-Allgemeine Aspekte
-Spezielle AspekteHmostasediagnostikHannover, November 2005
Allgemeine Aspekte-Testsystematik
-Qualittssicherung
-Befundinterpretation
Testsystematik-Phnotyp-Analytik-Funktionelle Testverfahren-Strukturelle Testverfahren
-Genotyp-Analytik-DNA-basiert-RNA-basiert
Funktionelle Testverfahren-Funktionelle Testverfahren bestimmen die biologische Aktivitt eines Analyten.
-Testmatrix: Vollblut, plttchenreiches Plasmaoder plttchenarmes Plasma
-Read-out-System:-turbidometrisch-koagulometrisch-amidolytisch
Thromboplastinzeit Messprinzip: koagulometrisch
Messparameter:Fibrinbildung
Messgre:Gerinnungszeit in Sek.
Befundmitteilung:in Prozent bezogen auf Normalplasma
Prothrombin-Ratio
International normalized ratio (INR)Prothrombin-Ratio = PatientenwertNormalwertINR = Prothrombin-RatioISI-WertISI = International Sensitivity Index
Korrelation Quick-Wert und INR
Diagramm1
2.62
0.99
1.13
1.21
1
1.03
1.02
1
0.97
0.81
1.03
1.19
1.01
0.91
1.17
1.16
1.13
1.73
2.57
1.8
2.4
1.17
1.69
0.92
2.2
1.12
1.07
1.25
1.24
1.2
0.98
1.18
1.25
1.87
1.28
4.78
Quick-Wert (%)
INR
Tabelle1
242.62
1010.99
811.13
721.21
1001
951.03
961.02
1001
1050.97
1300.81
951.03
741.19
981.01
1170.91
761.17
771.16
811.13
421.73
252.57
401.8
272.4
761.17
431.69
1150.92
302.2
821.12
891.07
681.25
691.24
731.2
1030.98
751.18
681.25
381.87
651.28
124.78
Tabelle1
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
0
Quick-Wert (%)
INR
Tabelle2
Tabelle3
Koagulometrisches TestverfahrenThrombinFibrinogenFibrinMessparameter: Fibrinbildung
Amidolytisches TestverfahrenH-D-Phe-Pip-Arg-pNApNAThrombinMessparameter: Hydrolyse eines Peptidsubstrats
Thrombinbestimmung: koagulometrisch
Diagramm2
241
112
54
21
14
10
13
Thrombinkonzentration (U/ml)
Gerinnungszeit (s)
Tabelle1
Thrombinsec.
0.01241
0.05112
0.154
0.521
114
510
1013
Tabelle1
Thrombinkonzentration (U/ml)
Gerinnungszeit (s)
Tabelle2
Tabelle3
Thrombinbestimmung: amidolytisch
Diagramm5
0.1
0.15
0.3
0.75
1.06
2.37
2.5
Thrombinkonzentration (U/ml)
Delta OD (405 nm)
Tabelle1
Thrombinsec.
0.01241
0.05112
0.154
0.521
114
510
1013
Tabelle1
Thrombinkonzentration (U/ml)
Gerinnungszeit (s)
Tabelle2
ThrombinOD (405 nm)
0.010.1
0.050.15
0.10.3
0.50.75
11.06
52.37
102.5
Tabelle2
Thrombinkonzentration (U/ml)
Delta OD (405 nm)
Tabelle3
TF-induced thrombin formationclot formation
Diagramm1
0
2.5
3.5
11.3
21
54
148
545
990
3950
5600
Time after TF (min)
T-AT complexes (ng/ml)
Tabelle1
0
12.5
23.5
311.3
421
554
6148
7545
8990
93950
105600
Tabelle1
Time after TF (min)
T-AT complexes (ng/ml)
Tabelle2
Tabelle3
Amidolytische TestverfahrenAmidolytische Testverfahren
-sind eine Alternative zu koagulometrischenVerfahren.
-ermglichen kinetische Untersuchungen Endogene Thrombinbildungspotenzial.
Testsystematik-Phnotyp-Analytik-Funktionelle Testverfahren-Strukturelle Testverfahren
-Genotyp-Analytik-DNA-basiert-RNA-basiert
AntigentesteDefinition:Antigenteste messen die Konzentration und/oder die molekulare Struktur eines Analyten.
