UTICAJ NERASTA I GODIŠNJE SEZONE NA POJEDINE … · 164 Vet. glasnik 70 (5-6) 163 - 174 (2016) Apić Jelena i sar.: Uticaj nerasta i godišnje sezone na pojedine parametre fertilizacionog

163

* Rad primljen za štampu 05.10.2016.**drsc.vet.med.JelenaApić,naučnisaradnik,Odeljenjezareprodukciju,Naučniinstitutzaveterinarstvo“NoviSad”,NoviSad;drsc.vet.med.IvanRadovićvan.prof.,Departmanzastočarstvo,Poljoprivrednifakultet,UniverzitetuNovomSadu;drsc.vet.med.IvanStančić,van.prof.,Departmanzaveterinarskumedicinu,Poljoprivrednifakultet,UniverzitetuNovomSadu;drsc.vet.med.SlobodankaVakanjac, red.prof.,Katedrazaporodiljstvo,sterilitet iveštačkuoplodnju,Fakultetveterinarskemedicine,UniverzitetuBeogradu,Beograd,Srbija

ORIGINALNI RAD / ORIGINAL PAPER

DOI10.2298/VETGL1606163A UDC636.4.082.454636.4.09:612.616

UTICAJ NERASTA I GODIŠNJE SEZONE NA POJEDINE PARAMETRE FERTILIZACIONOG POTENCIJALA SPERMATOZOIDA*

BOAR AND SEASON EFFECTS ON SOME PARAMETERS OF SEMEN FERTILIZING POTENTIAL

Apić Jelena, Radović Ivan, Stančić Ivan, Vakanjac Slobodanka**

U cilju određivanja što tačnijeg fertilizacionog potencijala spermatozoida, čini se da konvencionalni parametri kvaliteta semena nerastova (volumen ejakulata, koncentracija spermatozoida, progresivna pokretljivost, procenat živih spermatozoida, kao i onih sa intaktnom akrozomalnom morfologijom) nisu dovoljni. Od nedavno, postoje brojna istraživanja koja dokazuju da koncentracija proteina u spermalnoj plazmi ima visoku pozitivnu korelaciju sa fertilizacionim potencijalom nerastova. Cilj ovog istraživanja bio je da se utvrdi efekt nerasta kao i uticaj godišnje sezone na varijaciju sadržaja proteina u spermalnoj plazmi nerastova. Za ispitivanja su korištene spermalne frakcije 2 nerasta sa visokim (V-nerast) i 2 narasta sa niskim (N-nerast) sadržajem proteina u spermalnoj plazmi. Ejakulati su od nerastova uzimani jednom nedeljno, u okviru jednog meseca, tokom godinu dana (4×12=48 ejakulata po nerastu). Za analizu proteina u spermalnoj plazmi, uzorci su pripremljeni centrifugiranjem. Volumen ejakulata, koncentacija spermatozoida kao i progresivna pokretljivost su značajno varirali (p < 0,05 ili p < 0,01) između nerastova kao i kod jednog te istog nerasta. Varijacije istih parametara utvrđene su i tokom tople odnosno hladne sezone godine. Sa druge strane, koncentracija proteina je bila prilično konstantna, i kod V-nerastova (kretala se od 4 do 4,5%) i kod N-nerastova (kretala se od 2,3 do 2,6%). Sezona nije značajno uticala (p > 0,01) na sadržaj proteina u spermalnoj plazmi (V-nerastovi: 4 do 4,5% u toploj i hladnoj sezoni godine; N-nerastovi: 2,3 do 2,6% u toploj i 2,3 do 2,5% u hladnoj sezoni godine). Dobijeni

164

Vet.glasnik70(5-6)163-174(2016)ApićJelenaisar.:Uticajnerastaigodišnjesezonenapojedineparametrefertilizacionogpotencijalaspermatozoida

rezultati pokazuju da bi merenje sadržaja proteina u spermalnoj plazmi nerastova mogao biti koristan metod za njihovo rangiranje, a na osnovu fertilizacionog potencijala svežeg semena.

Ključne reči: sadržaj proteina, fertilitet spermatozoida, nerast, sezona.

Tehnika veštačkog osemenjavanja (VO) je metoda koja je u upotrebi nafarmama intenzivne proizvodnje svinja širom sveta (Maes i sar., 2011). Višeod99% inseminacija izvrši se sveže razređenim semenom, koje se čuva 0-5dana,na15-20oC(StančićiDragin,2011;Rodríguez,2012;Khalifaisar.,2014).Korišćenjeskupihgenetskisuperiornihnerastovazaveštačkoosemenjavanjeimavelikogekonomskoguticajanasavremenu,intenzivnuproizvodnjusvinja(Gadeaisar.,2004).Podovimsepodrazumevadaseodtakvihnerastovatrebadobitimaksimalanbrojinseminacionihdozapoejakulatu(iliponerastugodišnje)štoijesteglavnirazloguspešnereproduktivneeksploatacijenerastova.FertilizacionipotencijalVOdozazainseminacijuuglavnomzavisiodsamogkvalitetasemena(Tsakmakidis i sar., 2010). Stoga, tačna procena fertilizacionog potencijalaspermatozoidau cilju selekcije visoko fertilnih nerastova je od velikog značajadabisetajcilj ipostigao(Gadea,2005).Nažalost,klasičniparametrizaocenukvaliteta semena, kao što su volumen ejakulata, koncentracija spermatozoida,progresivnapokretljivost,procenatživihspermatozoida,kaoionihsaintaktnomakrozomalnommorfologijomnisudovoljnipokazateljifertilitetanerastovainjihovihreproduktivnihperformansi(Gadeaisar.,2004;Rodríguez-Martínez,2013).

