DNK na sudu
Interpretacija DNK dokaza u sudskom postupku
(pogled iza DNK izveštaja)
Medicinski fakultet
Prof. dr Oliver Stojković
Institut za sudsku medicinu
Laboratorija za sudskomedicinsku genetiku
O čemu to govore veštaci biološke struke?
■ Lokus, alel, DNK tipizacija, PCR, elektroferogrami, DNK profil, verovatnoća podudaranja, verovatnoća isključenja, indeks verodostojnosti, ispadanje alela, kompleksni profili...
■ Buckleton: „Iskaz veštaka – genetičara na sudu često ostavlja učesnike u sudskom postupku u osećanju da su im dokazi prezentovani na Svahili jeziku, bez pomoći prevodioca“.
Veštačenje bioloških tragova- „DNK veštačenje“
Veštačenje je dokazno sredstvo kome sud pribegava kada za ocenu nekakve činjenice ne raspolaže odgovarajućim stručnim znanjem.
Biološko veštačenje
- forenzička entomologija
- forenzička botanika
- forenzička genetika
-mikro-organizama (forenzička mikrobiologija)
- biljnog materijala (forenzička genetika biljaka)
- animalnog materijala (sudsko-veterinarska genetika)
- humanog materijala (sudsko-medicinska genetika)
Malo bazične biologije
■ Telo je izgrađeno od ćelija ■ U našem telu ima 30x1012 ćelija. ■ Najviše je crvenih krvnih zrnaca (25x1012)
0.0099
0.4386
0.1093
0.2193
0.0099
0.2851
0.8245
0.0548
crvena krvna zrnca trombociti masne ćelije drugo mišići
Još malo bazične biologije
■ DNK se nalazi u ćelijama (ali ne i u crvenim krvnim zrnicima i trombocitima)
■ U jednoj ćeliji ima 6,6 pikograma DNK (10-12 grama- hiljaditi deo od milijarditog dela grama)
■ DNK među ljudima se razlikuje u 0,1%. ■ U DNK analizama se analiziraju maleni
(desetomilioniti) delovi molekula DNK- genski lokusi (ili samo „geni“)
Malo genetike
■ U sudskomedicinskoj genetici se analizira petnaestak gena
■ Isti geni kod različitih ljudi postoje u različitim varijantama- belezima (alelima)
■ Svaki od petnaestak gena postoji u po desetak varijanti
■ Svaki gen postoji u po dve kopije (od majke i od oca).
Malo kombinatorike
Milan P Miroslav M Slaviša V.
■ Belezi se označavaju brojevima ■ Kombinacija belega na svim genima-
DNK profil ■ Broj mogućih kombinacija =1021.
Malo genetičke tehnologije
■ U sudskomedicinskoj genetici koriste se dve genetičke tehnologije – 1. Za umnožavanje (amplifikaciju) gena- PCR – 2. Za razlikovanje belega na genima – elektroforeza
■ Standardizacija i validacija hemikalija, procesa i opreme
DNK profil Elektroferogram
Poređenje elektroferograma
Biološki trag Referentni DNK profil
ISKLJUČENJE
Poređenje elektroferograma
Biološki trag Referentni DNK profil
PODUDARANJE
1 u 608,961,665,956,361,000,000
1 u 608 triliona
Biloški tragovi se ne mogu standardizovati
Broj osoba Obilnost Očuvanost
1 Obilni Očuvani
2 … ...
3 … ...
Više Oskudni Degradovani
OPTIMALNI
PESIMALNI
SUBOPTIMALNI
Nepodobni
Pojedinačni trag RMP: 1 u 630x1018 Mešani trag RMNE: 1 u 1,7x105
1 ng DNK
0,5 ng DNK
0,25 ng DNK
0,125 ng DNK
0,06 ng DNK
0,03 ng DNK
Degradacija
■ Izlaganje temperaturi i vlazi pogoduje razvoju mikroorganizama ■ Usled dejstva sunčeve svetlosti i protoka vremena biološki materijal
degraduje. ■ Dugačke niti molekula DNK se nasumično prekidaju ■ “Dugački” belezi stradaju prvi ■ Klasičan elektroferogram sa “nizbrdicom”: signali sa desne strane niži su
od signala sa leve.
dugački
Kratki
„Ispadanje“ alela
■ Signali u tragu su uglavnom niski – Većinom ispod 150 RFU
■ Signali u referentnom uzorku su značajno viši – Iznad 800 RFU
■ Na lokusu D13S817: – Referentni uzorak 8, 14 – Biološki trag: 8, 8
■ Alel 14 je ispao – ili ne?
