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT ..................................... 13

Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase..................................... 15

KESIMPULAN DAN SARAN ................................................................... 19

DAFTAR PUSTAKA ................................................................................. 20

LAMPIRAN ................................................................................................ 23

BIOGRAFI PENULIS ................................................................................ 49


xii

DAFTAR TABEL

Tabel I. Hasil Uji KLT Flavonoid ......................................................... 15

Tabel II. Nilai IC50 Allopurinol, Infusa Daun Salam, Infusa Daun Sisik

Naga, dan Kombinasi ............................................................... 17


xiii

DAFTAR GAMBAR

Gambar 1 Hasil Elus KLT Infusa Tunggal Daun Salam, Infusa Tunggal

Daun Sisik Naga, dan Kombinasi ........................................ 14

Gambar 2. Transformasi Xantin Menjadi Asam Urat untuk XO ........... 16

Gambar 3. Struktur Allopurinol ............................................................. 17

Gambar 4. Daun Tumbuhan Salam ........................................................ 28

Gambar 5. Daun Tumbuhan Sisik Naga ................................................ 28

Gambar 6. Serbuk Simplisia Daun Salam .............................................. 28

Gambar 7. Sebuk Simplisia Daun Sisik Naga ........................................ 28

Gambar 8. Kurva Allopurinol Repetisi 1 ............................................... 36



Gambar 11. Kurva Kombinasi Repetisi 1 ................................................ 37



Gambar 14. Kurva Infusa Tunggal Daun Sisik Naga Repetisi 1 ............. 39



Gambar 17. Kurva Infusa Tunggal Daun Salam Repetisi 1 ..................... 41




xiv

DAFTAR LAMPIRAN

Lampiran 1. Surat pengesahan determinasi salam .................................. 23

Lampiran 2 Surat pengesahan determinasi sisik naga............................ 24

Lampiran 3. Certificate of analysis xantin oksidase ............................... 25

Lampiran 4. Certificate of analysis xantin .............................................. 26

Lampiran 5. Gambar tumbuhan dan serbuk daun salam dan daun sisik .

naga ..................................................................................... 28

Lampiran 6. Data penimbangan serbuk simplisia tumbuhan daun salam

dan daun sisik naga untuk infusa ........................................ 29

Lampiran 7. Data penimbangan bahan KLT ........................................... 29

Lampiran 8. Data perhitungan nilai Rf ................................................... 30

Lampiran 9. Pembuatan larutan xantin oksidase..................................... 31

Lampiran 10. Pembuatan larutan substrat xantin ...................................... 32

Lampiran 11. Pembuatan Larutan Asam klorida ...................................... 32

Lampiran 12. Data panjang gelombang .................................................... 32

Lampiran 13. Pembuatan larutan seri standar allopurinol ........................ 33

Lampiran 14. Pembuatan larutan seri infusa daun salam, daun sisik naga

dan kombinasi ..................................................................... 33

Lampiran 15. Data uji penghambatan enzim xantin oksidase................... 35

Lampiran 16. Sertifikat CE & BU............................................................. 43

Lampiran 17. Data uji statistik .................................................................. 44


xv

ABSTRAK

Hiperurisemia adalah keadaan dimana kadar asam urat berlebih di dalam

tubuh. Asam urat adalah produk dari metabolisme purin yang mengendap di

persendian sehingga menimbulkan rasa nyeri yang hebat dan kaku. Xantin

oksidase (XOD) mengkatalisasi oksidasi hipoksantin dan xantin menjadi asam

urat, yang memiliki peran penting dalam pembentukan asam urat. Metabolit

sekunder yaitu flavonoid yang terdapat pada tanaman daun salam dan daun sisik

naga dapat berperan sebagai inhibitor xantin oksidase. Penelitian ini bertujuan

untuk mengetahui aktivitas kombinasi infusa daun salam (Syzygium polyanthum

(Wight) Walp dan daun sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) dalam

penghambatan enzim xantin oksidase. Tahapan penelitian ini meliputi penyiapan

sampel, determinasi tumbuhan, pembuatan simplisia, pembuatan infusa, pengujian

efek inhibisi enzim xantin oksidase untuk menentukan nilai IC50 dimana

allopurinol digunakan sebagai pembanding, dan pengujian kandungan senyawa

flavonoid dengan metode KLT.

Hasil pengujian KLT didapatkan bahwa daun sisik naga dan daun salam

mengandung flavonoid. Hasil uji efek penghambatan enzim xantin oksidase pada

infusa tunggal daun salam diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesar 45.674 µg/mL,

pada infusa tunggal daun sisik naga diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesa 41.637

µg/mL, sedangkan pada kombinasi diperoleh nilai rata-rata IC50 sebesar 33.246

µg/mL. Berdasarkan hasil uji statistika dengan uji one way anova menyatakan

bahwa hasil yang didapatkan berbeda bermakna secara signifikan antara sampel

dengan allopurinol yang dinyatakan dengan p<0.05.

Kata kunci : Hiperurisemia, xantin oksidase, infusa daun salam, infusa sisik naga,

konsentrasi inhibisi IC50.


xvi

ABSTRACT

Hyperuricemia is a condition in which excess uric acid levels in the body.

Uric acid is a product of purine metabolism which settles in the joints, causing

intense pain and stiffness. Xanthine oxidase (XOD) catalyzes the oxidation of

hypoxanthine and xanthine to uric acid, which has an important role in the

formation of uric acid. Flavonoids as secondary metabolites found in salam leaves

and sisik naga can act as xanthine oxidase inhibitors. This study aims to determine

the activity of the combination of salam infusion (Syzygium polyanthum (Wight)

Walp and sisik naga infusion (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) in the

inhibition of xanthine oxidase enzymes. The stages of this research included

sample preparation, plant determination, manufacturing of simplicia, making

infusion, testing the inhibitory effect of the xanthine oxidase enzyme to determine

the IC50 value where allopurinol was used as a comparison, and testing the content

of flavonoid compounds using the TLC method.

The results of the TLC test showed that sisik naga leaves and salam leaves

contain flavonoids. The test results of the inhibitory effect of the enzyme xanthine

oxidase on a single infusion of salam leaves obtained an average IC50 value of

45,674 µg / mL, for single infusion of sisik naga leaves an average IC50 value was

41,637 µg / mL, and the combination obtained an average IC50 value. 33,246 µg /

mL. Based on the results of the statistical test on the one way ANOVA test, it was

stated that the results obtained were significantly different between the samples

with allopurinol which was stated with p <0.05.

Keywords: Hyperuricemia, xanthine oxidase, salam leaf infusion, sisik naga leaf

infusion, inhibition concentration (IC50).