Sadrugestrane,odskoro,povećanapažnjapridajeseuticajuspermalneplazmenerastova(Gadea,2005;Maxwellisar.,2007;JuyenaiCalogero,2012).Utvrđenojedaproteinispermalneplazmemogubitiupozitivnojsprezisafertilitetomnerastova (Flowers, 2001; Rodriguez-Martinez i sar., 2011; Rodríguez, 2012;Stančićisar.,2012).Naosnovutihistraživanja,možesezaključitidaodređivanjesadržajaproteinauspermalnojplazmimožebitikorisna„alatka“zautvrđivanjestepena fertilizacionog potencijala nerastova.Međutim,mi predpostavljamo daovajmetodmožeimatiuticajasamoukolikonepostojiznačajnavarijacijasadržajaproteinauspermalnojplazmisvakognerastaponaosob,azavisnoogenetskihfaktoraifaktoraspoljašnjesredine.

Stoga,ciljovog istraživanja jedaseuporedevarijacijepojedinihklasičnihparametarakvalitetasvežegsemenaisadržajaproteina,zavisnoodnerasta(kaoindividue)igodišnjegdoba.

Uvod / Introduction

165

Materijal i metode rada / Material and methods

Odabir nerastova i prikupljanje ejakulata. Nerastovi za eksperiment suodabraninaosnovuprethodnoodređenogsadržajaproteinaunjihovojspermalnojplazmi,sakomercijalnefarmeintenzivneproizvodnjesvinja,naseveruSrbije(APVojvodina).OdabranasudvanerastaraseŠvedskilandrasčijisuejakulatiimalivisoknivoproteina(prosečno4,08%)usemenojplazmiidvanerastaisterasesaniskimsadržajemproteinauspermalnojplazmi(prosečno2,11%).Napočetkuogledastarostnerastovajebilaod18do24meseca.Koristećitehnikudvostrukerukavice, prikupljena je spermalna frakcija ejakulata svakog nerasta, i to početiriejakulatamesečno,tokomgodinudana(4×12=48ejakulataponerastu).Odmah nakon prikupljanja, nativna sperma je filtrirana kroz gazu i zagrevanana 35°C u vodenom kupatilu tokom 30minuta, u farmskoj laboratoriji. Nakonzagrevanja, određeni su sledeći parametri kvaliteta nativne sperme: volumenejakulata(ml),koncentracijaspermatozoida(×106/ml) iprogresivnapokretljivost(%). Koncentracija spermatozoida određena je fotometrom (SDM5, Minitüb,Germany). Progresivna pokretljivost određena je vizuelnom, mikroskopskommetodom, koriseći fazno-kontrastni mikroskop sa uveličanjem × 100 i grejnimpostoljem na 35°C. Pokretljivost spermatozoida su uvek određivala dvanezavisna, iskusnaoperatera, istovremeno.Pregledanasupo tri različitapoljaBürker-Türk-ovekomorice,udvekapisvakoguzorka(6komoricapooperateru).Prosečne vrednosti svihmerenja po uzorku su korišćene za analizu podataka(premaKommisrudi sar.2002).

Priprema spermalne plazme i hemijske analize. Pripremaspermalneplazmeizvršena je u laboratoriji za hemijske analize na Departmanu za stočarstvoPoljoprivrednog fakulteta,UniverzitetauNovomSadu,NoviSad,Srbija.Posleocenekvalitetanativnogsemenana farmi,50mlsvakoguzorka jestavljenousterilnu bočiću sa zavrtnjem i dopremljeno do laboratorije (Poljoprivrednogfakulteta),utermo-boksuna17°C,unutar2hdo3h.Svakidopremljeniuzoraksvežegejakulatajepodeljenupoduzorkeod20mlisipanuplastičneepruvetezazavrtnjem(zapremine25ml),apotomcentrifugiranna1000×gtokom10minutana4°C,dabisespermatozoidiistaložilinadnuepruvete.Dobijenisupernatantjeponovoodlivenunove,čisteepruvete i re-centrifugiran (na3000×g tokom15 minutes na4°C)dabisespermalnaplazmaprečistilaodmogućihzaostalihspermatozoidaidrugihorganskihpartikula.Takopripremljeniuzorcisuskladišteniufrižiderna4°Cdopočetkaanalize.OdređivanjeukupnihproteinauseminalnojplazmirađenojeAOAChemijskommetodom(OfficialMethod2001.11).Analizeuzorakasuzavršeneunutar24hodmomentaprikupljanjaejakulatanafarmi.