1500
Biološki trag
Referentni uzorak
150
?
„Lažni“ signali i tehnički problemi
■ Lažni signali: – Kontaminacija – Klobuci boje – Električni signali – Problemi sa spektralnim razdvajanjem
■ Problemi sa aparatom: – Visoka bazna linija – Nestabilna bazna linija – Problemi sa elektroforezom
Da li DNK nalaz sme da se zasniva na subjektivnoj interpretaciji?
Biološki trag
Osumnjičeni
Elektroferogrami dobijeni analizom biološkog traga i referentnog uzorka
Koraci u veštačenju biološkog materijala
■Krim. tehnika
•Uočavanje, dokumentovanje, fiksiranje
•Izuzimanje, pakovanje
■Analiza
DNK, umnožavanje gena
•Genotipizacija (utvrđivanje DNK pro
■Veštačenje
DNK profila
•Biostatistička analiza i interpretacija
Interpretacija DNK dokazaStatistika ne laže...ali, rezultat statističke analize zavisi od formulacije pitanja na koje pokušava da odgovori.
Sud najčešće interesuje odgovor na sledeće pitanje: - Koja je verovatnoća da trag potiče baš od okrivljenog, ako su DNK profili
podudarni?
NA OVO PITANJA VEŠTAK NAJČEŠĆE NE MOŽE UOPŠTE DA PRUŽI ODGOVOR, već može da izračuna ili proceni:
- Koja je verovatnoća da se DNK profili okrivljenog i traga podudare SLUČAJNO, ako je neka druga osoba izvor biološkog traga?
- Koja je verovatnoća da u Srbiji (Evropi, svetu) još neka druga (nesrodna) osoba ima odgovarajući DNK profil (kao što je DNK profil traga, NE OSUMNJIČENOG)?
Biostatistički proračun
■ Slučajno (koincidentno) podudaranje DNK profila biološkog traga i osumnjičenog: – Za kompletan pojedinačni DNK profil verovatnoća slučajnog podudaranja manja
od 1 u 10 triliona – Za mešani, oskudni i degradovani trag verovatnoća slučajnog podudaranja može
biti u 1 u 3. ■ Statistički proračun zavisi od
– Kvaliteta DNK profila biološkog traga ■ Količina DNK, ■ stepen degradacije-> stohastički fenomeni: ispadanje alela, Lažni signali ■ Mešavine ■ Tehnički kvalitet analize
– Okolnosti slučaja ■ (srodnici, populaciona pitanja)
Šta sa lokusima na kojima „nedostaje alel“?
■ „Konzervativna“ statistika – isključiti genske belege na kojima postoji fenomen “ispadanja alela”
■ Prepoznajemo takve belege po visini koja je ispod tzv. „stohastičkog praga“.
■ Ponavljanje analize iz istog uzorka više puta: – Konsenzusni DNK profil (prijavljuju se samo aleli koji se ponavljaju u
svim PCR analizama) – Kompozitni profil (prijavljuju se svi aleli koji se pojave u bilo kojoj PCR
analizi) ■ Moguće je računati „indeks verodostojnosti“- LR, uz procenu
„verovatnoće ispadanja“ i „verovatnoće upadanja“ alela ■ Moguće je računati „verovatnoću isključenja“ PE uz „ispadanje” alela ■ MEĐUTIM: ove statistike često daju veoma različite rezultate.