1

PENDAHULUAN

Asam urat adalah produk dari metabolisme purin yang mengendap di

persendian dan membentuk kristal kecil sehingga menimbulkan rasa nyeri yang

hebat dan kaku, juga pembesaran dan penonjolan sendi yang bengkak. Pada

kondisi tertentu dapat terjadi peningkatan kadar asam urat dalam darah melebihi

batas normal yang disebut hiperurisemia. Hiperurisemia dapat disebabkan oleh

tingkat produksi asam urat yang berlebih, ekskresi asam urat melalui ginjal yang

berkurang atau kombinasi keduanya (Ernawati et al, 2014). Pada sebagian besar

penelitian epidemiologi, disebut sebagai hiperurisemia jika kadar asam urat serum

orang dewasa lebih dari 7,0 mg/dl pada laki-laki dan lebih dari 6,0 mg/dl pada

perempuan (Dianati, 2015).

Xantin oksidase merupakan enzim yang berperan dalam mengkatalisis

oksidasi hipoxantin menjadi xantin kemudian menjadi asam urat. Xantin oksidase

sangat penting dalam metabolisme purin, karena dapat menghasilkan asam urat

dengan cara mengubah hipoxantin menjadi xantin (Unno et al, 2004).

Penghambatan xantin oksidase dapat menghalangi terjadinya proses biosintesis

asam urat yang menjadi salah satu pendekatan terapeutik untuk pengobatan

hiperurisemia (Putri et al, 2016).

Daun salam (Syzygium polyanthum (Wight) Walp dapat digunakan dalam

pengobatan asam urat. Kandungan utama yang dimiliki daun salam meliputi

saponin, triterpen, flavonoid total sebesar 0,19 %, tanin, polifenol, dan alkaloid.

Flavonoid kuersetin dan miresetin pada tanaman salam diduga berkhasiat dalam

menghambat kerja enzim xantin oksidase (Muhtadi et al, 2012).

Daun sisik naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price) memiliki

kandungan metabolit sekunder yaitu tanin, fenol, minyak atsiri, dan flavonoid.

Beberapa penelitian menyatakan bahwa tumbuhan sisik naga memiliki

kemampuan sebagai antioksidan, antikanker, dan antimikroba (Sumito et al.,

2016). Menurut Cos et al (1998) flavonoid adalah sekelompok senyawa alami

yang memiliki aktivitas biologi dan farmakologi sebagai antibakteri, anti kanker,

antioksidan, efek antimutagenik dan penghambatan beberapa enzim telah


2

dibuktikan. Dalam penelitian tersebut dikatakan bahwa flavonoid memiliki

aktivitas penghambatan enzim xantin oksidase.

Obat sintetik yang biasa digunakan untuk mengatasi asam urat adalah

allopurinol. Allopurinol bekerja menghambat pembentukan asam urat dari

prekursornya (xantin dan hipoxantin) dengan menghambat aktivitas enzim xantin

oksidase. Allopurinol memberikan efek samping yaitu ruam kulit, leukopenia,

masalah gastrointestinal, sakit kepala, dan urtikaria (Wells et al, 2015).

Penggunaan obat sintetik salah satunya yaitu allopurinol dalam mengatasi asam

urat memberikan beberapa efek samping, sehingga banyak masyarakat yang lebih

memilih untuk memanfaatkan tanaman herbal sebagai pengganti obat sintetik.

Katno (2002) menemukan bahwa bahan alami memiliki efek samping yang lebih

kecil dibandingkan obat sintesis walaupun dikonsumsi dalam jangka waktu yang

lama. Faktor pendorong terjadinya peningkatan penggunaan obat herbal di negara

maju adalah usia harapan hidup yang lebih panjang pada saat prevalensi penyakit

kronik meningkat, adanya kegagalan penggunaan obat modern untuk penyakit

tertentu di antaranya kanker serta semakin luas akses informasi mengenai obat

herbal di seluruh dunia (Sukandar, 2006).

Bentuk sediaan infusa merupakan bentuk sediaan yang sederhana dan

mudah untuk dikonsumsi oleh masyarakat. Infusa merupakan sediaan cair yang

dibuat dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90˚C selama

15 menit (Khafidhoh et al, 2015). Pada umumnya masyarakat Indonesia mengolah

tanaman obat secara konvensional yaitu dengan merebusnya menggunakan air.

Air memiliki kemampuan mengekstrak senyawa polar yang terdapat pada

tanaman obat lebih baik dibandingkan dengan etanol (Devi et al, 2019).

Penelitian Andriani et al (2016) mengatakan bahwa rata-rata perbedaan

hasil penurunan kadar asam urat sebelum dan sesudah pemberian air rebusan daun

salam adalah 1,40 mg/dL, hasil ini menunjukkan adanya penurunan kadar asam

urat antara sebelum dan sesudah diberikan air rebusan daun salam pada penderita

asam urat. Penelitian mengenai efek penghambatan tumbuhan sisik naga pohon

inang teh oleh Silviana (2019) didapatkan nilai IC50 yang menunjukkan bahwa

ekstrak metanol memiliki daya hambat aktivitas xantin oksidase yang lebih baik


3

dibandingkan dengan ekstrak etil asetat dan ekstrak diklorometana. Penelitian

mengenai uji penghambatan enzim xantin oksidase kombinasi daun salam dan

daun sidaguri oleh Telaumbanua (2018) menunjukan bahwa kombinasi infusa

daun salam dan daun sidaguri memiliki efek yang lebih baik dibandingkan dengan

infusa tunggal daun salam dalam penghambatan aktivitas xantin oksidase.

Berdasarkan ketiga penelitian diatas yang mengatakan infusa daun salam dan

ekstrak metanol sisik naga pohon inang teh memiliki aktivitas xantin oksidase,

sehingga peneliti tertarik untuk melakukan pengujian efek penghambatan xantin

oksidase pada kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga.

Dengan demikian, peneliti ingin mengetahui kemampuan kombinasi infusa

daun salam dan daun sisik naga dalam menurunkan kadar asam urat. Pemberian

kombinasi bahan aktif bertujuan untuk memberikan efek sinergisme atau efek

antagonis untuk melihat keefektifan ekstrak saat diberikan secara kombinasi

dibandingkan dengan pemberian secara tunggal. Kombinasi yang menguntungkan

adalah kombinasi bahan aktif yang memberikan efek sinergis (Syahrir et al,

2016). Efek sinergi adalah hasil dari menggabungkan dua atau lebih senyawa

kimia untuk menghasilkan efek yang lebih besar daripada efek tunggalnya.

Sebaliknya, antagonis adalah fenomena di mana kombinasi senyawa

menghasilkan efek keseluruhan yang kurang dari efek senyawa tunggal (Bulusu et

al, 2016 ).