Statistička obrada.Svidobijenipodacisuanaliziranisoftverskiprogramom“Statistika 15”. Korišćena je deskriptivna statistika. Homogenost varijanseutvrđena jeLevinovim testom.Razlike izmeđudobijenih rezultatapoduticajemnerasta igodišnjesezonetestiranisuStudentovimtestom.Srednjavrednost,±


166

standardnadevijacija,kaoiminimalneimaksimalnevrednostieksperimentalnihpodatakaprikazanisuutabelama1i2.Tabela1.Uticajnerastanaparametreejakulata(srednjavrednost±SD)Table 1. The influence of a boar on ejaculate parameters (mean value ± SD)

Nerastovi (n=4) / Boars (n=4)V11 V21 N12 N22

Brojanaliziranihejakulata(n)3Number of tested ejaculates (n)3 48 48 48 48

Parametriejakulata:Ejaculate parameters:

Volumen(ml)Volume (ml)

308±35,95A

(245-400)290±18,33B(255-375)

275±8,93C(255-380)

183±17,55D(165-265)

Koncentracijaspermatozoida(×106/ml)Sperm concentration(×106/ml)

303±23,11a

(245-350)296±41,79a

(250-378)280±17,69b(228-330)

293±27,53a

(235-350)

Progresivnapokretljivost(%)Progressive motility (%)

78±4,81A

(60-85)72±4,37B(55-80)

71±5,05C(50-85)

81±6,24A

(65-90)

Sadržajproteinauspermalnojplazmi(%)Protein content in sperm plasma (%)

4,27±0,12A

(4-4,55)4,4±0,08A

(4-4,48)2,48±0,07B(2,32-2,56)

2,44±0,08B(2,27-2,56)

1V1iV2–nerastovisavisokimsadrž.proteina;2 N1iN2–nerastovisaniskimsadrž.proteina;3Jedan ejakulatnedeljno×12meseci. Min.imaks.Vrednostiuparentezi;Vrednostisarazličitimsuperskripti-ma,unutaristogredaserazlikuju(ABp<0.01;abp<0.05)/1V1 and V2 – boars with high protein content; 2 N1 i N2 – boars with low protein content; 3 One ejaculate a week × 12 month. Min and max values in parenthesis; Values with different superscripts, differ within the same order (ABp < 0.01; abp < 0.05).Tabela2.Uticajsezonenaparametreejakulatanerastova(srednjavrednost±SD)Table 2. The influence of a season on a boar ejaculate parameters (mean value ± SD)

Parametriejakulata/Ejaculate parameters:

Sezona (n=192) / Season (n=192)Topla / Warmn = 401 + 402

Hladna / Coldn = 561 + 562

Volumen(ml)Volume (ml)

V1 270±26,84A

(225-324)287±30,77B(235-353)

N2 234±45,84A

(165-300)263±14,63B(225-360)

Koncentracijaspermatozoida(×106/ml)Sperm concentration(×106/ml)

V1 308±44,95A

(222-422)332±30,63B(285-421)

N2 279±22,67a

(225-345)289±22,75b(248-359)

Progresivnapokretljivost(%)Progressive motility (%)

V1 76±6,99A

(55-90)78±7,00A

(60-90)

N2 72±6,38a

(50-85)76±7,45b(60-95)

Sadržajproteinauspermalnojplazmi(%)Protein content in sperm plasma (%)

V1 4,29±0,17A

(4-4,55)4,33±0,12A

(4-4,48)

N2 2,44±0,06A

(2,32-2,56)2,41±0,06A

(2,27-2,55)


167

Rezultati / Results

Toplasezona=Maj-Septembar;Hladnasezona=Oktobar-April.;1Nerastovisavisokimsadrž.pro-teina(n=2);2Nerastovisaniskimsadrž.proteina(n=2);Vrednostisarazličitimsuperskriptima,unutaristogredaserazlikuju(ABp<0,01;abp<0.05)/Warm season = May - September; Cold season = Oc-tober - April; 1Boars with high protein content (n=2); 2Boars with low protein content (n=2); Values with different superscripts, differ within the same order (ABp< 0.01; abp < 0.05)

Prosečne vrednosti volumena ejakulata, koncentracije spermatozoida,progresivnepokretljivostiisadržajaproteinauspermalnojplazmi,kodnerastovasavisokim(V1iV2)iniskim(N1iN2)sadržajemproteinauspermalnojplazmi,prikazani su uTabeli 1. Prosečan volumen ejakulata (V1=308ml, V2=290ml,N1=275mliN2=183ml)iprogresivnepokretljivosti(V1=78%,V2=72%,N1=71%iN2=81%)subiliznačajnorazličiti(p<0,01).Značajnonižu(p<0,05)koncentracijuspermatozoidaimaojesamoN1nerast(280×106/ml),upoređenjusaostalatrinerasta(V1=303×106/ml,V2=296×106/mliN2=293×106/ml).Sadržajproteinanije značajno različit (p>0,01) kod nerastova sa visokim (V1=4,3 i V2=4,4) iliniskim(N1=2,5iN2=2,4)procentomproteinauspermalnojplazmi.

