DETERMINACION DE PORTADORES SANOS DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS NASAL Y SU
PREVALENCIA EN EL PERSONAL SANITARIO DEL
HUCA EN EL PRINCIPADO DE ASTURIAS.
Autoras:
Francisca Fernández San Martín
Susana García Martínez
Mónica Soage Bermúdez
LABORATORIO DE DIAGNÓSTICO CLÍNICO Y BIOMÉDICO
IES ISLA DE LA DEVA
Índice
Resumen/ Abstract
1. Introducción y Justificación
2. Objetivo del trabajo
3. Materiales y métodos
3.1. Medio de transporte Copan
3.2. Registro de la muestra
3.3. Medio de cultivo Agar Chapman-Stone
3.4. Tinción Gram
3.5. Pruebas enzimáticas Catalasa y Oxidasa
3.6. Medio de cultivo de identificación directa SAID
3.7. Material general de laboratorio
4. RESULTADOS
5. DISCUSIÓN
6. CONCLUSIONES
7. BIBLIOGRAFÍA
8. CITA
“Lo hemos logrado”
Propio.
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DETERMINACION DE PORTADORES SANOS DE
STAPHYLOCOCCUS AUREUS NASAL Y SU
PREVALENCIA EN EL PERSONAL SANITARIO DEL
HUCA EN EL PRINCIPADO DE ASTURIAS.
Autoras:
Francisca Fernández San Martín
Susana García Martínez
Mónica Soage Bermúdez
RESUMEN
Staphylococcus aureus es el agente mas frecuentemente identificado como
causa de infección nosocomial, particularmente S.aureus resistente a la
meticilina (SAMR). La infección intrahospitalaria causada por este
microorganismo, tiene una alta prevalencia e implicación terapéutica y
económica.
El objetivo de este trabajo es determinar la prevalencia de Staphylococcus
aureus en el personal sanitario del HUCA en Oviedo, y realizar una
comparativa con otros estudios que indican que dicho microorganismo está
presente en un 30% de adultos sanos, incrementándose el porcentaje en
pacientes ingresados y en el personal sanitario.
Se analizaron 30 muestras de la mucosa nasal de los profesionales sanitarios,
recogidas mediante hisopo, aisladas e identificadas en medio Chapman y
SAID. Se obtuvo un total de 6 aislamientos positivos para S.aureus, frente a 24
aislamientos negativos.
La prevalencia de Staphylococcus aureus según los resultados de este estudio
es del 20%, siendo inferior a los datos esperados.
Concluimos que debido a la buena praxis clínica y las campañas de lavado de
manos se está consiguiendo frenar la diseminación de estos microorganismos.
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Palabras clave: prevalencia, Staphylococcus aureus, SAMR, portador sano,
microorganismo e higiene.
ABSTRACT
Staphylococcus aureus is the agent most frequently identified as the cause of
nosocomial infection, particularly S.aureus has built up resistance to meticilin
(SAMR). The infection intrahospital caused by this microorganism, has a high
prevalencia and therapeutical involvement as well as economical.
The arm of this project is to determine the pravalence of S.aureus in the
sanitary staff of HUCA in Oviedo, and to carry out a comparative with other
investigations into this microorganism, that is present in 30% in healthy adults,
increasing the percentage in patients admitted and sanitary staff.
Thirty samples of nasal mucus of the sanitary staff were analysed, taken by
swab, insulated and identified by Chapman and SAID. A total of 6 positive
insulations were obtained for S.aureus, and twenty-four negative.
The prevalenia of Staphylococcus aureus according to the results of this
investigation is 20% inferior to the data expected.
In conclusión due to the good hospital praxis and the for washing hands is
obtaining the curb of spreading these microorganisms.
Keywords: prevalence, Staphylococcus aureus, SAMR, healthy carrier,
microorganism and hygene.
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1. INTRODUCCION Y JUSTIFICACIÓN
Staphylococcus aureus es el agente más frecuentemente identificado como
causa de infección nosocomial, particularmente en su variante SAMR.
