(57)【要約】

【課題】　安全で有効な発癌予防剤を提供する。

【解決手段】　本発明の発癌予防剤は、２４－メチルシ

クロアルタン－３β，２４，２４1－トリオール、２４1

－メトキシ－２４－メチルシクロアルタン－３β，２４

－ジオール、シクロアルタン－３，２４－ジオン、４，

４，１４－トリメチル－９，１９－シクロプレグナン－

３，２０－ジオン、２４，２５－ジヒドロキシシクロア

ルタン－３－オン、２５－ヒドロキシシクロアルト－２

３－エン－３－オン、２５－ヒドロキシ－２４－メトキ

シシクロアルタン－３－オンからなる群から選ばれた少

なくとも１種のシクロアルタン型トリテルペン系化合物

を含有する。

【選択図】図１

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発癌予防剤及びシクロアルタン型トリテルペン系化合物の製造方法秋久俊博、徳田春邦、浮谷基彦、渡辺建二、米今梨紗

【 特 許 請 求 の 範 囲 】【 請 求 項 １ 】　 シ ク ロ ユ ー カ レ ノ ー ル 、 ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ール 、 ２ ４ 1 － メ ト キ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル 、 シ ク ロ アル タ ン － ３ ， ２ ４ － ジ オ ン 、 ４ ， ４ ， １ ４ － ト リ メ チ ル － ９ ， １ ９ － シ ク ロ プ レ グ ナ ン －３ ， ２ ０ － ジ オ ン 、 ２ ４ ， ２ ５ － ジ ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ － オ ン 、 ２ ５ － ヒ ド ロキ シ シ ク ロ ア ル ト － ２ ３ － エ ン － ３ － オ ン 、 ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ － ２ ４ － メ ト キ シ シ ク ロ アル タ ン － ３ － オ ン か ら な る 群 か ら 選 ば れ た 少 な く と も １ 種 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペン 系 化 合 物 を 含 有 す る こ と を 特 徴 と す る 発 癌 予 防 剤 。【 請 求 項 ２ 】　 前 記 シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 、 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 た 化 合 物 を 基 質と し た 糸 状 菌 に よ る 微 生 物 変 換 反 応 か ら 得 ら れ る 反 応 生 成 物 、 あ る い は 米 糠 成 分 を 処 理 して 得 た 化 合 物 の 化 学 的 変 換 反 応 に よ っ て 得 ら れ る 反 応 生 成 物 で あ る こ と を 特 徴 と す る 請 求項 １ に 記 載 の 発 癌 予 防 剤 。【 請 求 項 ３ 】　 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 ら れ る 化 合 物 を 基 質 と し て 糸 状 菌 に よ る 微 生 物 変 換 を 行 う こ と でシ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 得 る こ と を 特 徴 と す る シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テル ペ ン 系 化 合 物 の 製 造 方 法 。【 発 明 の 詳 細 な 説 明 】【 技 術 分 野 】【 ０ ０ ０ １ 】　 本 発 明 は 発 癌 予 防 剤 及 び シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 の 製 造 方 法 に 関 し 、 特に シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 含 有 す る 発 癌 予 防 剤 及 び シ ク ロ ア ル タ ン 型 トリ テ ル ペ ン 系 化 合 物 の 製 造 方 法 に 関 す る 。【 背 景 技 術 】【 ０ ０ ０ ２ 】　 従 来 か ら 、 発 癌 予 防 剤 と し て ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 知 ら れ て い る （ 特 許 文 献 １ 参 照 ）。 こ の 特 許 文 献 １ で は 、 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 ら れ る γ － オ リ ザ ノ ー ル を 化 学 的 に 変 換 する こ と で 、 発 癌 予 防 に 有 効 な 数 種 の ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 得 る 技 術 が 示 さ れ て い る 。【 特 許 文 献 １ 】 特 開 ２ ０ ０ ３ － ２ ７ ７ ２ ６ ９ 号 公 報【 発 明 の 開 示 】【 発 明 が 解 決 し よ う と す る 課 題 】【 ０ ０ ０ ３ 】　 し か し な が ら 、 発 癌 予 防 の 大 き な ニ ー ズ に 鑑 み て 、 さ ら に 安 全 で 有 効 な 発 癌 予 防 剤 が 得ら れ な い も の か と の 期 待 は 大 き い 。　 本 発 明 は 、 上 述 の 課 題 に 鑑 み て な さ れ た も の で あ り 、 安 全 で 有 効 な 発 癌 予 防 剤 を 提 供 する こ と を 目 的 と し て い る 。【 課 題 を 解 決 す る た め の 手 段 】【 ０ ０ ０ ４ 】　 本 発 明 者 ら は 、 上 記 の 課 題 を 解 決 す る こ と を 目 的 と し て 、 従 来 か ら 安 全 性 及 び 優 れ た 発癌 予 防 効 果 が 報 告 さ れ て い る シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 に 着 目 し 、 さ ら に 優れ た 発 癌 予 防 効 果 を 有 す る 化 合 物 を 探 索 す べ く 鋭 意 研 究 を 行 っ た 。 そ の 結 果 、 糸 状 菌 を 用い る こ と で 、 優 れ た 発 癌 予 防 効 果 を 有 す る シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 得 るこ と が で き る の を 見 出 し た 。 す な わ ち 本 発 明 の 請 求 項 １ に よ る 発 癌 予 防 剤 は 、 シ ク ロ ユ ーカ レ ノ ー ル 、 ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ー ル 、 ２ ４ 1 － メト キ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル 、 シ ク ロ ア ル タ ン － ３ ， ２４ － ジ オ ン 、 ４ ， ４ ， １ ４ － ト リ メ チ ル － ９ ， １ ９ － シ ク ロ プ レ グ ナ ン － ３ ， ２ ０ － ジ オン 、 ２ ４ ， ２ ５ － ジ ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ － オ ン 、 ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ルト － ２ ３ － エ ン － ３ － オ ン 、 ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ － ２ ４ － メ ト キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ － オン か ら な る 群 か ら 選 ば れ た 少 な く と も １ 種 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 含

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有 す る こ と を 特 徴 と す る 。【 ０ ０ ０ ５ 】　 上 述 し た シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン で あ れ ば 、 発 癌 予 防 効 果 に 優 れ 、 か つ 、 案 税 も高 い 。　 な お 、 上 述 し た 本 発 明 の 化 合 物 に は 、 医 学 的 に 使 用 さ れ 薬 理 学 的 に 許 容 さ れ る 各 化 合 物の 塩 も 含 む も の で あ る も の 。 こ の よ う な 塩 と し て 、 例 え ば 、 ナ ト リ ウ ム 塩 、 カ リ ウ ム 塩 、リ チ ウ ム 塩 、 の よ う な ア ル カ リ 金 属 塩 、 カ ル シ ウ ム 塩 、 マ グ ネ シ ウ ム 塩 、 の よ う な ア ル カリ 土 類 金 属 塩 、 ア ル ミ ニ ウ ム 塩 、 鉄 塩 、 亜 鉛 塩 、 銅 塩 、 ニ ッ ケ ル 塩 、 コ バ ル ト 塩 等 の 金 属塩 ； ア ン モ ニ ウ ム 塩 の よ う な 無 機 塩 、 ｔ － オ ク チ ル ア ミ ン 塩 、 ジ ベ ン ジ ル ア ミ ン 塩 、 モ ルホ リ ン 塩 、 グ ル コ サ ミ ン 塩 、 フ ェ ニ ル グ リ シ ン ア ル キ ル エ ス テ ル 塩 、 エ チ レ ン ジ ア ミ ン 塩、 Ｎ － メ チ ル グ ル カ ミ ン 塩 、 グ ア ニ ジ ン 塩 、 ジ エ チ ル ア ミ ン 塩 、 ト リ エ チ ル ア ミ ン 塩 、 ジシ ク ロ ヘ キ シ ル ア ミ ン 塩 、 Ｎ ， Ｎ '－ ジ ベ ン ジ ル エ チ レ ン ジ ア ミ ン 塩 、 ク ロ ロ プ ロ カ イ ン塩 、 プ ロ カ イ ン 塩 、 ジ エ タ ノ ー ル ア ミ ン 塩 、 Ｎ － ベ ン ジ ル － フ ェ ネ チ ル ア ミ ン 塩 、 ピ ペ ラジ ン 塩 、 テ ト ラ メ チ ル ア ン モ ニ ア 塩 、 ト リ ス （ ヒ ド ロ キ シ メ チ ル ） ア ミ ノ メ タ ン 塩 の よ うな 有 機 ア ミ ン 塩 ； 及 び 、 グ リ シ ン 塩 、 リ ジ ン 塩 、 ア ル ギ ニ ン 塩 、 オ ル ニ チ ン 塩 、 ア ス パ ラギ ン 塩 の よ う な ア ミ ノ 酸 塩 等 を 挙 げ る こ と が で き る 。【 ０ ０ ０ ６ 】　 ま た 、 上 述 し た 請 求 項 １ に 記 載 の 本 発 明 の 化 合 物 が 溶 剤 和 物 （ 例 え ば 水 和 物 ） を 形 成 する 場 合 は 、 こ れ ら も す べ て 本 発 明 に 含 ま れ る 。 例 え ば 、 本 発 明 の 化 合 物 が 、 大 気 中 に 放 置さ れ た り 、 ま た は 再 結 晶 す る こ と に よ り 、 水 分 を 吸 収 し 、 吸 着 水 が 付 着 し た り 、 水 和 物 を形 成 す る 場 合 が あ る 。 本 発 明 に は こ の よ う な 溶 剤 和 物 も 含 ま れ る 。　 さ ら に 、 請 求 項 １ に 記 載 の 本 発 明 の 化 合 物 は 、 そ れ ぞ れ い く つ か の 不 斉 炭 素 原 子 を 有 して お り 、 こ の た め 、 種 々 の 光 学 異 性 体 が 存 在 す る 。 本 発 明 に お い て は 、 特 に 記 述 し な い 限り 、 ラ セ ミ 化 合 物 を 含 む こ れ ら の 異 性 体 及 び こ れ ら の 異 性 体 の 混 合 物 を も す べ て 含 む も ので あ る 。【 ０ ０ ０ ７ 】　 ま た 、 本 発 明 の 請 求 項 ２ に よ る 発 癌 予 防 剤 は 、 請 求 項 １ に お い て 、 前 記 シ ク ロ ア ル タ ン型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 、 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 た 化 合 物 を 基 質 と し た 糸 状 菌 に よ る 微生 物 変 換 反 応 か ら 得 ら れ る 反 応 生 成 物 、 あ る い は 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 た 化 合 物 の 化 学 的変 換 反 応 に よ っ て 得 ら れ る 反 応 生 成 物 で あ る こ と を 特 徴 と す る 。　 さ ら に 、 本 発 明 は 新 規 で 優 れ た 発 癌 予 防 効 果 を 有 す る シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系化 合 物 を 提 供 す る の み で な く 、 自 律 神 経 失 調 治 療 薬 等 と し て も 有 用 な シ ク ロ ア ル タ ン 型 トリ テ ル ペ ン 系 化 合 物 の 新 た な 製 造 方 法 を 提 供 す る も の で あ る 点 に お い て 重 要 な 意 味 を 有 する 。 す な わ ち 、 本 発 明 の 請 求 項 ３ に よ る は 、 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 ら れ る 化 合 物 を 基 質 とし て 糸 状 菌 に よ る 微 生 物 変 換 を 行 う こ と で シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 得 るこ と を 特 徴 と す る 。【 ０ ０ ０ ８ 】　 米 糠 成 分 を 処 理 し て 得 ら れ る 化 合 物 を 基 質 と し て 糸 状 菌 に よ る 微 生 物 変 換 を 行 う こ と でシ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 を 得 る こ と が で き る 。 こ れ は 、 よ り 安 全 な シ ク ロア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 の 製 造 の 可 能 性 、 糸 状 菌 の 大 量 培 養 、 変 換 反 応 の 関 連 遺伝 子 を 組 み 込 ん だ 形 質 転 換 体 の 培 養 や 糸 状 菌 か ら 抽 出 さ れ る 変 換 反 応 の 関 連 酵 素 の 利 用 によ る 大 量 製 造 の 可 能 性 を 示 唆 す る も の で あ る 。　 こ こ で 、 用 い る こ と が で き る 糸 状 菌 と し て は 、 例 え ば Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 属 、 Ｍ ｏ ｒｔ ｉ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 属 、 Ｃ ｈ ａ ｅ ｔ ｏ ｍ ｉ ｕ ｍ 属 、 Ａ ｓ ｐ ｅ ｒ ｇ ｉ ｌ ｌ ｕ ｓ 属 な ど が 挙 げ られ る 。 Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 属 の 中 で も 、 さ ら に Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏｉ ｄ ｅ ｓ が 好 ま し い 。【 発 明 の 効 果 】【 ０ ０ ０ ９ 】　 本 発 明 に よ れ ば 、 安 全 か つ 発 癌 予 防 効 果 に 優 れ た 発 癌 予 防 剤 が 提 供 さ れ る 。【 発 明 を 実 施 す る た め の 最 良 の 形 態 】