Beispiele:ELISA-VerfahrenElektrophoresetechniken/Western-BlotHPLCDurchflusszytometrie
Sandwich-ELISA: Prinzip (1)Fnger-AkMikrotiterplatte
Sandwich-ELISA: Prinzip (2)Fnger-AkMikrotiterplatteAntigen
Sandwich-ELISA: Prinzip (3)Fnger-AkMikrotiterplatte**Detektions-AkAntigen
Sandwich-ELISA: Prinzip (4)Fnger-AkMikrotiterplatte**Detektions-AkAntigenSubstratFarbstoff
Allgemeine Aspekte-Testprinzipien
-Qualittssicherung
-Befundinterpretation
Testvaliditt-Eignung des Tests fr die klinische Diagnostik.
Testvaliditt: Parameter-Przision (RiLiBK)
-Spezifitt
-Sensitivitt
TestprzisionIntra-assay Varianz:Schwankungen eines Messwertes innerhalbeiner Messserie.
Inter-assay Varianz:Schwankungen einesMesswertes von Seriezu Serie.
Testsensitivitt: DefinitionDie Testsensitivitt ist definiert als die
Wahrscheinlichkeit mit der erkrankte
Personen vom Test als krank erkannt
werden.
Krankheits-Testergebnisstatuspositivnegativ
positivrichtig positivfalsch negativ
negativfalsch positivrichtig negativTestvaliditt
Testsensitivitt: DefinitionSensitivitt =
RPRP + FNRP = richtig positiv, FN = falsch negativ
D-Dimer und DVT-DiagnostikTestSensitivittNegativer pr-(%) diktiver WertElisa9796Vidas-DD9898Latex-Assay8392Simplired8592Perrier A, Bounameaux. Thromb Haemost 2001; 86: 475 - 487
Testspezifitt: DefinitionDie Testspezifitt ist definiert als die
Wahrscheinlichkeit mit der gesunde
Personen vom Test als nicht krank
erkannt werden.
Krankheits-Testergebnisstatuspositivnegativ
krankrichtig positivfalsch negativ
gesundfalsch positivrichtig negativTestvaliditt
Testspezifitt: DefinitionSpezifitt =
RNRN + FPRN = richtig negativ, FN = falsch positiv
Testvaliditt-Eignung des Tests fr die klinische Diagnostik.
-Evidence-based diagnostics
EBD: BewertungenDas Ergebnis des diagnostischen Verfahrens ist ...
Level 1: diagnoseentscheidend und therapierelevant.
Level 2: diagnoseentscheidend oder therapierelevant.
Level 3: diagnosehinfhrend.
Level 4: zur Diagnostik und Therapie ungeeignet.
Qualittssicherung: Ziele- Erkennen von Einflssen, die unab-hngig von dem Messparameter dasTestergebnis beeinflussen.
-Sicherung einer gleichbleibendenErgebnisqualitt.
EinflussgrenEinflussgren beeinflussen das Messergebnis
unabhngig von der eigentlichen Messgre.
Einflussgren-Physiologische Einflussgren
-Methodische Einflussgren(Analytische Strgren)
Analytische Strgren-Pranalytische Fehler
-In-process Fehler
-Interpretationsfehler
Pranalytische Strgren-Art der Blutabnahme
-Verhltnis Blut : Antikoagulanz
-Art des Antikoagulanz
Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz
Diagramm1
0
0.15
0.45
1.02
1.66
2.06
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Citrat-antikoaguliertes Plasma
Tabelle1
HeparinDade-Behring
CTADCitratCTAD
0000
0.10.240.150.24
0.250.560.450.56
0.51.171.021.17
0.752.121.662.12
12.42.062.4
Tabelle1
00
00
00
00
00
00
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Citrat-antikoaguliertes Plasma
Tabelle2
Tabelle3
Anti-FXa-Bestimmung: Antikoagulanz
Diagramm1
00
0.150.24
0.450.56
1.021.17
1.662.12
2.062.4
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Citrat-antikoaguliertes Plasma
Tabelle1
HeparinDade-Behring
CTADCitratCTAD
0000
0.10.240.150.24
0.250.560.450.56
0.51.171.021.17
0.752.121.662.12
12.42.062.4
Tabelle1
CTAD-antikoaguliertes Plasma
Citrat-antikoaguliertes Plasma
Tabelle2
Tabelle3
Analytische Strgren: Beispiel aPTTPranalytische Fehler: Abnahme in SerumrhrchenAbnahme aus Heparinzugang
In-process Fehler:Fehlende Zugabe von CalciumchloridVerzicht auf Przisionskontrollen
Interpretationsfehler:Interpretation bei fehlendem Referenz-bereich
Physiologische Einflussgrssen-Alter
-AB0-Blutgruppe
-Akute-Phase-Reaktion
-Geschlecht
ParameterBlutgruppenA/B0
vWF-Ag:64 150 %46 125 %
RiCof:65 165 %50 130 %
CBA:69 116 %61 121 %
vWF-Parameter: Referenzbereiche** IHT Uniklinikum Bonn
Referenzintervall*: Definition-Das Referenzintervall bildet die bio-logische Streuung eines Messpara-meters in einer definierten Popula-tion ab.
