Www.procognia.com 1 GlycoScope TM Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation

www.procognia.com www.celld.com1

GlycoScopeTM

Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation de lectines

Mars 2012

http://www.procognia.com/



http://www.celld.com/





Fondée : 2000 (TASE:PRCG)

Employés: 26

Location : Ashdod, Israel

Buts : Biopharmaceuticals Biomarkers/Diagnostics

Glyco-Pharma Stem Cells

IP : 13 familles de brevets Obtention de 25 brevets

lectines array, algorithmes & applications)

Compagnie de biotechnologie offrant des solutions analytiques et

thérapeutiques basées sur les glycanes pour les industries

pharmaceutiques, de diagnostiques et de recherches

Plateformes TechnologiquesPlateformes Technologiques

Procognia Israel Ltd.

AnalytiqueAnalytique

DiagnostiqueDiagnostique

ThérapeutiqueThérapeutiqueStem CellsStem Cells









GlycoScopeTM

Glycoanalyse haut débit, quantitative et précis avec des

kits prêt à l'emploi








www.procognia.com www.celld.com 4

GlycoScopeTM : Technologie utilisable du clonage à la production. Permet l'optimisation des

conditions de culture

GlycoScopeTM permet le développent et la production des molécules plus rapide et plus efficace

Quality by Design :

• Selection du clone et du milieu de culture optimaux

• Selection des conditions de cultures optimales

Permet de cibler le profil désiré de glycosylation très rapidement

Réduction des temps et des coûts de développement économie $MM

Augmente la probabilité de succès pour le passage à la nouvelle phase de développement

Mise sur le marché + rapide ~$80M/mois en vente annuelle pour un produit à $1B

Réduit le ratio de déchets jusqu'à la production

Do It Right First Time









Les besoins de Glycoanalyse des

industries pharmaceutiques









La Glycosylation joue un rôle important dans les produits biopharmaceutiques

La Glycosylation affecte les protéines: Stabilité et demi-vie dans le sérum (e.g. Acide Sialique)

Pharmaco-cinétiques et pharmacodynamiques (PK/PD) Immunogénicité (e.g. Gal α)

Activité biologique

Les glycanes dans les Ac affectent la liaison au réception de la Fc ,:

– Affecte les bioactivitées ADCC and CDC; le facteur

critique étant l'activité anti-tumorale









Les facteurs procédé qui affectent la Glycosylation du produit

Facteurs clés dans la production de molécules biologiques Lignée cellulaire Clone Composition du milieu Conditions de culture

Type de Bioreacteur Température, PO2, pH… Nutriments Durée de la culture

Conditions de purification

Affecte la synthèse des carbohydrates

sur les protéines

Hétérogénéité

InconsistenceBiosimilaires: des Glycosylations différentes donnent des produits

différents non souhaités









Plateforme haut débit de Glycoanalyse pour le développement de produits Biopharmaceutiques

GlycoScopeTM

A partir de glycoprotéines intactes A partir de glycoprotéines intactes IgG et non-IgG IgG et non-IgG

Haut débit (1-96 échantillons/essai) Haut débit (1-96 échantillons/essai)

Faibles concentrations (0.1-15µg/ml) Faibles concentrations (0.1-15µg/ml)

Rapide Rapide

Faible volume Faible volume

Analyse complète et automatique des données 1mn/E Analyse complète et automatique des données 1mn/E

Aisée à utiliser Aisée à utiliser









GlycoScopeTM

Matrices de Lectines

Concept technologique intégré









Procognia’s Lectin-Array concepte technologique

Glc

NA

c0Glc/man comple

xGal/GalNAcα-Galβ-Gal N-

linked

core

Sia

lic a

cid

untreatedSialic acid removed

1

2

3

4

5N

orm

aliz

ed inte

nsi

ty

Douzaines de lectines avec spécificités

complémentaires et de chevauchements

Profils sensibles à de

très faibles changements

dans les structures de

glycane









Lectines ArrayArray scan

Empreinte de la

protéine

Glycoprotéine

Détection

Binding

Fonctionnement du GlycoScopeTM

Résultats en 4 heures

Structure glycanique

Base de connaissance

algorithmes

Base de connaissance

algorithmes









GlycoScopeTM

Value Proposition









GlycoScopeTM vs. HPLCComparison technique

GlycoScopeTMHPLCApplication IgG et non-IgGIgG et non-IgG

Protocole d'exécutionSimple ; travail de technicien

Complexe et nécessite une expertise pour la réalisation de la mesure et son interprétation

