UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR TEMA · "EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE SALVIA-ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL ... hacer uso de todos los contenidos

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN COMO REQUISITO PREVIO A LA

OBTENCIÓN DEL GRADO ACADÉMICO DE ODONTÓLOGA

TUTOR: Dr. Guillermo Alberto Lanas Terán

AUTORA: Gabriela Ximena Marín Vega

QUITO - ECUADORJUNIO 2016

FACULTAD DE ODONTOLOGÍA

UNIDAD DE INVESTIGACIÓN, TITULACIÓN Y GRADUACIÓN

"EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO

Y DE SALVIA-ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL

Streptococcus mutans. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO IN VITRO"

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR

Fernando

Texto tecleado

TEMA:

ii

DEDICATORIA

En primer lugar a Dios.

A mi familia y de manera especial a mi Madre, por su amor, paciencia y su ayuda

incondicional, que fueron determinantes para poder culminar este trabajo.

A mi hijo, el motor de mi vida, por ser la fuerza que me impulsa para seguir adelante.

Gabriela Ximena Marín Vega

iii

AGRADECIMIENTO

Agradezco de manera especial al Dr. Guillermo Lanas por su dedicación y entusiasmo en la

dirección de esta tesis.

A la Universidad Central Del Ecuador, y a todo el grupo de docentes del pregrado, por todos

sus conocimientos impartidos a lo largo de la carrera.

A la Dra. Rachide Acosta, por su colaboración en el desarrollo del experimento in vitro.

Al Dr. Ricardo Álvarez, por su donación de cajas petri utilizadas en la elaboración del

presente trabajo de investigación.


iv

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL

Yo, Gabriela Ximena Marín Vega, en calidad del autora del trabajo de investigación de tesis

realizada sobre “EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y

DE SALVIA-ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL Streptococcus

mutans. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO IN VITRO”por la presente autorizo a la

UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, hacer uso de todos los contenidos que me

pertenecen o de parte de los que contienen esta obra, con fines estrictamente académicos o de

investigación.


C.C: 1711855005

[email protected]

Los derechos que como autor me corresponden, con excepción de la presente autorización,

seguirán vigentes a mi favor, de conformidad con lo establecido en los artículos 5, 6, 8, 19 y

además pertinentes de la Ley de Prioridad Intelectual y su Reglamento.

Quito, Junio del 2016

v

Anexo 4

INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR

En mi carácter de Tutor del trabajo de Grado, presentado por el señorita. Gabriela Ximena

Marín Vega, para optar el Título de Odontóloga, cuyo título es. “EFECTIVIDAD DEL

EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE SALVIA-ROMERO AL 100%

COMO BACTERICIDA SOBRE EL Streptococcus mutans. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO

IN VITRO” Considero que dicho Trabajo reúne los requisitos y méritos suficientes para ser

sometido a la presentación pública y evaluación por parte del jurado examinador que se

designe.

En la ciudad de Quito a los diez y seis días del mes de Marzo del 2016.

Dr. Guillermo Alberto Lanas Terán

Tutor de tesis

vi

CERTIFICADO DEL TRIBUNAL

“EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE SALVIA-

ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL Streptococcus mutans. ESTUDIO

MICROBIOLÓGICO IN VITRO”

Autora: Gabriela Ximena Marín Vega,

APROBACIÓN DEL JURADO EXAMINADOR

MIEMBRO DEL TRIBUNAL MIEMBRO DEL TRIBUNAL

El presente trabajo de investigación luego de cumplir con todos los requisitos normativos, en

nombre de la UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR, FACULTAD DE

ODONTOLOGIA se aprueba, por lo tanto el jurado detalla a continuación, autoriza a la

postulante la presentación a efecto de la sustentación pública.

Quito, Junio del 2016

Dr. ÁNGEL AVILÉS

PRESIDENTE DEL TRIBUNAL

Dra. KARINA FARFÁN Dr. IVÁN GARCÍA

Fernando

Texto tecleado

DR. FERNANDO RIVADENEIRA

Fernando

Texto tecleado

MIEMBRO DEL JURADO

Fernando

Texto tecleado

vii

ÍNDICE

DEDICATORIA .......................................................................................................................................... ii

AGRADECIMIENTO ................................................................................................................................. iii

AUTORIZACIÓN DE LA AUTORÍA INTELECTUAL ...................................................................................... iv

INFORME DE APROBACIÓN DEL TUTOR .................................................................................................. v

CERTIFICADO DEL TRIBUNAL .................................................................................................................. vi

ÍNDICE .................................................................................................................................................... vii

ÍNDICE DE TABLAS ................................................................................................................................... x

ÍNDICE DE GRÁFICOS .............................................................................................................................. xi

ÍNDICE DE FIGURAS ............................................................................................................................... xii

RESUMEN ............................................................................................................................................. xiv

ABSTRACT .............................................................................................................................................. xv

INTRODUCCIÓN ....................................................................................................................................... 1

CAPITULO I .............................................................................................................................................. 3

1.1 Planteamiento del problema ............................................................................................................ 3

OBJETIVOS ........................................................................................................................................... 4

1.3 Objetivos ........................................................................................................................................... 4

1.3.1 Objetivo general ............................................................................................................................. 4

1.3.2 Objetivo especifico ........................................................................................................................ 4

JUSTIFICACIÓN ................................................................................................................................... 5

1.4 Justificación ...................................................................................................................................... 5

1.5 Hipótesis ............................................................................................................................................ 5

CAPÍTULO II ......................................................................................................................................... 6

viii

MARCO TEÓRICO ................................................................................................................................ 6

2. Fitoterapia general .............................................................................................................................. 6

2.1 Concepto ....................................................................................................................................... 7

2.1.1 Características de la fitoterapia .................................................................................................. 8

2.2. SALVIA (Salvia officinalis) ............................................................................................................... 10

2.2.1 Nombre científico y taxonomía ................................................................................................ 10

2.2.2 Nombre vulgar ......................................................................................................................... 10

2.2.3 Órgano oficinal ......................................................................................................................... 10

2.2.4 Características de la planta ....................................................................................................... 10

2.2.5 Ecología .................................................................................................................................... 11

2.2.6 Uso tradicional ......................................................................................................................... 11

2.2.7 Descripción .............................................................................................................................. 11

2.2.8 Composición Química .............................................................................................................. 12

2.2.10 Actividad antimicrobiana ....................................................................................................... 13

2.2.11 Indicaciones ............................................................................................................................ 13

2.2.12 Efectos secundarios ................................................................................................................ 14

2.2.13 Contraindicaciones ................................................................................................................. 15

2.3 ROMERO (Rosmarinus officinalis) .................................................................................................. 15

2.3.1 Taxonomía ................................................................................................................................ 15

2.3.2 Descripción botánica ................................................................................................................ 15

2.3.3 Propiedades Medicinales .......................................................................................................... 16

2.3.4 Aplicaciones terapéuticas y farmacológicas ............................................................................. 16

2.3.5 Composición química ............................................................................................................... 17

2.3.6 Indicaciones .............................................................................................................................. 17

2.3.7 Contraindicaciones ................................................................................................................... 17

2.4 COCCI GRAM POSITIVOS ................................................................................................................. 18

ix

2.4.1 Streptococci .............................................................................................................................. 18

2.4.2 Grupo mutans (estreptococci mutans) ...................................................................................... 18

CAPÍTULO III ...................................................................................................................................... 21

3. Metodología ...................................................................................................................................... 21

3.1 Tipo y diseño de la investigación o diseño del estudio ............................................................. 21

3.2 Población y muestra .................................................................................................................. 23

3.2.1 Criterios de inclusión ................................................................................................................... 23

3.2.2 Criterios de exclusión ................................................................................................................... 23

3.3 Operacionalización de las variables .......................................................................................... 24

3.4 Materiales y métodos ..................................................................................................................... 25

3.4.3 Técnicas e instrumentos de recolección de datos ....................................................................... 30

3.4.2 Técnicas para el procesamiento de datos y análisis de resultados .............................................. 31

CAPÍTULO IV ...................................................................................................................................... 44

4. ANÁLISIS ......................................................................................................................................... 44

4.1. RESULTADOS .............................................................................................................................. 44

4.2. DISCUSIÓN .................................................................................................................................. 55

CAPÍTULO V ....................................................................................................................................... 57

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES ................................................................................ 57

5.1 CONCLUSIONES .......................................................................................................................... 57

5.2 RECOMENDACIONES ................................................................................................................. 58

5.3. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA ............................................................................................... 59

ANEXOS ................................................................................................................................................. 61

x

ÍNDICE DE TABLAS

Tabla 1. Operacionalización de la Variables. ......................................................................................... 24

Tabla 2. Prueba de normalidad del romero, salvia, salvia-romero al 100% a las 24y 48 horas. ........ 44

Tabla 3. Prueba no paramétricas: Prueba de los rangos con signo de Wilcoxon de normalidad del

romero, salvia, salvia-romero al 100% a las 24y 48 horas. .................................................................... 46

Tabla 4. Prueba no paramétricas: romero 100% 48 horas vs romero 100% 24 horas ........................... 46

Tabla 5. Prueba no paramétricas: romero + salvia 100% 48 horas vs romero+ salvia 100% 24 horas . 48