Bitno je naglasiti da nije bilo značajnih varijacija sadržaja proteina useminalnojplazmiizmeđutestiranihejakulata,kakougrupinerastovasavisokimtakoiugrupinerastovasaniskimsadržajemproteinauspermalnojplazmi.Naime,procentualnerazlikeizmeđuminimalnogsadržajaproteina(kojijeuzetkao100%)jebiouopseguizmeđu9%(N1iN2nerastovi)i12%(V1iV2nerastovi).Sadrugestrane, klasični parametri kvaliteta semena (volumen ejakulata, koncentracijaspermatozoidaiprogresivnapokretljivost)značajnosuvariraliizmeđutestiranihejakulatasvakogpojedinačnognerasta.Procentualnerazlikeizmeđuminimalnihimaksimalnihvrednostisubileuopseguizmeđu+38%(progresivnapokretljivost-N2nesrast)i+70%(progresivnapokretljivost-N1nerast)(Grafikon1).

Prosečnevrednostisadržajaproteinauspermalnojplazmibilesuidentičnetokom tople ihladnesezonegodine,kodobegrupenerastova.Kodnerastovasa visokim sadržajemproteina u spermalnoj plazmi, nivo proteina je bio 4,3%tokomtopleihladnesezone,akodnerastovasaniskimsadržajemproteina2,5%u toploj sezoni i 2,4%u hladnoj sezoni godine (Tabela 2).Međutim, značajnoveće vrednosti (p<0,05 ili p<0,01) volumena ejakulata (V=287ml, N=263ml),koncentracije spermatozoida (V=332×106/ml, N=289×106/ml) i progresivnepokretljivosti(V=78%,N=76%),sudobijeneugrupinerastovasavisokimsaržajemproteina(V)tokomhladnesezoneuodnosunaisteparametretokomtoplesezonegodine:volumenejakulata(V=270ml,N=234ml),koncentracijaspermatozoida(V=308×106/ml, N=279×106/ml) i progresivna pokretljivost (V=76%, N=72%)(Tabela2).

Procentualnarazlikaizmeđuminimalnog(uzetogkao100%)imaksimalmogsadržaja proteina je bila +10% u toploj i +7% u hladnoj sezoni godine, bezstatističkiznačajnerazlike(p>0,01).Sadrugestrane,značajnevarijacije(p<0,05ilip<0,01)suustanovljenekodklasičnihparametarakvalitetasemena(volumen


168

ejakulata, koncentracija spermatozoida i progresina pokretljivost) između toplei hladne sezone godine. Naime, procentualne razlike između minimalnih imaksimalnihvrednostisubilevećeutoplojsezoni(opsegizmeđu+63%i+71%)negouhladnojsezoni(opsegizmeđu+46%i55%)(Grafikon2.)

Grafikon 2. Procentualne razlike između minimalnih i maksimalnih vrednosti parametara kvaliteta semena u toploj i hladnoj sezoni godine (minimane vrednosti uzete kao 100%)

Graph 2. Percentage differences between minimal and maximal values of the semen qua-lity parameters in warm and cold season of a year (minimal values considered as 100%)

Graf.1.Procentualnarazlikaizmeđuminimalnihimaksimalnihvrednostiparametaraejaku-latakodtestiranihnerastovatokomgodinudana

Graph 1. Percentage differences between minimal and maximal values of ejaculate param-eters in the tested boars during a year


169

Rezultati u ovom radu jasno dokazuju značajne varijacije klasičnihparametara kvaliteta (volumen ejakulata, koncentracija spermatozoida iprogresivna pokretljivost), pod individualnim uticajem nerasta kao i godišnjesezone. Sa druge strane, sadržaj proteina u spermalnoj plazmi nije značajnovarirao između testiranih rezultata unutar jednog nerasta kao ni unutar grupenerastova sa visokim i niskim sadržajem proteina spermalne plazme. Takođe,nijebiloniznačajnihvariranjasadržajaproteinauspermalnojplazmi ispitivanihnerastovapoduticajemtopleihladnesezonegodine.

Dokazanojedasuklasičniparametrikvalitetasemena,kaoštosuvolumenejakulata, koncentracija spermatozoida, progresivna pokretljivost, morfologija,procenat živih spermatozoida sa očuvanim akrozomalnim integritetom (Knox,2004;Maesisar.,2011;Apićisar.,2015)poduticajembrojnihfaktora(Smital,2009, Stančić i sar., 2015). Faktori vezani za samog nerasta (Smital, 2009;Rodríguez,2012)isezonagodine(Lapustei sar.,2011;Apići sar.,2015)imajunajveći uticaj na varijacije gore pomenutih parametara kvaliteta ejakulata.Najvažniji uticaj svakako imastarosnadobnerastova (Jankevičiūtė iŽilinskas,2002;Smital, 2009;Rodríguez, 2012), rasanerastova (Ciereszko i sar., 2000;Smital isar.,2004;Smital,2009;Savić isar.,2013)kao i frekvencijauzimanjaejakulata(SingletoniFlowers,2001;WolfiSmital,2009).Povišenaambijentalnatemperaturakaoiproduženidnevnifotoperiodsuglavničiniociuticajasezonezavarijacijeklasičnihparametarakvalitetaejakulata(Okere isar.,2005;Lapuste isar.,2011;Apićisar.,2015;Petrocelliisar.,2015).Upravoteznačajnevarijacijeklasičnihparametarakvalitetaejakulata,poduticajemnerastaigodišnjesezone,ijesurazlozizaštonavedeniparametrikvalitetanisudovoljnidapredvideoplodnusposobnost spermatozoida (Gadea i sar., 2004). Naime, klasični parametrikvalitetaejakulata,dajusamopribližnuocenufertilizacionogpotencijalasvakogpojedinačnog ejakulata (Waberski i sar., 2011), i samo oni nerastovi sa jakološim kvalitetom ejakulatamogu biti ustanovljeni (Gadea i sar., 1998). Iz ovihrazloga,dabisepreciznijeobjasniokvalitetsemenameđunerastovimasadobrimkvalitetomsemena,trebalobikoristitiparametreejakulatasamnogokonstantnijimvrednostima,aunutarznačajnihvarijacijakojezaviseodstarostiirasenerastova,frekvencijeuzimanjaejakulata,kaoigodišnjesezone.