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【 ０ ０ １ ０ 】　 次 に 、 実 施 例 に よ り 本 発 明 を 具 体 的 に 説 明 す る 。 す な わ ち 、 本 発 明 に 係 る 微 生 物 変 換 反応 に よ る 発 癌 予 防 効 果 を 有 す る 化 合 物 の 生 成 、 単 離 、 単 離 さ れ た 化 合 物 の 同 定 及 び 構 造 解析 、 並 び に 、 本 発 明 に 係 る 発 癌 予 防 剤 の 効 果 確 認 試 験 に つ い て 説 明 す る 。［ 基 質 の 調 製 ］　 微 生 物 変 換 反 応 の 基 質 で あ る シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル （ 以 下 、 本 明 細 書 で は 「 化 合 物 １ 」 と記 す こ と も あ る 。 ） 、 ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ 以 下 、 本 明 細 書 で は 「 化 合 物２ 」 と 記 す こ と も あ る 。 ） 、 及 び 、 シ ク ロ ア ル テ ノ ン （ 以 下 、 本 明 細 書 で は 「 化 合 物 ３ 」と 記 す こ と も あ る 。 ） の 調 製 に つ い て 説 明 す る 。【 ０ ０ １ １ 】　 ま ず 、 γ － オ リ ザ ノ ー ル か ら 、 文 献 記 載 （ Ｌ ． 　 Ｊ ． 　 Ｇ ｏ ａ ｄ 、 Ｔ ． 　 Ａ ｋ ｉ ｈ ｉ ｓａ 、 “ Ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ 　 ｏ ｆ 　 Ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｌ ｓ ” 、 Ｂ ｌ ａ ｃ ｋ ｉ ｅ 　 Ａ ｃ ａ ｄ ｅ ｍ ｉ ｃ　 ＆ 　 Ｐ ｒ ｏ ｆ ｅ ｓ ｓ ｉ ｏ ｎ ａ ｌ 、 ロ ン ド ン 、 ２ ９ ２ 項 、 １ ９ ９ ７ 年 ） の 方 法 に 基 づ き 、分 別 再 結 晶 法 に よ り 、 シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル フ ェ ル ラ ー ト 及 び ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タノ ー ル フ ェ ル ラ ー ト を 調 製 し た 。 そ の 後 、 シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル フ ェ ル ラ ー ト 及 び ２ ４ － メチ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル フ ェ ル ラ ー ト を 、 そ れ ぞ れ ア ル カ リ 加 水 分 解 （ ５ ％ 水 酸 化 カ リウ ム ・ メ タ ノ ー ル 溶 液 ； 加 熱 還 流 ； ３ 時 間 ） す る こ と で 、 シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル （ 化 合 物 １） 及 び ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ 化 合 物 ２ ） を 調 製 し た 。 ま た シ ク ロ ア ル テ ノン （ 化 合 物 ３ ） は 、 化 合 物 １ の Ｃ 3 位 の 水 酸 基 を Ｃ ｒ Ｏ 3 ／ Ｃ 5 Ｈ 5 Ｎ に て 化 学 的 に 酸 化 し て調 製 し た 。【 ０ ０ １ ２ 】［ 変 換 反 応 菌 体 の 調 製 ］　 微 生 物 変 換 反 応 に 用 い る 糸 状 菌 Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ の 調 製に つ い て 説 明 す る 。 ま ず 、 糸 状 菌 Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ 、 よ り具 体 的 に 本 実 施 例 で は Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ 　 Ｉ Ｆ Ｏ ８ ８ ３ １（ 財 団 法 人 　 発 酵 研 究 所 ） を ポ テ ト デ キ ス ト ロ ー ス 液 体 培 地 （ Ｐ Ｄ Ｂ 、 日 水 製 薬 株 式 会 社製 ） ４ ０ ０ ｍ Ｌ に て 、 室 温 で ５ 日 間 、 撹 拌 培 養 を 行 っ た 。 さ ら に 新 た に 調 製 し た Ｐ Ｄ Ｂ ３Ｌ に 植 菌 し 、 室 温 で ３ 日 間 、 大 量 培 養 を 行 っ た 。 培 養 終 了 後 、 菌 体 を 水 洗 浄 し 、 微 生 物 変換 反 応 に 用 い る 変 換 反 応 菌 体 を 調 製 し た 。【 ０ ０ １ ３ 】　 な お 、 本 発 明 に お い て は 、 変 換 反 応 菌 体 の 調 製 工 程 に お け る 培 養 方 法 と し て は 、 通 常 微生 物 の 大 量 培 養 に 用 い ら れ る 培 養 法 で あ れ ば 特 に 限 定 は な い が 、 例 え ば 、 上 記 の 撹 拌 培 養法 、 振 盪 培 養 法 、 通 気 培 養 法 等 を 挙 げ る こ と が で き る 。 こ こ で 挙 げ ら れ た い ず れ の 培 養 法も 、 好 気 的 条 件 下 で 行 う こ と が 好 ま し い 。 工 業 的 培 養 に は 、 通 気 撹 拌 培 養 法 が 適 し て い る。【 ０ ０ １ ４ 】［ 微 生 物 変 換 反 応 ］　 基 質 を ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド に 溶 解 さ せ 、 こ れ を 純 水 に 加 え て 反 応 液 を 調 製 し た 。 こ の反 応 溶 液 に 変 換 反 応 菌 体 を 加 え 、 室 温 で １ ０ 日 間 、 通 気 培 養 を 行 っ た 。［ 化 合 物 の 単 離 ］　 反 応 終 了 後 、 反 応 溶 液 を 酢 酸 エ チ ル に て 抽 出 を 行 っ た 。 こ の 抽 出 物 に つ い て 、 シ リ カ ゲル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー 、 オ ク タ デ シ ル シ リ カ （ Ｏ Ｄ Ｓ ） カ ラ ム 分 取 高 速 液 体 ク ロ マト グ ラ フ ィ ー （ Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ） に よ り 分 画 を 行 っ た 。 な お 本 実 施 例 で 用 い た 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ の カラ ム は 、 Ｐ ｅ ｇ ａ ｓ ｉ ｌ 　 Ｏ Ｄ Ｓ （ （ 株 ） セ ン シ ュ ー 科 学 製 、 充 填 剤 ： 粒 子 径 ５ μ ｍ 、 カラ ム ： 長 さ ２ ５ ｃ ｍ × 内 径 １ ０ ｍ ｍ ） で あ る 。【 ０ ０ １ ５ 】［ シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル の 微 生 物 変 換 反 応 ］　 シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル （ ５ ０ ７ ｍ ｇ ） を 基 質 と し て 上 記 の 方 法 で 微 生 物 変 換 反 応 を 行 い 、そ の 反 応 溶 液 か ら 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 （ ５ ３ ６ ｍ ｇ ） を 得 た 。 以 下 に 、 こ の 酢 酸 エ チ ル 抽 出物 の シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ る 分 画 、 及 び 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ に よ る 変 換 生 成