Tabla 6. Prueba no paramétricas: salvia 100% 48 horas vs salvia 100% 24 horas ............................... 49

xi

ÍNDICE DE GRÁFICOS

Gráfico 1. Prueba de Wilcoxon de los rangos con signo de muestras relacionadas. ................. 47




Gráfico 5. Pruebas no paramétricas: Soluciones a las 24 horas. .............................................. 50

Gráfico 6. Comparación por parejas de soluciones a las 24 horas. ........................................... 51

Gráfico 5. Pruebas no paramétricas: Soluciones a las 48 horas. .............................................. 52

Gráfico 6. Comparación por parejas de soluciones a las 48 horas ........................................... 53

xii

ÍNDICE DE FIGURAS

Figura 1. Rosmarinus officinalis 26

Figura 2 Salvia officinalis 26

Figura 3. . Preparación de los tallos y hojas del Rosmarinus Officinalis 27

Figura 4. Pesaje de la preparación de Rosmarinus officinalis 27

Figura 5. Medición del agua destilada para la posterior obtención del extracto acuoso de Romeo 28

Figura 6. Colocación del agua destilada en los tallos y hojas pesados de Romero y Salvia 28

Figura 7. Materiales ( Portaobjetos, discos de papel filtro estériles, extractos de romero y salvia, agar

sangre de cordero, hisopos

estériles, cajas petri, pipeta, marcador, tubo de ensayo con la cepa de Streptococo mutans ) 31

Figura 8. Cepa de Streptococo mutans 31

Figura 9. Comparación de la cepa con solución en la escala de Mc Farland 32

Figura 10. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5% 32

Figura 11. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5%. 33

Figura 12. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5%. 33

Figura 13. Medición del extracto de romero con la pipeta 34

Figura 14. Colocación del extracto de romero en el tubo de ensayo 34

Figura 15. Colocación del extracto de salvia en el tubo de ensayo 35

Figura 16. Empapar los discos de papel filtro estériles con 20 um de extracto de salvia 35

Figura 17. Cajas petri con agar sangre de cordero al 5% sembradas con Streptococo mutans, listas para

la colocación de los

discos con el extracto de salvia. 36

Figura 18. Colocación de los discos con extracto de salvia en el agar sangre sembradas con 36

Figura 19. Colocación de los discos con extracto de salvia en el agar sangre sembradas con 37

Figura 20. Colocación de discos con salvia terminada. 37

Figura 21. Cajas petri con agar sangre de cordero, con los respectivos extractos de romero y salvia,

listas para ir a la incubadora

3

8

xiii

Figura 22. Incubación de las placas en una estufa a 35°C en condiciones de baja presión de

oxigeno durante 24 horas 38

Figura 23- Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de

romero al 100% 39

Figura 24. Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de romero

al 100% 40

Figura 25. Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia

al 100%. 41

Figura 26. Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia

al 100%. 42

Figura 27. Medición de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia

al 100% 43

xiv

Anexo 5

Tema: “EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE

SALVIA-ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL Streptococcus mutans.

ESTUDIO MICROBIOLÓGICO IN VITRO”

Autora: Gabriela Ximena Marín Vega

Tutor: Dr. Guillermo Alberto Lanas Terán

Fecha: Junio, 2016

RESUMEN

El estudio fue llevado a cabo en el Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la

P.U.C.E, con el objeto de comprobar la eficacia de los extractos acuosos al 100% de Salvia

Officinalis, de Romero, y de Salvia-Romero en la inhibición del crecimiento del Streptococcus

mutans. Es un estudio transversal, comparativo, experimental, in vitro, se lo realizó con una

muestra de 15 cajas Petri con agar sangre de cordero 5%, 5 cajas Petri por extracto. Lo que

dio como resultado 60 muestras, Los resultados indicaron que el Efecto bactericida del

extracto acuoso de Romero al 100% sobre el Streptococcus mutans, no mostró un halo de

inhibición mayor de 6.15 mm a las 24 h y de 6.15mm a las 48 h. Los extractos acuosos de

Salvia con Romero al 100% sobre el Streptococcus mutans, mostraron un halo de inhibición

de 12.60 a las 24 horas y de 15.40 a las 48 horas, mientras que la acción bactericida del

extracto acuoso de Salvia (Salvia Officinalis) al 100%, sobre el Streptococcus mutans, mostró

un halo de inhibición de 12.45mm a las 24 horas y de 15.35mm a las 48 horas.

PALABRAS CLAVES: ROMERO 100%, SALVIA 100%, SPTREPTOCOCO MUTANS.

xv

Anexo 6

ABSTRACT

The study was conducted at the Laboratory of the Faculty of Chemical Sciences PUCE, in

order to verify the effectiveness of the aqueous extracts 100% of Sage officinalis, Rosemary,

and Sage-Rosemary in growth inhibition Streptococcus mutans. It is a transversal,

comparative, experimental study, in vitro, was made with a sample of 15 Petri dishes with

sheep blood agar 5%, 5 Petri dishes per extract. Which resulted in 60 samples, The results

indicated that the bactericidal effect of aqueous extract of rosemary 100% on Streptococcus

mutans, showed a halo of greater inhibition of 6.15 mm at 24 hours and 6.15mm at 48 hours.

Aqueous extracts of Sage-Rosemary 100% on Streptococcus mutans, showed an inhibition of

12.60mm at 24 hours and 15.40mm at 48 hours, while the bactericidal action of the aqueous

extract of Sage (Salvia Officinalis) 100 %, on Streptococcus mutans, showed an inhibition of

12.45mm at 24 hours and at 48 hours 15.35mm.

KEYWORDS: ROSMARINUS OFFICINALIS 100%, 100% SAGE, STREPTOCOCUS

MUTANS.

I CERTIFY that the above and foregoing is a true and correct translation of the original document in

Spanish.

_________________

Gabriela Ximena Marin Vega

ID: 1711855005

1

INTRODUCCIÓN

Las enfermedades de la boca más prevalentes como son la caries dental y la enfermedad

periodontal, son infecciosas y transmisibles, provocadas por múltiples factores, como

microorganismos específicos entre los cuales están el grupo Streptococcus mutans,

lactobacillus acidóphilus, S. sanguis, entre otros. Barrancos (2006). Por esta razón es

importante conocer las características bacteriostáticas o bactericidas de ciertas plantas

medicinales que podrían ayudar a controlar estas infecciones desde el punto de vista de una

Odontología Alternativa.

Dalirsani y otros (2011, citado en San Román, 2013), evaluaron “in vitro” los efectos

antibacterianos de diez extractos de plantas contra Streptococcus mutans. La efectividad

antimicrobiana se comparó con clorhexidina al 0.12 %. Los diámetros de cada disco se

compararon con los de clorhexidina, donde se observó que la inhibición alrededor de los

discos de extracto de romero fue 11.5 mm el que más se aproxima al de la clorhexidina que

fue de 14,6 mm.18.

Según Purca y otros (2013), el Rosmarinus officinalis (Romero) es una planta rica en

principios activos y con acción sobre casi todos los órganos del cuerpo humano. Al tener un

alto contenido en aceites esenciales, cuyos ingredientes activos son flavonoides, ácidos

fenólicos y principios amargos, genera una acción tónica y estimulante sobre el sistema

nervioso, circulatorio y corazón, además de ser colerético, antiespasmódico, diurético.

Según San Román- Moroni (2013), el extracto de Rosmarinus officinalis ha demostrado

actividad antibacteriana contra S. mutans, S. aureus, S. casei y en Streptococcus mitis,

Streptococcus sanguinis, Streptococcus mutans, Estreptococcus sobrinus y Lactobacillus casei.

En base a estos antecedentes, en el presente trabajo se realizó un estudio sobre dos

especies terapéuticas (Salvia officinalis y Rosmarinus officinalis) de uso frecuente en

2

la medicina natural, para ello vamos a aplicar conocimientos procedentes de Microbiología

Oral, Cariología, Botánica y Fitoterapia, con el fin de descubrir si las plantas mencionadas

ejercen una acción bacteriostática sobre el Streptococo mutans, microorganismo principal

causante de la caries dental.

Debido al alto costo de la salud bucal en el Ecuador, según el MSP (2014), nos vemos

obligados a buscar alternativas terapéuticas y preventivas naturales, al alcance de la población

e igualmente eficaces que los medicamentos que se hallan en el mercado nacional.

Por lo tanto el objetivo de nuestro estudio va ser comprobar la eficacia de los extractos

acuosos al 100% de Salvia Officinalis (Salvia), de Rosmarinus Officinalis (Romero) y de

Salvia con Romero en la inhibición del crecimiento del Streptococcus mutans, mediante

métodos de investigación in vitro.

3

CAPITULO I

1.1 Planteamiento del problema

El hombre ha hecho uso de los productos de la naturaleza desde tiempos remotos, no sólo

para satisfacer su hambre, sino también con el fin de sanar sus enfermedades, cicatrizar sus

heridas y elevar su estado de ánimo. Un 90% de los fármacos son de origen vegetal.