Za pojedinačne tragove Verovatnoća slučajnog podudaranja (RMP) Za delimične i/ili mešane tragove PE - Verovatnoća isključenja - Probability of Exclusion LR - Indeks verodostojnosti – Likelyhood Ratio (LR)
Statistička interpretacija
LR – indeks verodostojnosti: testiranje hipoteza ili testiranje verodostojnosti tvrdnji
▪ Dokaz (podudaranje DNK profila)
▪ Tvrdnja tužioca: biološki trag jeste od okrivljenog
▪ Tvrdnja odbrane: biološki trag nije od okrivljenog
D
K
K
Ili odnos verovatnoća
)|( DKP
)|()|(
DD
KPKP
•Šta interesuje sud?
•Šta može da kaže veštak?)|( KP D
Verovatnoća krivice na osnovu dokaza
Verovatnoća dobijanja dokaza na osnovu pretpostavke o krivici
Ili: odnos verovatnoća- LR)|()|(KDP
DP K
LR (indeks verodostojnosti) nudi rešenja, ali...■ Procena „verovatnoće ispadanja“ je problematična
■ Procena „verovatnoće upadanja“ je problematična
■ Kompleksne mešavine (više od 2 osobe) su zahtevne za računanje (kompjuterski programi pomažu...)
■ Definisanje “hipoteze tužioca” i “hipoteze odbrane”
■ Definisanje broja osoba u mešavini
■ Interpretacija značenja indeksa verodostojnosti je teško razumljiva (lako se sklizne u pogrešku tužioca)
■ Problem računanja LR za osobe iz više etničkih grupa
■ Problem računanja LR za međusobno srodne osobe u mešavini....
Greške u interpretaciji
■ Greška transponovanog kondicionala ■ Npr. LR vrednost je 10.000. ■ Pogreška tužioca
– Verivatnoća da trag ne potiče od okr. je 0,01% – Verovatnoća da trag potiče od okr. je 99,99%
■ Pogreška odbrane – U regionu ima 10 miliona ljudi – 10.000.000/10.000 je 1000 – Okrivljeni je jedan od 1000 ljudi, dakle verovatnoća
da trag potiče baš od okr. je 0,1%.
Greška numeričke konverzije Među koliko ljudi bi se pronašla još jedna osoba sa odgovarajućim DNK profilom? Naivni odgovor: ako je učestalost 1 u 10.000, tada bi trebalo analizirati bar 10.000 ljudi da pronađemo bar jednu takvu osobu Tačan odgovor: 6932 osobe Alternativno pitanje: kolika je verovatnoća da ćete među 8 milijardi ljudi naći još jednu osobu sa DNK profiliom čija je učestalost 1 u 10 milijardi? Analogni problem: paradoks rođendana
verovatnoća 0.51/365 0.0027397261-(1/365) 0.997260274logaritam -1.19148E-03 -0.30103broj kombinacija 252.6519888ili približno 253broj parova (n(n-1))/2 23
Greške u interpretaciji
DNK veštačenje: Komponente zapisnika o veštačenju
■ Opis analiziranih uzoraka – Biološki tragovi sa mesta zločina – Referentni uzorci (osumnjičeni, oštećeni,
eliminatorni uzorci) ■ Primenjene analitičke metode ■ Tabele utvrđenih DNK profila ■ Zaključak- UTVRĐIVANJE ČINJENICA:
– Utvrđeno podudaranje – Statistička interpretacija dokaza
■ Mišljenje – STRUČNA OCENA ČINJENICA – Logično, jasno, koherentno
Milan P Miroslav M Slaviša V.
Zaključak
Milan P. Miroslav M. Slaviša. V
Milana P.Slaviše V.
Milana P.
Miroslava MSlaviše V.
Mišljenje
Milana P.
Milana P.
Milana P.
Milana P.
Slaviše V.
Slaviše V.
Slaviše V.
Miroslava M.Miroslava M.
Miroslava M.
Slaviše V.
Miroslava M.
Optužnica
Strahinje D.
Milan P.
Optužnica (ili kako je Mišljenje veštaka razumeo tužilac...)
Milan P.
Slaviše V.
Milana P.
Milana P.
Presuda (kako je mišljenje veštaka razumeo Sud...)