Dicha infección además de repercutir a nivel de la morbimortalidad de los
pacientes, representa un impacto económico importante para los hospitales. En
el caso de SARM, “bacteria devastadora”, la resistencia puede llegar a ser del
44%, 40% y 38% en América latina, África Occidental y Europa
respectivamente.
Estudios demuestran que de cada 100 pacientes hospitalizados, 7 en los
países de ingresos elevados y 10 en los de ingresos bajos o mediados,
contraen una infección relacionada con la atención sanitaria. También se
demuestra que el 30 % de la población adulta es portadora de Staphylococcus
aureus, incrementándose esta cifra, en el personal sanitario.
Se calcula que las personas infectadas por Staphylococcus aureus resistentes
a la meticilina, tienen una probabilidad de morir un 64% mayor que las
infectadas por cepas no resistentes. Los antibióticos utilizados como “último
recurso”, están dejando de ser efectivos, lo que conlleva a una pérdida de
salud pública mundial cuyas repercusiones serán devastadoras.
Es sabido que en la transmisión y persistencia de dicho agente, juega un factor
fundamental el contacto sin medidas de precaución suficiente, tanto guantes,
como lavado de manos con productos antisépticos (jabones y soluciones
hidroalcoholicas). De aquí las numerosas campañas recomendadas por los
institutos de prevención que son avaladas a nivel mundial por la OMS.
Aún así, la realización de cribados nasales en el medio hospitalario permite una
visión real de la prevalencia de estos microorganismos en el ambiente
hospitalario.
Estudios previos advierten que la trasmisión de microorganismos de personal a
paciente, es mucho mayor que a la inversa. Las ropas o batas de trabajo así
como la mucosa nasal, en el caso de Staphylococcus aureus, actúan como
reservorio en el sanitario facilitando la contaminación del paciente y
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convivientes. Todo ello justifica el por qué de este proyecto de investigación
sobre la prevalencia de Staphylococcus aureus en el personal sanitario.
Realizamos este proyecto con el fin de determinar la prevalencia de
Staphylococcus aureus en el personal sanitario del HUCA en Oviedo, en
concreto entre DUES y Auxiliares de enfermería. Y hacer una comparativa
respecto a estudios previos donde indican que la prevalencia en el personal
sanitario es mayor al 30%.
2. OBJETIVO DEL TRABAJO
5
3. MATERIALES Y MÉTODOS
El estudio se centró en el personal de la unidad de UCI cardiaca y en la unidad
de Cirugía Vascular del HUCA, en Oviedo.
La toma de muestra fue realizada por las autoras entre el mes de septiembre y
diciembre de 2016, y los análisis bacteriológicos fueron realizados en el
Laboratorio de Diagnóstico Clínico y Biomédico del IES Isla de la Deva durante
el mismo periodo.
Para analizar las variables de carácter microbiológico se ha seguido el
siguiente protocolo:
3.1. Toma de muestra mediante hisopo de transporte estéril en medio
líquido COPAN ESwab™. Consiste en un sistema de recogida y transporte
multipropósito a base de un medio líquido que mantiene la viabilidad de
aerobios, anaerobios y bacterias exigentes. Adecuado para la automatización,
la tinción de Gram y el cultivo tradicional. (Figura 1)
Figura 1. Medio Copan.
3.2. Al llegar al laboratorio se realiza el registro de la muestra a través del
programa informático asignándole un número de referencia.
3.3. Una vez identificada la muestra, se procede a la siembra en la placa de
Agar Chapman-Stone. Medio de cultivo deshidratado de la casa comercial
Cultimed, selectivo y diferencial en el aislamiento de Staphylococcus debido a
6
la alta concentración de cloruro sódico (75 g/L). La mayoría de los
microorganismos no crecen a esta concentración de sal, mientras que
Staphylococcus, sí lo hace. Incorpora manitol como fuente de carbono y rojo
fenol como indicador, lo que permite aprovechar la correlación que existe entre
la patogenia y la capacidad fermentadora del manitol de los estafilococos para
establecer un diagnóstico presuntivo y sirve, por lo tanto, como indicativo de la
presencia de Staphylococcus aureus, que fermentan el manitol y producen
colonias amarillas. Los Staphylococcus no patógenos no lo fermentan y
producen colonias de color rosa. (Figura 2)
Figura 2.- Colonia de Staphylococcus aureus en Agar Chapman.