Según la literatura, ciertas plantas medicinales tienen propiedades curativas, tanto como

bacteriostáticas ante los microorganismos causantes de la enfermedad periodontal y caries

dental. La Medicina Natural ofrece alternativas de tratamiento para las enfermedades

dentales.

Los altos índices de caries y enfermedad periodontal frente a la falta de recursos

económicos de la sociedad, nos obliga a buscar métodos naturales alternativos de prevención

de estas enfermedades que posiblemente por la ausencia de programas de instrucción de

higiene bucal, son de gran importancia en la actualidad.

Es por estos antecedentes que en el presente trabajo investigativo se comprobará la

eficacia bacteriostática de los extractos de Salvia (Salvia Officinalis), Romero (Rosmarinus

Officinalis) y de Salvia con Romero, frente al Streptococcus mutans.

4

OBJETIVOS

1.3 Objetivos

1.3.1 Objetivo general

Comprobar la eficacia de los extractos acuosos al 100% de Salvia Officinalis (Salvia), de

Rosmarinus Officinalis (Romero) y de Salvia con Romero en la inhibición del crecimiento

del Streptococcus mutans, mediante métodos de investigación in vitro.

1.3.2 Objetivo especifico

Establecer la acción bactericida del extracto acuoso de Salvia (Salvia Officinalis)

al 100%, sobre el Streptococcus mutans.

Determinar el efecto bactericida del extracto acuoso de Romero (Rosmarinus

Officinalis) al 100% sobre el Streptococcus mutans.

Comprobar que la mezcla los extractos acuosos de Salvia y de Romero al 100%

ejerce mejor acción bactericida sobre el Streptococcus mutans.

5

JUSTIFICACIÓN

1.4 Justificación

Según Pizzorno y otros (2013) la medicina natural (integradora, holística,

homeopática o funcional), está influyendo en la medicina convencional y transformándola.

Algunas plantas medicinales tienen propiedades tanto curativas como bacteriostáticas, frente a

los microorganismos causantes de caries dental y enfermedad periodontal.

La placa bacteriana parece ser el factor determinante de la caries y la enfermedad

periodontal, justificando de esta manera, la utilización de medidas alternativas para su control.

1.5 Hipótesis

“La combinación del extracto acuoso de Salvia Officinalis (Salvia) con Rosmarinus

Officinalis (Romero) al 100% potencializa su acción bactericida sobre el Streptococcus

mutans que cuando se utiliza los extractos mencionados de manera individual.”

6

CAPÍTULO II

MARCO TEÓRICO

2. Fitoterapia general

Desde tiempos inmemoriales el hombre ha tratado de mitigar sus dolencias y prolongar su

vida. Este hecho se ha observado desde que existen registros históricos, de civilización en

civilización, hasta nuestros días. Aun así, el hombre en pleno siglo XXI no ha podido evitar la

muerte limitándose a mitigar síntomas de enfermedades y evitar el desarrollo de otras. (

Avello & Cisternas, 2010)

En épocas en que el hombre sólo tenía a su disposición los recursos que el planeta le otorgaba,

buscó en éstos las herramientas para disminuir el dolor físico y evitar la muerte. Entre los

recursos más aprovechados por distintas culturas a través de la historia, se encuentran los

recursos minerales, animales y vegetales. Éstos constituyeron hasta mediados del siglo XX los

recursos terapéuticos por excelencia. ( Avello & Cisternas, 2010)

Dentro de los reinos de la naturaleza que contribuyen hasta hoy en disminuir síntomas y

prevenir enfermedades, destaca el reino vegetal. Las plantas, gracias a su maravilloso y

complejo metabolismo, constituyen un verdadero arsenal químico, del cual sólo se conoce con

éxito un tercio, considerando la variedad de especies existentes a nivel mundial y aquellas

inexploradas hasta hoy, sin considerar aquellas especies ya extintas. ( Avello & Cisternas,

2010)

Fue así como cada región del mundo desarrolló su forma de curar a partir de plantas

medicinales, que es única y característica, puesto que se utilizaban especies endémicas de las

regiones en cuestión. Con el tiempo estas terapias características locales pasaron a conformar

la llamada medicina tradicional y al ser preservada por los pueblos originarios fue llamada

medicina aborigen o autóctona, existiendo estos términos hasta nuestros días, al igual que las

recetas tradicionales o autóctonas que agrupan tanto usos, formas de preparación,

administración, dosis, entre otros parámetros farmacológicos modernos. (Bodeker &

Kronenberg , 2002)

7

Para celso, el padre de la Farmacología Química, médico y químico suizo en pleno

Renacimiento, fue el primero en señalar que las propiedades medicinales de las plantas radican

en sus principios activos aislables por técnicas alquímicas. Esta observación constituye la base

de la Farmacología Moderna. (Montes & Wilkomisrky , 1996)

Luego y gracias al desarrollo de la síntesis química hombres de ciencia lograron “copiar”

núcleos básicos de moléculas exitosas desde la naturaleza para mejorarlas haciéndolas más

selectivas y seguras. (Montes & Wilkomisrky , 1996)

Es así como nuestra realidad terapéutica hoy en día, está regida por la química sintética, pero

lo que pocos saben es que estas exitosas moléculas que curan no son sino copias mejoradas de

sustancias químicas que la naturaleza en forma espontánea creó. (Montes & Wilkomisrky ,

1996)

Hoy día y desde hace aproximadamente dos décadas se ha observado un especial interés por el

empleo de plantas medicinales en los países desarrollados del mundo occidental. Por ejemplo,

en los últimos años, la prevención del cáncer y enfermedades cardiovasculares se ha asociado

con la ingestión de frutas frescas, vegetales o infusiones ricas en antioxidantes naturales.

Existe una gran cantidad de estudios que sugieren que una mayor ingesta de dichos

compuestos se asocia con un menor riesgo de mortalidad por estas enfermedades que incluyen

además, la hipertensión arterial, la aterosclerosis y la diabetes mellitus. Estas patologías son

las principales causas de muerte en los países industrializados. (Argolo, Pletsch , , & Coelho)

2.1 Concepto

La fitoterapia es un neologismo empleado por Henri Leclerc, médico francés (1870-1955), en

los comienzos de siglo, desde entonces la palabra fitoterapia es utilizada para designar la

utilización de las plantas medicinales con fines terapéuticos, que serviría más tarde para

diferenciarla de la forma de curar actual; la medicina sintética o convencional. En 1980 ya

contaba con una definición más acabada: “terapia complementaria que utiliza plantas o partes

de ellas donde el empirismo de la medicina tradicional se transforma en fundamento

científico”, en otras palabras a la medicina tradicional o autóctona se la pone a prueba en

laboratorios siguiendo el método científico para validar o descartar el uso popular. De esta

8

forma organizaciones e instituciones mundiales se han ocupado de este aspecto y divulgan sus

resultados para asegurar el correcto uso, eficacia y seguridad de los recursos medicinales

vegetales. Aunque es reconocida por la Organización Mundial de la Salud (OMS), el problema

de cómo armonizar la fitoterapia con la llamada medicina convencional no ha sido resuelta del

todo (Salud, 2014).

La OMS reconoce la importancia de las plantas medicinales en el tratamiento y prevención de

múltiples enfermedades, como también la relevancia a nivel económico al ser una fuente de

descubrimiento de nuevas drogas que en algunos casos tiene un costo muy inferior a la síntesis

de nuevos fármacos. El regreso del interés científico sobre las plantas medicinales,

investigando su riqueza y variabilidad química, ha impulsado una revalorización de su empleo

en muchas partes del mundo, representando una forma complementaria de curar, en que el

empirismo de la terapia queda atrás en función de la evidencia científica, armonizando la

medicina tradicional con las terapias oficiales de cada país. (Bodeker & Kronenberg , 2002)

(Montes & Wilkomisrky , 1996)

2.1.1 Características de la fitoterapia

A diferencia de la medicina sintética o convencional, la fitoterapia utiliza matrices vegetales

complejas. Estas matrices las constituyen plantas enteras, partes de ellas (hojas, raíces, etc), y

también productos de éstas, resultados de tratamientos directos con algún disolvente o medio

que concentre los compuestos afines y facilite su administración, son los llamados extractos.

En cualquier caso en esta matriz compleja nos encontramos con un sin número de compuestos

de diferente naturaleza química, a esta mezcla se la llama fitocomplejo. (Hoffmann, 1992)

El fitocomplejo es la mezcla de sustancias activas y otras acompañantes que actúan en

conjunto para lograr un mismo fin terapéutico, que no sería el mismo si se administraran por

separado, o sea como monosustancias. (Muñoz, , Montes, , & Wilkomirsky, 1999)

Estas sustancias activas son llamadas técnicamente metabolitos secundarios y se refieren a las

sustancias que son el producto secundario de la fotosíntesis y que intervienen en procesos

9

vegetales como la defensa frente a patógenos, y protección a los rayos UV, entre otros.