4

METODE PENELITIAN

Alat dan Bahan

Alat-alat yang digunakan adalah spektrofotometer UV-Vis (Shimadzu) ,

timbangan analitik (Ohaus), pH meter (Ohaus), vortex mixer (Stuart Scientific),

microtube (Eppendorf), oven (Memmert), hot plate, rotary evaporator (Butchi),

corong buchner, bejana maserasi, pipet mikro (Stuart Scientific), tabung reaksi

(Pyrex), beaker gelas, (Pyrex), labu ukur (Pyrex), dan alat-alat gelas lainnya

(Pyrex).

Bahan yang digunakan dalam penelitian ini adalah daun salam, daun sisik

naga, aquades bebas CO2, KH2PO4 1 M, HCl 1 N (Pa), dapar fosfat 0,05 M,

NaOH 1 M (Pa), kuarsetin, Substrat Xantin (Sigma Aldrich), Allopurinol, Enzim

Xantin Oksidase (Sigma Aldrich).

Pengumpulan Tumbuhan

Tanaman Salam diambil dari CV Merapi Farmasi dengan spesifikasi

berupa daun segar warna hijau, utuh tidak berlobang, bersih, daun keempat dari

pucuk dan keempat dari pangkal batang. Pencucian dilakukan terlebih dahulu

untuk menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu. Bagian daun

dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan, kemudian

dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat lalu

ditiriskan sampai sisa air menghilang.

Tanaman Sisik naga diambil dari CV Merapi Farmasi dengan spesifikasi

daun fertil, warna hijau, tidak berlubang dan bersih. Pencucian dilakukan terlebih

dahulu untuk menghilangkan kotoran yang menempel seperti debu. Bagian daun

dipisahkan dari bagian tanaman lain yang terikut saat pengumpulan, kemudian

dicuci dengan air mengalir untuk menghilangkan kotoran yang melekat

selanjutnya ditiriskan sampai sisa air menghilang.

Determinasi Tumbuhan

Determinasi pada tumbuhan sisik naga dan daun salam dilakukan di

Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi Universitas Sanata

Dharma, Yogyakarta. Bagian tumbuhan yang digunakan dalam determinasi adalah

keseluruhan bagian tumbuhan sisik naga dan salam.


5

Pembuatan Simplisia

Daun tanaman salam dan daun sisik naga dikeringkan dalam oven pada

suhu 40ºC sampai kering, dikatakan kering jika daun dapat hancur ketika diremas

dengan tangan. Daun tanaman salam dan daun sisik naga yang telah kering

kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbukan, lalu diayak dengan ayakan

no.40 mesh.

Pembuatan Infusa

Infusa daun salam dan daun sisik naga masing-masing dibuat dengan

cara serbuk kering yang sudah diayak kemudian ditimbang sebanyak 10 gram dan

dicampur dalam panci dengan aquades 100 mL dilakukan secara bertahap sedikit

demi sedikit, kemudian panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung

mulai suhu mencapai 90o

sambil sekali-kali diaduk. Selanjutnya disaring selagi

panas menggunakan kain flanel dan ditambahkan air panas secukupnya melalui

ampas sehingga diperoleh volume 100 mL. Hasil infusa dipekatkan menggunakan

vacuum rotary evaporator, kemudian dipanaskan di atas waterbath sampai

mendapakan ekstrak kental. Ekstrak kental kemudian dikeringkan didalam oven

pada suhu 40oC sampai mendapatkan ekstrak kering.

Infusa kombinasi daun salam dan daun sisik naga dibuat dengan cara

ditimbang masing-masing daun salam 5 gram dan daun sisik naga 5 gram

dicampur dalam panci dengan aquades 100 mL dilakukan secara bertahap sedikit

demi sedikit, kemudian panaskan di atas tangas air selama 15 menit terhitung

mulai suhu mencapai 90o

sambil sekali-kali diaduk. Selanjutnya disaring selagi

panas menggunakan kain flanel dan ditambahkan air panas secukupnya melalui

ampas sehingga diperoleh volume 100 mL. Hasil infusa dipekatkan menggunakan

vacuum rotary evaporator, kemudian dipanaskan di atas waterbath sampai

mendapakan ekstrak kental. Ekstrak kental kemudian dikeringkan didalam oven

pada suhu 40oC sampai mendapatkan ekstrak kering.

Uji Kandungan Flavonoid dengan Kromatografi Lapis Tipis

Infusa tunggal daun salam, daun sisik naga, dan kombinasinya yang

digunakan untuk identifikasi secara KLT dibuat dengan melarutkan masing-

masing 0,1 gram infusa dengan aquades. Infusa ditotolkan pada fase diam silika


6

60 GF254 dengan menggunakan pipa kapiler jarak 2 cm dari tepi bawah lempeng

plat KLT dan dibiarkan mengering. Plat dimasukkan ke dalam bejana tertutup

yang telah dijenuhkan dan fase gerak dibiarkan merambat sampai batas jarak

rambatnya. Fase gerak yang digunakan yaitu n-butanol-asam asetat-air (10: 2,5:

12,5). Plat diangkat dan dikeringkan lalu bercak diamati dengan sinar tampak

pada panjang gelombang 254 nm dan 365 nm dengan pereaksi semprot AlCl3.

Bercak yang muncul dibandingkan dengan standar yaitu kuersetin. Jarak tiap

bercak dari titik awal penotolan sampai titik akhir bercak diukur dan dicatat,

kemudian dihitung nilai Rf dari setiap bercak.

Uji Efek Inhibisi Xantin Oksidase

Pengujian efek penghambatan enzim xantin oksidase dilakukan pada

infusa daun salam tunggal, infusa daun sisik naga tunggal, dan kombinasi infusa

daun salam dan daun sisik naga. Prosedur penelitian merujuk pada Owen et.al dan

Umamaheswari et.al.

Pembuatan Larutan Dapar Fosfat pH 7,5

Kalium dihidrogen phosfat (KH2PO4) ditimbang sebanyak 6,805 gram

dilarutkan dalam 600 mL aquadest bebas CO2 kemudian ditambahkan 18 ml

larutan NaOH 2 N dan diencerkan dengan aquadest bebas CO2 hingga 1000 mL.

Atur pH sampai 7,5 dengan menambahkan NaOH 0,2 N atau HCl 0,2 N.

Pembuatan Larutan Enzim Xantin Oksidase 0,1 unit/mL

Enzim xantin oksidase ditimbang sebanyak 9,0875 mg, kemudian

dilarutkan dengan dapar fosfat pH 7,5 dan dimasukkan ke dalam labu ukur 10 mL

selanjutnya ditambahkan dapar fosfat pH 7,5 hingga batas tanda.