Temps d'obtention des résultats pour 96 échantillons

1 jour de travail2-6 jours pour préparation des échantillons et LC/MS + 16 jours pour analyse des données

Temps de réalisation2-3 heures>10 jours

Quantité d'échantillon2µg20 - 50µg

Nombre d'échantillon traités/essai

Jusqu'à 9610-20

Temps d'analyse< 1,5 minute (analyse des données automatique)

1,5 hr

Equipement nécessaireSlide ScannerHPLC/MS

Coût direct/échantillon(Matériels +main d'oeuvre)

$150-$200/échantillon$1,000-1,500 pour IgG, $2,000-$4,000 pour protéines complexes









Pour anticorps monoclonaux

Efficacité du GlycoScopeTM démontrée: Performance Comparable à l'HPLC

Structure Glycoscope HPLC Glycoscope HPLC Glycoscope HPLC

high mannose 8 ±2 6.8 3 ±1 1.4 4 ±1 5.1

complex 92 ±2 93.2 97 ±1 98.6 96 ±1 94.9

G0 76 ±4 76.5 78 ±4 78.8 34 ±2 34

G1 22 ±3 19.9 20 ±4 17.5 49 ±1 43

G2 2 ±1 3.6 1 ±0 3.7 17 ±2 24

Core Fucose 93 ±6 90.5 98 ±5 94.2 85 ±6 93

Antennae termini

Sialic acid 2 ±0 0-3.7 3 ±0 2.4-3.6 1 ±0 6

Gal a1-3 Gal 1 ±1 .n.d ±0 0 .n.d ±0 0 0

GalNAc 0 ±0 .n.d ±0 0 .n.d ±0 0 0

# of experiments 18 11 5

% Abundance ± SD

Mab X Mab Y Mab Z

Validation parameter

Accuracy

Repeatability (CV) 0.3-1.7% (1) 2.6-6.45% (2)

Reproducibility (CV) 0.61-4.35 % (1) 7.2-19.6 % (2)

Linearity (RSQ)

Limit of Quantitation

95-108%

Validation Result

0.94-0.99

5%

(1) Épitopes >20% d'abondance(1) Épitopes >20% d'abondance

(2) Épitopes <20% d'abondance(2) Épitopes <20% d'abondance








15

LeGlycoScopeTM montre des résultats comparables à

l'HPLC sur toute la plage d'abondance des glycanes

20 échantillons de 3 différents IgGs testés au cours d'un procédé de dévelopement par le GlycoScope et l'HPLC


GlycoScopeTM vs. HPLCcomparatif

GlycoScopeTMHPLCApplications1. Screening de Clones

2. Optimisation Milieu3. Développement à l'échelle Labo des

conditions de culture4. Développement purification échelle

Labo5. Scale up purification échelle labo6. Contrôle procédé

1. Non applicable2. Non applicable3. Non applicable 4. Applicable si purifié 5. Applicable si purifiés6. Non applicable

Coût direct Faible : Nombreux échantillons/essai faible coût d'obtentionPlus de données pour un moindre coût

Très fort : Peu d'échantillons/essai à un coût de mise en œuvre 5-50 supérieur

Temps pour résultats et

capacité d'analyses

Résultats même jour & haute capacité de glycoanalyse

Prise de décision améliorée et efficace effectué pendant le développement

Développement + rapide et meilleure qualioté produit Gains en mois & en $Millions

Plusieurs jours & analyse peu nombreuses

Prise de décision limitée et en retard à un moment critique du développement et de la production