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物 の 単 離 の 詳 細 を 示 す 。　 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り Ｆ ｒ ． １ （ 溶 離 液 、 ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エチ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； １ １ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ２ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ４ ２ ｍｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ３ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ３ ０ ４ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ４ （ ｎ －ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； １ ９ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ５ （ ｎ － へ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝９ ： １ ； ４ ０ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ６ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ４ ＝ １ ： １ ； ２ １ ｍ ｇ ） 、 Ｆｒ ． ７ （ 酢 酸 エ チ ル ； ９ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ８ （ メ タ ノ ー ル ； ５ ５ ｍ ｇ ） を 得 た 。【 ０ ０ １ ６ 】　 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 展 開 液 ： メ タ ノ ー ル － 水 － 酢 酸 （ ９ ５ ： ５ ： １ ） 、 ３ ． ０ ｍ Ｌ ／ 分 ］ を行 い 、 Ｆ ｒ ． ２ か ら 、 シ ク ロ ア ル テ ノ ン （ 化 合 物 ３ ； ２ ４ ． ７ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ８ ． ８ 分） 、 Ｆ ｒ ． ４ か ら 、 シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ５ － ト リ オ ー ル （ 化 合 物 ４ ； ４ ． ８ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ２ ． ４ 分 ） 、 Ｆ ｒ ． ５ か ら 、 シ ク ロ ア ル ト － ２ ５ － エ ン － ３ β ， ２ ４ －ジ オ ー ル （ 化 合 物 ５ ； ４ ． １ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ３ ． ２ 分 ） を 単 離 し た （ 図 １ 参 照 ） 。 な お、 未 反 応 の 基 質 で あ る シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル （ 化 合 物 １ ） は Ｆ ｒ ． ３ 成 分 と し て 回 収 さ れ た。【 ０ ０ １ ７ 】［ ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル の 微 生 物 変 換 反 応 ］　 ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ ５ ０ ０ ｍ ｇ ） を 基 質 と し て 用 い 、 上 記 の 方 法 で 微生 物 変 換 反 応 を 行 い 、 そ の 反 応 溶 液 か ら 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 （ ４ ４ ２ ｍ ｇ ） を 得 た 。 以 下 に、 こ の 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 の シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ る 分 画 、 及 び 分 取 ＨＰ Ｌ Ｃ に よ る 変 換 生 成 物 の 単 離 の 詳 細 を 示 す 。【 ０ ０ １ ８ 】　 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り Ｆ ｒ ． １ （ 溶 離 液 、 ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エチ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ２ ５ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ２ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ３ ５ ５ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ３ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ２ ３ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ４ （ ｎ －ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ５ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ５ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９： １ ； １ ２ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ６ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ： １ ； １ ９ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ．７ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ８ ： ２ ； ９ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ８ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チル ＝ １ ： １ ； ６ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ９ （ 酢 酸 エ チ ル ； ８ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． １ ０ （ メ タ ノ ー ル ； ３１ ｍ ｇ ） を 得 た 。【 ０ ０ １ ９ 】　 こ の う ち 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 展 開 液 ： メ タ ノ ー ル － 酢 酸 （ １ ０ ０ ： １ ） 、 ３ ． ０ ｍ Ｌ ／ 分 ］を 行 い 、 Ｆ ｒ ． ２ か ら シ ク ロ ユ ー カ レ ノ ー ル （ 化 合 物 ６ ； ４ ． ８ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ７ ． ２分 ） 、 ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ー ル （ 化 合 物 ７ ； ３ ．７ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ８ ． ４ 分 ） 、 ２ ４ 1 － メ ト キ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ，２ ４ － ジ オ ー ル （ 化 合 物 ８ ； ６ ． ５ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ８ ． ４ 分 ） を 単 離 し た 。 Ｆ ｒ ． ３ から シ ク ロ ユ ー カ レ ノ ー ル （ 化 合 物 ６ ； ４ ． ８ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ７ ． ２ 分 ） 、 ２ ４ 1 － メ トキ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル （ 化 合 物 ８ ； ６ ． ５ ｍ ｇ ； 保持 時 間 １ ８ ． ４ 分 ） を 単 離 し た 。 ま た 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 展 開 液 ： メ タ ノ ー ル － 水 － 酢 酸 （ ９５ ： ５ ： １ ） 、 ３ ． ０ ｍ Ｌ ／ 分 取 に よ り 、 Ｆ ｒ ． ５ か ら シ ク ロ ア ル ト － ２ ５ － エ ン － ３ β， ２ ４ － ジ オ ー ル （ 化 合 物 ５ ； ３ ． ６ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ２ ６ ． ８ 分 ） を 単 離 し た （ 図 ２ 参 照） 。 な お 、 Ｆ ｒ ． ２ に 未 反 応 基 質 で あ る ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ 化 合 物 ２ ）は Ｆ ｒ ． ２ 成 分 と し て 回 収 さ れ た 。【 ０ ０ ２ ０ 】［ シ ク ロ ア ル テ ノ ン の 微 生 物 変 換 反 応 ］　 シ ク ロ ア ル テ ノ ン （ ５ ６ ８ ｍ ｇ ） を 基 質 と し て 上 記 の 方 法 で 微 生 物 変 換 反 応 を 行 い 、 その 反 応 溶 液 か ら 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物 （ ５ ４ ６ ｍ ｇ ） を 得 た 。 以 下 に 、 こ の 酢 酸 エ チ ル 抽 出 物の シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ る 分 画 、 及 び 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ に よ る 変 換 生 成 物の 単 離 の 詳 細 を 示 す 。 シ リ カ ゲ ル カ ラ ム ク ロ マ ト グ ラ フ ィ ー に よ り Ｆ ｒ ． １ ［ 溶 離 液 、 ｎ－ ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ ９ ５ ： ５ ； ３ ０ ９ ｍ ｇ ］ 、 Ｆ ｒ ． ２ ［ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ

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ル ＝ ８ ： ２ ； ３ ２ ｍ ｇ ］ 、 Ｆ ｒ ． ３ （ ｎ － ヘ キ サ ン ： 酢 酸 エ チ ル ＝ １ ： １ ； １ ３ ０ ｍ ｇ ）、 Ｆ ｒ ． ４ （ 酢 酸 エ チ ル ； ３ ０ ｍ ｇ ） 、 Ｆ ｒ ． ５ （ メ タ ノ ー ル ； １ ０ ７ ｍ ｇ ） を 得 た 。【 ０ ０ ２ １ 】　 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 展 開 液 ： メ タ ノ ー ル － 水 － 酢 酸 （ ９ ５ ： ５ ： １ ） 、 ３ ． ０ ｍ Ｌ ／ 分 ］ を行 い 、 Ｆ ｒ ． １ か ら 、 シ ク ロ ア ル タ ン － ３ ， ２ ４ － ジ オ ン （ 化 合 物 ９ ； ３ ． １ ｍ ｇ ； 保 持時 間 １ ６ ． ２ 分 ） 、 ２ ４ － ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ル ト － ２ ５ － エ ン － ３ － オ ン （ 化 合 物 １ １； ５ ． ２ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ３ ． ８ 分 ） 、 ２ ４ ， ２ ５ － ジ ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ －オ ン （ 化 合 物 １ ３ ； ５ ． ３ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ８ ． ７ 分 ） 、 ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ － ２ ４ － メ ト キシ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ － オ ン （ 化 合 物 １ ５ ； ４ ２ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ２ ． ９ 分 ） を 単 離 し た。 Ｆ ｒ ． ２ か ら 、 ４ ， ４ ， １ ４ － ト リ メ チ ル － ９ ， １ ９ － シ ク ロ プ レ グ ナ ン － ３ ， ２ ０ －ジ オ ン （ 化 合 物 １ ０ ； ３ ． ５ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 ６ ． ９ 分 ） 、 化 合 物 １ １ （ ５ ． ２ ｍ ｇ ； 保 持時 間 １ ３ ． ８ 分 ） 、 シ ク ロ ア ル ト － ２ ５ － エ ン － ３ ， ２ ４ － ジ オ ン （ 化 合 物 １ ２ ； ３ ． ０ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ９ ． ５ 分 ） を 単 離 し た 。 Ｆ ｒ ． ３ か ら 、 化 合 物 １ ３ （ ５ ． ３ ｍ ｇ ； 保 持時 間 ８ ． ７ 分 ） 、 ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ シ ク ロ ア ル ト － ２ ３ － エ ン － ３ － オ ン （ 化 合 物 １ ４ ；３ ． ９ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ６ ． ５ 分 ） 、 を 単 離 し た （ 図 ３ 参 照 ） 。 な お 、 反 応 基 質 で あ る シク ロ ア ル テ ノ ン は Ｆ ｒ ． １ 成 分 と し て 回 収 さ れ た 。【 ０ ０ ２ ２ 】［ 化 合 物 ４ ～ １ ５ の 構 造 解 析 及 び 同 定 に つ い て ］　 上 記 の よ う に し て 単 離 し た １ ２ 種 の 化 合 物 ４ ～ １ ５ に つ い て 構 造 解 析 及 び 同 定 を 行 っ たの で 説 明 す る 。 化 合 物 ４ ～ １ ５ の 構 造 解 析 は Ｍ Ｓ 、 Ｉ Ｒ 、 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 、 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ 、及 び ２ 次 元 Ｎ Ｍ Ｒ 法 で あ る 相 関 分 光 法 （ 1 Ｈ － 1 Ｈ Ｃ Ｏ Ｓ Ｙ ） 、 異 種 核 多 量 子 コ ヒ ー レ ン ス法 （ Ｈ Ｍ Ｑ Ｃ ） 、 異 種 核 遠 隔 多 量 子 相 関 法 （ Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ ） 、 及 び 、 核 オ ー バ ー ハ ウ ザ ー 交 換分 光 法 （ Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ） を 用 い て 行 っ た 。 構 造 解 析 を 行 っ た １ ２ 種 の 化 合 物 ４ ～ １ ５ の 化 学構 造 式 を 図 １ ～ 図 ３ に 示 す 。【 ０ ０ ２ ３ 】　 こ れ ら の う ち 、 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の ４ 種 は こ れ ま で 文 献 記 載 の な い 新 規 化 合 物で あ る 。 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ を Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ デ ータ と と も に 表 １ ～ ４ に 示 し た 。 ま た 、 図 ４ に は 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の 炭 素 番 号を 示 し た 構 造 式 を 、 図 ５ に は こ れ ら の 新 規 化 合 物 の Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル 法 に よ り 得 ら れた 核 オ ー バ ー ハ ウ ザ ー 効 果 （ Ｎ Ｏ Ｅ ） 相 関 関 係 を 立 体 構 造 式 と と も に 両 方 向 の 矢 印 で 示 した 。 こ れ ら の Ｎ Ｏ Ｅ 相 関 は 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ に つ い て 帰 属 し た 構 造 と 矛 盾 は し ない 。【 ０ ０ ２ ４ 】　 ま た 既 知 の 化 合 物 ４ ～ ６ 、 ９ 、 １ １ ～ １ ４ の 構 造 は 、 こ れ ら 各 化 合 物 の 種 々 の ス ペ ク トル 値 を 文 献 （ 以 下 に 示 す ） 値 と 比 較 す る こ と に よ り 確 認 し た 。　 化 合 物 ４ ： 稲 田 ら Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ 　 ４ ６ 巻 、 ２ 号 、 ３ ７ ９ － ３ ８ １ 頁 、１ ９ ９ ７ 年　 化 合 物 ５ 、 １ １ ： Ｃ ａ ｂ ｒ ｅ ｒ ａ ら Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ 　 ｏ ｆ 　 Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ 　 Ｐ ｒ ｏ ｄｕ ｃ ｔ ｓ 　 ５ ９ 巻 、 ３ ４ ３ － ３ ４ ７ 頁 、 １ ９ ９ ６ 年　 化 合 物 ６ ： 秋 久 ら Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ ４ ７ 巻 、 ６ 号 、 １ １ ０ ７ － １ １ １ ０ 頁、 １ ９ ９ ８ 年化 合 物 ９ 、 １ ３ ： 稲 田 ら Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ 　 ｏ ｆ 　 Ｎ ａ ｔ ｕ ｒ ａ ｌ 　 Ｐ ｒ ｏ ｄ ｕ ｃ ｔ ｓ 　 ５８ 巻 、 １ １ ４ ３ － １ １ ４ ６ 頁 、 １ ９ ９ ５ 年　 化 合 物 １ ２ 、 １ ４ ： Ｄ ｅ Ｐ ａ ｓ ｃ ｕ ａ ｌ ら Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ 　 ２ ６ 巻 、 １７ ６ ７ － １ ７ ７ ６ 頁 、 １ ９ ８ ７ 年　 但 し 、 こ れ ら の 化 合 物 の 発 癌 予 防 効 果 に つ い て は 知 ら れ て い な い 。【 ０ ０ ２ ５ 】　 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の 諸 性 質 及 び ス ペ ク ト ル デ ー タ を 次 に 示 す 。（ １ ） ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ー ル （ 化 合 物 ７ ）　 無 色 結 晶 ． 融 点 ： １ ７ ５ ～ １ ７ ７ ℃ ． 比 旋 光 度 　 ［ α ］ 2 5