Pembuatan Larutan Substrat Xantin

Substrat xantin ditimbang sebanyak 15,21 mg dan dilarutkan dengan

beberapa tetes NaOH 0,2 N hingga larut, kemudian dimasukkan ke dalam labu

ukur 100 mL dan ditambahkan aquadest bebas CO2 sampai batas tanda. Larutan

induk diambil 15 mL kemudian dimasukkan ke dalam labu ukur 100 mL dan

ditambahkan aquadest bebas CO2 hingga batas tanda.


7

Pembuatan Larutan Asam Klorida 1 N

Sebanyak 8,33 mL asam klorida pekat diencerkan dengan aquadest bebas

CO2 hingga 100 mL.

Penentuan Optimasi Panjang Gelombang Maksimum

Penentuan panjang gelombang maksimum dilakukan sebelum pengujian

untuk menetukan nilai serapan secara optimum. Larutan dapar fosfat 0,05 M pH

7,5 diambil sebanyak 3,9 mL, dimasukkan kedalam tabung reaksi dan

ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase, kemudian diinkubasi selama

15 menit. Larutan xantin oksidase 0,1 mL ditambahkan dan digojok hingga

homogen lalu diinkubasi kembali selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan

penambahan 1 mL HCl 1 N. Pengukuran serapan dilakukan menggunakan

spektrofotometer pada panjang gelombang 200-400 nm.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Blanko

Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M dimasukkan ke dalam

tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase kemudian

diinkubasi selama 15 menit. Setelah itu, ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat dan

digojog hingga homogen, kemudian larutan diinkubasi pada suhu 30oC selama 30

menit. Reaksinya dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N. Selanjutnya

diukur serapannya menggunakan spekrofotometer UV pada panjang gelombang

maksimum dan pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Blanko

Sebanyak 3,9 mL larutan dapar fosfat 0,05 M dimasukkan ke dalam

tabung reaksi dan ditambahkan 2 mL larutan substrat xantin oksidase kemudian

diinkubasi selama 15 menit. Setelah itu, ditambahkan 0,1 mL enzim xantin

oksidase dan digojog hingga homogen, kemudian larutan diinkubasi pada suhu

30oC selama 30 menit. Reaksinya dihentikan dengan penambahan 1 mL HCl 1 N.

Selanjutnya diukur serapannya menggunakan spekrofotometer UV pada panjang

gelombang maksimum dan pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pembuatan Larutan Standar Allopurinol 1000 µg/mL

Tablet allopurinol digerus kemudian ditimbang sebanyak 10 mg dan

dilarutkan dengan beberapa tetes NaOH 1 N kemudian dimasukkan ke dalam labu


8

ukur 10 mL dan ditambahkan dengan aquades bebas CO2 hingga batas tanda

sehingga didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Standar allopurinol dibuat dengan

mengencerkan larutan induk, diambil masing-masing 5; 10; 25; 50; dan 100 µL

dan dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL kemudian ditambahkan aquades bebas

CO2 hingga batas tanda sehingga akan diperoleh larutan standar allopurinol

dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Standar Allopurinol

Larutan uji dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil

masing-masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2

mL substrat xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit.

Ditambahkan 0,1 mL dapar fosfat 0,05 pH 7,5 kemudian digojog hingga homogen

dan diinkubasi selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N

sebanyak 1 mL kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV

pada panjang gelombang maksimum. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Standar Allopurinol

Larutan uji dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil

masing-masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan

ditambahkan dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2

mL substrat xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit

pada suhu 30oC. Ditambahkan 0,1 mL larutan enzim xantin oksidase 0,1 U/ml

kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi selama 30 menit pada suhu

30oC. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL kemudian

diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang gelombang

maksimum. Pengujian dilakukan sebanyak 3 kali.

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Daun Sisik Naga 1000

µg/mL

Sebanyak 10 mg sampel infusa daun sisik naga ditimbang dan dilarutkan

dengan aquades bebas CO2 hingga homogen dalam 10 mL labu ukur, sehingga

didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri infusa dibuat dengan

dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL dimasukkan kedalam labu ukur


9

10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air bebas CO2, sehingga akan

didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL.

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Daun Salam 1000 µg/mL

Sebanyak 10 mg sampel infusa daun sisik naga ditimbang dan dilarutkan

dengan aquades bebas CO2 hingga homogen dalam 10 mL labu ukur, sehingga

didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri infusa dibuat dengan

dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL dimasukkan kedalam labu ukur

10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air bebas CO2, sehingga akan

didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL.

Pembuatan Konsentrasi Larutan Uji Sampel Infusa Kombinasi Daun Salam

dan Daun Sisik Naga 1000 µg/mL

Sejumlah 10 mg kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga

perbandingan 1:1 ditimbang dan dilarutkan dalam 10 mL air bebas CO2 hingga

homogen, sehingga didapatkan konsentrasi 1000 µg/mL. Pembuatan larutan seri

infusa dibuat dengan dipipet masing masing 0,1; 0,25; 0,5; 0,75; 1 mL

dimasukkan kedalam labu ukur 10 mL dan dicukupkan volumenya dengan air

bebas CO2, sehingga akan didapatkan larutan uji infusa konsentrasi 10; 25; 50; 75;

100 µg/mL.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Kontrol Sampel

Larutan uji daun salam, daun sisik naga, atau kombinasi daun salam dan

sisik naga dengan konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL diambil masing-masing

1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan dengan

larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2 mL substrat xantin

oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit. Ditambahkan 0,1 mL

dapar fosfat 0,05 pH 7,5 kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi

selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL

kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang

gelombang maksimum.

Pengujian Efek Inhibisi Larutan Sampel

Larutan uji daun salam, daun sisik naga, atau kombinasi daun salam dan

sisik naga dengan konsentrasi 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL diambil masing-


10

masing 1 mL kemudian dimasukkan ke dalam tabung reaksi dan ditambahkan

dengan larutan dapar fosfat 0,05 M pH 7,5 sebanyak 2,9 mL dan 2 mL substrat

xantin oksidase kemudian dilakukan pra inkubasi selama 15 menit. Ditambahkan

0,1 mL enzim xantin oksidase kemudian digojog hingga homogen dan diinkubasi

selama 30 menit. Reaksi dihentikan dengan penambahan HCl 1 N sebanyak 1 mL

kemudian diukur serapannya menggunakan spektrofotometer UV pada panjang

gelombang maksimum.

Perhitungan Penghambatan Enzim Xantin Oksidase (IC50)

Perhitungan % aktivitas inhibitor enzim xantin oksidase dapat dihitung

dengan rumus :

% Inhibisi = (1-

) x 100%

Keterangan :

A : Perubahan absorbansi larutan uji tanpa ekstrak tumbuhan sisik naga (Blanko

(abs dengan enzim) – Kontrol blanko (abs tanpa enzim))

B : Perubahan absorbansi larutan uji dengan ekstrak tumbuhan sisik naga

(Sampel (abs dengan enzim) – Kontrol sampel (abs tanpa enzim))

Nilai IC50 dihitung menggunakan rumus persamaan regresi untuk

menentukan y = a + bx. Aktivitas inhibisi dinyatakan dengan Inhibition

Concentration 50% (IC50) yaitu konsentrasi sampel yang dapat menghambat kerja

enzim xantin oksidase sebanyak 50%. Nilai IC50 didapatkan dari nilai x setelah

mengganti y = 50.