Odskoro,postojisvevišenavodadaproteinispermalneplazmemogubitiukorelacijisafertilitetomnerastovaimoguslužitikaojoš jedanodparametaraocene kvaliteta semena (Dyck i sar., 2011; Rodriguez-Martinez i sar., 2011;Rodriguez-Martinez,2013).Takođe,dokazanojedanerastovisavišimsadržajemproteinauspermalnojplazniimajuznatnoboljifertilizacionipotencijaluodnosuna nerastove sa niskim sadržajem proteina spermalne plazme (Flowers,1998; Novak i sar., 2010; Mogielnicka-Brzozowska i Kordan, 2011; Stančić isar., 2012).Naše prethodno istraživanje (Apić i sar., 2015), pokazalo je da je

Diskusija / Disscusion


170

progresivnapokretljivostiprocenatdobrihuzoraka(uzorcisa≥65%progresivnepokretljivosti)nakončuvanjaposle72hurazređenju1:4,bilaznatnoviša(82%i 41%) kod nerastova sa znatno višim sadržajem proteina spermalne plazme(4%), u poređenju sa istim parametrima (76% i 12%) kod nerastova sa nižimsadržajemproteinauspermalnojplazmi (2%).Takođesmoutvrdili (Apić isar., 2016)dajeukupanbrojspermatozoidasaoštećenimakrozomomznačajnoniži(29%)uejakulatimasavišimsadržajemproteina,poredećiihsaejakulatimasanižim sadržajem proteina (45%). I drugi autori su utvrdili (Maxwell i Johnson,1999; Ashrafzadeh i sar., 2013; González-Cadavid i sar., 2014) da redukcijakoncentracijeproteinaspermalneplazmeurazređenomsemenunerastovavodika postepenom smanjenju progresivne pokretljivosti, vremenu preživljavanja,akrozomalnogintegritetaimitohondrijalneaktivnosti.

Rezultati naših istraživanja pokazuju da je sadržaj proteinapriličnokonstantanusvakomejakulatu jednogistognerasta(4do4,5%kodnerastovasavisokimsadržajemproteinai2,3do2,6%kodnerastovasaniskimsadržajemproteinauspermalnojplazmi).Takođejeutvrđenodanivoproteinauspermalnojplazminijeuvisokojkorelacijisarasomilistarošćunerasta(Gerfenisar.,1994;Maxwell i Johnson, 1999; Apić, 2015; Stančić i sar., 2015). Sadržaj proteinau spermalnoj plazmi je prilično konstantan kod jednog istog nerasta,međutimdokazane su velike varijacije između nerastova (Flowers, 2001; Novak i sar.,2010).Dobijenirezultatinašihtrenutnihistraživanja,takođe,dokazujudagodišnjasezona nema značajnog uticaja na sadržaj proteina spermalne plazme (toplasezona:V=4-4,5%iN=2,3-2,6%;hladnasezona:V=4-4,5%iN=2,3-2,5%).Poredrezultatadokojihsmomidošli,idrugiautorinavode(Muraseisar.,2007;Apić,2015;Stančićisar.,2015)dasezonagodinenemabitnijeguticajananivoproteina u spermalnoj plazmi individualnog nerasta. Podaci do kojih je došaoZhu(2000)predočavajudabimerenjeproteinaspermalneplazmemoglobitiodvelikogznačajazaevaluacijukvalitetanerastovskogsemena.Štaviše,Flowers(2001)jepronašaodanerastovisavišimsadržajemproteinauspermalnojplazmipokazujuznatnovećiindeksprašenja(86,7%)kaoivećibrojživorođeneprasadipoleglu(11,2),upoređenjusanerastovimačijijesadržajproteinauspermalnojplazminizak(indeksprašenja=78,4;živorođenaprasad/leglo=10,4).Naosnovunašihistraživanja,kaoirezultatadokojihsudošlidrugiautori,možesezaključitidasadržajproteinauspermalnojplazmimože imativelikoguticajapridetekcijiejakulata sa smanjenim fertilizacionim potencijalom i tako pomoći pri selekcijivisoko fertilnih nerastova, radi njihove upotrebe za veštačko osemenjavanje.Međutim, naše mišljenje je, da je trenutna procedura za detekciju proteinaspermalneplazmepriličnokomlikovanatj.nepraktičnazaizvođenjeufarmskimuslovima.Stoga,potrebnojerazvitijednostavne,jeftineiprecizneprocedure,kojebibilepraktičnezaprimenuuuslovimaintenzivneproizvodnjesvinja.