(Vivanco, Cosio, Loyola-Vargas, & Flores , 2005)

La mezcla de metabolitos secundarios son únicos para cada especie, puesto que su biosíntesis

se rige principalmente por la genética vegetal, pero también influyen la fisiología, el estrés, la

procedencia geográfica y condiciones de recolección del vegetal, entre otros factores. (Trease

& Evans , 2006)

Los metabolitos secundarios corresponden a compuestos que dependiendo de la orden

genética pueden ser biosintetizados siguiendo diversas rutas metabólicas, así podemos

encontrar compuestos de la familia fenólica como los favonoides; terpénica como las

saponinas y aceites esenciales; alcaloidea (alcaloides varios como la cafeína); esteroidea como

los cardiotónicos y fitohormonas, y polímeros heterogéneos como las gomas y mucílagos.

(Bruneton , 2000)

A menudo se confunde la fitoterapia y el concepto de fitocomplejo con los fitofármacos que

por definición ya forman parte de la terapia convencional. Algunos metabolitos secundarios

por su alta actividad no necesitan de la acción sinérgica de los componentes del fitocomplejo

para ejercer una acción biológica potente y tienen un estrecho margen terapéutico, como los

alcaloides y cardiotónicos. En este caso se prefiere aislarlos, purificarlos y elaborar productos

destinados a tratar enfermedades crónicas y delicadas como la insuficiencia cardíaca y dolor

asociado a enfermedades terminales, con el fin de manejar exactamente su dosis y de esta

forma evitar intoxicaciones que son inherentes a la alta actividad de este tipo de compuestos,

son los fitofármacos. Por el contrario, compuestos de mediana o baja actividad también tienen

escasas posibilidades de ejercer toxicidad. En este grupo se encuentran los compuestos

fenólicos, polímeros heterogéneos y terpenos en general. Este es el terreno de la fitoterapia y

del fitocomplejo que, en su forma natural (planta medicinal) o procesada (extractos y

productos que los contengan), van a conformar lo que se denomina fitomedicamento. (WHO,

1991)

10

2.2. SALVIA (Salvia officinalis)

2.2.1 Nombre científico y taxonomía

Su nombre científico es Salvia officinalis y pertenece a la familia Labiadas.

2.2.2 Nombre vulgar

Su principal nombre vulgar es Salvia aunque también tiene otros nombres menos

frecuentemente usados como son Salima fina, Hierba sagrada, Salvia común, Salvia de

Castilla, Salvia de Granada, Salvia del Moncayo, Salvia fina, Salvia oficinal y Salvia real.

(González, 2009)

2.2.3 Órgano oficinal

El órgano oficinal, donde se encuentran sus componentes con finalidad terapéutica, es la hoja

desecada. (González, 2009)

2.2.4 Características de la planta

En cuanto a la morfología de la especia podemos decir que es una mata o arbustillo espeso,

vivaz, rústico de 30-90 cm de altura, y hasta 150, de tallo leñoso en la base, erecto, muy

ramificado (vuelo o anchura, unos 60 cm), hojas opuestas, lanceolado-elípticas, vellosas, las

inferiores pecioladas, las superiores sésiles, de color verde grisáceo por el haz y blanquecinas

por el envés, rugosas, con muchas nervaduras, especialmente notables en el envés, con bordes

finamente dentados. ( Cañigueral, 1998)

Sus flores son de color violeta o azul, a veces blancas o rosadas, bastante grandes, dispuestas

en verticilos que constituyen espigas terminales de 3-6 flores; sólo aparecen en los brotes de 2

11

años, su fruto está en tetraquenio, y su raíz es fusiforme, robusta y fibrosa. Es planta aromática

y melífera, muy escasa en estado silvestre y las plantas viejas forman matas muy densas.

( Cañigueral, 1998)

2.2.5 Ecología

La Salvia crece en pastos, céspedes, peñascos, acantilados, declives secos pedregales,

murallas, landas, monte bajo, llanuras, áridas laderas, collados de las montañas bien soleados,

ribazos entre panes, vecindad de casas de labor, montañas calizas de cierta elevación con

orientación Este y llanos abandonados.

Su clima óptimo es templado y templado-cálido, sin variaciones bruscas de temperatura. Pleno

sol, semi-sombra o sombra con exposición a mediodía. No tolera los terrenos empapados ni el

exceso de agua. Le perjudican inviernos muy rigurosos aunque es relativamente resistente a

las heladas (tolera hasta -5 grados centígrados). Además es una planta termófila y xerófila que

resiste bien a la sequía, pero se puede malograr el cultivo si aquella es prolongada. (Fernandez,

1996)

2.2.6 Uso tradicional

Antidiabética Tónico estimulante, aperitivo estomacal, astringente, antiséptico, reduce los

niveles de azúcar en la sangre. (Jiménez & Graniello, 2005, pág. 106)

.

2.2.7 Descripción

Hojas largamente pecioladas de 3-10 cm de longitud y hasta 3 cm de anchura, ovales,

oblongo-ovales o lanceoladas, densamente pelosas en ambas caras, con borde finalmente

festoneado, nerviación reticular bastante hundida por la cara superior y muy sobresaliente por

el envés. La base del limbo es simple o doblemente auriculada. La droga cortada para tisana

está constituida por pequeños fragmentos de hojas, frecuentemente aglomeradas entre sí al

entrelazarse los pelos, con una fina vellosidad en ambas caras y nerviación reticulada potente

12

en el envés. Presenta un olor especiado-aromático y un sabor amargo y astringente. (Jiménez

& Graniello, 2005, pág. 106)

2.2.8 Composición Química

La composición química del órgano oficial de la Salvia es la siguiente:

– Aceite esencial (1- 2.5 %). Los aceites esenciales principalmente se caracterizan por ser

líquidos oleosos de aroma agradable e intenso, por ser volátiles y extraíbles por arrastre de

vapor de agua, por ser insolubles en agua y por presentar un índice de refracción elevado. En

cuanto al contenido de dichos aceites en la hoja de salvia, no menos del 1.5 % según DAB

1996, ÖAB y Ph Helv. VII) compuesto por un 35-60% de tuyona (“alfa” y “beta” tuyona, en

proporciones variables según el origen geográfico y la época de recolección), un 20 % o más

de otros monoterpenos (sobre todo 1.8- cineol y alcanfor) y pequeñas cantidades de

sesquiterpenos (humuleno, cariofileno, viridifloral). (González, 2009)

– Taninos (3-7 %): Los taninos son sustancias de origen vegetal, no nitrogenadas, de

estructura polifenólica, solubles en agua, de sabor astringente y con propiedades curtientes, en

el caso de la Savia, los taninos son la luteolina, la apigenina, y la hispidulina. (González,

2009)

– otros componentes son: b – D- glucósidos de tuyol, mentol y timol, sustancias amargas de

tipo diterpenicos. (González, 2009)

2.2.9 Acción farmacológica

La hoja de Salvia posee acción antibacteriana y antifúngica, debida principalmente al aceite

esencial y acción antiviral a causa de los compuestos diterpénicos. Sus preparados tienen

acción antiinflamatoria a la cual contribuye el ácido rosmarínico. También posee acción

astringente, estimulante de las secreciones y antiperspirante (impide la transpiración o

13

vaporización que se efectúa constantemente a través de la piel). Esta última actividad ha sido

demostrada experimentalmente en animales y en estudios clínicos. (Vid & Velázquez, 2005)

2.2.10 Actividad antimicrobiana

El carnosol, compuesto diterpenoide que se encuentra en el extracto de salvia, redujo la

concentración mínima inhibitoria de aminoglucósidos en enterococo vancomicin-resistente, tb

se demostró una débil actividad antibacteriana directa, que actúa sinérgico con la gentamicina.

En este mismo sentido, el ácido oleanóico también demostró un efecto antibacteriano frente al

enterococo vancomicín-resistente. Esta misma propiedad fue determinada para el ácido

ursólico. Estas dos últimas sustancias mostraron también actividad antibacteriana frente al

Streptococcus pneumoniae y Staphylococcus aureus meticilin-resistente. Horiuchi y otros

(2007)

Aunque los resultados de diversos estudios, como los referidos, no se traducen en una

aplicación clínica inmediata, ha sido posible identificar otras propiedades antibacterianas frete

a Klebsiella, Enterobacter, Escherichia coli, Salmonella typhi, S.enteritidis, Shigella sonei,

Proteus mirabilis y Morganella morganii.

2.2.11 Indicaciones

Según ESCOP y la comisión E del Ministerio de Sanidad alemán, los preparados de hoja de

Salvia se emplean principalmente por vía externa en inflamaciones e infecciones de las

mucosas bucofaríngeas (gingivitis, estomatitis, faringitis). (Rdf, 2005)

Principalmente en estos casos se utilizan gargarismos como forma de tratamiento, y por vía

interna en el tratamiento de trastornos dispépticos, flatulencias, inflamaciones de las mucosas

intestinales y diarreas, utilizándose en dichas circunstancias infusión administrada por vía oral.