El Agar fue reconstruido a partir del producto comercial, hidratado, hervido,
autoclavado y dispensado en placa Petri. Como método de control de calidad,
se ha procedido a mantener en estufa durante 24 horas una de las placas de
Agar Chapman realizadas en el laboratorio.
Como método de siembra, se realizo un agotamiento del asa extremando las
medidas para evitar la contaminación. Posteriormente se incuba la placa entre
24 y 72 horas en estufa a 37º C y se observa el crecimiento en ella.
Tras este tiempo de crecimiento, se puede observar en la placa características
típicas para Staphylococcus como son las colonias amarillas con halo
gelatinasa positiva.
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3.4. Se procede entonces a la extensión en porta para la tinción Gram que
se observa al microscopio. Los reactivos utilizados son:
Cristal violeta según HUCKER de la casa comercial Sharlau Chemisie S.A.
Lugol (mordiente) de la casa comercial Sharlau Chemisie S.A.
Alcohol de 70º de realización casera.
Safranina de HUCKER de la casa comercial Panreac.
Para realizar la extensión, se pone una gota de agua destilada sobre un porta
bien limpio, y con el asa de siembra, previamente esterilizada a la llama, se
coge una pequeña cantidad de bacterias de las que tenemos en nuestra placa.
Con el asa se extiende la gota y bacterias sobre el portaobjetos y se fija la
extensión a la llama del mechero hasta que se seque. Los tiempos utilizados
son:
Cristal violeta de Hucker (colorante inicial) 2 min.
Lugol (mordiente) 1 min.
lavado con agua destilada.
Decoloración con alcohol de 95° 35-40 segundos.
Lavado con agua destilada.
Safranina (colorante de contraste) 1 min.
Lavado con agua destilada.
La observación al microscopio se realiza con objetivo de 40 X.
Microscópicamente se buscan bacterias de forma cocoide, Gram positivas en
agrupamiento típico “racimos de uvas”. ( Figura 3)
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Figura 3. Tinción Gram
3.5. Paralelamente se realizan las pruebas enzimáticas de Catalasa
(resultando positivo para Staphylococcus) y oxidasa (resultando negativo para
Staphylococcus).
Para fabricar la catalasa hemos utilizado un protocolo estipulado en el
laboratorio que consiste en:
50 % peróxido de hidrogeno al 30% de la casa comercial Scharlau
Chemesie S.A.
50 % glicerol de Panreac.
Unas gotas de azul de metileno.
En la técnica se coloca una gota de reactivo catalasa en el portaobjetos con
ayuda de una pipeta Pasteur. Se esteriliza el asa de siembra y se recoger una
colonia de la placa de cultivo.
Se pasa la colonia al portaobjetos dando unos pequeños toques con el asa
encima de la gota.
La aparición instantánea de burbujas sobre la gota o sobre el asa indicará una
reacción catalasa positiva. (Figura 4)
La falta de burbujeo nos indica una reacción negativa de la catalasa.
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Figura 4. Reacción positiva de catalasa.
La prueba de oxidasa se ha realizado con un reactivo llamado Oxidase
Reagent de la casa comercial Biomeriux.
Se procede a colocar el frasco cuentagotas en el sistema de apertura de la
ampolla y se golpea el fondo del frasco para eliminar burbujas que se han
podido formar.
Dejar el conjunto frasco y sistema de apertura, y apretar cuidadosamente para
romper la ampolla.
Para realizar la técnica se pone un trozo de papel de filtro en el porta. Una gota
de reactivo sobre el papel de filtro y coger con el asa de siembra (previamente
estéril) una colonia a analizar y golpear sobre el papel. (Figura 5)
Figura 5. Prueba oxidasa
La aparición en 10-30 segundos de un color que va desde el violeta al púrpura,
indica una reacción positiva.
