ELECTROFORESIS ELECTROFORESIS DE DE
LIPOPROTEINAS:LIPOPROTEINAS:
ASPECTOS ASPECTOS TECNICOS Y TECNICOS Y
APLICACIONES APLICACIONES CLINICASCLINICAS
ELECTROFORESIS ELECTROFORESIS DE DE
LIPOPROTEINAS:LIPOPROTEINAS:
ASPECTOS ASPECTOS TECNICOS Y TECNICOS Y
APLICACIONES APLICACIONES CLINICASCLINICAS
Servi-MedBIOL. CARLOS BEJAR LOZANO
Jefe del Departamento de InmunologíaServi-Med Laboratorios Clínicos
Laboratorios Clínicos
EVOLUCION EVOLUCION BIOLOGICABIOLOGICA Y Y EVOLUCION EVOLUCION CULTURALCULTURAL
DiabetesDislipidemiaHipertensiónSedentarismo
Servi-M
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Servi-M
ed L
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torio
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línico
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línico
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OBESIDAD:OBESIDAD: Cuestión cultural ? Cuestión cultural ?Cuestión de países desarrollados ?Cuestión de países desarrollados ?Cuestión genética ? … o TODO..?Cuestión genética ? … o TODO..?
MéxicoMéxico disputa el Primer Lugar 2013Primer Lugar 2013en Obesidad en
el Mundo.
Servi-M
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Importante un Sistema de ClasificaciónClasificaciónMediciónMedición y seguimientoseguimiento
en dislipidemias.
CLASIFICACION CLASIFICACION SOBREPESO / OBESIDADSOBREPESO / OBESIDAD
I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2I.M.C. = Kg peso ÷ (Altura m)2
Servi-M
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Si Lincoln hubiera tenido pc
Si David hubiera viajado a EEUU
Mi IMC: 84.0 kg ÷ (1.80)2
84.0 ÷ 3.24 = 25.9
FACTORES DE RIESGO FACTORES DE RIESGO VIEJOS Y EMERGENTESVIEJOS Y EMERGENTES
Síndrome Metabólico / Síndrome de Resistencia a la InsulinaDislipidemia – Hipertensión – Diabetes
SíndromeSíndrome metabólicometabólico
- Desfibrilador (60´s)- Unidad Coronaria (80´s)- Betabloqueadores
LOS LOS AVANCESAVANCES DE LA DE LA CARDIOLOGIA MODERNACARDIOLOGIA MODERNA
Era de Reperfusión (´80´s)Trombolisis + Stents
Disminución de MortalidadDisminución de MortalidadIntrahospitalariaIntrahospitalaria
NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!NO PREVIENEN… TRATAN DE CORREGIR EL DEFECTO.:!
MORBILIDAD Y MORTALIDAD MORBILIDAD Y MORTALIDAD ASOCIADA A DISLIPIDEMIASASOCIADA A DISLIPIDEMIAS
Cada hora mueren 7 personas en México por infarto, de los que el 70 % está relacionado con dislipidemias e hipertensión.
http://www.invdes.com.mx/anteriores/Abril2001/htm/infarto.html
Es la tercer causa de muerte en México, después de diabetes y cáncer.
http://sinais.salud.gob.mx/mortalidad/tabs/m_009.xls
Se estima que al menos un tercio de la población mexicana tiene algún grado de obesidad y dislipidemia, muchos de ellos asociados a diabetes.
Como medida de control de factores de riesgo, se debe controlar el nivel de nivel de lípidoslípidos, así como otros factores de riesgo asociados (hipertensión, tabaquismo y sedentarismo y hábitos alimenticios).
Mortalidad Mundial
22.3
19.3
12.6
9.7
9
6.3
0 5 10 15 20 25 30
AterosclerosisAterosclerosis
Enfermedad infecciosa
Cáncer
Accidentes
Enfermedad pulmonar
SIDA
Causas de mortalidad (%)
The World Health Report 2001. Geneva. WHO. 2001.
El papel del Laboratorio Clínico: Proporcionar elementos medibles para el control de este padecimiento
Tendencias a buscar en la medicina..
LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A:
- SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA- DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS
LA MEJOR MEDICINA SERA LA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA… …
LA MEJOR MEDICINA ES LA QUE CONTROLA Y PREVIENE LOS FACTORES DE RIESGO Y LAS COMPLICACIONES ASOCIADOS A:
- SINDROME DE RESISTRENCIA A LA INSULINA- DIABETES / DISLIPIDEMIASDISLIPIDEMIAS, - HTA / TROMBOSIS
LA MEJOR MEDICINA SERA LA MEJOR MEDICINA SERA LA PREVENTIVALA PREVENTIVA… …
Origen de las Dislipidemias:Dislipidemias primarias
Causas Causas genéticasgenéticas (primarias) (primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:
Genética Familiar Genética Familiar
- Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar- Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada- Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica- Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar- Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar- Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL
Causas Causas genéticasgenéticas (primarias) (primarias) de Dislipidemias:de Dislipidemias:
Genética Familiar Genética Familiar
- Hipercolesterolemia FamiliarHipercolesterolemia Familiar- Dislipidemia Familiar CombinadaDislipidemia Familiar Combinada- Hipercolesterolemia PoligénicaHipercolesterolemia Poligénica- Hiperquilomicronemia familiarHiperquilomicronemia familiar- Hipertrigliceridemia familiarHipertrigliceridemia familiar- Déficit congénito de HDLDéficit congénito de HDL
Enfermedades mas comunes asociadas a desnutrición:
• Gen Ob en cr7 que codifica para Leptina.• Se expresa (produce) en adipocitos, y bajo
condiciones normales, será en proporción directa a la masa de tejido adiposo.
Leptina ↑↑
Aumento de tejido adiposo
Péptidos anoréxicos- Ghrelina- Serotonina- Colecistoquinina- Neuropéptido Y
Lipogénesis ↓Lipólisis ↑Apetito ↓↓
Origen de las Dislipidemias:Dislipidemias Secundarias
- DiabetesDiabetes: : Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL
- ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina)
- HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL
- NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica.
- ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma
- AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos
- Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL
- DiabetesDiabetes: : Valores elevados de insulina, defectos en el catabolismo de quilomicrones y VLDL
- ObesidadObesidad:: Mayor cantidad de lípidos en circulación y valores elevados de insulina (resistencia a la insulina)
- HipotiroidismoHipotiroidismo:: Disminución del receptor de LDL y depuración lenta de las LDL
- NefropatíasNefropatías:: Insuficiencia renal crónica y depuración lenta de VLDL con aumento de producción de LDL. Retención de colesterol para compensación oncótica.
- ColestasisColestasis:: Bloqueo de vía excretoria de la bilis con aumento del paso colesterol y fosfolípidos al plasma
- AlcoholismoAlcoholismo:: Estimula la secreción de VLDL por parte del hígado y síntesis hepática de triglicéridos
- Terapia sustitutiva de EstrógenosEstrógenos:: Mayor síntesis de VLDL y HDL
Objetivo del estudio de Lípidos:
1.1. Proporcionar una Proporcionar una medidamedida que valore el riesgo que valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante el asociada a dislipidemias, mediante el
Indice de Riesgo = CT Indice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL
2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) de absolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc.
1.1. Proporcionar una Proporcionar una medidamedida que valore el riesgo que valore el riesgo de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) de Enfermedad Coronaria (aterosclerosis) asociada a dislipidemias, mediante el asociada a dislipidemias, mediante el
Indice de Riesgo = CT Indice de Riesgo = CT ÷ cHDL÷ cHDL
2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a 2. Valorar dislipidemia y complicaciones asociadas a hiperlipidemia (hiperlipidemia (cifrascifras absolutas de CT y TG) de absolutas de CT y TG) de acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, acuerdo a riesgos de: colelitiasis, pancreatitis, hígado graso, etc.hígado graso, etc.
“Solo se puede conocer lo que se puede medir”
Valoración de las Dislipidemias por LaboratorioValoración de las Dislipidemias por Laboratorio
Medición de Colesterol + Triglicéridos. Medición del Perfil de Lípidos
Colesterol cHDL + cLDL + cVLDL “LIPIDOS
TOTALES..??? “ Triglicéridos
Test de Quilomicrones: Se deja reposar el suero a 4ºC durante 24 hs; cuando existen quilomicrones, aparece un sobrenadante cremoso en la superficie. En sueros normales, esto nunca aparecerá.