171

Zaključak / Conclusion

Rezultatiuovomradupokazujudajesadržajproteinauspermalnojplazmisvakogpojedinačnogejakulata,jednogistognerasta,priličnokonstantanidanevariraznačajnopoduticajemgodišnjesezone.Takođe,drugiautorisupronašlidaovajparametarejakulatanevariraznačajnoniuzavisnostiodstarostiilirasenerasta.Ovaistraživanjadajudobrupotporupretpostavcidamerenjemsadržajaproteinauspermalnojplazmimožebitikorisna„alatka“zapreciznijuevaluacijufertilizacionogpotencijalanerastova.Oveprocedure,moglebiobezbeditimnogoefikasniju selekciju nerastova sa višim oplodnim sposobnostima. Upotrebomnerastova sa visokim fertilizacionom potencijalom obezbedio bi značajnopovećanjeefikasnostinafarmamaintenzivneproizvodnjesvinja.

1. ApićJ,MilovanovićA,BarnaT,JovičinM.Spermpathologicalformsandacrosomalmembranein-tegrityinboarAIdoseonpigfarmsinAPVojvodina(Serbia).Proc.1stInternationalSym-posium“Onehealth–newchallenges”,Vrdnik,Serbia21–23.05.2015:87-91.

2. ApićJ,VakanjacS,RadovićI,JotanovićS,StankovićB,KanačkiZ.Effectofseasononboarse-menquality.ContAgri(NoviSad,Srb.)2015,64(1-2)9–13.

3. ApićJ,VakanjacS,RadovićI,KučevićD, JotanovićS,KanačkiZ,StankovićB.:ProteingehaltimSamenplasmavonZuchtebernaufdenBetrieben für intensiveSchweineproduktion inSerbien.(ProteincontentinboarseminalplasmaontheintensivepigproductionfarmsinSerbia).Züchtungskunde2015,87(5)S.361–8.

4. ApićJ. Effectofproteincontentintheboarseminalplasmaonthedilutedsemenparametersandfertilityofartificiallyinseminatedsows(PhDThesis). FacultyofAgriculture,DepartmentofVeterinaryMedicine,UniversityofNoviSad,Serbia, 2015.

5. AshrafzadehA,KarsaniAS,NathanS.Mammalianspermfertilityrelatedproteins. Int J Med Sci 2013,10:1649-57.

6. CiereszkoA,OttobreJS,GlogowskiJ.Effectsofseasonandbreedonspermacrosinactivityandsemenqualityofboars. Anim Reprod Sci 2000, 64:89-96.

7.DyckMK,FoxcroftGR,NovakS,Ruiz-SanchezA,PattersonJ,DixonWT.Biologicalmarkersofboarfertility.ReprodDomestAnim2011,4655-8.

8. Flowers,W.L.Boarfertilityandartificialinsemination.Proceedingsof15thInternationalPigVeteri-narySocietyCongress,Birmingham,England1998,volume1:45-52.

9. FlowersWL.Relationshipbetweenseminalplasmaproteinsandboarfertility.SwineNews(USA)2001,6:1-4.

10. GadeaJ,Mata´SC,LucasX.Predictionofporcinesemenfertilitybyhomologusinvitropenetra-tion(hIVP)assay.AnimReprodSci1998,54:95–108.

11. GadeaJ.Spermfactorsrelatedtoinvitroandinvivoporcinefertility.5thInternationalConferenceonBoarSemenPreservation,Doorwerth,TheNetherlands,August24–27, 2003:277-8.

12. GadeaJ,Selle´SE,MarcoA.ThePredictiveValueofPorcineSeminalParametersonFertilityOut-comeunderCommercialConditions.ReprodDomesticAnim2004,39:303-8.

13. Gadea, J. Sperm factors related to in vitro and in vivo porcine fertility. Theriogenology 2005, 63:431–444.

14.González-CadavidV,MartinsMAJ,MorenoBF,AndradeST,SantosLCA,CristinaA,Monteiro-MoreiraO,MoreiraAR,MouraAA.Seminalplasmaproteinsofadultboarsandcorrela-tionswithspermparameters.Theriogenology 2014,82:697-707.

Literatura / References


172

15. GerfenWR,WhiteBR,CottaAM,WheelerlMB.Comparisonofthesemencharacteristicsoffeng-jing,meishanandyorkshireboars.Theriogenology 1994,41:461-9.

16. JankevičiuteN,ŽilinskasH.Influenceofsomefactorsonsemenqualityofdifferentbreedofboars.VetZootec 2002,T.19:41.

17.JuyenaSA,CalogeroS..SeminalPlasma:AnEssentialAttributetoSpermatozoa(AReview).JAndrol2012,33(4)536-51.

18.KhalifaT,RekkasC,SamartziF,LymberopoulosA,KousenidisK,DovenskiT.Highlightsonartifi-cialinsemination(AI)technologyinthepigs.MacVetRev2014,37:5–34.