Las reacciones tardías o ausentes de color, indican resultados negativos.
3.6. Una vez realizado estos procedimientos, se cogen aquellas colonias
sospechosas de ser positivas para Staphylococcus y se hace una siembra en
medio SAID- Biomeriux. Consiste en un medio cromogénico que se utiliza
para la identificación inmediata del género Staphylococcus, inhibiendo la
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formación de otras bacterias (Gram+ y Gram-) y levaduras. La identificación
directa de S. aureus se basa en la coloración verde espontánea de colonias
productoras de glucosidasa (patente pendiente). Se mantiene en estufa 18-24
horas a 37º C. (Figura 7-Muestra 36)
Figura 7 .Colonias de diferentes Staphylococcus
Estas placas fueron divididas en cuatro cuadrantes, permitiendo la
identificación de varias muestras a la vez, obteniéndose varios tipos de
Staphylococcus.
La técnica de siembra en masa fue la utilizada en esta ocasión.
Se pudo observar:
S.epidermidis (colonias blancas).
S.saprophyticus (colonias rosas).
S.Xylosus (colonias malvas).
S.aureus (colonias verdes).
3.7. Material general del laboratorio:
Estufas: para incubación de las placas de cultivo a 37º C.
Microscopio óptico: Visualización de las tinciones Gram.
Asas de siembra.
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Mechero bunsen.
Frascos lavadores con agua destilada.
Bateas.
Puentes de tinción.
Autoclave.
Material de vidrio: Erlenmeyer, probeta.
Microondas.
Pesa, bandejas, cuchara.
3.8. Finalmente se transfiere los datos a una tabla obteniendo los resultados.
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4. RESULTADOS
De un total de 30 muestras analizadas se ha obtenido los resultados
desglosados en la tabla que se muestra a continuación.
Nº IDENTIF DATOS PERSONALES PRUEBAS REALIZADAS
EDAD SEXO PROFESION GRAM SAID
1116/0135 55 MUJER DUE Streptococcus /
1116/0136 57 MUJER TCAE Staphylococcus S.aureus
1116/0137 44 MUJER TCAE Streptococcus /
1116/0138 45 MUJER TCAE Staphylococcus S. xylosus
1116/0139 41 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1116/0140 36 MUJER DUE Staphylococcus S.xylosus
1216/0136 44 MUJER DUE Staphylococcus S.aureus
1216/0137 58 MUJER TCAE Staphylococcus S.xylosus
1216/0138 52 MUJER TCAE Staphylococcus /
1216/0139 31 VARON DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0140 50 MUJER DUE Staphylococcus S. xylosus
1216/0141 33 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0148 26 MUJER DUE Staphylococcus S.xylosus
1216/0149 59 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0150 57 MUJER TCAE Streptococcus /
1216/0151 42 MUJER DUE Staphylococcus S.aureus
1216/0152 53 MUJER DUE Staphylococcus S.xylosus
1216/0173 31 MUJER TCAE Staphylococcus S.aureus
1216/0174 48 MUJER TCAE Staphylococcus S.aureus
1216/0187 37 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0188 37 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0190 46 MUJER TCAE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0190 50 MUJER TCAE Staphylococcus S.xylosus
1216/0191 38 VARON DUE Staphylococcus S.aureus
1216/0192 31 MUJER TCAE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0193 35 MUJER DUE Staphylococcus S.saprophyticus
1216/0194 25 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0195 50 MUJER TCAE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0196 33 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
1216/0197 31 MUJER DUE Staphylococcus S.epidermidis
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NUESTRO ESTUDIO:
El 93% de los participantes fueron mujeres, por lo que realizar una comparativa
por género de la prevalencia del S.aureus no fue considerada. Pero si se
analizaron las siguientes variables:
4.1 .Análisis de los resultados por porcentaje de los diferentes tipos de
Staphylococcus.
Por otro lado se ha obtenido que el 40% de las muestras han sido positivas
para S.epidermidis, el 23,3% positivas para S. xylosus, el 3,33 % para S.
saprophyticus y el 13,33% han sido negativas para cualquier tipo de
Staphylococcus. (Gráfico 1).