Medición de Perfil de Lípidos + Electroforesis de Lipoproteínas
- Colesterol
- cHDL + cLDL + cVLDL
- Triglicéridos
- Indice de Riesgo Aterogénico
C.T. / cHDL
- Alfa
- Pre-Beta
- Beta
- Indices de Riesgo Aterogénico
Pre-Beta / Alfa
Beta / Alfa
CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE CALCULO DE cLDL y cVLDL A PARTIR DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLDCOLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y cHLD
Fórmula de FriedewaldFórmula de Friedewald para calcular las distintas fracciones de colesterol:
- Medición directa de Colesterol (CT), - Medición directa de Triglicéridos (TG) - Medición directa de cHDL
- Calcular cLDLcLDL y cVLDLcVLDL mediante las fórmulas:
* cLDL = CT – ((Tg / 5 ) + cHDL)
* cVLDL = CT – (cLDL + cHDL)
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia
cVLDL = TG / 5
METODOS PARA VALORACION METODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO
Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia
Normal (mg/dL)
Ejemplo 1 Ejemplo 2Ejemplo 3 Ejemplo 4
Colesterol Total 100 – 200 200 200 250 314
Triglicéridos 50 – 170 170 170 400 245
cHDL > 50 35 50 60 46
cLDL < 100 131 116 110 219
cVLDL < 21 34 34 80 49
Riesgo Aterogénico
C T / cHDL
< 4.5 5.7 4.0 4.1 6.8
METODOS PARA VALORACION METODOS PARA VALORACION DE RIESGO ATEROGÉNICODE RIESGO ATEROGÉNICO
Medición de Colesterol y Triglicéridos, incluyendo las fracciones cHDL, cLDL Y cVLDL, para obtener el riesgo aterogénico derivado de alteraciones del colesterol y las lipoproteínas de transporte.
No valora riesgo asociado a hipertrigliceridemiahipertrigliceridemia
Normal (mg/dL)
Ejemplo 5 Ejemplo 6Ejemplo 7 Ejemplo 8
Colesterol Total 100 – 200 185 180 205 344
Triglicéridos 50 – 170 400 679 754 3 018
cHDL > 50 37 42 56 65
cLDL < 100 68 2 - 1 - 324
cVLDL < 21 80 136 150 603
Riesgo Aterogénico
C T / cHDL
< 4.5 5.0 4.3 3.6 :-) 5.3
VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON VALORACION DE RIESGO DE ENFERMEDAD CORONARIA (EC) CON CIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDLCIFRAS DE COLESTEROL, TRIGLICERIDOS Y LOS cHDL, cLDL Y cVLDL
Datos de Riesgo y Terapéutica del Toronto Working Group, 1998Toronto Working Group, 1998
Factor de Riesgo
Coronario
Nivel de riesgo
Riesgo EC a 10 años
Tratamiento, si: LDL(mg) ó CT/HDL
4 Muy alto 40% 135 ó >5
3 Alto 20 a 39% 174 ó >6
2 Normal 10 a 19% 193 ó >7
1 Bajo <10% 232 ó >8
Las lipoproteínas están formadas por:
- Fracción proteica o Apo (Apoproteína) Función primordial en acoplamiento a
receptores.
- Colesterol total y esterificado
- Triglicéridos.
COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS
COMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINASCOMPOSICION DE LAS LIPOPROTEINAS PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS PROPORCION DE LIPIDOS / APOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
METABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINASMETABOLISMO DE LAS LIPOPROTEINAS
CAUSAS Y CLASIFICACION CAUSAS Y CLASIFICACION DE LAS DISLIPIDEMIAS DE LAS DISLIPIDEMIAS
PROCESO DE LA PROCESO DE LA ATEROSCLEROSISATEROSCLEROSIS
IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL IMPORTANCIA DEL ESTUDIO DEL PACIENTE CON DISLIPIDEMIAPACIENTE CON DISLIPIDEMIA
Cual es su riesgo aterogénico..??Cual es su riesgo aterogénico..??
NO HAY REGLA: Hay “flacos” con hipercolesterolemia o hipertrigliceridemia, y flacos normolipémicos.
Hay “gordos” con hipercolesterolemia y/o hipertrigliceridemia y “gordos normolipémicos.
Se pueden clasificar las dislipidemias y medir el riesgo aterogénico… con solo medir colesterol y triglicéridos ?
… Causas de obesidad ?
… Causas de talla baja ?
ESTUDIO DE DISLIPIDEMIASESTUDIO DE DISLIPIDEMIAS
• La ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ofrece un método sensible y accesible para valoración de riesgos aterogénicos, tanto asociados a hipercolesterolemia como hipertrigliceridemia.
Patológico: Aumento de LDL y VLDL con agravamiento por presencia de quilomicrones. Disminución de síntesis de HDL.
Tendencia óptima: Aumentar HDL y disminuir LDL, IDL y VLDL
Clasificación de Dislipidemias
Terapéutica específica Riesgo EC
RespuestaA tratamiento
Electroforesis de Lipoproteinas
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ELECTROFORESIS DE MICROZONA ELECTROFORESIS DE MICROZONA
Clasificacion de las DislipidemiasClasificacion de las Dislipidemias(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)(OMS 1970 modificada de Fredickson y Levi de 1963)
- Tipo I: Quilomicrones. - Tipo IIa: Betalipoproteínas (LDL) - Tipo IIb: LDL + VLDL (Beta y p-Beta)- Tipo III: IDL (Beta ancha)- Tipo IV: VLDL (pre-Betalipoproteínas)- Tipo V: VLDL + Quilomicrones
Método semi-semi-cuantitativocuantitativo
Debe interpretarse junto con los valores de colesterol colesterol y triglicéridos.triglicéridos.