D ： ＋ ２ ５ ． ５ ０ （ 濃 度 　 ｃ

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＝ ０ ． １ ０ （ ｇ ／ １ ０ ０ ｍ Ｌ ） 、 溶 媒 ク ロ ロ ホ ル ム ） ． Ｉ Ｒ 　 ν m a x ： ３ ４ ０ ７ 、 ２ ９ ２８ ｃ ｍ - 1

Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 、 （ 相 対 イ オ ン 強 度 ） ） ： ４ ７ ４ （ ８ ） 〔 Ｍ 〕 + 、 ４ ５ ６ （ ３ ０ ）［ Ｍ － Ｈ 2 Ｏ ］ + 、 ４ ４ １ （ ２ ３ ） ［ ｍ ／ ｚ ４ ５ ６ － Ｃ Ｈ 3 ］ 、 ４ ２ ３ （ ３ ０ ） ［ ｍ ／ ｚ ４４ １ － Ｈ 2 Ｏ ］ + 、 ３ ３ ４ （ ２ ３ ） 、 ２ ０ ３ （ ３ ２ ） 、 １ ７ ５ （ ５ ７ ） 、 ９ ５ （ １ ０ ０ ） ．高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 ） ： ４ ７ ４ ． ４ ０ ６ ４ （ 理 論 値 Ｃ 3 1 Ｈ 5 4 Ｏ 3 ［ Ｍ － Ｈ 2 Ｏ ］+ ４ ７ ４ ． ４ ０ ７ ３ ） ．　 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ デ ー タ は Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ デ ー タ と と も に 表 １ に 示 し た 。　 化 合 物 ７ の 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ （ １ ５ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 、 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ （ ６ ０ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 及 び Ｈ Ｍ ＢＣ ス ペ ク ト ル デ ー タ （ 溶 媒 ： Ｃ Ｄ Ｃ ｌ 3 ）【 ０ ０ ２ ６ 】

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【 表 １ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ２ ７ 】（ ２ ） ２ ４ 1 － メ ト キ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル （ 化 合 物８ ）　 無 色 結 晶 ． 融 点 ： １ ６ ８ ～ １ ７ １ ℃ ． 比 旋 光 度 　 ［ α ］ 2 5

D ： ＋ ４ ． ３ ° （ 濃 度 ｃ ＝ ０． １ ０ （ ｇ ／ １ ０ ０ ｍ Ｌ ） 、 溶 媒 ク ロ ロ ホ ル ム ） ． Ｉ Ｒ 　 ν m a x ： ３ ４ ０ ９ 、 ２ ９ ３ ８ ｃｍ - 1 ．

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(8) JP 2006-131595 A 2006.5.25

Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 、 （ 相 対 イ オ ン 強 度 ） ） ： ４ ８ ８ （ １ ３ ） 〔 Ｍ 〕 + 、 ４ ７ ０ （ ４ ５） ［ Ｍ － Ｈ 2 Ｏ ］ + 、 ４ ５ ７ （ １ ０ ０ ） 、 ４ ３ ８ （ ３ ７ ） ［ ｍ ／ ｚ ４ ７ ０ － Ｈ Ｏ Ｃ Ｈ 3 ］ 、４ ２ ３ （ ５ ２ ） ［ ｍ ／ ｚ ４ ３ ８ － Ｃ Ｈ 3 ］ 、 ３ １ ７ （ ８ ３ ） 、 １ ７ ５ （ ４ ４ ） 、 ９ ５ （ ６８ ） ．高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 ） ： ４ ８ ８ ． ４ ２ ２ ８ （ 理 論 値 Ｃ 3 1 Ｈ 5 6 Ｏ 3 ［ Ｍ ］ + ４ ８ ８． ４ ２ ２ ９ ） ．　 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ デ ー タ は Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ デ ー タ と と も に 表 ２ に 示 し た 。　 化 合 物 ８ の 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ （ １ ５ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 、 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ （ ６ ０ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 及 び Ｈ Ｍ ＢＣ ス ペ ク ト ル デ ー タ （ 溶 媒 ： Ｃ Ｄ Ｃ ｌ 3 ）【 ０ ０ ２ ８ 】 10

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【 表 ２ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ２ ９ 】（ ３ ） ４ ， ４ ， １ ４ － ト リ メ チ ル － ９ ， １ ９ － シ ク ロ プ レ グ ナ ン － ３ ， ２ ０ － ジ オ ン （ 化合 物 １ ０ ）　 無 色 結 晶 ． 融 点 ： １ ６ ５ ～ １ ６ ８ ℃ ． 比 旋 光 度 　 ［ α ］ 2 5

D ： ＋ ８ ． ３ ０ （ 濃 度 ｃ ＝ ０． １ ６ （ ｇ ／ １ ０ ０ ｍ Ｌ ） 、 溶 媒 ク ロ ロ ホ ル ム ） ． Ｉ Ｒ 　 ν m a x ： ２ ９ ３ １ 、 １ ７ １ ０ ｃ

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ｍ - 1 ．Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 、 （ 相 対 イ オ ン 強 度 ） ） ： ３ ５ ６ （ １ ０ ０ ） 〔 Ｍ 〕 + 、 ３ ４ １ （ ５２ ） ［ Ｍ － Ｃ Ｈ 3 ］

+ 、 ３ １ ３ （ ５ ２ ） ［ ｍ ／ ｚ ３ ４ １ － Ｃ Ｏ ］ 、 ２ ７ １ （ ２ ６ ） ［ ｍ ／ ｚ３ １ ３ － Ｃ 3 Ｈ 6 ］ 、 ２ １ ８ （ １ ０ ０ ） ［ ｍ ／ ｚ ２ ７ １ － Ｃ 4 Ｈ 6 ］ 、 １ ７ ５ （ ７ ０ ） 、 １ ３７ （ ５ ０ ） 、 １ ２ １ （ ４ ７ ） 、 １ ０ ７ （ ６ ０ ） 、 ９ ５ （ ６ ８ ） ．高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 ） ： ３ ５ ６ ． ２ ７ １ ４ （ 理 論 値 Ｃ 2 4 Ｈ 3 6 Ｏ 2 ［ Ｍ ］ + ３ ５ ６． ２ ７ １ ５ ） ．　 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ デ ー タ は Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ デ ー タ と と も に 表 ３ に 示 し た 。　 化 合 物 １ ０ の 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ （ １ ５ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 、 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ （ ６ ０ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 及 び Ｈ ＭＢ Ｃ ス ペ ク ト ル デ ー タ （ 溶 媒 ： Ｃ Ｄ Ｃ ｌ 3 ）【 ０ ０ ３ ０ 】【 表 ３ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ３ １ 】（ ４ ） ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ － ２ ４ － メ ト キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ － オ ン （ 化 合 物 １ ５ ）　 無 色 結 晶 ． 融 点 ： １ ９ ８ ～ １ ９ ９ ℃ ． 比 旋 光 度 　 ［ α ］ 2 5