-Die obere und untere Grenze des Referenzintervalls wird durch das 95% Konfidenzintervall bestimmt.
* Synonym: Referenzbereich
X- 2s+ 2s95 %Referenzgrenzen: Bewertung
Referenzwerte-Referenzstichprobe
-Referenzintervall
-Referenzgrenzen
Referenzstichprobe: SelektionInduktiv:Ausgewhlte Population ohne Krankheits-merkmale (Blutspender, Krankenhausper-sonal)
Deduktiv:Unselektierte Patienten bilden das Basis-material. Durch Ausschlusskriterien wirddas Kollektiv der nicht kranken ermittelt.
Mathematisch:Bhattacharya Plot
Referenzstichprobe: induktivPopulation: 100 gesunde Blutspender50 Frauen/ 50 Mnner
Berechnung:95 % Konfidenzintervall** Fast alle Hmostaseparameter sind nicht normalverteilt.
Referenzstichprobe: DeduktivParameter: D-Dimer als Thrombose-indikator
Basiskollektiv:Patienten mit thrombose-typischer Symptomatik
Selektionskriterium:bildgebende Diagnostik
Allgemeine Aspekte-Testprinzipien
-Qualittssicherung
-Befundinterpretation
TransversalbeurteilungWert in Bezug zum Referenzintervall:
- innerhalb:gesund?
- auerhalb:pathologisch?
Entscheidungsgrenzen-Entscheidungsgrenzen korrelieren eine klinische Symptomatik mit ein-em Messwert.
-Entscheidungsgrenzen knnen nur an einem Kollektiv von erkrankten Personen ermittelt werden.
-Entscheidungsgrenzen und Referenz-grenzen sind nicht deckungsgleich.
Entscheidungsgrenzen: BeispielParameter:FVIII-Aktivitt
Referenzintervall:60 150 %
Entscheidungsgrenze:
-Hmophilie:< 30 %
-Thrombophilie:> 250 %
MesswertBewertungsalgorithmus: Laboranalytiklaborinterne QualittskontrollefehlerfreiFreigabeFehlersucheArzt informierenWiederholungrztliche Befundungjanein
Qualittskontrolle & ReferenzintervallUnprzision von Tag zu Tag:-hchstens 1/8 des Referenzintervalls-besser 1/12 des Referenzintervalls
Beispiel: aPTT (26 34 s)-1/8 1 s-1/12 0,7 s
freigegebener MesswertBewertungsalgorithmus: LaboranalytikInnerhalb desReferenzbereichsVerlaufs-kontrolleKrankheits-bezugjaneinBezug zu VorwertenNormal-wertjaneinKlinisch-relevantKlinisch-nichtrelevantjanein
180.000/lBeispiel: ThrombzytenzahlReferenzbereich:150.000 300.000/LVerlaufs-kontrolleKrankheits-bezugjaneinBezug zu VorwertenNormal-wertjaneinKlinisch-relevantKlinisch-nichtrelevantjanein
Beispiel: ThrombozytenzahlKlinischer Verlauf:-Beginn Heparintherapie vor 5 TagenAusgangswert: 290.000/l
Aktueller Messwert:180.000/l
Bewertung: V. a. relative Thrombozytopenie
-Allgemeine Aspekte
-Spezielle AspekteHmostasediagnostik