Gros risques de devoir ré-itérer les phase de développement et

beaucoup de perte









GlycoScopeTM vs. HPLCComparison

Résultats de comparaison additionnels par rapport à l'HPLC sont présentés en

appendix B









GlycoScopeTM: Une technologie unique qui permet

d'offrir une grande valeur au développement pré-clinique

L'utilisation du GlycoScopeTM (GS) pour la sélection des clones, des milieux et des

conditions de culture permet de réaliser la struture de glycosylation désirée en

parralèle avec une productivité forte, en moins de temps et à moindre coût

Do It Right the First Time

Economise temps et coût de développement 3-9 mois

Haut débit et réponse rapide Réponse en temps réel

Sur le marché + rapidement $80M/mois pour produit de $1B/an

Développement Procédé

2 ans + ~ 1 an d'itérations

2 ans - Minimise les itérations

Without GS

With GS









GlycoScopeTM est une technologie unique qui permet

de haute valeur ajoutée pour la production

GlycoScopeTM permet de piloter le

procédé en temps réel pour assurer la

qualité et la consistance du produit

Pilotage et réponse en temps réel Evite le rejet de votre production

Réduit le ratio d'échecs économie de $KK- $MM

Les changements de Glycosylation peuvent être détectés au cours d'une de la culture par le GlycoScopeTM









La précision et la répétabilité du GlycoScopeTM ont été validés avec des

douzaines de glycoprotéines et des milliers d'échantillons au cours des phases

de développement et de prodcution

– Avastin, Humira, Rituxan, Erbitux, Herceptin, Remicade, FSH, EPO, FVII, FVIII, et

plus envore

La plateforme GlycoScopeTM est basée sur des douzaines de lectines, couvrant

une large variété de glycanes et ont été vérifiés par HPLC. Cette plateforme a

été développée en utilisant une base de plus de 80 glycoprotéines et

glycovariants ce qui explique sa grande capacité à identifier les variations de

glycosylation, même très faible.

Procognia a été impliquée avec succès pour de nombreux projets de

développement d'Ac et de complexes protéiques :

– Biosimilaires et nouvelle molécules avec des compagnies comme Teva, Ferring et

d'autres, ainsi que nombreux instituts de recherche

GlycoScopeTM est un outil analytique de Glycoanalyse bien validé









Quality Control

Procognia est certifié ISO 13485

Les lectines arrays sont produits au standards de l'assurance qualité pharmaceutique

– SOP’s approuvées

– Contrôle qualité

– Documentation (enregistrement des lots, des modifications de contrôle etc.)

Les essais de Glycoanalyse incluent:

– Un standard de calibration

– Un standard interne

– Des critères d'acceptation et de rejet des analyses

Les équipements de calibration et de maintenance









EMEA

La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Octobre 2008 au BMWP

FDA

La plateforme de glycoanalyse haut débit GlycoScopeTM a été présentée en Novembre 2008 à la FDA

Regulatory Authorities









GlycoScopeTM

Etudes de cas









GlycoScopeTM Augmente les capacité de sélection du bon clone

Est ce que plus grand

producteur est le meilleur

clone ?

GlycoScopeTM ajoute une nouvelle dimension à votre sreening de

clones Surveille la glycosylation de votre molécule pendant le

screening Sélectionne le clone optimal (la bonne Glycosylation + Productivité) et augmente votre

succès en réduisant vos risques









GlycoScopeTM Optimisation du milieu de culture

Effect of Media on Glycosylation ProfileCHO-S Clone 83D1(2H12)

0

20

40

60

80

100

120

Comple

x

CoreF

ucos

e

GalAlph

a

G0

G1

G2

Man

High

SialicA

cid

Glaycan Epitope

% A

bu

nd

an

ce

Comercial Reference Comercial Reference H12 CD CHO-1 H12 CD CHO-1 H12 ExCell-2

H12 ExCell-2 H12 ExCell-11 H12 ExCell-12 H12 ExCell-16 H12 IS CHO-13

H12 IS CHO-13 H12 IS CHO-3 H12 IS CHO-3

Clone CHO poussant dans différents milieux SFM montre des différences dans les concentration de Galactose

* Les barres de même couleur représentent le même échantillon testé en duplicata indépendant Les barres vertes représentent le profil de glycosylation de l'IgG générique de référence









Effect of Media on Glycosylation Profile CHO-DG44 Clone 442D5

0

20

40

60

80

100

120

Complex CoreFucose GalAlpha G0 G1 G2 ManHigh SialicAcid

Glaycan Epitope

% A

bu

nd

ance

Comercial Reference D5 ExCell-10 D5 ExCell-10 D5 ExCell-4 D5 ExCell-7

D5 ExCell-7 D5 ExCell-15 D5 ExCell-15 D5 CD CHO-14 D5 CD CHO-9

D5 CD CHO-9 D5 Hyclone-5 D5 Hyclone-5 D5 Hyclone-8

Exemple BEffet du milieu sur le profil de Glycosylation

Clone CHO-DG44 poussant sur different SFM montre des différences des contenus en Galactose, High Mannose et Core Fucose