D ： ＋ １ ６ ． ４ ０ （ 濃 度 ｃ ＝

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０ ． １ ８ （ ｇ ／ １ ０ ０ ｍ Ｌ ） 、 溶 媒 ク ロ ロ ホ ル ム ） ． Ｉ Ｒ 　 ν m a x ： ３ ４ ４ ５ 、 ２ ９ ３ １、 １ ７ １ ０ ｃ ｍ - 1 ．Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 、 （ 相 対 イ オ ン 強 度 ） ） ： ４ ７ ２ （ １ ５ ） 〔 Ｍ 〕 + 、 ４ ４ ０ （ ４ ５） ［ Ｍ － Ｈ Ｏ Ｃ Ｈ 3 ］

+ 、 ３ １ ３ （ ５ ０ ） ［ Ｍ － 側 鎖 （ Ｃ 9 Ｈ 1 9 Ｏ 2 ） ］ + 、 ２ ７ １（ ５ ） 、 ７ ３ （ １ ０ ０ ） ．高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ ｍ ／ ｚ 値 ） ： ４ ７ ２ ． ３ ９ ２ ４ （ 理 論 値 Ｃ 3 1 Ｈ 5 2 Ｏ 3 ［ Ｍ ］ + ４ ７ ２． ３ ９ １ ６ ）　 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ デ ー タ は Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ デ ー タ と と も に 表 ４ に 示 し た　 化 合 物 １ ５ の 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ （ １ ５ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 、 1 Ｈ － Ｎ Ｍ Ｒ （ ６ ０ ０ Ｍ Ｈ ｚ ） 及 び Ｈ ＭＢ Ｃ ス ペ ク ト ル デ ー タ （ 溶 媒 ： Ｃ Ｄ Ｃ ｌ 3 ）【 ０ ０ ３ ２ 】

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【 表 ４ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ３ ３ 】　 以 下 に 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の 構 造 決 定 に つ い て 述 べ る （ 図 ４ 参 照 ） 。　 化 合 物 ７ は 、 高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ 〔 Ｍ 〕 + ｍ ／ ｚ ４ ７ ４ ． ４ ０ ６ ４ ） 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ ＭＲ よ り 分 子 式 Ｃ 3 1 Ｈ 5 4 Ｏ 3 を 持 つ 事 が 示 さ れ た 。 ま た 本 化 合 物 は Ｉ Ｒ ス ペ ク ト ル 、 1 Ｈ － ＮＭ Ｒ 、 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ か ら メ チ レ ン 基 〔 δ H 　 ０ ． ３ ３ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ４ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ５ ５（ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ２ Ｈ ｚ ） 〕 の 存 在 が 示 さ れ 、 シ ク ロ プ ロ ピ ル 基 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 さ らに ４ 個 の 第 ３ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ８ １ 、 ０ ． ８ ９ 、 ０ ． ９ ７ 、 ０ ． ９ ７ （ 各 ｓ ） 〕 、１ 個 の 第 ２ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ９ ０ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ７ ． ３ Ｈ ｚ ） 〕 、 イ ン プ ロ ピ ル 基 〔 δ H

　 ０ ． ９ ３ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ３ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ９ ４ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ８ Ｈ ｚ ） 〕 、 そ し て １ 個 のヒ ド ロ キ シ メ チ ン 基 〔 ３ ４ ０ ７ ｃ ｍ - 1 ； δ H 　 ３ ． ２ ８ （ ｍ ） ； δ C 　 ７ ８ ． ８ 〕 、 １ 個 の

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ヒ ド ロ キ シ メ チ レ ン 基 〔 δ H 　 ３ ． ４ ７ （ ｄ 、 Ｊ ＝ １ １ ． ３ Ｈ ｚ ） 、 ３ ． ６ ２ （ ｄ 、 Ｊ ＝１ ０ ． ７ Ｈ ｚ ） ； δ C 　 ６ ５ ． ９ 〕 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ で は ｍ ／ ｚ ４ ５ ６ にＨ 2 Ｏ の 脱 離 に よ る イ オ ン 、 ｍ ／ ｚ ４ ４ １ に （ ｍ ／ ｚ ４ ５ ６ － Ｃ Ｈ 3 ） に 対 応 す る イ オ ン 、ｍ ／ ｚ ４ ２ ３ に （ ｍ ／ ｚ ４ ４ １ － Ｈ 2 Ｏ ） に 対 応 す る イ オ ン が 観 測 さ れ た 。 こ れ ら の 値 とシ ク ロ ア ル タ ン 系 化 合 物 の 文 献 値 （ Ｄ ｅ 　 Ｐ ａ ｓ ｃ ｕ ａ ｌ ら 　 Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔｒ ｙ 　 ２ ６ 巻 、 １ ７ ６ ７ － １ ７ ７ ６ 頁 、 １ ９ ８ ７ 年 ） と 比 較 し 、 化 合 物 ７ は ２ ４ － メ チ ルシ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ー ル 構 造 を 持 つ 事 が 明 ら か と な っ た 。 本 構造 が 正 し い 事 は 、 1 Ｈ － 1 Ｈ Ｃ Ｏ Ｓ Ｙ 、 Ｈ Ｍ Ｑ Ｃ 、 Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ 、 及 び Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル の解 析 に よ り 確 認 し た 。【 ０ ０ ３ ４ 】　 化 合 物 ８ は 、 高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ 〔 Ｍ 〕 + ｍ ／ ｚ ４ ８ ８ ． ４ ２ ２ ９ ） 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ ＭＲ よ り 分 子 式 Ｃ 3 2 Ｈ 5 6 Ｏ 3 を 持 つ 事 が 示 さ れ た 。 ま た 本 化 合 物 は Ｉ Ｒ ス ペ ク ト ル 、 1 Ｈ － ＮＭ Ｒ 、 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ か ら メ チ レ ン 基 〔 δ H 　 ０ ． ３ ３ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ４ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ５ ５（ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ２ Ｈ ｚ ） 〕 の 存 在 が 示 さ れ 、 シ ク ロ プ ロ ピ ル 基 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 さ らに ４ 個 の 第 ３ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ８ １ 、 ０ ． ９ ０ 、 ０ ． ９ ７ 、 ０ ． ９ ７ （ 各 ｓ ） 〕 、１ 個 の 第 ２ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ９ ０ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ５ Ｈ ｚ ） 〕 、 イ ン プ ロ ピ ル 基 〔 δ H

　 ０ ． ９ ２ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ３ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ９ ４ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ８ Ｈ ｚ ） 〕 、 そ し て １ 個 のヒ ド ロ キ シ メ チ ン 基 〔 ３ ４ ０ ９ ｃ ｍ - 1 ； δ H 　 ３ ． ２ ９ （ ｍ ） ； δ C 　 ７ ８ ． ９ 〕 、 １ 個 のメ ト キ シ ル 基 〔 δ H 　 ３ ． ２ ３ （ ｍ ） ； δ C 　 ４ ９ ． ４ ］ の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓで は ｍ ／ ｚ ４ ７ ０ に Ｈ 2 Ｏ の 脱 離 に よ る イ オ ン 、 ｍ ／ ｚ ４ ３ ８ に Ｃ 2 4 － Ｃ 2 4

