Predtransplantaciona imunološka testiranja bolesnika na programu transplantacije bubrega Doc.dr Svetlana Vojvodić

Zavod za transfuziju krvi Vojvodine

Odeljenje za tipizaciju tkiva

IMUNOLOŠKA PRIPREMA

BOLESNIKA cilj sticanje uvida u

imunološki rizik od postupka primene transplantacije

presudna su u izboru odgovarajuće terapijske strategije

vreme i broj testova koji se vrše moţe da varira u zavisnosti od specifiĉnosti transplantacionog programa, duţine ĉekanja na transplantaciju, broja i vrste imunizacijskih događaja kod svakog pojedinaĉnog pacijenta i drugih faktora

Tri grupe testiranja:

-određivenje imunogenetskih faktora (ABO, HLA,MICA/MICB sistema)

-detekcija i identifikacija anti-HLA antitela,anti-MICA/B antitela

-detekcija donor specifiĉnih antitela-CROSS MATCH

ODREĐIVANJE IMUNOGENETSKIH

FAKTORA - ABO sistem

Tri grupe gena

determinišu krvne

grupe ABO sistema:

ABO, Hh i Sese geni

Prisustvo izoaglutinina

anti-A i anti-B

PRIMENA TRANSPLANTACIJE I

KOD ABO INKOPATIBILIJE Plazmafereze - da fiziĉki uklone antitela

Imunoadsorpcija-otklanja samo anti A ili anti-B antitela

Imunoglobulin –koji putem vezivanja za antitela smanjuje destruktivnu aktivnost antitela

Splenektomija - slezina koncentriše B limfocite oko svojih krvnih sudova u borbi protiv infekcije, pa njeno uklanjanje, kod osoba sa visokim nivoom antitela spreĉava odbacivanje grafta

Anti-CD20 antitela (Rituksimab) – smanjuje nivo CD20 proteina, koji se nalazi na zidu većine B ćelija

ODREĐIVANJE IMUNOGENETSKIH

FAKTORA - HLA sistem

na 6. hromozomu u

regionu p21.3

prostor od 4

centimograma

0,1% humanog

genoma

redak crossing over

neravnoteţa vezivanja

alela:

A1B8,A2B5,A3B7,

A2B12,A33B14

HLA ANTIGENI

nasleđivanje u vidu

haplotipova

p= 1-(3/4)n

METODE DETEKCIJE U HLA

SISTEMU Serološke

Ćelijske:

mešana limfocitna kultura, ćelijski posredovana limfoliza, izo-elektrofokusiranje

Molekulske:

-RFLP(Restriction Fragment Lenght Polymorphism)

-PCR (Polimerase Chain Reaction):

SSP,SSO,PCR-RFLP, SBT,RT-PCR,PCR in situ, cDNK

CROSS-REACTIONS

SPLIT-ovi

SUPERTIPOVI

DISEKVILIBRIJUM LINKAŢE

IZBOR DONORA

ţivi srodni i podudarni u ABO i HLA sistemu

roditelji ili braća sestre

manje od 17% bolesnika ima srodnog donora:

hipertenzija (visok krvni pritisak)

bolesti bubrega

bolesti zavisnosti

Dijabetes

Trudnoća

kardiovaskularne bolesti

HIV

ekstremna gojaznosti

lista ĉekanja na

kadaveriĉnu Tx

Priprema:

-I HLA klasa serološkim testovima

-II HLA molekuleskim, PCR niske rezolucije

-RETIPIZACIJA IZ 2. uzorka

-match -DR,-B,-A

ANTI-HLA ANTITELA

Senzibilizacija alogenim HLA antigenima putem:

- trudnoća,

- transfuzija krvi,

- prethodnim transplantacijama

Preformisana anti-HLA antitela su udruţena sa:

- akutnim odbacivanjem bubrega i ostalih organa(jetra,pluća),

- neefektivnim transfuzijama trombocita,

- hroniĉnim odbacivanjem organa i

- transfuzijom udruţenim oštećenjem pluća (TRALI)

ODBACIVANJE TRANSPLANTATA

KLINIĈKI ZNAĈAJ ANTI-HLA

ANTITELA

Funkcionalnost

grafta

Pacijenti bez

anti-HLA

antitela

Pacijenti sa anti-

HLA antitelima

5 godina 85% 65%

10 godina 76% 53%

15 godina 56% 25%

Lee P.C., et al. Transplant Proceedings 2009;41:121-123.

METODE DETEKCIJE ANTI-

HLA ANTITELA

ANTIGEN SPECIFIĈNE

ELISA

Luminex tehnologija

protoĉna citometrija putem primene perli

ANTIGEN NON-SPECIFIĈNE

CDC

AHG-CDC PRA (anti-human globulin enhanced cytotoxicity PRA determination)

ćelijska protoĉna citometrija

KREIRANJE ISTORIJE HLA

ALOSENZIBILIZACIJE Identifikacija pacijenata koji imaju ili

nemaju aloantitela na antigene HLA klase I

i klase II

Određivanje specifiĉnosti antitela kod

pacijenata sa detektovanim cirkulišućim

antitelima

Praćenje razvoja antitela kod pacijenata koji

nemaju antitela

Svaka 3 meseca (mart, jun, septembar,

decembar), pohranjivanje svih seruma

CROSS-MATCH

Detekcija donor-specifiĉnih anti-HLA antitela I ili II klase

Metode:

-CDC

-AHG-CDC

-ELISA

-Luminex tehnologija

-Protoĉna citometrija

STRATEGIJA PRIMENE CROSS

MATCH-a

Odabir tehnike

prema senzitivnosti

Odabir seruma

Vreme primene Tx

Ţivi srodni donori :

-prospektivni

-finalni (unutar 48h od Tx)

Kadaveriĉni donori:

-serum unutar 48h od Tx

-istorijski serum

PRIMENA PROTOKOLA

DESENZIBILIZACIJE KOD

POZITIVNOG CROSS-MATCH-a Visoke doze IV imunoglobulina (2g/kg TT)

Izmene plazme (pre i posle Tx)

Imunoadsorpcija proteinom A

Primena anti-CD20 antitela

Primena antitimocitnog globulina

Splenektomija

Blokada komponente C5 komplementa (Eculizumab) ili anti-C5 antitelom

Primena proteazomne inhibicije plazma ćelija putem bortezomib-a

Gloor, J. & Stegall, M. D. Nat. Rev. Nephrol. 2010;6: 297–306.

ZAKLJUĆAK

Primena reproducibilnijih tehnika

detekcije anti-HLA antitela i CROSS-

MATCH-a

Permanentno unapređenje kvaliteta

rada u skladu sa standardima EFI

Uĉešće u aktivnostima za postanak

Srbije punopravnog ĉlana

Eurotransplanta