Milana P.Strahinje D.
Presuda
Strahinja D.
Milana P.
Slaviše V.
Milana P.Slaviše V.
Pogledajmo ponovo rezultate
Stručne konsultacije...
Pri
mer
iz p
raks
e
Da
li je
veš
tak
zave
o su
d?
Zaključak
■ DNK analize imaju potencijalno veliku dokaznu snagu
■ Posebna pažnja se mora obratiti na interpretaciju rezultata, koja mora biti: – nepristrasna – jasno formulisana – nedvosmislena – zasnovana na struci i nauci
Zaključak
■ Veštak je dužan – da pomogne sudu u pravilnoj oceni dokaza – da formuliše mišljenje na takav način da ga
učesnici u postupku jasno i nedvosmisleno razumeju.
Pitanja?????
Pogrešno tumačenje indeksa verodostojnosti: SALLY CLARK
• Sinovi Sally i Stephena Clarka (Christopher i Harry) naglo umrli u 11 odnosno 8 nedelji života
• Clarkovi su tvrdili da su deca umrla prirodnom smrću (sindrom iznenadne dečje smrti)
• Postojali su medicinski dokazi o maltretiranju dece, ali ne i dokazi o nasilnoj smrti
–SALLY osuđena za ubistvo
■ Pedijatar svedočio da je verovatnoća da jedno dete umre od SIDSa 1 u 8,543
Na suđenju:
• Pitanje: da proceni rizik za dva deteta da u istoj familiji umru od SIDSa
• Odgovor: Morate da pomnožite 1 u 8,543 puta 1 u 8,543 …. što čini
1 u 73 miliona
■ = 1 u 73 miliona
■ Verovatnoća dve prirodne smrti je 1 u 73 miliona
■ = 1 u 73 miliona
■ Verovatnoća nevinosti je 1/73 miliona
Tužiočeva pogreška> izjednačavanje sa
)|( DKP
)|( KP D
)|( KP D )|( DKP
Alternativno…
■ P(2 bebe umru od SIDS) = 1/73 miliona ■ P(2 bebe budu ubijene) = 1/2000 miliona
Obe brojke su podjednako relevantne za slučaj
Jedno od 44.000 dece ubije majka
BAYES: Ukupna verovatnoća je proizvod LR i prethodne verovatnoće
Ukupna verovatnoća
)()(
)()(
)|()|(
KPKP
KPKP
KPKP
×=|D|D
DD
=Indeks verodostojnosti
× Prethodna verovatnoća
Ako je prethodna verovatnoća= 1/2000 miliona Naknadna verovatnoća = 0.0365
%6.3)|( =⇒ DKP
73miliona ??
Identifikacioni dokazi
:::
OUIi
Pretpostavimo
miliona10/1)(])[,|(
1])[,|(
====
==
xIPxIKP
xIKP
UO
O
D
D
“verovatnoća podudaranja”
),(: xIxI OU ==D
Individualni DNK profil iUčinilacOsumnjičeni
Dokaz:
Podudaranje
Pogreška tužioca
Verovatnoća da potiče od nekog drugog, nevinog čoveka je 1/10 miliona
Dakle )|( DKP = 1/10 million
– tj. )|( DKP Veoma blizu 1
–> osuda
POGREŠKA ODBRANE
■ U odsustvu drugih dokaza, ima npr. 30 miliona ljudi u regionu
■ 1 je KRIV (i podudara se) ■ ~3 su NEVINA i podudraju se ■ Dakle, samo jedna od 4 osobe je kriva ■ T.j.
%2541)|( ==DKP
–>oslobađanje
BAYES▪ UKUPNA VEROVATNOĆA= ▪ (10 MILIONA) × “prethodna verovatnoća”
)|()|(iDrugiDokazKPiDrugiDokazKP
TUŽIOČEVA tvrdnja je OK ako
BAJES dozvoljava eksplicitnu inkroporaciju DD
1/1)|(/)|( =DDKPDDKP
ODBRANA je u pravu ako jemilionaDDKP
DDKP
301
)|()|( =
ucestalostLR
1=