1 の 開 裂 に よ りＨ Ｏ Ｃ Ｈ 3 が 脱 離 し た イ オ ン が 観 測 さ れ た 。 こ れ ら を 化 合 物 ７ の ス ペ ク ト ル 値 と 比 較 し 、化 合 物 ８ は ２ ４ 1 － メ ト キ シ － ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル 構 造を 持 つ 事 が 明 ら か と な っ た 。 本 構 造 が 正 し い 事 は 、 1 Ｈ － 1 Ｈ Ｃ Ｏ Ｓ Ｙ 、 Ｈ Ｍ Ｑ Ｃ 、 Ｈ Ｍ ＢＣ 、 及 び Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル の 解 析 に よ り 確 認 し た 。【 ０ ０ ３ ５ 】　 化 合 物 １ ０ は 高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ 〔 Ｍ 〕 + ｍ ／ ｚ ３ ５ ６ ． ２ ７ １ ４ ） 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ ＭＲ よ り 分 子 式 Ｃ 2 4 Ｈ 3 6 Ｏ 2 を 持 つ 事 が 示 さ れ た 。 ま た 本 化 合 物 は Ｉ Ｒ ス ペ ク ト ル 、 1 Ｈ － ＮＭ Ｒ 、 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ か ら メ チ レ ン 基 〔 δ H 　 ０ ． ５ ７ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ６ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ８ ２（ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ３ Ｈ ｚ ） 〕 の 存 在 が 示 さ れ 、 シ ク ロ プ ロ ピ ル 基 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 さ らに ４ 個 の 第 ３ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ９ ３ 、 ０ ． ９ ８ 、 １ ． ０ ５ 、 １ ． １ ０ 、 ２ ． １ ２ （各 ｓ ） 〕 、 そ し て ２ 個 の カ ル ボ ニ ル 基 〔 １ ７ １ ０ ｃ ｍ - 1 ； δ C 　 ２ １ ０ ． ３ 、 ２ １ ６ ． ４〕 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ で は ｍ ／ ｚ ３ ４ １ に Ｃ 2 0 ‐ Ｃ 2 1 の 開 裂 に よ り Ｃ 2 1 メ チル 基 が 脱 離 し た 開 裂 イ オ ン 、 ｍ ／ ｚ ３ １ ３ に Ｃ 1 7 ‐ Ｃ 2 0 の 開 裂 に よ り Ｃ Ｈ 3 Ｃ Ｏ が 脱 離 した イ オ ン が 観 測 さ れ た 。 こ れ ら の ス ペ ク ト ル 値 、 及 び シ ク ロ ア ル タ ン 系 化 合 物 の 文 献 値 （Ｂ ａ ｒ ｉ ｋ ら Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ 　 ３ ５ 巻 、 １ ０ ０ １ － １ ０ ０ ４ 頁 、 １ ９ ９ ４年 ） と 比 較 し 、 化 合 物 １ ０ は ４ ， ４ ， １ ４ － ト リ メ チ ル － ９ ， １ ９ － シ ク ロ プ レ グ ナ ン －３ ， ２ ０ － ジ オ ン 構 造 を 持 つ 事 が 明 ら か と な っ た 。 本 構 造 が 正 し い 事 は 、 1 Ｈ － 1 Ｈ Ｃ Ｏ ＳＹ 、 Ｈ Ｍ Ｑ Ｃ 、 Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ 、 及 び Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル の 解 析 に よ り 確 認 し た 。【 ０ ０ ３ ６ 】　 化 合 物 １ ５ は 高 分 解 能 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ （ 〔 Ｍ 〕 + ｍ ／ ｚ ４ ７ ２ ． ３ ９ ２ ４ ） 及 び 1 3 Ｃ － Ｎ ＭＲ よ り 分 子 式 Ｃ 3 1 Ｈ 5 2 Ｏ 3 を 持 つ 事 が 示 さ れ た 。 ま た 本 化 合 物 は Ｉ Ｒ ス ペ ク ト ル 、 1 Ｈ － ＮＭ Ｒ 、 1 3 Ｃ － Ｎ Ｍ Ｒ か ら メ チ レ ン 基 〔 δ H 　 ０ ． ５ ７ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ４ ． ２ Ｈ ｚ ） 、 ０ ． ７ ９（ ｄ 、 Ｊ ＝ ３ ． ７ Ｈ ｚ ） 〕 の 存 在 が 示 さ れ 、 シ ク ロ プ ロ ピ ル 基 の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 さ らに ４ 個 の 第 ３ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ９ １ 、 １ ． ０ ０ 、 １ ． ０ ５ 、 １ ． １ ０ 、 （ 各 ｓ ） 〕、 １ 個 の 第 ２ 級 メ チ ル 基 〔 δ H 　 ０ ． ８ ９ （ ｄ 、 Ｊ ＝ ６ ． ４ Ｈ ｚ ） 〕 、 イ ン プ ロ ピ ル 基 〔δ H 　 １ ． １ ０ 、 １ ． １ ３ （ 各 ｓ ） 、 そ し て ヒ ド ロ キ シ ル 基 〔 ３ ４ ４ ５ ｃ ｍ - 1 〕 、 カ ル ボニ ル 基 〔 １ ７ １ ０ ｃ ｍ - 1 ； δ C 　 ２ １ ３ ． ０ 〕 、 メ ト キ シ ル 基 （ δ H 　 ３ ． ２ ３ （ ｓ ） ； δ

C 　 ４ ９ ． １ ） の 存 在 が 示 唆 さ れ た 。 Ｅ Ｉ － Ｍ Ｓ で は ｍ ／ ｚ ４ ４ ０ に Ｃ 2 4 位 の Ｃ Ｈ 3 Ｏ Ｈ 脱離 に よ る イ オ ン 、 ｍ ／ ｚ ３ １ ３ に Ｃ 1 7 ‐ Ｃ 2 0 の 開 裂 に よ り 側 鎖 （ Ｃ 9 Ｈ 1 9 Ｏ 2 ） が 脱 離 し た開 裂 イ オ ン 、 更 に ｍ ／ ｚ ２ ７ １ に Ｃ 1 3 ‐ Ｃ 1 7 と Ｃ 1 4 ‐ Ｃ 1 5 の 結 合 開 裂 に よ る 、 １ Ｈ を 伴 っ

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た Ｄ 環 の 開 裂 イ オ ン が 観 測 さ れ た 。 こ れ ら の 値 と シ ク ロ ア ル タ ン 系 化 合 物 の 文 献 値 （ 稲 田ら Ｐ ｈ ｙ ｔ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍ ｉ ｓ ｔ ｒ ｙ 　 ４ ６ 巻 、 ３ ７ ９ － ３ ８ １ 頁 、 １ ９ ９ ７ 年 ） 、 化 合 物 １３ の ス ペ ク ト ル 値 と の 比 較 に よ り 、 化 合 物 １ ５ は ２ ５ － ヒ ド ロ キ シ － ２ ４ － メ ト キ シ シ クロ ア ル タ ン － ３ － オ ン 構 造 を 持 つ 事 が 明 ら か と な っ た 。 本 構 造 が 正 し い 事 は 、 1 Ｈ － 1 Ｈ ＣＯ Ｓ Ｙ 、 Ｈ Ｍ Ｑ Ｃ 、 Ｈ Ｍ Ｂ Ｃ 、 及 び Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル の 解 析 に よ り 確 認 し た 。【 ０ ０ ３ ７ 】　 な お 、 化 合 物 ７ 、 ８ は 、 ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ 化 合 物 ２ ） の 化 学 的 変 換反 応 に よ っ て 得 ら れ る も の で あ っ て も よ い 。 化 学 的 変 換 反 応 を 用 い た 化 合 物 ７ ， ８ の 合 成方 法 を 以 下 に 示 す （ 図 ５ 参 照 ） 。［ 化 合 物 ７ の 化 学 的 方 法 に よ る 調 製 ］（ １ ） 化 合 物 ２ （ １ ０ ０ ｍ ｇ ） を 塩 化 メ チ レ ン に 溶 解 さ せ 、 炭 酸 水 素 ナ ト リ ウ ム （ ２ ５ ０ｍ ｇ ） 、 ｍ － ク ロ ロ 過 安 息 香 酸 （ ５ ０ ０ ｍ ｇ ） を 加 え 、 室 温 に て ４ ８ 時 間 、 撹 拌 し た 。（ ２ ） 反 応 終 了 後 、 反 応 溶 液 を １ Ｎ 水 酸 化 ナ ト リ ウ ム 水 溶 液 に て 洗 浄 し 、 続 い て 塩 化 メ チレ ン 層 は 水 で 洗 浄 し た 。【 ０ ０ ３ ８ 】（ ３ ） 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 溶 離 液 ： メ タ ノ ー ル ； 流 速 ３ ． ０ ｍ Ｌ ／ 分 ］ を 行 い 、 ２ ４ ， ２ ４ 1

－ エ ポ キ シ シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β － オ ー ル （ 化 合 物 １ ６ ； ３ １ ． ６ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ６ ．８ 分 ） を 得 た 。（ ４ ） 化 合 物 １ ６ （ ８ ． ７ ｍ ｇ ） を １ ， ２ － ジ メ ト キ シ エ タ ン に 溶 解 さ せ 、 過 塩 素 酸 水 溶液 （ ２ ｍ Ｌ ） を 加 え 、 室 温 に て １ ６ 時 間 、 撹 拌 し た 。（ ５ ） 反 応 終 了 後 、 ジ エ チ ル エ ー テ ル に て 抽 出 し 、 エ ー テ ル 層 を １ Ｍ 炭 酸 ナ ト リ ウ ム 、 続い て 水 で 洗 浄 し た 。 エ ー テ ル 抽 出 部 は 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 溶 離 液 ： メ タ ノ ー ル ； 流 速 ３ ． ０ ｍＬ ／ 分 ］ を 行 い 、 化 合 物 ７ （ ２ ． ６ ｍ ； 保 持 時 間 １ ２ ． ９ 分 ） を 得 た 。【 ０ ０ ３ ９ 】　 上 述 し た 本 発 明 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 、 単 独 で あ る い は 混 合 し て用 い る こ と が で き る 。　 ま た 、 本 発 明 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 、 適 当 な 医 薬 用 の 担 体 又 は 希釈 剤 と 組 み 合 わ せ て 医 薬 と す る こ と が で き 、 通 常 の 如 何 な る 方 法 に よ っ て も 製 剤 化 で き 、経 口 又 は 非 経 口 投 与 す る た め の 固 体 、 半 固 体 又 は 液 体 の 剤 形 に 処 方 す る こ と が で き る 。 処方 に あ た っ て は 、 他 の 医 薬 活 性 成 分 と の 配 合 剤 と し て も よ い 。【 ０ ０ ４ ０ 】　 例 え ば 、 日 本 薬 局 方 に 記 載 さ れ て い る 各 種 製 剤 、 即 ち 、 錠 剤 、 丸 剤 、 カ プ セ ル 剤 、 顆 粒剤 、 散 剤 、 乾 燥 エ キ ス 剤 、 ト ロ ー チ 剤 等 の 内 用 固 形 製 剤 、 流 エ キ ス 剤 、 エ リ キ シ ル 剤 、 酒精 剤 、 シ ロ ッ プ 剤 、 リ モ ナ ー デ 剤 等 の 内 容 液 剤 、 チ ン キ 剤 、 リ ニ メ ン ト 剤 、 ロ ー シ ョ ン 剤等 の 外 用 液 剤 、 硬 膏 剤 、 軟 膏 剤 、 パ ッ プ 剤 等 の 外 用 剤 な ど に 製 剤 化 で き る 。 ま た 、 投 与 可能 で あ る な ら ば 、 吸 入 剤 、 エ ア ゾ ー ル 剤 、 注 射 剤 、 点 眼 剤 、 座 剤 等 に も 用 途 に 応 じ て 製 剤化 し て も よ い 。【 ０ ０ ４ １ 】　 経 口 投 与 に お い て は 、 成 人 に 対 し 体 重 １ ｋ ｇ 当 り ０ ． ５ ～ ５ ０ ０ ｍ ｇ ／ 日 の 範 囲 で 投 与す る の が 好 ま し い 。　 ま た 、 本 発 明 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は 発 癌 予 防 の 薬 剤 と し て 使 用 する だ け で な く 、 種 々 の 飲 食 品 に 添 加 し 、 発 癌 予 防 に 有 効 な 機 能 性 飲 食 品 を 製 造 す る の に も有 用 な も の で あ る 。 こ の よ う な 機 能 性 飲 食 品 の 形 態 の 例 と し て は 、 顆 粒 、 錠 菓 、 ゼ リ ー 、飴 、 飲 料 な ど が 挙 げ ら れ る 。 さ ら に 、 本 発 明 の シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン 系 化 合 物 は、 人 間 の 食 べ る 食 品 と し て だ け で な く 、 ペ ッ ト 、 家 畜 、 競 技 用 動 物 な ど の 人 間 以 外 の 動 物の 飼 料 に 添 加 し て 利 用 さ れ 得 る 。【 ０ ０ ４ ２ 】［ 化 合 物 ８ の 化 学 的 方 法 に よ る 調 製 ］（ １ ） ～ （ ３ ） 　 上 記 （ １ ） ～ （ ３ ） と 同 じ よ う に し て 、 化 合 物 １ ６ を 得 た 。（ ４ ） 化 合 物 １ ６ （ ８ ． ７ ｍ ｇ ） を １ ， ２ － ジ メ ト キ シ エ タ ン に 溶 解 さ せ 、 過 塩 素 酸 ／ メ