Se emplea como anhidrótico, en la sudoración nocturna excesiva de los pacientes tuberculosos

y también contra la hipersudoración de naturaleza psicosomática. (Rdf, 2005)

14

Dicha acción anhidrótica ha sido demostrada experimentalmente en animales y en estudios

clínicos (bloqueando rápidamente la sudoración inducida por pilocarpina). Además, al actuar

inhibiendo la sudoración, puede resultar útil para combatir el mal olor corporal. Otra de sus

aplicaciones o empleos es como emenagogo, rebajando ligeramente los dolores de la

menstruación y facilitando el vaciado, evitando así de esta forma los problemas colaterales que

origina como dolores de cabeza, estomago, retención de líquidos e irritabilidad general. (Rdf,

2005)

Otros empleos menos frecuentes son como hipoglucemiante, relajante muscular (en dolores

producidos por estiramientos o esfuerzos demasiado grandes sin preparación previa, también

resulta muy útil para combatir el insomnio, ya que, cuando nos relajamos podemos conciliar

mejor el sueño), medidas medicinales para aumentar la fertilidad (dicha especie por su riqueza

en zinc influye en la producción de testosterona) y para combatir el Alzheimer (la Salvia

ayuda a la conservación de la acetilcolina, uno de los principales neurotransmisores, por lo que

las infusiones de esta planta podrían ayudar al mejor funcionamiento de la mente en los

enfermos de Alzheimer. (Botanical-online)

En medicina popular, la hoja de Salvia se utiliza también para facilitar el destete, debido a su

acción inhibidora de la secreción láctea. Sin embargo, en los países mediterráneos, la hoja de

Salvia se emplea fundamentalmente como vulnerario11, curando las llagas y heridas.

(Botanical-online)

2.2.12 Efectos secundarios

Los efectos secundarios pueden aparecer en caso de sobredosis (más de 15 g de hoja de Salvia

por dosis) o de uso prolongado. La tuyona, componente tóxico del aceite esencial, produce

síntomas como taquicardia, sensación de calor, calambres y sensación de vértigo y

convulsiones de tipo epiléptico. (Espiritugaia)

15

2.2.13 Contraindicaciones

El aceite esencial puro y los extractos alcohólicos no deberían utilizarse durante embarazo y la

lactancia debido a la presencia de tuyona, lógicamente debido a que una de las acciones

principales de la Salvia es la inhibición de la secreción láctica. (Espiritugaia)

2.3 ROMERO (Rosmarinus officinalis)

2.3.1 Taxonomía

Nombre científico: Rosmarinus officinalis.

Reino: PLANTAE

División: MAGNOLIOPHYTA

Clase: MAGNOLIOPSIDA

Orden: LAMIALES

Familia: LAMIACEAE

Género: Rosmarinus

Especie: Rosmarinus officinalis

2.3.2 Descripción botánica

El romero es un arbusto aromático, leñoso, de hojas perennes, muy ramificado y

ocasionalmente achaparrado y que puede llegar a medir 2 metros de altura. Los tallos jóvenes

están cubiertos de borra que desaparece al crecer- y tallos añosos de color rojizo y con la

corteza resquebrajada. (Labiatae, 2015)

Las hojas, pequeñas y muy abundantes, presentan forma lineal. Son opuestas, sésiles, enteras,

con los bordes hacia abajo y de un color verde oscuro, mientras que por el envés presentan un

color blanquecino y están cubiertas de vellosidad. En la zona de unión de la hoja con el tallo

nacen los ramilletes floríferos. (Labiatae, 2015)

https://es.wikipedia.org/wiki/Arbusto

https://es.wikipedia.org/wiki/Planta_perenne

https://es.wikipedia.org/wiki/Hoja

16

Las flores son de unos 5 mm de largo. Tienen la corola bilabiada de una sola pieza. El color es

azul violeta pálido, rosa o blanco, con cáliz verde o algo rojizo, también bilabiado y

acampanado. Son flores axilares, muy aromáticas y melíferas; se localizan en la cima de las

ramas, tienen dos estambres encorvados soldados a la corola y con un pequeño diente.

(Labiatae, 2015)

El fruto, encerrado en el fondo del cáliz, está formado por cuatro núculas de 1,5-3 por 1-2 mm,

ovoides, aplanadas, color castaño claro con una mancha clara en la zona de inserción.

(Labiatae, 2015)

2.3.3 Propiedades Medicinales

Estimulante general, tónico cardíaco, antiséptico pulmonar, antirreumático, cicatrizante,

diurético y sudorífico. (Jiménez & Graniello, 2005)

2.3.4 Aplicaciones terapéuticas y farmacológicas

Del romero se utilizan sobre todo las hojas y a veces, las flores. Es una planta rica en

principios activos. ( Barbut , Josephson , & Maurer, 1985)

(Inatani, Nakatani, & Fuwa , 1983)

(

Nakatani, 2000)

Con el aceite esencial que se extrae directamente de las hojas, se prepara alcohol de

romero, que se utiliza para prevenir las úlceras. También se emplea para tratar dolores

reumáticos y lumbalgias.

También en forma de té. El sabor no es muy agradable al paladar por ser una hierba

amarga.

Se utiliza en fricciones como estimulante del cuero cabelludo (alopecia).

La infusión de hojas de romero alivia la tos y es buena para el hígado y para atajar los

espasmos intestinales. Debe tomarse antes o después de las comidas.

El humo de romero sirve como tratamiento para el asma.

El alcanfor de romero tiene efecto hipertensor (sube la tensión) y tonifica la circulación

sanguínea.

Por sus propiedades antisépticas, se puede aplicar por decocción sobre llagas y heridas

como cicatrizante.

https://es.wikipedia.org/wiki/Flor

https://es.wikipedia.org/wiki/Corola

https://es.wikipedia.org/wiki/C%C3%A1liz

https://es.wikipedia.org/wiki/Estambre

https://es.wikipedia.org/wiki/Fruto

https://es.wikipedia.org/wiki/N%C3%BAcula

17

También posee una ligera cualidad. (Font Quer, 1980)

Además es una excelente planta de interior debido al agradable aroma que desprende.

El romero como remedio casero: el té, el vino, el baño y el alcohol se utilizan para trastornos

de órganos nobles como el riñón, el corazón, los intestinos etc., reuma, lesiones musculares, el

estrés y la ansiedad.

2.3.5 Composición química

La Composición química (1,5- 2,5%); pineno, canfeno, borneol, alcanfor, limoneno. Ácidos

fenólicos: caféico, clorogénico, rosmarinico. Flavonoides derivados del luteolol, y Principios

amargos diterpénicos: carnosol (picrosalvina) rosmanol, rosmadial. Ácidos triterpénicos:

ursólico; alcoholes triterpénicos (alfa y beta-amirina, betulósico), vitamina C. (Espiritugaia)

2.3.6 Indicaciones

Cura desde el reumatismo hasta la caída del cabello. La infusión es recetada para curar la

influenza, los resfriados, la fiebre provocada por los cambios bruscos en la temperatura y las

depresiones prolongadas. La tintura reduce cálculos renales y cálculos en la vesícula,

También cura la debilidad y la anemia. El enjuague diario con agua de romero promueve el

crecimiento del cabello. (Jiménez & Graniello, 2005)

2.3.7 Contraindicaciones

Evitar durante el embarazo. En grandes dosis es tóxico. (Espiritugaia)

Si lo usamos a menudo, aumenta la presión sanguínea, por lo que no es aconsejable

para personas hipertensa (Espiritugaia)

En casos de epilepsia (Espiritugaia)

No es aconsejable tomarlo en la noche, pues sus propiedades estimulantes pueden

dificultar el sueño. (Espiritugaia)

18

2.4 COCCI GRAM POSITIVOS

2.4.1 Streptococci

Los streptococci han sido aislados de todos los sitios en la boca y abarcan una gran proporción

de la microflora oral cultivable residente. La mayoría es alfa-hemolítico (hemolisis parcial) en

agar sangre y las investigaciones previas los agruparon juntos, llamándolos streptococci

viridans. Sin embargo, la hemolisis no es una propiedad confiable en la distinción de estos

streptococci, y muchas especies orales contienen cepas que muestran tres tipos de hemolisis

(alfa, beta y gamma). Estos streprococci del grupo del «viridans» actualmente se concentran

en cuatro grupos. (Philip & Michael, pág. 30)

2.4.2 Grupo mutans (estreptococci mutans)

Hay gran interés en los streptococci mutans debido a su papel en la etiología de la caries

dental. El S. mutans fue aislado originalmente de los dientes humanos cariados por Clarke en

1924 y, poco tiempo después, fue recuperado de un caso de endocarditis infecciosa

(crecimiento de bacterias en las válvulas de corazón dañadas). Poca atención fue prestada a

esta especie hasta los años 60, cuando fue demostrado que la caries podría ser

experimentalmente inducida y transmitida en animales infectados artificialmente con cepas

que se asemejaban al S. mutans. (Philip & Michael, pág. 30)

El nombre de esta especie deriva del hecho de que las células pueden perder su morfología

coccal y aparecer a menudo como bastones cortos como cocobacilos. Se han reconocido nueve

serotipos (a-h, y k), basados en la especificidad serológica de los antígenos del carbohidrato

situados en la pared celular, aunque algunos serotipos se encuentren solamente en animales. El

trabajo subsecuente mostró que suficientes diferencias existieron entre los grupos de estos

serotipos para merecer su subdivisión en siete especies distintas; estas especies se describen

colectivamente como streptococci mutans. (Philip & Michael, págs. 30 , 31)

