ER/PgR enkäten
– Andel positiva– Fördelning per avdelning och inom grupper– Primär antikropp: kloner, spädningar, tider– Fixering och fixeringstid, buffert och pH– Förbehandling, förstärkning, visualisering
– Påverkas ER- och PgR-positiviteten av metodvalet?– 22 av 25 avdelningar har svarat
ER och PgR
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
ER PgR
pos
neg
35651783
ER: 72,8%-89,2% PgR: 50,6%-77,6%
Cut-off: 10% pos
Andel ER-pos per avdelning (21 avd.)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u
ER
Cut-off: 10% pos
ER fördelning (18 avd.)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0% >0-10% 11-75% >75%
ER
Andel PgR-pos per avdelning (21 avd.)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u
PgR
Cut-off: 10% pos
PgR fördelning (18 avd.)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0% >0-10% 11-75% >75%
PgR
PgR fördelning (18 avd.)
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0% >0-10% 11-75% >75%
PgR
SP1
1D5
6F11
6F11/2
GF11
Ej svarat
6F11/2: 1 st
Ej svarat: 3 st
ER kloner
SP1: 11 st
1D5: 3 st
6F11: 3 st
GF11: 1 st
ER spädningar och tider
• SP1: – Färdigspädd 16/32 min– 1:40 30 min– 1:50 25 min– 1:100 30/32 min
• 1D5:– 1:30 30 min– 1:35 25 min– 1:60 30 min
• 6F11:– 1:30 30 min– 1:50 32 min– 1:150 30 min
Någon avdelning späder den färdigspädda (SP1), 32 min (Ventanas system).
klon 16
1E2
PgR636
1A6
312/2
Ej svarat
PgR kloner
klon16: 8 st
1E2: 5 st
PgR636: 4 st
1A6: 1 st
312/2: 1 st
Ej svarat: 3 st
PgR spädningar och tider
• Klon 16: – 1:50 30/32 min– 1:100 30/32 min– 1:200 25/30 min– 1:250 30 min
• PgR636:– 1:150 25 min– 1:300 25/30 min– 1:400 30 min
• 1E2:– Färdigspädd 16 min– Färdigspädd 20 min– Färdigspädd 32 min
Någon avdelning späder den färdigspädda (1E2), 32 min.
• 4% buffrad formalin: 6 st• 4% formalin: 5 st• formalin: 5 st• buffrad formalin: 1 st• 10% buffrad formalin: 2 st• 4% obuffrad formalin: 1 st• Ej svarat: 2 st
Typ av fixering
Fixeringstid
• 24-72h: 10 st• 24-48h: 3 st• Minst 24h: 3 st• 12-24h: 1st• 24h: 1 st• 24h-?: 1 st• 16-48h: 1 st
• Ej svarat: 2 st
Förvaring mellan fix och dehydrering
• Formalin: 13 st• 70% alkohol: 5 st• Vatten: 2 st• Ej svarat: 2 st
Buffert och pH
• CC1: 10 st• TRS;Tris/EDTA;
TRS/EDTA;EDTA: 6 st• Flex high pH: 1 st• Citrat: 1 st• Ej svarat: 4 st
• pH 9: 10 st • pH 8.4: 2 st• pH 8: 1 st• High pH: 1st• pH 6: 1 st• Ej svarat: 7 st
CC1= Tris/EDTA, pH 8.4
PgR: en avd. citrat, pH6 i st.f. EDTA, pH9
(eg. 8 st)
(eg. 10 st)
(eg. 2 st)
(eg. ingen)
Förbehandlingsmetod
• BenchMarkXT (Ventana): 8 st• Kokning 95°C (Ventana). 1 st• Värme (Ventana): 1 st• Mikrovågsugn: 7 st• BondMax: 1 st• Pretreatment module: 1 st• Tryckkokare: 1st• Ej svarat: 2 st
Samma för ER och PgR
Förstärkningssteg och visualisering
• UltraViewDAB: 8 st• IViewDAB: 1 st• EnVision: 7 st• EnVisionFlex: 1 st• LSAB: 1 st• Inget steg: 2 st• Ej svarat: 2 st
Samma för ER och PgR
• DAB: 19 st• DABpolymer: 1 st• Ej svarat: 2 st
Hypotes
• Spritförvaring => färre andel positiva
• SP1 => högre andel ER-positiva
• Högt pH => högre andel positiva
ER kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
ER pos (%) Förvaring
SP1
färdigspädd
16 min CC1 8.4 79 dehydreras direkt
32 min CC1 8.4
79 H2O
8310% buff FA
70%
85 FA
1:40 30 min EDTA 9 82 70%
1:50 25 min Tris/EDTA 986 4% buff FA
89 FA
1:10030 min flex high 84
FA32 min CC1 8.4 78
6F11
1:30 30 min TRS/EDTA 9 88 4% FA
1:50 32 min CC1 8.4 82 FA
1:150 30 min n/a 9 73 direkt t 70% i dehydr.