Le GlycoScopeTM permet une sélection efficace

du meilleur clone et milieu de culture

Selection of Clones and Media Combination

0

20

40

60

80

100

120

Comple

x

CoreF

ucos

e

GalAlph

a

G0

G1

G2

Man

High

SialicA

cid

Glaycan Epitope

% A

bu

nd

an

ce

Comercial Reference Comercial Reference H12 CD CHO-1 H12 CD CHO-1

H12 IS CHO-3 H12 IS CHO-3 D5 ExCell-7 D5 ExCell-7

C2 CHO CD-6 C2 CHO CD-6 H12 ExCell-12

Différents Clones montrent des différences de contenu en Galactose, High Mannose et Core Fucose










GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales de cultures

Three representative bioreactor runs under different conditions









Cible la Glycosylation désirée pendant la culture









GlycoScopeTM Permet de sélectionner les conditions optimales d'ajout de nutriments








Analyse de clusters

0 20 40 60 80 100 120

0 5

1015

2025

3035

40

20 30 40 50 60

70 80 90100

TiterG

0

Ma

nH

igh

Cluster 3DG44 86 C2 0 CD_CHO 14 Temp 33 0 Feed 7 14 Titer 81

D5 86 ExCell 50 Temp 36.5 100 Feed 13 36 G0 42CHO5 14 H12 14 HyClone 21 Feed 20 50 ManHigh 6

E6 0 IS_CHO_CD 14 cluster size 14







Titre Haut – faible G0

Faible titre - Optimale

G0

combination optimale en titre et G0

Screening de 230 échantillons

Etude de cas additionnels sont présentés en Appendix C


Conclusions des études de cas

Le type de clone et les paramètres procédé, milieu et conditions de culture ont un impact évident sur la productivité et le profil de glycosylation de la protéine : Ils interagissent en plus entre eux

Par conséquent, afin de parvenir à un processus

optimal, productivité la plus élevée et profil de

glycosylation désiré, il est important d'évaluer, à un

stade très précoce de la mise au point, une

matrice de variété des conditions pour surveiller le

profil de glycosylation en plus de la productivité

Par conséquent, afin de parvenir à un processus

optimal, productivité la plus élevée et profil de

glycosylation désiré, il est important d'évaluer, à un

stade très précoce de la mise au point, une

matrice de variété des conditions pour surveiller le

profil de glycosylation en plus de la productivité









GlycoScopeTM Kit & Services

Services de Glycoanalyse

Optimisation de la préparation de l'échantillon

et du domaine d'application

Préparation et test d'échantillons de Glyco

variant

Ajustement des algorithmes d'analyse de la

Glycoanalyse (si nécessaire)

Libération définitive du protocole de dosage

Qualification test

Formation des utilisateurs

Appui technique et analytique

Générique & Validé

Kit pour MAbs

Dévéloppement du kit

(non-MAb)

Fournitures des kits









GlycoScopeTM

en résumé

GlycoScopeTM est la méthode de glycoanalyse la plus rapide, la plus facile et

efficace sur le marché pour optimiser les processus de développement

biologique tout comme assurer un meilleur contrôle du manufacturing

Une surveillance étroite de la glycosylation produit tout au long du

développement du procédé peut augmenter de manière significative la

probabilité de réussite réduction significative des coûts et des délais de

commercialisation résultat gain potentiel se chiffrant en MM $

La surveillance en temps réel de la glycosylation des produits en cours de

production (IPC) permet d'augmenter le niveau de contrôle et peut réduire les

résultats incohérent et le ratio de déchets en cas de dysfonctionnement ou

d'écarts par rapport aux valeurs de consigne définies

GlycoscopeTM increase your chance to succeed









Thank You









Appendix A

Glycoanalyse Centre d'Excellence









Sur la base de son équipe scientifique hautement qualifiée et d'une vaste expérience

dans les défis très complexe de la glycosylation, Procognia propose une large

gamme de solutions pour répondre aux divers besoins de glycoanalyse :