Analisis Data Statistik

Data pengujian kandungan flavonoid dengan menggunakan metode KLT

dibuat dalam bentuk tabel yang selanjutnya hasil dideskripsikan. Data uji

penghambatan xantin oksidase dihitung nilai absorbansi setiap sampel, persen

inhibisi, dan selanjutnya dihitung IC50 menggunakan metode regresi linear.

Analisis Shapiro-Wilk digunakan untuk melihat data terdistribusi normal

atau tidak. Jika data terdistribusi normal maka dapat dilakukan uji Anova satu

arah dengan taraf kepercayaan 95% untuk mengetahui perbedaan data antar

kelompok. Apabila data yang didapatkan tidak terdistribusi normal maka

dilakukan uji Kruskal-Wallis. Pada uji Anova satu arah atau Kruskal-Wallis yang


11

dilakukan apabila didapatkan hasil nilai P<0.05, dilanjutkan analisis Post-Hoc

untuk mengetahui kelompok yang berbeda bermakna. Dilakukan uji Post-Hoc

dengan menggunakan uji Scheffe apabila hasil data didapatkan terdistribusi

normal tetapi jika hasil data yang didapatkan tidak terdistribusi normal, maka

digunakan uji Mann-Whitney. Hasil nilai P<0.05 menunjukkan bahwa terdapat

perbedaan rerata bermakna antara dua kelompok data.


12

HASIL DAN PEMBAHASAN

Penyiapan Bahan

Tanaman daun salam dan daun sisik naga diambil dari CV Merapi Farmasi.

Daun salam diambil dengan spesifikasi berupa daun segar warna hijau, utuh tidak

berlobang, bersih, daun keempat dari pucuk dan keempat dari pangkal batang.

Daun Sisik naga diambil dengan spesifikasi daun fertil, warna hijau, tidak

berlubang dan bersih.

Dilakukan determinasi pada tanaman daun salam dan daun sisik naga yang

telah dikumpulkan. Tujuan dilakukan determinasi pada tanaman salam dan sisik

naga yaitu untuk memastikan kebenaran identitas tanaman dengan jelas. Hasil dari

determinasi menunjukan tanaman yang digunakan benar merupakan tanaman

salam Syzygium polyanthum (Wight) Walp dan sisik naga Pyrrosia piloselloides

(L.) M.G.Price. Hasil didukung dengan adanya surat keterangan dari

Laboratorium Kebun Tanaman Obat Fakultas Farmasi, Universitas Sanata

Dharma Yogyakarta.

Tanaman daun salam dan daun sisik naga yang digunakan dalam

determinasi selanjutnya dicuci terlebih dahulu untuk menghilangkan kotoran yang

menempel seperti debu. Bagian daun dipisahkan dari bagian tanaman lain yang

terikut saat pengumpulan, kemudian dicuci dengan air mengalir untuk

menghilangkan kotoran yang melekat lalu ditiriskan sampai sisa air menghilang.

Setelah dilakukan pencucian, kedua tanaman dirajang untuk memperkecil ukuran

sehingga mudah untuk dikeringkan. Selanjutnya daun sisik naga dan daun salam

dikeringkan menggunakan oven dengan suhu 40oC sampai kering, dikatakan

kering jika daun dapat hancur ketika diremas dengan tangan. Tujuan dilakukan

pengeringan yaitu untuk mengurangi kadar air yang terdapat pada daun salam dan

daun sisik naga. Daun tanaman salam dan daun sisik naga yang telah kering

kemudian diserbuk menggunakan alat penyerbukan, lalu diayak dengan ayakan

no.40 mesh. Penyerbukan sangat penting karena dapat meningkatkan luas

permukaan partikel yang kontak dengan pelarut sehingga pelarut dapat masuk ke

dalam serbuk dan zat kimia berupa metabolit sekunder pada serbuk simplisia akan


13

keluar dan bercampur dengan zat penyari sehingga proses penyarian dapat

berlangsung efektif.

Proses ekstraksi serbuk simplisia daun sisik naga dan daun salam

menggunakan metode ekstraksi pelarut secara panas yaitu infudasi. Pada

umumnya infusa merupakan teknik umum yang digunakan untuk ekstraksi

tanaman obat (Handa et al, 2008). Infusa merupakan sediaan cair yang dibuat

dengan mengekstraksi simplisia nabati dengan air pada suhu 90˚C selama 15

menit (Khafidhoh et al, 2015). Penggunaan bentuk sediaan infusa dikarenakan

sediaan infusa merupakan bentuk sediaan yang sederhana dan mudah untuk

dikonsumsi oleh masyarakat. Kandungan flavonoid pada daun memiliki sifat non

polar sampai polar karena adanya kandungan senyawa aglikon ataupun bentuk

glikosida. Ekstraksi infusa menggunakan pelarut polar yaitu air. Senyawa yang

memiliki tingkat kepolaran yang sama dengan pelarut akan lebih mudah

bercampur. Dengan demikian, diharapkan flavonoid dapat tersari pada sediaan

infusa (Sutrisna et al, 2010).

Uji Kandungan Flavonoid dengan Metode KLT

Dilakukan pengujian kandungan kimia pada infusa daun salam dan daun

sisik naga dengan menggunakan metode KLT. Pengujian kandungan kimia

bertujuan untuk mengetahui kandungan flavonoid yang terdapat pada infusa di

mana flavonoid memilki kemampuan dalam penghambatan xantin oksidase.

Pengujian dilakukan dengan membandingkan nilai Rf pada standar dengan infusa.

Standar yang digunakan pada pengujian flavonoid yaitu kuersetin, karena

kuersetin merupakan flavonoid golongan flavonol yang memiliki gugus keto pada

atom C-4 dan juga gugus hidroksil pada atom C-3 dan C-5 yang bertetangga

(Azizah et al, 2014). Sampel dan standar ditotolkan pada fase diam yaitu silika 60

GF 254 kemudian dielusi pada chamber yang berisi fase gerak yaitu n-butanol-

asam asetat-air dengan perbandingan (10: 2,5: 12,5). Fase gerak yang digunakan

bersifat sangat polar sehingga bisa memisahkan senyawa flavonoid yang juga

bersifat polar. Eluen yang baik ialah eluen yang bisa memisahkan senyawa dalam

jumlah yang banyak dengan ditandai munculnya noda (Forestryana, 2020).