19

Los streptococci mutans se recuperan casi exclusivamente de superficies duras, y superficies

no diseminadoras en la boca, como dientes o prótesis, y pueden actuar como patógenos

oportunistas, siendo aislados de casos de endocarditis contagiosa (biofilms que crecen en las

válvulas dañadas del corazón). Los streptococci mutans son regularmente aislados de la placa

dental en los sitios cariados, pero su prevalencia es baja en esmalte sano. El epíteto específico,

S. mutans, ahora se limita a los aislados en humanos que pertenecen previamente a lo serotipos

c, e, f y k. Ésta es la especie más comúnmente aislada de streptococci mutans, y

epidemiológicamente los estudios han implicado el S. mutans como el patógeno primario en la

etiología de la caries de esmalte en los niños y los adultos jóvenes, caries radicular en el

anciano y en la caries de la enfermera (o biberón) en los niños. (Philip & Michael, pág. 31)

La siguiente especie más comúnmente aislada del grupo de los streptococci mutans es el S.

sobrinus (serotipos d y g), que también ha sido asociado a la caries dental humana. Menos se

sabe sobre papel del S. sobrinus en la enfermedad porque algunos estudios no intentan

distinguir entre estas especie, mientras que algunos medios selectivos comúnmente usados

para el aislamiento de los streptococci mutans contienen la bacitracina que puede ser

inhibitoria a crecimiento del S. sobrinus y del S. criceli (antes S. cricerus) (serotipo a). El S.

cricetí es recolectado sólo raramente de seres humanos. a1gunas personas abrigan más de una

especie de streptococci mutans en su boca. . (Philip & Michael, pág. 31)

La estructura antigénica de los streptococci mutans ha sido estudiada en detalle para establecer

los esquemas serológicos y durante el desarrollo de una vacuna anticipada de la caries. Los

streptococci mutans poseen pared celular, antígenos del carbohidrato, ácido lipoteicoico, las

lipoproteínas y la pared celular o las proteínas asociadas a la pared de la célula. El antígeno

I/II (también llamado antígeno B, SpaP o Pac) ha generado considerable interés debido a Su

inclusión en una posible vacuna de la subunidad; una proteína similar es designada SpaA en el

S. sobrinus. El antígeno I/II puede ser involucrado en la adherencia inicial del S. mutans a la

superficie del diente por interacción con los componentes de la película salival. . (Philip &

Michael, págs. 31,32)

20

Los streptococci mutans producen los polisacáridos extracelulares solubles y polisacáridos

insolubles extracelulares (glucano, mutan y fructano) de la sucrosa que son asociados a la

maduración de la placa y cariogenicidad. Los glucanos y los fructanos son producidos por la

glucosil y fructosiltransferasas, respectivamente. El mutan es un glucano muy insoluble que es

producido solamente por los streptococci mutans, mientras que el fructano es inusual que

tenga una estructura parecida a la inulina. Estos polímeros contribuyen a la morfología

colonial característica de los streptococci mutans al crecer en las placas que contienen agar

sucrosa. . (Philip & Michael, pág. 32)

Los streptococci mutans pueden también sintetizar los polisacáridos intracelulares cuando hay

exceso de azúcar, y éstos pueden actuar como reservas del carbohidrato, y se convierten en

ácido durante los períodos en que los carbohidratos dietéticos no están disponibles. Los

streptococci mutans pueden también sintetizar los azúcares dietéticos muy eficientemente, y

los convierten rápidamente en los productos ácidos de la fermentación (principalmente

lactato); perceptiblemente, pueden también crecer y sobrevivir bajo condiciones ácidas

generadas por ellos por la inducción de respuestas moleculares específicas al stress. (Philip &

Michael, pág. 32)

Los streptococti mutans pueden comunicarse con otros streptococci mutans por la liberación

de las moléculas de señalización difusibles que pueden inducir la capacidad genética (una

capacidad de tomar el ONA extracelular) y la tolerancia ácida en las células vecinas. (Philip &

Michael, pág. 32)

21

CAPÍTULO III

3. Metodología

3.1 Tipo y diseño de la investigación o diseño del estudio

Transversal: El presente estudio se realizó durante un periodo de tiempo determinado:

Julio 2015-Marzo 2016

Comparativo: Se evaluó la diferencia significativa entre los extractos de Salvia y

Romero utilizados para el control de S. mutans.

Experimental: Las variables fueron sometidas a una manipulación en condiciones

controladas.

In vitro: Debido a que la técnica para el experimento se realizó en un ambiente

controlado fuera de un organismo vivo.

CALCULO DE LA MUESTRA

n = 2 1,960 1,645 0,5625

0,72

n = 14,621

n = 20,2

en cada

grupo

0,72

n = tamaño de la muestra

22

Z: VALORES CORRESPONDIENTES AL RIESGO DESEADO

S2 : VARIANZA DE LA VARIABLE CUANTITATIVA (GRUPO DE CONTROL

OBSERVADO)

•La variabilidad (desviación típica) presente en cada grupo, o al menos una estimación de ella.

Para ello nos ayudaremos de publicaciones anteriores, o de muestras piloto.

s = 0,75 MILIMETROS

d: VALOR MINIMO DE LA DIFERENCIA QUE SE DESEA DETECTAR (DATOS

CUANTITATIVOS)

d = 0,85 MILIMETROS

•La diferencia (mínima) que creemos que existe entre ambos grupos, y que nos gustaría

ser capaces de detectar con nuestro estudio.

Z

test unilateral

test bilateral

0,200 0,842 1,282 0,150 1,036 1,440 0,100 1,282 1,645 0,050 1,645 1,960 dos colas

0,025 1,960 2,240 0,010 2,326 2,576

La potencia de una prueba estadística o el poder estadístico es la probabilidad de

que la hipótesis nula sea rechazada cuando la hipótesis alternativa es verdadera

(es decir, la probabilidad de no cometer un error del tipo II

23

Potencia

Z 0,010 0,990 2,326

0,050 0,950 1,645 potencia 5%

0,100 0,900 1,282 0,150 0,850 1,036 0,200 0,800 0,842 0,250 0,750 0,674 0,300 0,700 0,524 0,350 0,650 0,385 0,400 0,600 0,253 0,450 0,550 0,126 0,500 0,500 0,000

3.2 Población y muestra

El efecto bactericida de los extractos en estudio, se evaluó a partir de una unidad de sedimento

liofilizado de Streptococcus mutans con referencia ATCC 25175, en 15 unidades

experimentales (cajas Petri con Agar Sangre 5% sangre humana) donadas por el Dr. Ricardo

Álvarez, Rector del Instituto Superior “Libertad”, de las cuales se dividieron 5 para cada

extracto. Obteniendo así 20 muestras por extracto acuoso de Romero, 20 muestras por

extracto acuoso de Salvia y 20 muestras por extracto acuoso de Salvia-Romero. Lo que dio

como resultado 60 muestras para la elaboración de nuestro estudio.

3.2.1 Criterios de inclusión

Cepas puras de Streptococcus mutans

Extracto acuoso de Salvia officinalis al 100%

Extracto acuoso de Rosmarinus officinalis al 100%

Extracto acuoso de Salvia-Romero al 100%

3.2.2 Criterios de exclusión

Cepas de Streptococcus que no pertenezcan al grupo viridans. Z

24

Extractos de Romero y Salvia que no correspondan al 100%

Extracto Etanólico

Extracto oleoso

Tinturas

Decocciones

3.3 Operacionalización de las variables

Tabla 1. Operacionalización de la Variables.

VARIABLES

CONCEPTUALIZACIÓN

INDICADORES

ESCALA

CATEGORÍA

Independientes:

Extracto acuoso de

Romero

(Rosmarinus

officinalis), de

Salvia (Salvia

officinalis) y de

Salvia-Romero.

Soluciones concentradas al

100%

A las 24 Horas

A las 48 Horas

Cualitativa

nominal

mm

Dependientes:

Streptococcus

mutans

Capacidad inhibitoria del

crecimiento de

Streptococcus mutans por

acción de las sustancias en

estudio, mediante cultivos in

vitro.

Diámetro del halo

de inhibición

Cuantitativa

razón

mm

25

3.4 Materiales y métodos

3.4.1 Materiales para la obtención de los extractos.

Hojas, flores y talluelos de romero y salvia

Balanza

Vaso de precipitado

Agua destilada

Licuadora Oster

Papel filtro N.- 1

Refrigeradora

3.4.1.1 Método para la obtención de los extractos acuosos de Salvia y Romero

Para preparar los extractos acuosos, se tomaron 50 g de hojas verdes, flores y talluelos

descontaminados de las plantas mencionadas, se cortaron en trozos de 0,5 cm y se depositaron

en un vaso de precipitado, luego se mezclarán con 200 ml de agua destilada y se dejaron

remojar por 24 h. Al transcurrir el lapso, se trituraron en una licuadora de casa, durante 30 seg

y la solución se filtró dos veces a través de papel de filtro Nº 1. La solución obtenida se

consideró como estándar (100%).

El proceso comprende las etapas de:

a) Descontaminación de la planta

b) Trituración de la planta

c) Tratamiento de la planta triturada con una radiación.

d) Suspensión de la mezcla obtenida en la etapa en agua destilada

e) Maceración de la suspensión obtenida en la etapa d).

f) Filtración y separación del líquido resultante.