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タ ノ ー ル （ ２ ｍ Ｌ ） を 加 え 、 室 温 に て １ ６ 時 間 、 撹 拌 し た 。（ ５ ） 反 応 終 了 後 、 ジ エ チ ル エ ー テ ル に て 抽 出 し 、 エ ー テ ル 層 を １ Ｍ 炭 酸 ナ ト リ ウ ム 、 続い て 水 で 洗 浄 し た 。 エ ー テ ル 抽 出 部 は 分 取 Ｈ Ｐ Ｌ Ｃ ［ 溶 離 液 ： メ タ ノ ー ル ； 流 速 ３ ． ０ ｍＬ ／ 分 ］ を 行 い 、 化 合 物 ８ （ １ ． ７ ｍ ｇ ； 保 持 時 間 １ ８ ． ３ 分 ） を 得 た 。【 ０ ０ ４ ３ 】［ 発 癌 予 防 効 果 の 確 認 試 験 に つ い て ］　 次 に 、 本 発 明 の 効 果 を 確 認 す る た め に 行 っ た 試 験 に つ い て 説 明 す る 。（ Ｅ ｐ ｓ ｔ ｅ ｉ ｎ － Ｂ ａ ｒ ｒ ウ イ ル ス （ Ｅ Ｂ Ｖ ） 活 性 化 抑 制 試 験 ）　 本 研 究 者 ら は 、 Ｅ Ｂ Ｖ の ゲ ノ ム を 内 蔵 す る バ ー キ ッ ト ・ リ ン パ 腫 由 来 の 培 養 細 胞 で あ るＲ ａ ｊ ｉ （ ラ ジ ） 株 に お い て 、 Ｅ Ｂ Ｖ ・ ゲ ノ ム の 発 現 を 阻 害 す る 化 合 物 の 多 く が 、 マ ウ ス皮 膚 発 癌 二 段 階 実 験 に お い て 抗 発 癌 プ ロ モ ー タ ー と し て 作 用 す る 点 に 注 目 し た 。 そ し て 米糠 抽 出 物 か ら 得 ら れ る シ ク ロ ア ル タ ン 系 ト リ テ ル ペ ノ イ ド の 糸 状 菌 に よ る 微 生 物 変 換 反 応か ら 得 ら れ た 変 換 生 成 物 か ら Ｅ Ｂ Ｖ ・ ゲ ノ ム の 発 現 を 阻 害 す る ウ イ ル ス ・ ゲ ノ ム 不 活 性 化物 質 を 探 索 し た 。 Ｅ Ｂ Ｖ ・ ゲ ノ ム の 発 現 阻 害 作 用 に 着 目 し た こ の 方 法 は Ｒ ａ ｊ ｉ （ ラ ジ ）株 培 養 系 に 、 発 癌 プ ロ モ ー タ ー で あ る Ｔ Ｐ Ａ （ テ ト ラ デ カ ノ イ ル ホ ル ボ ー ル ア セ タ ー ト ）と 、 活 性 発 現 の た め に 相 乗 作 用 と し て 働 く ｎ － 酪 酸 、 そ れ に 被 験 物 質 を 加 え て 培 養 し 、 ＴＰ Ａ に よ り 活 性 化 さ れ た 細 胞 由 来 の 抗 体 を 用 い る 間 接 蛍 光 抗 体 法 で 検 出 す る 方 法 で あ る 。こ の 方 法 は 、 迅 速 、 か つ 定 量 性 に 優 れ 、 加 え て 、 微 量 活 性 成 分 の 検 出 が 可 能 な 点 で 優 れ た方 法 で あ る 。【 ０ ０ ４ ４ 】　 ま ず 、 試 験 の 手 順 に つ い て 図 ７ の ス キ ー ム を 参 照 し な が ら 説 明 す る 。 な お 、 本 手 順 は 、徳 田 ら の 方 法 （ Ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ 　 Ｌ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｓ 、 ４ ０ 巻 、 ３ ０ ９ 頁 、 １ ９ ９ ８ ） に 準 拠 して い る 。（ １ ） １ × １ ０ 6 ／ ｍ Ｌ の ラ ジ 細 胞 に 、 発 癌 プ ロ モ ー タ ー と し て 、 ２ ０ ｎ ｇ ／ ｍ Ｌ の 濃 度の １ ２ － Ｏ － テ ト ラ デ カ ノ イ ル ホ ル ボ ー ル － １ ３ － ア セ タ ー ト （ Ｔ Ｐ Ａ ） を ３ ２ ｐ ｍ ｏ １加 え 、 さ ら に Ｔ Ｐ Ａ の 活 性 発 現 の た め に 相 乗 作 用 と し て 働 く ｎ － 酪 酸 を 加 え た 。（ ２ ） そ こ に 、 水 、 エ タ ノ ー ル 、 又 は ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド に 溶 解 し た 所 定 量 の 被 験 物 質を 添 加 し て 、 ３ ７ ℃ で ４ ８ 時 間 培 養 し た 。（ ３ ） 培 養 終 了 後 、 上 咽 頭 癌 患 者 の 血 清 （ Ｔ Ｐ Ａ に よ り 活 性 化 さ れ た 細 胞 由 来 の 抗 体 を 含む ） を 用 い た 間 接 蛍 光 抗 体 法 に よ り Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 を 検 出 し た 。【 ０ ０ ４ ５ 】　 上 記 の 手 順 に 従 っ て 検 定 を 行 っ た 後 、 Ｔ Ｐ Ａ の み を 加 え た 群 （ コ ン ト ロ ー ル ） の Ｅ Ｂ Ｖ早 期 抗 原 の 発 現 率 を １ ０ ０ ％ と し て 、 被 験 物 質 添 加 群 の Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 率 を 求 め 、次 式 （ １ ） に よ り 被 験 物 質 の Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 阻 害 率 （ ％ ） を 算 出 し た 。Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 阻 害 率 （ ％ ） ＝　 １ ０ ０ － 被 験 物 質 添 加 群 の Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 率 （ ％ ） ・ ・ ・ 式 （ １ ）　 検 定 は 、 前 述 の よ う に 糸 状 菌 Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ に よ る シク ロ ア ル タ ン 系 ト リ テ ル ペ ノ イ ド の 変 換 反 応 よ り 得 た 化 合 物 １ ～ １ ５ を 被 験 物 質 と し 、 各被 験 物 質 を 種 々 の 濃 度 （ 被 験 物 質 ／ Ｔ Ｐ Ａ の モ ル 比 ） に 調 製 し て 行 っ た 。 こ の 検 定 の 結 果を 表 ５ に 示 す 。　 シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン （ 化 合 物 １ ～ １ ５ ） の Ｅ Ｂ Ｖ 早 期 抗 原 の 発 現 阻 害 率 （ ％）【 ０ ０ ４ ６ 】