Sebelum digunakan plat KLT harus diaktivasi dengan menggunakan oven pada


14

suhu 110oC selama 30 menit untuk menghilangkan air yang terdapat pada plat

KLT (Bele, 2011). Hasil elusi kemudian disemprot pereaksi AlCl3 untuk

mendeteksi senyawa fenolik, selanjutnya dideteksi dibawah sinar UV pada

panjang gelombang 365 nm dan 254 nm. Pengamatan bercak dilakukan pada sinar

tampak, sinar UV 254 dan sinar UV 365 nm.

Flavonoid adalah salah satu golongan senyawa fenolik terbesar dalam

tanaman dan merupakan salah satu metabolit sekunder. Struktur karbon dasar dari

flavonoid mengandung 15 karbon dengan 2 cincin aromatik yang dihubungkan

oleh jembatan 3-karbon (Wildman, 2007). Adanya kandungan flavonoid pada

tumbuhan menandakan adanya aktivitas antioksidan. Flavonoid merupakan salah

satu antioksidan alami (Kristanti et al, 2019).

Gambar 1. Hasil elusi KLT Infusa tunggal daun salam (A), infusa tunggal

daun sisik naga (B), kombinasi infusa daun salam dan sisik naga (C),

kuersetin (D)

Pengujian kandungan kimia pada infusa dilakukan dengan metode KLT

secara kualitatif. KLT merupakan metode yang dapat menganalisis sampel dalam

jumlah yang banyak secara paralel dalam satu waktu yang bersamaan dengan

waktu yang relatif lebih cepat dibandingkan kromatografi kolom (Rafi et al,

2017). Hasil positif adanya kandungan senyawa flavonoid ditandai dengan

terbentuknya bercak berwarna kuning setelah disemprot dengan AlCl3.

A B C D D A C B

Visual Lampu UV 365 nm


15

Tabel I. Hasil Uji KLT Flavonoid

No. Sampel

Visual setelah reagen

semprot (AlCl3)

Deteksi UV 365 nm setelah

reagen semprot (AlCl3)

Warna Rf (cm) Warna Rf (cm)

1. Kuersetin Kuning 0.98 Biru 0.82

2. Infusa

Kombinasi Kuning 0.96 Biru 0.78

3. Infusa Daun

Salam Kuning 0.8 Biru 0.7

4. Infusa Daun

Sisik Naga Kuning 0.98 Biru 0.78

Berdasarkan pengujian KLT pada sampel infusa daun salam, daun sisik

naga, dan kombinasi hasilnya menunjukan kemungkinan adanya kandungan

flavonoid jenis kuersetin yang dapat ditunjukan dengan adanya perubahan warna

menjadi warna kuning di bawah sinar UV pada panjang gelombang 365 nm dan

nilai Rf yang didapatkan mendekati nilai Rf pada pembanding kuersetin.

Pembanding kuersetin menghasilkan bercak berwarna kuning setelah dideteksi di

bawah sinar UV pada panjang gelombang 365 nm dengan nilai Rf sebesar 0.78

cm setelah disemprot pereaksi AlCl3.

Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase

Enzim xantine oksidase (XO) merupakan enzim yang mengkatalisasi

oksidasi hipoksantin dan xantin menjadi asam urat. Hidroksilasi purin dikatalisis

oleh XO dan terutama konversi xantin menjadi asam urat yang lebih bertanggung

jawab untuk beberapa penyakit seperti asam urat, penyakit ginjal dan

pembentukan batu dalam sistem kemih (Mehta et al, 2014). Selama reoksidasi

xantin oksidase, oksigen molekular beraksi sebagai elektron akseptor,

memproduksi radikal superoksida dan hidrogen peroksida.

Xantin + 2O2 + H2O Asam urat + 2O2- + 2H

+

Xantin + O2 + H2O Asam urat + H2O2

(Mehta et al, 2014)


16

Gambar 2. Transformasi xantin menjadi asam urat oleh XO (Kostic et al, 2015).

Dengan demikian, penggunaan inhibitor XO yang menghambat sintesis asam urat

dalam tubuh dapat menjadi salah satu pendekatan terapi untuk pengobatan

hiperurisemia dan asam urat kronis (Liu et al, 2016).

Pengujian enzim xantin oksidase diawali dengan pendahuluan dimana

dilakukan penentuan suhu inkubasi, waktu inkubasi, pH larutan, dan konsentrasi

substrat xantin yang merujuk pada Umamaheswari et al. Dilakukan penentuan

serapan panjang gelombang maksimum pada rentang 200-400 nm. Nilai panjang

gelombang maksimum yang didapatkan yaitu 287,60 nm dilihat dari nilai

absorbansi tertinggi yang didapatkan. Nilai panjang gelombang maksimum

digunakan dalam penentuan serapan pada sampel. Suhu inkubasi yang digunakan

yaitu 30oC selama 15 menit untuk pra inkubasi dan 30 menit untuk inkubasi, pH

yang digunakan yaitu 7,5, dan konsentrasi substrat xantin yaitu 0,15 mM.

Pada pengujian enzim xantin oksidase dilakukan pembuatan larutan

kontrol blanko dan blanko yang bertujuan sebagai pembanding terhadap larutan

sampel untuk melihat aktivitas penghambatan xantin oksidase tanpa ekstrak uji.

Standar yang digunakan dalam pengujian enzim xantin oksidase yaitu allopurinol

dengan variasi konsentrasi yaitu 0,5; 1; 2,5; 5; dan 10 µg/mL dengan diencerkan

dengan larutan induk 1000 µg/mL.


17

Gambar 3. Struktur Allopurinol (Pacher et al, 2006)

Allopurinol digunakan sebagai pembanding, dikarenakan allopurinol

memiliki mekanisme kerja sebagai inhibitor enzim xantin oksidase. Dilihat dari

mekanismenya, allopurinol termasuk inhibitor reversibel kompetitif. Suatu

inhibitor kompetitif memiliki struktur mirip dengan substrat yang menyebabkan

adanya kompetisi antara substrat dengan inhibitor dalam mengikat sisi aktif enzim

(Wulandari et al, 2012). Senyawa standar yang digunakan dalam penelitian bukan

merupakan senyawa murni tetapi dalam bentuk sediaan tablet sehingga

kemungkinan hasil yang didapatkan pada penentuan nilai IC50 pembanding

kurang sesuai. Nilai IC50 allopurinol yang didapatkan dilihat pada Tabel II

berturut-turut yaitu 12.655; 15.111; 17.387 µg/mL dengan rata-rata yaitu 15.051

µg/mL.