Analyse GlycoScopeTM

Haut débit

IgG et non-IgG

Faibles concentration & volume

Vérifié par HPLC (MALDI)

N & O glycanes

Détermination Ratio NANA/NGNA

Dossier validation complet

Glycoanalysis Centre d'ExcellenceOne Stop Shop pour un large éventail de besoins Glycoanalyse

• Développement procédé

• Optimisation milieu

• Contrôle en ligne Manufacturing

Etudes de comparabilité

• Discovery et Recherche

• Structure - Activité des profils de

glycoproteine








39

Appendix B

Platformed Procognia’s GlycoScopeTM

Février 2012

Comparaison avecl'HPLC

40

mAb3/581

HPLC

mAb3/581

GS

mAb3/582

HPLC

mAb3/582

GS

mAb3/382

HPLC

mAb3/382

GS

mAb3/386

HPLC

mAb3/386

GS

mAb3/397

HPLC

mAb3/397

GS

N-linked

%

%

%

%

%

%

%

%

%

%High Mannose

2.603.003.554.363.30

Complex 97.410097.010096.59595.79496.7100

G071.57570.87474.87977.38177.378

G120.52320.724191612.81215.420

G22.823.022.814.102.61

Sialic Acidn.d1n.d21.121.321.32

Gal a1-3 Gal n.d1n.d2n.d0n.d0n.d0

Core Fucose95.010094.5100938590.77991.4100

The GlycoScopeTM Demonstration de résultats Comparables à ceux obtenus par HPLC

Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés

aux résultats obtenus par HPLC

41

mAb3/401

HPLC

mAb3/401

GS

mAb3/402

HPLC

mAb3/402

GS

mAb3/405

HPLC

mAb3/405

GS

mAb3/406

HPLC

mAb3/406

GS

mAb3/410

HPLC

mAb3/410

GS

N-linked%%%%%%%%%%

High mannose

2.83443.544.347.56

Complex 97.297969696.59695.79692.594

G074.97973.18079.68178.28074.779

G114.91715.21510.51410.71512.115

G24.71614.914.412.51

Sialic Acid1.32n.d31.521.821.7

Gal a1-3 Gal

n.d0n.d0n.d0n.d0n.d0

Core Fucose

919790.88891.88389.7828690

Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés

aux résultats obtenus par HPLC

The GlycoScopeTM suite

42

The GlycoScopeTM suite

Résultats en routine sur un Mab#3 testés par le GlycoScopeTM , comparés aux résultats obtenus

par HPLC pendant le procédé de développement sur un an (N=22)

Date Complex G0 G1 G2 GalAlpha ManHigh SialicAcid 04-Mar-10 94.2 70.7 21.8 1.7 2.1 5.8 3.225-Mar-10 91.8 63.2 25.9 2.7 2.5 8.2 4.106-Apr-10 93.2 70.6 21.1 1.6 1.7 6.8 1.825-Apr-10 93.1 73.0 18.9 1.2 1.1 6.9 2.426-Apr-10 94.6 65.0 26.8 2.8 2.6 5.4 4.303-May-10 94.6 67.7 24.6 2.2 1.9 5.4 3.405-May-10 95.1 76.1 17.9 1.1 1.4 4.9 2.809-May-10 93.4 69.8 21.9 1.7 3.0 6.6 1.909-May-10 94.0 74.4 18.5 1.2 1.6 6.0 1.212-May-10 92.3 71.6 19.4 1.3 1.5 7.7 1.707-Jul-10 95.5 69.0 24.3 2.2 1.9 4.5 2.508-Jul-10 94.0 64.9 26.4 2.7 1.6 6.0 3.105-Oct-10 92.9 72.2 19.5 1.3 1.3 7.1 2.506-Oct-10 92.3 71.4 19.6 1.3 0.9 7.7 2.101-Nov-10 93.4 70.2 21.6 1.7 1.8 6.6 2.603-Nov-10 91.4 68.9 20.9 1.6 1.5 8.6 2.403-Nov-10 92.3 71.4 19.6 1.3 0.3 7.7 2.326-Dec-10 94.6 70.0 22.8 1.9 3.2 5.4 2.130-Jan-11 92.3 72.4 18.7 1.2 1.2 7.7 2.421-Feb-11 92.1 68.1 22.1 1.8 1.1 8.0 1.816-Mar-11 93.9 72.4 20.1 1.4 1.9 6.1 2.116-Mar-11 92.7 72.4 19.0 1.3 2.0 7.3 2.5