19.KommisrudE,PaulenzH,SehestedE,GrevleIS.InfluenceofBoarandSemenParametersonmotilityandacrosomeintegrityinliquidboarsemenstoredforfivedays.ActaVetScand2002,43:49-55.

20. KnoxVR.PracticalitiesandPitfallsofSemenEvaluation.Advances inPorkProduction 2004, 15:315-22.

21. LapusteC,DiaconescuS,HincuM,PascoveanuG. InfluenceofSeasonon theQuantityandQualityofBoarSemen.AnimalScienceandBiotechnologies 2011,4:270-2.

22. MaesD,RodriguezLA,RijsselaereT,VytP,VanSoomA.ArtificialInseminationinFarmAnimalsArtificial.In:InseminationinPigs, Dr. Milad Manafi (Ed.) 2011, pp. 81-94.ISBN:978-953-307-312-5.http://www.intechopen.com/books/artificial-insemination-in-farm-animals/arti-ficialinsemination-in-pigs.

23. MaxwellWMC,JohnsonAL.Physiologyofspermatozoaathighdilution rates: the influenceofseminalplasma.Theriogenology1999,52:1353-62.

24.MaxwellWMC,DeGraafPS,GhaouiE-HR,EvansG.Seminalplasmaeffectsonspermhandlingandfemalefertility.SocReprodFertil2007,Suppl,64:13–38.

25. Mogielnicka-BrzozowskaM,KordanW.Characteristicsofselectedseminalplasmaproteinsandtheirapplicationintheimprovementofthereproductiveprocessesinmammals.PolJVetSci 2011,14(3)489-99.

26. MuraseT,ImaedaN,YamadaH,MiyazawaK.Seasonalchangesinsemencharacteristics,com-positionofseminalplasmaandfrequencyofacrosomereactioninducedbycalciumandcalciumionophoreA23187inlargewhiteboars.JReprodDevelop 2007,53(4)853-65.

27.NovakS,Ruiz-SanchezA,DixonTW,FoxcroftRG,MichaelGR,DyckK.SeminalPlasmaProteinsasPotentialMarkersofRelativeFertilityinBoars.JAndrol 2010,31(2)188-200.

28.OkereC,JosephA,EzekweM.Seasonalandgenotypevariationsinlibido,semenproductionandqualityinartificialinseminationboars.JAnimVetAdv 2005,4(10)885-8.

29.PetrocelliH,BatistaC,GosálvezJ.Seasonalvariationinspermcharacteristicsofboarsinsouth-ernUruguay.RevBrasZootec 2015,44(1)1-7

30. RodríguezLA.Freshboarsemen:qualitycontrolandproduction(PhDThesis).FacultyofVeteri-naryMedicine2012,GhentUniversity.

31. Rodriguez-MartinezH,KvistU,ErnerudhJ,SanzL,CalveteJJ.Seminalplasmaproteins:whatroledotheyplay?AmJReprodImmunol 2011,66:11-22.

32. Rodríguez-MartínezH.Semenevaluationtechniquesandtheirrelationshipwithfertility.AnimRe-prod2013,10(3)148-59.

33. SavićR,PetrovićM,RadojkovićD,RadovićČ,ParunovićN.Theeffectofbreed,boarandsea-sononsomepropertiesofsperm.BiotechnologyinAnimalHusbandry (Bgd.,Srb.)2013, 329(2)299-310.

34.Singleton LW, Flowers B.Managing Boars inArtificial Insemination Centers. Pork InformationGateway,PurdueUniversity&NorthCarolinaStateUniversity2001, 1-7.

35. SmitalJ,DeSousaLL,MohsenA.DifferencesamongbreedsandmanifestationofheterosisinAIboarspermoutput.AnimReprodSci 2004,80:121–30.

36. SmitalJ.Effectsinfluencingboarsemen.AnimReprodSci 2009,110:335–46.


173

ENGLISH

37.StančićI,DraginS.Moderntechnologyofartificial inseminationindomesticanimals.ContAgri(NoviSad,Srb.)2011,60:204–14.

38.StančićB,BožićA,Stančić I,DraginS,Radović I,PetrovićM.Effectofseasononnativeboarspermqualityparameters.Proc.1stInternationalSymposiumonAnimalScience,Novem-ber8–10,2012.,Belgrade,Serbia,pp.65-70.

39.Stančić I,DraginS,StankovićB, JotanovićS.Effectofprotein contents in seminalplasmaonspermmotilityindilutedboarsemen.Proc.1stInternationalSymposiumonAnimalSci-ence,November8–10,2012.,Belgrade,Serbia,pp.149-54.

40.StančićI,ApićJ,RadovićI,DraginS,BožićA,ŽarkovićI,StančićB.Influenceofseason,boarsbreedandageonproteincontentvariationinseminalplasma.ContAgri(NoviSad,Srb.)2015,64(3-4)120-6.

41.Tsakmakidis IA,LymberopoulosAG,KhalifaTA.Relationshipbetweenspermquality traitsandfield-fertilityofporcinesemen.J Vet Sci 2010,11:151-154.

42.ZhuJ.BoarSeminalPlasmaComponentsandFertilization(MasterofScienceThesis).UniversityofAlberta,DepartmentofAgriculture,FoodandNutritionalScience,2000.