26

Figura 1. Rosmarinus Officinalis

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega.

Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador.

Figura 2 Salvia Officinalis



27

Figura 3. Preparación de los tallos del Rosmarinus Officinalis


Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador

Figura 4. Pesaje de la preparación de Rosmarinus officinalis



28

Figura 5. Medición del agua destilada para la posterior obtención del extracto acuoso de Romeo Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega.


Figura 6. Colocación del agua destilada en los tallos y hojas pesados de Romero y Salvia

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega..


29

3.4.2 Materiales y equipos para la preparación del experimento in vitro

Materiales

Medios de cultivo enriquecidos con Agar Sangre de cordero 5%

Discos de papel filtro estériles

Cepa de Streptococcus mutans con referencia ATCC 25175,

Extracto acuoso de Salvia y Romero

Placas Petri

Pipetas

Mechero

Estufa (incubadora)

Guantes

Probetas

Refrigeradora

Hisopos

3.4.2.1 Método para la elaboración del experimento in vitro

Para la activación de la Cepa de Streptococcus mutans con referencia ATCC 25175,

que fue adquirida de manera comercial, en estado liofilizado, se colocó 1 ml de caldo

nutritivo, TSB (Tryptip Soy Broth). La suspensión fue pipeteada en 4mL de caldo TSB para

luego ser inoculada en cajas de agar sangre de cordero 5%, se realizó un hisopado, con la

técnica de agotamiento por estrías, además de la técnica de sembrado por extensión con ayuda

de un asa bacteriológica para poder aislar las colonias. Las condiciones de incubación fueron

temperatura de 35°C y atmósfera de 5% de CO2 durante 24 y 48 horas.

Cuando se observó el crecimiento en colonias puras, el microorganismo se diluyó hasta

que su turbidez fue comparada visualmente con una suspensión preparada previamente de

sulfato de bario que corresponde al estándar 0.5 de la escala de McFarland.

30

Se inoculó la solución con hisopos estériles en cajas de agar sangre humana al 5%,

siguiendo la técnica de inoculación del hisopado en superficie completa, para que exista un

crecimiento uniforme del microorganismo y se pueda establecer el efecto de las sustancias

bactericidas. Se colocaron cuatro discos de papel filtro estériles de ¼ de pulgada en cada caja

Petri, cada uno de ellos impregnados con 20 µl (microlitros) de extracto acuoso de romero al

100%, así como de extracto acuoso de Salvia al 100%, y por último de la combinación de

ambos extractos al 100%.

Luego se incubaron las placas en una estufa a 35°C en condiciones de baja presión de

oxigeno durante 24 horas, después de las cuales se anotaron los resultados, luego de las 48

horas siguientes, se sucedió a tomar nota de los resultados obtenidos de las 60 muestras.

3.4.3 Técnicas e instrumentos de recolección de datos

Se midió el diámetro de los halos de inhibición en cada caja petri con un calibrador

debidamente milimetrado en la base de la placa, a las 24 horas y posteriormente a las 48 horas,

se registraron los datos en una ficha de recolección de Excel. Anexo 1

Según Malbrán (2001), Las categorías de interpretación son:

Susceptible: cuando presenta una gran área de inhibición

Intermedio: si presenta un halo de inhibición más reducido

Resistente: si no presenta halo de inhibición

31

Figura 7. Materiales ( Portaobjetos, discos de papel filtro estériles, extractos de romero y salvia, agar sangre de cordero, hisopos

estériles, cajas petri, pipeta, marcador, tubo de ensayo con la cepa de Streptococo mutans ) Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega.


Figura 8. Cepa de Streptococo mutans

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega. Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del

Ecuador.

32

Figura9. Comparación de la cepa con solución en la escala de Mc Farland



Figura 10. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5%



33

Figura11.. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5%.



Figura 12. Siembra del Streptococo mutans en agar sangre de cordero al 5%.

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega..


34

Figura13. Medición del extracto de romero con la pipeta



Figura 14. Colocación del extracto de romero en el tubo de ensayo



35

Figura 15. Colocación del extracto de salvia en el tubo de ensayo



Figura 16. Empapar los discos de papel filtro estériles con 20 um de extracto de salvia



36

Figura 17. Cajas petri con agar sangre de cordero al 5% sembradas con Streptococo mutans, listas para la colocación de los

discos con el extracto de salvia.



Figura 18. Colocación de los discos con extracto de salvia en el agar sangre sembradas con

Streptococo mutans.



37

Figura 19. Colocación de los discos con extracto de salvia en el agar sangre sembradas con

Streptococo mutans.



Figura 20. Colocación de discos con salvia terminada.



38

Figura 21. Cajas petri con agar sangre de cordero, con los respectivos extractos de romero y salvia,

listas para ir a la incubadora



Figura 22. Incubación de las placas en una estufa a 35°C en condiciones de baja presión de

oxigeno durante 24 horas



39

Figura 23- Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de romero al 100%



40

Figura24. Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de romero al 100%



41

Figura 25- Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia al 100%.



42

Figura 26. Resultados de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia al 100%.



43

Figura 27. Medición de los halos de inhibición en las cajas Petri donde se utilizó el extracto de salvia al 100%



44

3.4.2 Técnicas para el procesamiento de datos y análisis de resultados

Se utilizó la prueba de de Kolmogorov - Smirnov o con la prueba de Shapiro - Wilk (menor a 20

datos) para el experimento. Los datos fueron procesados en un laptop, utilizando Microsoft Excel

2010 y el programa estadístico SPSS 2.1.

3.4 Aspectos éticos

Por la manera de obtención de la muestra biológica y al ser un estudio in vitro, el

presente proyecto fue sometido al comité de ética de la Facultad de Odontología de la

Universidad Central del Ecuador, siendo aprobado por el Dr. Juan Viteri el día 25 de

noviembre del 2015.

CAPÍTULO IV

4. ANÁLISIS

4.1. RESULTADOS

ESTADÍSTICA NO PARAMÉTRICA: Son procedimientos estadísticos para pruebas de

hipótesis que no requieren de la suposición de la normalidad de la población de la cual fue

extraída la muestra y se pueden aplicar a datos de tipo cuantitativo y cualitativo.

Inicialmente se verifica que las muestras tomadas provienen de una población con distribución

Normal, esto se realiza con las pruebas de Kolmogorov - Smirnov o con la prueba de Shapiro

- Wilk (menor a 20 datos), luego vamos a probar:

Ho (Hipótesis inicial): La muestra proviene de una población con distribución Normal

Ha (Hipótesis alterna): La muestra NO proviene de una población con distribución Normal

Tabla 2. Prueba de normalidad del romero, salvia, salvia-romero al 100% a las 24y 48 horas.

.

45

Pruebas de normalidad

Kolmogorov-Smirnov Shapiro-Wilk

Estadístico gl Sig. Estadístico gl Sig.

ROMERO 100% 24 Horas 0,509 20 0,000 0,433 20 0,000

ROMERO 100% 48 Horas 0,509 20 0,000 0,433 20 0,000

ROMERO SALVIA 100% 24

Horas

0,268 20 0,001 0,858 20 0,007


Horas

0,287 20 0,000 0,881 20 0,018

SALVIA 100% 24 Horas 0,284 20 0,000 0,773 20 0,000

SALVIA 100% 48 Horas 0,225 20 0,009 0,860 20 0,008

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador

De la prueba de Normalidad de Shapiro-Wilk los valores Sig. (Nivel de significación) son

inferiores a 0,05 (95% de confiabilidad), luego rechazamos Ho, esto es la muestra de las

soluciones NO provienen de una población con distribución Normal, luego para el análisis se

debe realizar pruebas NO PARAMÉTRICAS

Pruebas no paramétricas: Prueba de los rangos con signo de Wilcoxon

Ho: (hipótesis nula) Las muestras proceden de poblaciones con la misma distribución de

probabilidad (Medias similares)

Ha: (hipótesis alternativa) Existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones.

46

Rangos

N Rango promedio Suma de rangos

ROMERO 100% 48 Horas

ROMERO 100% 24 Horas

Rangos negativos 0 0,00 0,00

Rangos positivos 0 0,00 0,00

Empates 20

Total 20


Horas


Horas



Empates 0

Total 20

SALVIA 100% 48 Horas

SALVIA 100% 24 Horas



Empates 0

Total 20

Tabla 3. Prueba no paramétricas: Prueba de los rangos con signo de Wilcoxon de normalidad del romero, salvia, salvia-romero al 100% a

las 24y 48 horas.



Estadísticos de contraste

ROMERO 100% 48

Horas - ROMERO

100 24 Horas

ROMERO SALVIA

100% 48 Horas -

ROMERO SALVIA

24 Horas

SALVIA 100 %48

Horas - SALVIA 100

24 Horas

Z 0,000 -3,981 -3,994

Sig. asintót. (bilateral) 1,000 0,000 0,000

Tabla 4. Prueba no paramétricas: romero 100% 48 horas vs romero 100% 24 horas

47

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega. Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador.

Gráfico 1. Prueba de Wilcoxon de los rangos con signo de muestras relacionadas.