Average 93.3 70.2 21.4 1.7 1.7 6.7 2.5STDV 1.1 3.1 2.7 0.5 0.7 1.1 0.7HPLC Results 93 71 19 3 0 7 1Difference 0.3 -0.8 2.4 -1.3 1.7 -0.3 1.5

43

Ref. 1

HPLC

Ref. 1

GS

mAb2/3

HPLC

mAb2/3

GS

mAb2/4

HPLC

mAb2/4

GS

mAb2/5

HPLC

mAb2/5

GS

mAb2/6

HPLC

mAb2/6

GS

N-linked%%%%%%%%%%

High mannose

1.432.433.111.612.32

complex 98.69796.59796.59996.89996.798

G077.78071.37169.17063.45773.465

G117.316222523.62728.93620.829

G23.614.234.236.164.43

Sialic Acid2.41n.d1n.d2n.d4n.d4

Gal a1-3 Gal

n.d1n.d1n.d0n.d1n.d1

Core Fucose

94.28088.99693.1951.341.17

The GlycoScopeTM Suite (Customer B)

5 échantillons de Mab#2 testés par le GlycoScopeTM et comparé à l'HPLC

44

The GlycoScopeTM Résultats comparables avec l'HPLC (Customer C)

HPLC GlycoScope HPLC GlycoScope HPLC GlycoScopeHM 4.5 4.0 16.0 13.0 4.6 8.0

complex 95.5 96.0 84.0 87.0 95.4 92.0G0 80.1 85.0 45.6 45.0 58.3 60.0G1 11.5 11.0 27.6 35.0 28.3 28.0G2 4.2 0.0 10.4 7.0 9.1 3.0SA 2.6 1.0 3.8 1.0 4.6 1.0

Gal Alpha n.d 2.0 n.d 5 n.d 3CoreF 92.8 90.0 79.4 67.0 91.8 78.0

IgG 1 Sample 22 IgG 1 Sample 27 Reference 1 lot#B3354B01

HPLC GlycoScope HPLC GlycoScope HPLC GlycoScopeHM 2.8 3.0 3.8 1.6 1.4 3.3

complex 97.2 97.0 96.2 98.4 98.6 96.75G0 37.0 40.0 39.1 44.6 77.7 80.0G1 41.4 45.0 42.2 43.3 17.3 15.9G2 15.0 12.0 15.6 10.5 3.6 0.9SA 7.3 0.0 6.9 2.8 2.4-3.6 1.3

Gal Alpha n.d 3 n.d 1.3 n.d 0.9CoreF 91.6 88.0 93.2 98.3 94.2 79.7

Epitope

Epitope

IgG 1 Sample 12 IgG 1 Sample 16 IgG 1 Sample 20

Resultats de 6 échantillons d'IgG#1 sous différentes conditions de culture

testés pour customer C par GlycoScopeTM et comparés à l'HPLC

Conditions

de culture

montrent des

différences en

G0 détectées

GlycoScope et

confirmées par

HPLC

Les signaux des Lectines sont en corrélation linéaire avec la

concentration de l'échantillon et comparable à l'HPLC (Customer D)

45

0

5000

10000

15000

20000

Com

plex

(1)

Com

plex

(3)

Com

plex

(4)

Glc

NA

c (1

)

Glc

NA

c (2

)

Glc

\Man

(1)

Glc

\Man

(2)

Glc

\Man

(3)

Man

nose

(2)

Man

nose

(3)

Man

nose

(5)

Ter

min

al G

lcN

Ac

(1)

Alp

ha G

al (

1)

Alp

ha G

al (

2)

Alp

ha G

al (

4)

Bet

a G

al (

1)

Bet

a G

al (

2)

Gal

\Gal

NA

c (2

)

Gal

\Gal

NA

c (4

)

Gal

\Gal

NA

c (5

)

Gal

\Gal

NA

c (6

)

Gal

\Gal

NA

c (8

)

Sia

lic A

cid

(4)