43.WaberskiD,HenningH,PetrunkinaAM.Assessmentofstorageeffectsinliquidpreservedboarsemen. Reprod Domest Anim 2011,46:45-8.

44.WolfJ,SmitalJ.Quantificationoffactorsaffectingsementraitsinartificialinseminationboarsfromanimalmodelanalyses.J Anim Sci 2009,87:1620-7.

THE INFLUENCE OF A BOAR AND THE SEASON ON CERTAIN PARAMETERS OF SPERM FERTILE POTENTIAL

Apic Jelena, Radovic Ivan, Stancic Ivan, Vakanjac Slobodanka

Inordertodeterminethemoreaccuratefertilepotentialofsperm,itseemsthattheconventionalparametersofboarsemenquality(theejaculatevolume,spermconcentra-tion,progressivemotility,percentageoflivespermandofthosewithintactacrosomalmor-phology)areinsufficient.Sincerecently,therehavebeennumerousstudiesprovingthatproteinconcentration inspermplasmahashighpositivecorrelationwithboar fertilepo-tential.Theresearchobjectivewastodeterminetheeffectofboarsaswellastheseasononthevariationofproteincontentinthespermplasma.Fortheresearchtherewereusedspermalfractionsof2boarswithhigh(V-boar)and2boarswithlow(N-boar)proteincon-tent inspermalplasma.Theejaculatesofboarsweretakenonceaweek,foramonth,duringoneyear(4×12=48ejaculatesperboar).Forproteinanalysisinthespermalplas-ma,thesampleswerepreparedbycentrifugation.Theejaculatevolume,proteinconcen-trationandprogressivemotilityvariedconsiderably(p<0.05orp<0.01)amongtheboarsaswellasinoneandthesameboar.Thevariationsofthesameparametersweredeter-minedalsoduringbothwarmandcoldseason.Ontheotherhand,proteinconcentrationwasratherconstant,andinV-boars(rangedfrom4to4.5%)whileinN-boars(rangedfrom2.3 to2.6%).Theseasondidnotsignificantlyaffect (p>0.01)proteincontent inspermplasma(V-boars:4to4.5%inwarmandcoldseason;N-boars:2.3do2.6%inwarmand2.3to2.5%incoldseason).Theobtainedresultsshowedthatmeasurementofproteincon-tentinboarspermplasmacouldbeausefulmethodfortheirranking,basedonfertilepo-tentialoffreshsemen.

Keywords:proteincontent,fertilityofsperm,boar,season.


174

ВЛИЯНИЕ ХРЯКА И ВРЕМЕНИ ГОДА НА ОТДЕЛЬНЫЕ ПАРАМЕТРЫ ФЕРТИЛИЗАЦИОННОГО ПОТЕНЦИАЛА СПЕРМАТОЗОИДОВ

Апич Елена, Радович Иван, Станчич Иван, Ваканяц Слободанка

В целях максимально точного определения фертилизационного потенциаласперматозоидовстандартныепараметрыкачествасеменихряков(объемэякулята,концентрация сперматозоидов, прогрессивная подвижность, процент живых спер-матозоидов, а также сперматозоидов с интактной акросомальной морфологией)являютсянедостаточными.Снедавнихпорсуществуютмногочисленныеисследов-ания, доказывающие, что концентрация белка в спермальной плазме имеет вы-сокую положительную корреляцию с фертилизационным потенциалом хряков.Цельюданногоисследованиябылоустановлениевлиянияхряка,а такжевлияниявремени года на вариативность содержания белка в спермальной плазме хряков.При проведении исследования использовались спермальные фракции 2 хряков свысоким (В-хряк) и2 хряков снизким (Н-хряк) содержаниембелкав спермальнойплазме.Сборэякулятау хряковпроводилсяодинразвнеделюв течениемесяцанапротяжении года (4×12=48порцийэякулятаот хряка).Дляанализабелка вспермальнойплазмеобразцыбылиподготовленыпутемцентрифугирования.Объемэякулята,концентрациясперматозоидовипрогрессивнаяподвижностьзначительноварьировались(p<0,05orp<0,01)средихряков,атакжеуодногоитогожехряка.Изменчивость параметров установлена в теплое и в холодное время года. Сдругой стороны, концентрация белка было достаточно постоянной, как у В-хряков(колебаласьот4до4,5%),такиуН-хряков(колебаласьот2,3до2,6%).Времягоданеоказывалодостаточноговлияния(p>0,01)насодержаниебелкавспермальнойплазме(В-хряки:от4до4,5%втеплоеивхолодноевремягода;Н-хряки:от2,3до2,6%в теплое, и от 2,3 до 2,5%в холодное время года).Полученные результатыпоказывают,чтоизмерениесодержаниябелкавспермальнойплазмехряковможетбыть эффективным методом их ранжирования на основе фертилизационногопотенциаласвежегосемени.

Ключевые слова: содержание белка, фертильность сперматозоидов, хряк,времягода.

РУССКИЙ


Documents

UTICAJ NERASTA I GODIŠNJE SEZONE NA POJEDINE … · 164 Vet. glasnik 70 (5-6) 163 - 174 (2016) Apić Jelena i sar.: Uticaj nerasta i godišnje sezone na pojedine parametre fertilizacionog