De la Prueba de Wilcoxon de los rangos con signos, Sig. asintótica = 1,000 es mayor a 0,05

(95% de confiabilidad), luego NO existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones, las medidas centrales son similares.

48

Tabla 5. Prueba no paramétricas: romero + salvia 100% 48 horas vs romero+ salvia 100% 24 horas





De la Prueba de Wilcoxon de los rangos con signos, Sig. asintótica = 0,000 es menor a 0,05

(95% de confiabilidad), luego SI existen diferencias respecto a la tendencia central de las

49

poblaciones, las medidas centrales no son similares, a las 48 horas los halos son mayores para

el ROMERO + SALVIA

Tabla 6. Prueba no paramétricas: salvia 100% 48 horas vs salvia 100% 24 horas




De la Prueba de Wilcoxon de los rangos con signos, Sig. asintótica = 0,000 es menor a 0,05

(95% de confiabilidad), luego SI existen diferencias respecto a la tendencia central de las

poblaciones, las medidas centrales no son similares, a las 48 horas los halos son mayores para

la Salvia al 100%

50

Prueba de Kruskal-Wallis: Tres o más muestras

Gráfico 5. Pruebas no paramétricas: Soluciones a las 24 horas.

Elaborado: Gabriela Ximena Marín Vega Fuente: Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad Central del Ecuador.

De la Prueba de Kruskal-Wallis Sig. asintót. = 0,000 es menor a 0,05 (95% de confiabilidad),

luego existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las

medias de las muestras son similares, se realiza la prueba dos a dos para verificar cuales son

distintas:

Comparando dos a dos se tiene que a las 24 horas el Romero al 100% tienen valores inferiores

con relación a las otras dos soluciones.

51

Gráfico 6. Comparación por parejas de soluciones a las 24 horas.


52

Gráfico 7. Pruebas no paramétricas: Soluciones a las 48 horas.


De la Prueba de Kruskal-Wallis Sig. asintót. = 0,000 es menor a 0,05 (95% de confiabilidad),

luego existen diferencias respecto a la tendencia central de las poblaciones. No todas las

medias de las muestras son similares, se realiza la prueba dos a dos para verificar cuales son

distintas:

Comparando dos a dos se tiene que a las 24 horas el Romero al 100% tienen valores inferiores

con relación a las otras dos soluciones

53

Gráfico 8. Comparación por parejas de soluciones a las 48 horas


Tabla. Medias de las soluciones de romero, romero-salvia, salvia al 100% a las 24 y 48 horas.

SOLUCIÓN TIEMPOS MEDIAS

1: ROMERO 100% 24 H 6,15

48 H 6,15

2: ROMERO +

SALVIA 100%

24 H 12,60

48 H 15,40

3: SALVIA 100% 24 H 12,65

48 H 15,35


54

Gráfico. Medias de las soluciones de Romero 100%, Romero+Salvia 100% Salvia 100% a las 24 y 48

horas.


6,15 6,15

12,60

15,40

12,65

15,35

24 H 48 H 24 H 48 H 24 H 48 H

1: ROMERO 100% 2: ROMERO + SALVIA 3: SALVIA 100%

MEDIAS DE LAS SOLUCIONES

55

4.2. DISCUSIÓN

El estudio se realizó en el Laboratorio de la Facultad de Ciencias Químicas de la Universidad

Central del Ecuador con el objeto de comprobar la eficacia de los extractos acuosos al 100%

de Salvia Officinalis (Salvia), de Rosmarinus Officinalis (Romero) y de Salvia con Romero

en la inhibición del crecimiento del Streptococcus mutans, mediante métodos de investigación

in vitro.

En el análisis de acuerdo al efecto bactericida del extracto acuoso de Romero (Rosmarinus

Officinalis) al 100% sobre el Streptococcus mutans, no existen diferencias con respecto a las

medidas de los halos son similares a las 24 y 48 horasmientras en la investigacion realizada

Garcia. (1995), efecto inhibitorio de la infusión del romero sobre microorganismos

cariogénicos, Lactobacillus acidophillus y S.mutans determinó que la extracto inhibió el

aumento de los microorganismos, a múltiples concentraciones 100%, 60%, 20 %; y a 1

minuto, 3 minutos y 5 minutos respectivamente coincide con nuestra investigación que

tiene un buen efecto inhibitorio del extracto de romero contra el Streptococcus mutans,

según Motacero. ( 2013), resultados revelan la infusión de Rosmarinus Officinalis presenta

mayor inhición a la concentración del 40% a los 5 minutos con u porcentaje de 95,35%,

mientras que al minuto fue de 46,87. Al 20% en un minuto de exposición inhibió el

desarrollo de Strepcoccus mutans en un 5,21% de la misma manera que a los 5 minutos

inhibió en un 8,33% a mayor tiempo de exposición Streptococcus mutans con infusión

del Rosmarinus Officinalis “Romero” mayor efecto inhibitorio concuerda con los

resultados de nuestro estudio a mayor tiempo de exposición del Streptococcus mutans y a

mayor concentración del extracto acuoso el efecto satisfactorio.

Con respecto a la acción bactericida del extracto acuoso de Salvia (Salvia Officinalis) al

100%, sobre el Streptococcus mutans, si existen diferencias respecto las medidas no son

similares, a las 48 horas los halos son mayores para la Salvia al 100% no se han descrito

estudios de modo.

56

De acuerdo con los extractos acuosos de Salvia y de Romero al 100% sobre el Streptococcus

mutans, si existen diferencias respecto a las medidas no son similares, a las 48 horas los halos

son mayores para el Romero + Salvia no se han reportado investigaciones de esta forma

solo estudios con Romero o con Salvia independientemente.

57

CAPÍTULO V

5. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES

5.1 CONCLUSIONES

El Efecto bactericida del extracto acuoso de Romero (Rosmarinus Officinalis) al 100%

sobre el Streptococcus mutans, no mostró un halo de inhibición mayor de 6.15 mm a

las 24 y de 6.15mm a las 48 horas.

Los extractos acuosos de Salvia con Romero al 100% sobre

el Streptococcus mutans, mostraron un halo de inhibición de 12.60 a las 24 horas y de

15.40 a las 48 horas

La acción bactericida del extracto acuoso de Salvia (Salvia Officinalis) al 100%, sobre

el Streptococcus mutans, mostró un halo de inhibición de 12.45mm a las 24 horas y de

15.35mm a las 48 horas.

No existe diferencia significativa entre la medida de los halos de inhibición del

Romero-Salvia y de la salvia pura.

El extracto acuoso de Salvia al cien por ciento fue mejor bactericida que

combinándolo con el romero

58

5.2 RECOMENDACIONES

Se debería continuar con este estudio, enfocándose a preparar extractos en otras

concentraciones, puesto que a mayores concentraciones mayor contenido de principios

activos como las catequinas.

Se recomienda realizar más estudios de este extracto de salvia empleándolo sobre otros

patógenos de la microflora oral y aplicado a otras áreas de la Odontología.

Al llevarse a cabo este estudio in vitro y con resultados satisfactorios, sería ideal llevar

a cabo un estudio in vivo.

Se debería recomendar a los pacientes el uso de especies vegetales, como la salvia y el

romero, ya que resulta efectivo, barato y de fácil acceso.

59

5.3. REFERENCIA BIBLIOGRÁFICA

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WHO. (1991). Guidelines for the Assessment of Herbal Medicines. WHO. Munich.

61

ANEXOS

ANEXO 1

CLIENTE: GABRIELA MARÍN

MUESTRA: EXTRACTO DE ROMERO Y DE SALVIA

FECHA DE ANÁLISIS: 2015/03/04

EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE SALVIA-ROMERO AL

100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL Streptococcus mutans. ESTUDIO MICROBIOLÓGICO IN

VITRO.

MEDIO DE CULTIVO

UTILIZADO: AGAR SANGRE

CEPA DE ESTUDIO: STREPTOCOCCUS MUTANS

ATCC

25175

LOTE

266-20-4

FECHA DE

CADUCIDAD 2015-09

ROMERO 100% ROMERO + SALVIA SALVIA 100%

24 H 48 H 24 H 48 H 24 H 48 H

REPETICIÓN HALOS DE INHIBICIÓN (mm)

HALOS DE INHIBICIÓN

(mm) HALOS DE INHIBICIÓN (mm)

1 6 6 12 14 12 15

2 6 6 11 13 12 16

3 6 6 12 14 12 16

4 7 7 12 14 12 14

5 6 6 13 15 13 17

6 6 6 13 16 14 17

7 7 7 13 16 13 16

8 6 6 14 18 12 14

9 6 6 14 16 13 16

10 6 6 12 14 13 16

11 6 6 13 16 14 16

12 7 7 14 16 13 15

13 6 6 12 14 12 14

14 6 6 12 16 12 14

15 6 6 13 16 13 16

16 6 6 12 16 13 15

17 6 6 12 16 13 17

18 6 6 13 17 13 15

19 6 6 12 15 12 14

20 6 6 13 16 12 14

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UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR TEMA · "EFECTIVIDAD DEL EXTRACTO ACUOSO DE SALVIA, ROMERO Y DE SALVIA-ROMERO AL 100% COMO BACTERICIDA SOBRE EL ... hacer uso de todos los contenidos