Gráfica-1. Porcentaje de los diferentes tipos de Staphylococcus.
4.2. Análisis del número de muestras positivas para S.aureus.
Del total de las muestras sembradas en Agar Chapman, 6 han sido positivas
para Staphylococcus aureus, observando la colonia de color verde en SAID y
correspondiendo al 20 % de portadores nasales de este microorganismo.
(Gráfica-2)
14
Gráfico-2.Número de muestras positivas para S.aureus
4.3. Análisis de los resultados por rango de edad.
Nos encontramos con 3 grupos diferentes:
Profesionales menores o igual a 35 años (un total del 30% de las
muestras).
o En este grupo de edad la totalidad de las muestras son positivas para
algún tipo de Staphylococcus, obteniendo una positiva para
S.aureus.
Profesionales de edad comprendida entre los 36-49 años (36´66 %).
o En este grupo es donde se dio el mayor número de casos positivos
para S.aureus
Mayores de 50 años (33,33%).
o Finalmente en este grupo de edad encontrarnos con el mayor
número de casos negativos con un total de 3 casos. Tan sólo un
caso en este rango de edad ha sido positivo. (Gráfico-3)
S.epidermidis ha sido el más frecuente encontrado en 12 muestras, lo que
supone el 40% del total.
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0
1
2
3
4
5
6
Menores de 35
años
Entre 36- 49 años Mayores de 50
años
Tipos de Staphylococcus por rango de edad
S.epidermidis
S.xylosus
S.saprophytycus
S.aureus
Negativas
Gráfica 3-. Tipos de Staphylococcus por rangos de edad.
4.4. Análisis de los resultados por categoría profesional.
Por otro lado, de los participantes en el estudio, 18 han sido DUES y 12 han
correspondido a TCAES. La prevalencia en este caso por categoría profesional
ha sido del 50% afectando por igual a ambos grupos profesionales
demostrándose que ambos están expuestos a los mismos riesgos de
contaminación a microorganismos. (Tabla-4)
PROFESIONAL MUESTRAS POSITIVAS S.aureus
DUE 3
TCAE 3
Tabla-4. Número de muestras positiva S.aureus por categoría profesional.
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5. DISCUSIÖN
Se sabe que Staphylococcus aureus es un agente ampliamente diseminado,
constituyendo parte de la flora comensal del ser humano, principalmente de la
piel, axilas, inglés, periné y fosas nasales.
Los niños se colonizan fácilmente tras el nacimiento, con un 6 a 24% de
portación a los 3-4 meses de vida.
En los adultos sanos se describe una tasa de portación de 11 a 32%,
pudiendo ser mayor en el personal sanitario.
En España 6 de cada 100 hospitalizados contraen una infección relacionada
con la atención sanitaria, según el último informe de la Sociedad Española de
Medicina Preventiva, Salud Pública e Higiene y se calcula que las personas
infectadas por S.aureus resistentes a la meticilina, tienen una probabilidad de
morir un 64% mayor que las infectadas por cepas no resistentes.
La portación nasal en el ambiente hospitalario (profesionales y pacientes), varia
de acuerdo a diversos factores propios de la población en estudio, pudiendo
ser permanente o intermitente, sensible o resistente a los antimicrobianos. Y
ha sido reconocida como importante en la epidemiología.
La importancia de conocer la prevalencia de este microorganismo.
El entorno hospitalario favorece la “selección natural” de cepas resistentes.
Desde los primeros brotes de la forma resistente de S.aureus (finales década
de 1980), estudios de prevalencia han mostrado aumentos del porcentaje de
resistencia de este microorganismo a la meticilina, siendo en las unidades de
UCI donde existe un porcentaje mayor entorno al 30,5%.
La vigilancia epidemiológica es un componente crítico de cualquier programa
de control. Los pasos claves son la recogida sistemática de información, su
análisis e interpretación.