Tabel II. Nilai IC50 allopurinol, infusa daun salam, infusa daun sisik naga, dan

kombinasi infusa daun salam dan sisik naga

Repitisi Allopurinol

Infusa Daun

Salam

Infusa Daun

Sisik Naga

Infusa

Kombinasi

IC50 (µg/mL)

1 12.655 45.665 41.780 33.494

2 15.111 46.045 41.605 33.088

3 17.387 45.313 41.526 33.156

Rerata 15.051 45.674 41.637 33.246

SD 2.366 0.366 0.129 0.217

CV (%) 15.720 0.802 0.312 0.654

Pada pengujian enzim xantin oksidase dilakukan pembuatan larutan

sampel dengan konsentrasi 10; 25; 50; 75; 100 µg/mL diencerkan dari larutan

induk 1000 µg/mL. Nilai IC50 sampel infusa daun salam ditunjukan pada Tabel II

berturut-turut yaitu 45.665; 46.045; 45.313 µg/mL dengan nilai rata-rata yaitu

45l.674 µg/mL. Nilai IC50 sampel infusa daun sisik naga berturut-turut yaitu

41.780; 41.605; 41.526 µg/mL dengan nilai rata-rata yaitu 41.637 µg/mL.

Sedangkan nilai IC50 sampel kombinasi infusa daun salam dan daun sisik naga


18

berturut-turut yaitu 33.494; 33.088; 33.156 µg/mL dan nilai rata-rata yaitu 33.246

µg/mL.

Dari hasil nilai IC50 yang didapatkan pada standar allopurinol dan sampel

maka disimpulkan bahwa allopurinol memiliki efek penghambatan xantin

oksidase yang paling baik dikarenakan allopurinol memiliki nilai IC50 yang paling

kecil dibandingkan sampel. Semakin kecil nilai IC50 suatu senyawa maka

kemampuan dalam penghambatan enzim xantin oksidase semakin baik. Pada

ketiga sampel yang diuji menunjukan bahwa infusa kombinasi daun sisik naga

dan daun salam memiliki efek penghambatan xantin oksidase yang lebih baik

dibandingkan infusa tunggal daun salam dan infusa tunggal daun sisik naga dilihat

dari nilai IC50 yang didapatkan paling mendekati nilai IC50 pembanding

allopurinol. Peningkatan persen penghambatan IC50 pada infusa kombinasi

disebabkan karena adanya efek sinergis antara daun salam dan daun sisik naga.

Efek sinergis yang dihasilkan oleh kombinasi dapat disebabkan karena adanya

kombinasi dari dua jenis antioksidan pada daun salam dan daun sisik naga

sehingga menghasilkan potensi aktivitas total antioksidan yang lebih tinggi

(Marianne, 2018). Hasil uji statistik dengan menggunakan uji one way Anova

menyatakan bahwa hasil yang didapatkan berbeda bermakna secara signifikan

antara sampel dan allopurinol dilihat dari nila p<0.05.


19

KESIMPULAN

Berdasarkan hasil penelitian yang dilakukan dapat disimpulkan bahwa

kombinasi daun sisik naga memiliki kemampuan penghambatan enzim xantin

oksidase yang baik dengan rata-rata nilai IC50 yaitu 33.246 µg/mL. Belum dapat

dipastikan adanya kandungan flavonoid pada identifikasi kimia daun salam dan

daun sisik naga dikarenakan nilai Rf yang berbeda dengan pembanding kuersetin.

SARAN

Perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk memastikan apakah benar

adanya kandungan flavonoid pada sampel dikarenakan hasil KLT yang

didapatkan kurang nyata.


20

DAFTAR PUSTAKA

Andriani, A., Chaidir, R., 2016. Pengaruh Pemberian Air Rebusan Daun Salam

(Syzygium Polyanthum) Terhadap Penurunan Kadar Asam Urat. Research

of Applied Science and Education, 10(2), 117.

Azizah, D, N., Kumolowati, E., Faramayuda, F., 2014. Penetapan Kadar

Flavonoid Metode AlCl3 pada Ekstrak Metanol Kulit Buah Kakao

(Theobroma cacao L.). Kartika Jurnal Ilmiah Farmasi, 2(2), 48.

Bele, A, A., Khale, A., 2011. An Overview on Thin Layer Chromatography.

International Journal of Pharmaceutical Sciences and Research, 2(2),

258.

Bulusu, K, C., Guha, R., Mason, D, J., Lewis, R, P, I., Muratov, E., Motamedi, Y,

K., Cokol, M., Bender, A., 2016. Modelling of Compound Combination

Effects and Applications to Efficacy and Toxicity : State-of-the-art,

Challenges and Perspectives. Drug Discovery Today, 21 (2), 226.

Cos, P., Ying, L., Calomme, M., Hu, J.P., Cimanga, K., 1998. Structure-Activity

Relationship and Classification of Flavonoids as Inhibitors of Xanthine

Oxidase and Superoxide Scavengers. Journal of Natural Products, 61 (1),

71.

Devi, S., Rahmah, M., and Jannah, N, R., 2019. Analisis Infusa dan Ekstrak

Etanol Tamarindus indica L, Scurrula Sp, Mimosa pudica D Segar dan

Kering Sebagai Inhibitor Enzim Amilase. Jurnal Natur Indonesia, 17 (2),

28.

Dianati, N, A., 2015. Gout and Hyperuricemia. Jurnal Majority, 4 (3), 82.

Ernawati., Susanti, H., 2014. Penghambatan Aktivitas Xanthine Oxidase oleh

Ekstrak Etanol Sarang Semut (Myrmecodia tuberosa (non Jack) Bl.)

Secara In Vitro. Pharmaciana, 4(1), 16.

Forestryana, D., and Arnida., 2020. Skrining Fitokimia dan Analisis Kromatografi

Lapis Tipis Ekstrak Etanol Daun Jeruju (Hydrolea Spinosa L.). Jurnal

Ilmiah Farmako Bahari, 11 (2), 121.

Handa, S, S., Khanuja, S, P, S., Longo, G., and Rakesh, D, D., 2008. Extraction

Technologies for Medicinal and Aromatic Plants. United Nations

Industrial Development Organizations and the International Centre for

Science and High Technology.

Katno., Pramono, S., 2002. Tingkat Manfaat dan Keamanan Tanaman Obat dan

Obat Tradisional. Fakultas Farmasi, UGM.

Khafidhoh, Z., Dewi, S, S., Iswara, A., 2015. Efektivitas Infusa Jeruk Purut

(Citrus hystrix DC.) Terhadap Pertumbuhan Candida albicans Penyebab

Sariawan Secara in vitro. Fakultas Ilmu Keperawatan dan Kesehatan,

Universitas Muhammadiyah Semarang.

Kostić,D.A., Dimitrijević,D.S., Stojanović,G.S., Palić,I.R., et al., 2015. Xanthine

Oxidase :Isolation,Assays of Activity, and Inhibiton. Hindawi

Publishing Corporation. Journal of Chemistry, volume 2015, pp.1-8.