Sig

nal

In

ten

sity

34-1-mAb1-1 0.15uM

34-1-mAb1-1 0.125uM

34-1-mAb1-1 0.1uM

34-1-mAb1-1 0.075uM

34-1-mAb1-1 0.05uM

34-1-mAb1-1 0.025uM

Plate RUN ID User Date Sample Name Complex CoreFucose G0 G1 G2 GalAlpha ManHigh SialicAcid within_assay K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.15uM 94 83 74 18 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.125uM 94 82 75 18 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.1uM 94 80 72 21 1 0 6 1 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.075uM 95 79 71 22 2 0 5 2 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.05uM 94 76 69 23 2 1 6 2 1K-31-03-09-A2 14171 Mali Talmor 16-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.025uM 0

k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.15uM 94 88 75 18 1 0 6 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.125uM 95 94 78 17 1 0 5 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.1uM 96 91 74 21 2 0 4 1 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.075uM 96 87 70 24 2 0 4 2 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.05uM 96 83 64 28 3 1 4 3 1k-26-04-09 A2 14178 mor goldenberg 19-Jul-09 34-1-mAb1-1 0.025uM 91 70 58 29 4 1 9 3 1

HPLC reference 93 90 71 18 4 0 7 2

46

The GlycoScopeTM résultats comparables à l'HPLC (Customer D)

0.0

20.0

40.0

60.0

80.0

100.0

34-1-mab1-1 34-1-mab1-2 34-1-mab1-3 34-1-mab1-4

% GS

HPLC

4 échantillons de Mab#34-1

testés par GlycoScopeTM et

comparés aux résultats

HPLC


Appendix C

Effets des paramètres procédé sur le profile de Glycosylation

Exemples de cas d'étude utilisant le

GlycoScopeTM








Impacte du clone/procédé sur le N-glycosylationTemp shift Feed Rate Clone Media type

G1

G2

Gal alpha

G0

48

Effet des paramètres procédé sur la glycosylation des

glycoprotéines (Comparaison Bioréacteurs vs. µBioréacteurs

49

2 types de conditions ont été testées sur des bioréacteurs et desµ Bioreactors:GlycoScopeTM détecte les effets des paramètres procédé sur la glycosylation en temps réelProfiles similaire sont obtenus dans les deux échellesLes résultats du procédé A montrent un G0&SA similaire le D un HMsimilaire

Pas d'effet signification du taux de dilution

Effect of Feed Rate on G0In CD CHO Media

0102030405060708090

C2 D5 E6 H12

CD CHO Temp 33

G0 Feed7 G0 Feed13 G0 Feed20

Effect of Feed Rate on G0 In IS CHO CD Media

0102030405060708090

C2 D5 E6 H12

IS CHO CD

G0 Feed7 G0 Feed13 G0 Feed20


Effect of DO on SA

0.000.501.001.502.002.503.003.504.004.505.00

CD CHO CD CHO IS CHO IS CHO ExCell ExCell

D5 E6 D5 E6 D5 E6

% A

bund

ance

10.5 20

Une augmentation de l'oxygène dissous de 10.5% à

20% augmente de environ 124% (91-176%)

l'abondance de l'acide sialique

Le niveau d'oxygène dissous affecte la Sialylation

10.5 20

12

34

5

DOS

ialic

Aci

d


L'augmentation de l'oxygène dissous réduit les niveaux de Core Fucose

Effect of DO on CF

0102030405060708090


D5 E6 D5 E6 D5 E6

% A

bund

ance

10.5 20

Une augmentation de l'oxygène

dissous de 10.5% à 20% conduit à

une réduction de 15% (8-22%) en

Core Fucose

10.5.p-II 20.p-II 10.5.p-III 20.p-III

60

70

80

90

Effect of DO on Core Fucose levels

DO

Co

re F

uco

se

L'effet de la concentration

d'oxygène dissous sur le % de

Core Fucose a été démontré

dans 2 essai indépendant

experiments


Oxygène dissous n'a pas d'effet signification sur G0 et GalAlpha

Effect of DO on G0

0102030405060708090


D5 E6 D5 E6 D5 E6

% A

bu

nd

an

ce

10.5 20

Effect of DO on GalAlpha

0

1

2

3

4

5

6


D5 E6 D5 E6 D5 E6

% A

bu

nd

an

ce

10.5 20

Documents

Www.procognia.com 1 GlycoScope TM Plateforme analytique haut débit de glycoanalyse basée sur l'utilisation