Banda en el punto de aplicación corresponde a la presencia de quilomicrones,
Banda ancha que abarca beta y prebeta sugiere un acúmulo anormal de IDL y/o de remanentes de quilomicrones.
Banda Pre-Pre-αα (LipoalbúminaLipoalbúmina) aparece cuando hay ácidos grasos libres y lecitina unida a albúmina (no patológica).
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa) ELECTROFORESIS DE MICROZONA (acetato de celulosa)
Punto de aplicación
Lipoproteínas Beta (LDL)
Lipoproteínas Pre-Beta (VLDL)
Lipoproteínas Alfa (HDL)
Sitio de aparición delos quilomicrónes
Método electroforético que permite separar e identificar y medir las distintas fracciones lipoproteicas, mediante su tinción con Sudán Negro y su integración densitométrica en un lipidograma.
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS
HDL VLDL LDL
qu
ilom
icron
es
Integración densitométrica de la electroforésis
MUESTRA A USAR…?MUESTRA A USAR…?
El SUEROSUERO contiene Lipoprotein LipasaLipoprotein Lipasa, que es activa y estará degradando lipoproteínas en la muestra.
La Lipoprotein Lipasa es activada por laactivada por la HEPARINAHEPARINA, por lo que no es una muestra útil para una electroforesis de lipoproteinas.
El El EDTAEDTA inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo inhibe la actividad de la enzima Lipoprotein Lipasa, por lo que es la muestra ideal a utilizar, ya sea que es la muestra ideal a utilizar, ya sea EDTA -Na, -K, o -LiEDTA -Na, -K, o -Li..
NO HAY CAMBIOS SIGNIFICATIVOS SI SE EMPLEA UNA MUESTRA DE SUERO Y SE EFECTUA LA ELECTROFORESIS ANTES DE 48 HORAS EN SUERO REFRIGERADO.
Si no se procesará antes de 48 horas de obtenida la muestra, será mas conveniente una muestra de plasma y refrigerar para procesar.
Datos del
paciente
ELECTROFORESIS DE PROTEINASELECTROFORESIS DE PROTEINAS REPORTE REPORTE
Corrimiento electroforético
Datos de interpretación clínica
Integración de electroforesis
PROPORCIONAR AL MEDICO, TODA LA INFORMACION POSIBLE PARA EL CORRECTO APROBECHAMIENTO DEL ESTUDIO
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS PATRON NORMAL PATRON NORMAL
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia FENOTIPO IIa: Hiper-Betalipoproteinemia
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta FENOTIPO IIb: Hiperlipidemia Mixta
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO III: Beta Ancha FENOTIPO III: Beta Ancha
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia) FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia) FENOTIPO IV: Hiper-Betalipo (trigliceridemia)
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
FENOTIPO DE DISLIPIDEMIASFENOTIPO DE DISLIPIDEMIAS FENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicronesFENOTIPO V: Hipertrigliceridemia con quilomicrones
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASPrincipales problemas y alternativas:Principales problemas y alternativas:
Muy baja cantidad de lípidos (ppalm tg) Prescribir a pacientes dislipidémicos
Uso de sueros envejecidos (> 2 días)Procesar al menos 3 veces por semana
Usar plasma si se procesara después de 48 hs
Uso de sueros/plasmas congelados No congelar. Ideal refrigerar a 4°C
Uso de Buffer equivocado o deteriorado Recambio de buffer y uso de secantes
Déficit Congénitode HDL ..?
Usar un suero normal comoControl Interno
ELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINASELECTROFORESIS DE LIPOPROTEINAS Principales problemas Principales problemas
Principales problemas de corrimientos:1. Deficiente preparación de acetatos por no recambio de filtros Habrá
aparición de artificios en el corrimiento2. Envejecimiento de reactivos Teñido deficiente3. Uso de amortiguador impropio Corrimiento anormal4. Muestras envejecidas Desaparición o atenuamiento de bandas5. No coincide lo que veo en el corrimiento con lo que integra el integrador
densitométrico Limpieza y mantenimiento de los sensores o fotoceldas de cada canal de integración.
Sugerencias:- En lo posible, meter suero “normal” para comparar patrones anormales.- Recambio de papel filtro de puentes y desecantes.- Procesamiento 3 veces por semana- Programación de mantenimiento preventivo al menos una vez al año
Corrimientos de lipoproteinas con muestras frescas (izquierda) y misma muestra con 5 dias de almacenamiento (imagen derecha).