Kristanti, A.N., Aminah, N.S., Tanjung, and M., Kurniadi, B., 2019. Buku Ajar

Fitokimia. Airlangga University Press.


21

Liu, K., Wang, W., Guo, B, H., Gao, H., Liu, Y., 2016. Chemical Evidence for

Potent Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of Ethyl Acetate Extract of

Citrus aurantium L. Dried Immature Fruits. Moleculas, 21 (302), 1.

Marianne, M., 2018. Uji Aktivitas Antioksidan Kombinasi Ekstrak Etanol

Rimpang Temu Giring (Curcuma Heyneana) dan Daun Pugun Tanoh

(Curanga Fel-Terrae) Menggunakan Metode Diphenyl

Picrylhydrazil(DPPH). TALENTA Conference Series: Tropical Medicine

(TM), 1(2), 399.

Mehta, S.K., Nayeem, N., 2014. Natural Xanthine Oxidase Inhibitors for

Management of Gout : A review. Research and Reviews : Journal of

Medical and Health Sciences. 3(3), 5.

Muhtadi., Retnani, I., and Wahyuningtyas, N., 2012. Penghambatan Ksantin

Oksidase oleh Kombinasi Ekstrak Tempuyung (Sonchus Arvensis) dan

Salam (Syzgium Polyanthum) pada Mencit Hiperurisemia. Jurnal

Biomedika, 4 (1), 17.

Owen, P.L., Johns, T., 1999. Xanthine Oxidase Inhibitory Activity of

Northeastern North American Plant Remedies Used for Gout. Journal of

Ethnopharmacology, 64, 150-153.

Pacher, P., Nivorozhkin, A., Szabo, C., 2006. Therapeutic Effects of Xanthine

Oxidase Inhibitors : Renaissance Half a Century after the Discovery of

Allopurinol. Pharmacological Reviews, 58(1), 91.

Putri, N.E., Rissyelly., and Mauldina, M.G., 2016. Uji Penghambatan Xantin

Oksidase secara In Vitro Ekstrak Kulit Rambutan. Journal of

Pharmaceutical Sciences and Research, 3 (1), 13.

Rafi, M., Heryanto, R., and Septaningsih, D, A., 2017. ATLAS Kromatografi

Lapis Tipis Tumbuhan Obat Indonesia. Pusat Studi Biofarmaka Tropika

LPPM, Institute Pertanian Bogor.

Silviana, N, C., 2019. Uji Efek Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Ekstrak

Tumbuhan Sisik Naga (Pyrroadsia piloselloides (L.) M.G.Price) Pohon

Inang The. Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Sukandar, E, Y., 2006. Tren dan Paradigma Dunia Farmasi. Industri Klinik

Teknologi Kesehatan. Departemen Farmasi FMIPA, Institut Teknologi

Bandung.

Sumito, J.S., Khotimah, S., and Linda, R., 2016. Uji Bioaktivitas Fraksi Metanol

dan Etil Asetat Tumbuhan Sisik Naga (Drymoglossum piloselloides (L)

pressl.) Terhadap Bakteri Staphylococcus aureus dan Salmonella typhi.

Jurnal Protobiont, 5 (1), 30.

Sutrisna, E, M., Wahyuni, A, S., Azmi, U., 2010. Efek Ekstrak Etanol Daging

Buah Mahkota Dewa (Phaleria Macrocarpa (Scheff.) Boerl.) Terhadap

Penurunan Kadar Asam Urat pada Mencit Putih Jantan yang Diinduksi

Potassium Oxonate. Pharmacon, 11(2), 63,67.

Syahrir, N.H.A., Afendi, F.M., Susetyo, B., 2016. Efek Sinergis Bahan Aktif

Tanaman Obat Berbasiskan Jejaring Dengan Protein Target. Jurnal Jamu

Indonesia, 1 (1), 36.


22

Telaumbanua, A, K., 2015. Uji Penghambatan Enzim Xantin Oksidase Kombinasi

Infusa Daun Salam (Syzygium polyanthum Wigh) dengan Infusa Daun

Sidaguri (Sida rhombifolia L.). Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta.

Umamaheswari, M., Asokkumar, K., Sivashanmugam, A.T., Remyaraju, A.,

Subhadradevi, V., and Ravi, T.K., 2009. In Vitro Xanthine Oxidase

Inhibitory Activity of The Fractions of Erythrina stricta Roxb. Journal of

Ethnopharmacology, 124, 647-648.

Unno, T., Sugimoto, A., Kakuda, T., 2004. Xanthine Oxidase Inhibitors from the

Leaves of Lagerstroemia speciosa (L.) Pers. Journal of

Enthnopharmacology, 93, 391.

Wells, B.G., Dipiro, J.T., Schwinghammer, T.L., Dipiro, C.V., 2015.

Pharmacotherapy Handbook 9th

edition, McGraw-Hill Companies.

Wildman, R.E.C., 2007. Handbook of Nutraceuticals and Functional Foods

Second Edition. CRC Press Taylor & Francis Group.

Wulandari, S., Subandi., Muntholib., 2012. Inhibisi Xantin Oksidase oleh Ekstrak

Etanol Kulit Melinjo (Gnetum gnemon) Relatif Terhadap Allopurinol.

Universitas Negeri Malang.


49

BIOGRAFI PENULIS

Penulis skripsi yang berjudul “Uji Efek Inhibisi Enzim

Xantin Oksidase Kombinasi Infusa Daun Salam

(Syzygium polyanthum (Wight) Walp dan Daun Sisik

Naga (Pyrrosia piloselloides (L.) M.G Price)” memiliki

nama lengkap Desty Sandy Oktoviana Liunokas.

Penulis dilahirkan di Jayapura pada tangga 26 Oktober

1997 sebagai anak ke dua dari tiga bersaudara, dari

pasangan Petrus Liunokas dan Evy Susianti. Penulis

menempu pendidikan formal di TK Ria Pembangunan

Sentani (2002-2003), SD YPPK Bonaventura Sentani (2003-2009), SMP Negeri 2

Sentani (2009-2012), SMA Negeri 1 Sentani (2012-2015) dan kemudian

melanjutkan pendidikan di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma pada

tahun 2016. Semasa kuliah penulis aktif dalam beberapa kegiatan fakultas seperti

anggota BEMF divisi Penelitian dan Pengembangan (2016-2017), seksi acara

Kampanye Informasi Obat (2017), Bendara Herbal Garden Team (2017-2018),

Sekretaris SEMNAS dan HCC dalam kegiatan Future Pharmacist in Action 3

(2018), dan asisten praktikum Farmakognosi Fitokimia (2018-2019).


Documents

UJI EFEK INHIBISI ENZIM XANTIN OKSIDASE KOMBINASI INFUSA