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Los brotes de Staphylococcus aureus sobretodo SAMR, actúan de reservorio
en los sanitarios trasmitiéndose a los pacientes o convivientes. Las mayorías
de las guías recomiendan la realización de cultivos de cribado a sanitarios y no
fundamentalmente en situaciones de brote o cuando existe sospecha de
sanitario implicado en la trasmisión o en otras situaciones de contacto con
SAMR.
El papel del sanitario colonizado ha sido infravalorado. El cribado y su
descolonización han formado parte del éxito en programas de control holandés
o neozelandés. Por ello debe valorarse su realización en el contexto de un
programa global de control para evitar situaciones endémicas (sobretodo en
unidades de alto riesgo).
Pero por qué no se lleva a cabo.
Staphylococcus aureus está catalogado como uno de los microorganismos más
importantes que causa costes económicos, sobretodo SAMR, perteneciente al
grupo de prioridad elevada y peligrosa para los hospitales y que causa
infecciones mortales a nivel Mundial.
En nuestro país apenas se llevan a cabo cribados que controlen a este
microorganismo y se puede deber a:
Escasos estudios en situación endémica.
Falta de consenso.
Falta de datos que impliquen al sanitario como trasmisor.
Recortes en sanidad.
Se opta por la realización de cribados en los pacientes en vez del personal.
La sanidad pública está llevando a través de la medicina preventiva, campañas
efectivas de concienciación de lavado de manos y buenas praxis que están
resultando efectivas y mucho más económica que la realización de cribados.
Todo ello avalado e impulsado a nivel Mundial por la OMS, que están
consiguiendo frenar, hasta el momento, la diseminación de este
microorganismo; por lo menos así se demuestra en este proyecto con una
prevalencia inferior a la esperada.
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6. CONCLUSIONES
En nuestro estudio encontramos con respecto a los objetivos marcados las
siguientes conclusiones:
6.1. Hemos logrado como objetivo el análisis de 30 muestras obteniendo una
tasa de portación nasal de Staphylococcus aureus en personal sanitario del 20
%.
6.2. Se ha podido comparar un resultado muy por debajo del esperado según
estudios previos, ya que se acerca más a la prevalencia de la población
normal.
6.3. Respecto al análisis de los resultados por rango de edad concluimos:
El mayor número de casos positivos para S.aureus ha sido el rango de edad
36-49 años. Este hecho no es nada extraño ya que el promedio de edad para
este estudio se sitúa en 42,5 años.
El S. epidermidis ha sido el microorganismo más frecuente (40% del total).
Datos clínicos demuestran que este microorganismo es aislado con una
frecuencia que varia entre el 50% y 80 %, encontrándose en la piel y mucosa
de los animales.
Dentro del rango de edad de menores de 35 años nos encontramos con un
solo caso de S.aureus. la baja prevalencia se puede deber a la inestabilidad
laboral de los profesionales a esta edad y que por tanto no se encuentran
expuestos de manera continua al entorno hospitalario.
Finalmente en el grupo de mayores de 50 años sorprende encontrarnos con el
mayor número de casos negativos (3 casos). Dos de ellos corresponden a
TCAE y uno a DUE. Ello puede deberse a que con los años de experiencia
estos profesionales han conseguido manejar las herramientas necesarias para
frenar la diseminación de los microorganismos o también puede deberse a una
tardía incorporación como profesionales de la salud en el ambiente hospitalario
19
7. BIBLIOGRAFÍA
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Microbiol Clin. 2004;Supl 1:78.
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8. CITA
Los autores del presente trabajo se reservan todos los derechos sobre el
mismo, sin más limitaciones que las contenidas en la normativa vigente en
materia de propiedad industrial e intelectual.
Los autores del presente trabajo autorizan al IES isla de la Deva a la
publicación total o parcial del mismo tanto en medios impresos como en
páginas web. Siempre citando la autoría.
Se permite el uso de los datos recogidos en el presente trabajo para la
realización de estudios de agregación en próximos años, en le marco de la
realización de futuros proyectos por parte del alumnado del IES Isla de La
Deva.
Los autores del presente trabajo también autorizan a los profesores del IES Isla
de la Deva a la publicación del mismo en páginas web. Siempre citando la
autoria.
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