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【 表 ５ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ４ ７ 】　 な お 、 被 検 物 質 の 濃 度 が １ ０ ０ ０ 倍 モ ル 濃 度 の 欄 の 括 弧 内 の 数 値 は 、 ラ ジ 細 胞 の 生 存 率（ ％ ） を 示 す 。 こ の 数 値 が 高 い 方 が 正 常 細 胞 に 対 す る 悪 影 響 が 小 さ い 、 す な わ ち 安 全 性 が高 い と 言 え る 。 表 ５ に 示 さ れ る よ う に 、 こ れ ら の 化 合 物 の 阻 害 率 は 、 Ｔ Ｐ Ａ に 対 し １ ０ ０倍 モ ル 濃 度 の 時 ２ ８ ～ ３ ７ ％ で あ り 、 高 い 活 性 を 有 し て い る 。 特 に ２ ４ － メ チ ル シ ク ロ アノ レ タ ン － ３ β ， ２ ４ ， ２ ４ 1 － ト リ オ ー ル （ 化 合 物 ７ ） 、 ２ ４ 1 － メ ト キ シ － ２ ４ － メ チル シ ク ロ ア ル タ ン － ３ β ， ２ ４ － ジ オ ー ル （ 化 合 物 ８ ） は １ ０ 倍 モ ル 濃 度 の 時 １ ５ ％ 以 上と 非 常 に 高 い 活 性 を 有 し て お り 、 抗 発 癌 プ ロ モ ー タ ー 活 性 に 優 れ る 事 が 確 認 さ れ た 。 ま た、 こ の 阻 害 率 は 、 ビ タ ミ ン Ａ 誘 導 体 で あ り 、 そ の 発 が ん 予 防 効 果 が 種 々 の 動 物 実 験 で も 確認 さ れ て い る β － カ ロ テ ン （ 村 上 ら 、 Ｂ ｉ ｏ ｓ ｃ ｉ ． 　 Ｂ ｉ ｏ ｔ ｅ ｃ ｈ ． 　 Ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅｍ ． 、 ６ ０ 巻 、 １ 頁 、 １ ９ ９ ６ ） よ り も 高 い 値 を 示 し た 。 さ ら に 、 こ れ ら は 本 検 定 に お いて 高 い ラ ジ 細 胞 生 存 率 を 示 し た こ と か ら 、 高 い 安 全 性 を 持 つ 発 癌 予 防 剤 と し て 期 待 で き る。【 ０ ０ ４ ８ 】　 さ ら に 、 本 発 明 の 効 果 を 試 験 す る た め に 化 合 物 １ ～ １ ５ を Ｎ Ｏ （ 一 酸 化 窒 素 ） 障 害 に 対す る 抑 制 試 験 を 行 い 、 活 性 を 示 し た の で 説 明 す る 。（ Ｎ Ｏ Ｒ １ 処 理 に よ る 細 胞 形 態 変 化 抑 制 試 験 ）　 （ ± ） － （ Ｅ ） － ４ － メ チ ル － ２ － ［ （ Ｅ ） － ハ イ ド ロ キ シ イ ミ ノ ］ － ５ － ニ ト ロ － ６ム メ ト キ シ － ３ － ヘ キ セ ナ ミ ド （ Ｎ Ｏ Ｒ １ ） 処 理 に よ る 細 胞 形 態 変 化 抑 制 試 験 は 、 発 癌 イ

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ニ シ エ ー タ ー の 一 次 ス ク リ ー ニ ン グ 法 と し て 知 ら れ た 試 験 で あ る 。 Ｎ Ｏ は ガ ス 状 の フ リ ーラ ジ カ ル で あ り 、 そ の 過 剰 産 生 が 慢 性 化 す る と 、 胃 が ん や 大 腸 が ん の 危 険 性 が 高 ま る と いわ れ て い る 。 こ の こ と か ら 、 Ｎ Ｏ の 過 剰 生 産 を 抑 制 す る こ と が 発 癌 予 防 に 有 効 で あ る と いえ る 。 こ の 試 験 は 迅 速 、 か つ 微 量 活 性 成 分 の 検 出 が 可 能 な 点 で 優 れ た 試 験 で あ る【 ０ ０ ４ ９ 】　 試 験 方 法 に つ い て 説 明 す る 。 な お 、 本 手 順 は 、 秋 久 ら の 方 法 （ Ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ 　 Ｌ ｅ ｔ ｔｅ ｒ ｓ 　 ２ ０ ５ 巻 、 ９ － １ ３ 頁 、 ２ ０ ０ ４ 年 ） に 準 拠 し て い る 。（ １ ） イ ー グ ル の 最 小 必 要 培 地 よ り 得 た ５ × １ ０ 5 ／ ｍ Ｌ の ヒ ト 正 常 肝 由 来 細 胞 を ３ 日 間培 養 す る 。（ ２ ） そ こ に 被 検 物 質 を 加 え 、 そ の １ 分 後 に Ｎ Ｏ ド ナ ー で あ る Ｎ Ｏ Ｒ １ を 加 え Ｃ Ｏ 2 イ ンキ ュ ベ ー タ ー で 培 養 す る 。（ ３ ） 細 胞 の 形 態 変 化 を 光 学 顕 微 鏡 に て 測 定 す る 。 （ ２ ５ ０ 以 上 の 形 態 変 化 を 示 し た 細 胞数 を 測 定 す る 。 ）【 ０ ０ ５ ０ 】　 上 記 の 手 順 に 従 っ て 試 験 を 行 な っ た 後 、 被 検 物 質 を 加 え な い 群 を コ ン ト ロ ー ル と し 、 次式 に よ り Ｎ Ｏ Ｒ １ 処 理 に よ る Ｎ Ｏ 産 性 抑 制 率 を 算 出 し た 。　 Ｎ Ｏ Ｒ １ 処 理 に よ る 細 胞 形 態 変 化 抑 制 率　 ＝ Ｎ Ｏ Ｒ １ の み で 形 態 変 化 し た 細 胞 （ ％ ） ／ Ｎ Ｏ Ｒ １ と 被 検 物 質 を 加 え た と き の 形 態 変化 し た 細 胞 （ ％ ） … 式 （ ２ ）【 ０ ０ ５ １ 】　 前 述 の よ う に 糸 状 菌 Ｇ ｌ ｏ ｍ ｅ ｒ ｅ ｌ ｌ ａ 　 ｆ ｕ ｓ ａ ｒ ｉ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ に よ る シ ク ロ ア ルタ ン 系 ト リ テ ル ペ ノ イ ド の 変 換 反 応 よ り 得 た 化 合 物 （ １ ～ １ ５ ） を 被 験 物 質 と し て 行 っ た検 定 の 結 果 を 表 ６ に 示 す 。 な お 、 参 照 化 合 物 と し て 、 発 癌 予 防 効 果 が 知 ら れ て い る ク ル クミ ン （ Ｃ ａ ｎ ｃ ｅ ｒ 　 Ｌ ｅ ｔ ｔ ｅ ｒ ｓ １ ５ ９ 巻 、 １ ３ ５ 頁 、 ２ ０ ０ ０ 年 ） と 、 Ｎ Ｏ ス カ ベン ジ ャ ー で あ る ２ － （ ４ － カ ル ボ キ シ フ ェ ニ ル ） － ４ ， ４ ， ５ ， ５ － テ ト ラ メ チ ル イ ミ ダゾ リ ン － １ － オ キ シ ル 　 ３ － オ キ シ ド 　 ナ ト リ ウ ム 塩 （ カ ル ボ キ シ － Ｐ Ｔ Ｉ Ｏ ） の 値 も 示し た 。　 シ ク ロ ア ル タ ン 型 ト リ テ ル ペ ン （ 化 合 物 １ ～ １ ５ ） の Ｎ Ｏ 障 害 に 対 す る 抑 制 率【 ０ ０ ５ ２ 】

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【 表 ６ 】　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　【 ０ ０ ５ ３ 】　 表 ６ に 示 さ れ る よ う に 、 化 合 物 ７ 、 ８ は 参 照 化 合 物 で あ る ク ル ク ミ ン と 同 程 度 の 活 性 を示 し た 。 こ の こ と か ら 、 こ れ ら の 化 合 物 は 抗 発 癌 イ ニ シ エ ー タ ー 活 性 に 優 れ る こ と が 確 認さ れ た 。【 図 面 の 簡 単 な 説 明 】

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【 ０ ０ ５ ４ 】【 図 １ 】 糸 状 菌 に よ る シ ク ロ ア ル テ ノ ー ル （ 化 合 物 １ ） の 微 生 物 変 換 反 応 生 成 物 （ 化 合 物３ ～ ５ ） の 化 学 構 造 式 を 示 す 図 で あ る 。【 図 ２ 】 糸 状 菌 に よ る ２ ４ － メ チ レ ン シ ク ロ ア ル タ ノ ー ル （ 化 合 物 ２ ） の 微 生 物 変 換 反 応生 成 物 （ 化 合 物 ５ ～ ８ ） の 化 学 構 造 式 を 示 す 図 で あ る 。【 図 ３ 】 糸 状 菌 に よ る シ ク ロ ア ル テ ノ ン （ 化 合 物 ３ ） の 微 生 物 変 換 反 応 生 成 物 （ 化 合 物 ９～ １ ５ ） の 化 学 構 造 式 を 示 す 図 で あ る 。【 図 ４ 】 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の 化 学 構 造 式 を 示 す 図 で あ る 。【 図 ５ 】 本 発 明 に 係 る 新 規 化 合 物 ７ 、 ８ 、 １ ０ 、 １ ５ の Ｎ Ｏ Ｅ Ｓ Ｙ ス ペ ク ト ル 法 に よ り 得ら れ た 核 オ ー バ ー ハ ウ ザ ー 効 果 （ Ｎ Ｏ Ｅ ） 相 関 関 係 を 説 明 す る 図 で あ る 。【 図 ６ 】 化 合 物 ７ 、 ８ を 化 学 的 に 合 成 す る 方 法 を 示 す 図 で あ る 。【 図 ７ 】 Ｅ Ｂ Ｖ 活 性 化 抑 制 試 験 の 手 順 を 説 明 す る 図 で あ る 。

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【 図 １ 】 【 図 ２ 】

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【 図 ３ 】 【 図 ４ 】

【 図 ５ 】 【 図 ６ 】

【 図 ７ 】

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(51)Int.Cl. ＦＩ テーマコード（参考） Ｃ１２ＰＣ１２ＰＣ１２ＰＣ１２ＰＣ１２ＰＣ１２ＰＣ１２ＰＣ１２Ｐ 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) 33/06 (2006.01) Ｃ１２Ｐ 33/06 　　　Ａ 　　　　　 　　　　 Ｃ１２Ｐ 33/06 　　　Ｚ 　　　　　

(72)発明者 浮谷　基彦 東京都千代田区九段南四丁目８番２４号　学校法人　日本大学内(72)発明者 渡辺　健二 東京都葛飾区四ツ木４－５－７(72)発明者 米今　梨紗 神奈川県横浜市金沢区並木１－１７－１１－６０４Ｆターム(参考) 4B064 AH07 CA05 CB12 CB13 CB30 DA05 　　　　 　　 4C086 AA01 AA04 DA11 MA01 MA04 NA14 ZB26 　　　　 　　 4C091 AA01 BB01 CC03 DD01 EE07 FF02 FF06 GG01 HH04 JJ04 　　　　 　　 KK01 LL03 MM03 NN01 PA02 PA06 PB05 QQ05 QQ15 RR13

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