1D5
1:30 30 min n/a 9 84 4% FA
1:35 25 min citrat 6 80 buff FA
1:60 30 min TRS 9 86 sköljning i H2O
ER kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
ER pos (%) Förvaring
SP1
färdigspädd
16 min CC1 8.4 79 dehydreras direkt
32 min CC1 8.4
79 H2O
8310% buff FA
70%
85 FA
1:40 30 min EDTA 9 82 70%
1:50 25 min Tris/EDTA 986 4% buff FA
89 FA
1:10030 min flex high 84
FA32 min CC1 8.4 78
6F11
1:30 30 min TRS/EDTA 9 88 4% FA
1:50 32 min CC1 8.4 82 FA
1:150 30 min n/a 9 73 direkt t 70% i dehydr.
1D5
1:30 30 min n/a 9 84 4% FA
1:35 25 min citrat 6 80 buff FA
1:60 30 min TRS 9 86 sköljning i H2O
ER kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
ER pos (%) Förvaring
SP1
färdigspädd
16 min CC1 8.4 79 dehydreras direkt
32 min CC1 8.4
79 H2O
8310% buff FA
70%
85 FA
1:40 30 min EDTA 9 82 70%
1:50 25 min Tris/EDTA 986 4% buff FA
89 FA
1:10030 min flex high 84
FA32 min CC1 8.4 78
6F11
1:30 30 min TRS/EDTA 9 88 4% FA
1:50 32 min CC1 8.4 82 FA
1:150 30 min n/a 9 73 direkt t 70% i dehydr.
1D5
1:30 30 min n/a 9 84 4% FA
1:35 25 min citrat 6 80 buff FA
1:60 30 min TRS 9 86 sköljning i H2O
ER kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
ER pos (%) Förvaring
SP1
färdigspädd
16 min CC1 8.4 79 dehydreras direkt
32 min CC1 8.4
79 H2O
8310% buff FA
70%
85 FA
1:40 30 min EDTA 9 82 70%
1:50 25 min Tris/EDTA 986 4% buff FA
89 FA
1:10030 min flex high 84
FA32 min CC1 8.4 78
6F11
1:30 30 min TRS/EDTA 9 88 4% FA
1:50 32 min CC1 8.4 82 FA
1:150 30 min n/a 9 73 direkt t 70% i dehydr.
1D5
1:30 30 min n/a 9 84 4% FA
1:35 25 min citrat 6 80 buff FA
1:60 30 min TRS 9 86 sköljning i H2O
PgR kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
PgR pos (%) Förvaring
16
1:5030 min Tris/EDTA 9 65
FA32 min CC1 8.4 64
1:100
30 min TRS 9 72 sköljning i H2O
32 min CC1 8.457 FA
67 24h FA, 8h 70%
1:20025 min Tris/EDTA 9 62 4% buff FA
30 min citrat 6 57 70%
1:250 30 min n/a 9 51 direkt t 70%
PgR636
1:150 25 min citrat 6 60 buff FA
1:30025 min
Tris/EDTA 973 FA
30 min 69 4% FA
1:400 30 min n/a 9 61 buff FA
1E2 färdigspädd
16 min CC1 8.4 62 dehydreras direkt
20 min CC1 8.4 n/a 4% FA
32 min CC1 8.4
70 10% buff FA
77 FA
78 70%
PgR kloner Spädning Ink.tid Buffert pH
PgR pos (%) Förvaring
16
1:5030 min Tris/EDTA 9 65
FA32 min CC1 8.4 64
1:100
30 min TRS 9 72 sköljning i H2O
32 min CC1 8.457 FA
67 24h FA, 8h 70%
1:20025 min Tris/EDTA 9 62 4% buff FA
30 min citrat 6 57 70%
1:250 30 min n/a 9 51 direkt t 70%
PgR636
1:150 25 min citrat 6 60 buff FA
1:30025 min
Tris/EDTA 973 FA
30 min 69 4% FA
1:400 30 min n/a 9 61 buff FA
1E2 färdigspädd
16 min CC1 8.4 62 dehydreras direkt
20 min CC1 8.4 n/a 4% FA
32 min CC1 8.4
70 10% buff FA
77 FA
78 70%
Antal analyserade ER-fall per avdelning (21 avd.)
0
50
100
150
200
250
300
350
400
450
500
a b c d e f g h i j k l m n o p q r s t u
avd
Range: 107-484
Bara tre avd. analyserar >250 fall
84
82
85
83
85
79
• 99% ER och PgR analyseras• 83% ER-pos, spridning: 73-89%• 65% PgR-pos, spridning: 51-78%• Spridning ang. kloner, spädningar och tider• Typ av fixering och fixeringstid mer lika• Hälften använder Ventanas system • Nästan alla använder förstärkningssteg
• Inget klart samband mellan metodval och ER/PgR-positivitet.
• Få avdelningar gör på exakt samma sätt.
Slutsatser