GUÍA TÉCNICA GTC COLOMBIANA 125
2005-10-26
GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES E: REFERENCES GUIDE FOR HORIZONTAL
MICROBIOLOGYCAL METHODS FOR BEVERAGE, FOOD AND ANIMAL FEEDING STUFFS
CORRESPONDENCIA: DESCRIPTORES: microbiología de alimentos – métodos
horizontales; microbiología de alimentos – alimentos para animales; microbiología de alimentos – bebidas.
I.C.S.: 07.100.30 Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. 6078888 - Fax 2221435
Prohibida su reproducción Editada 2005-11-08
PRÓLOGO El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993. ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo. La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general. La GTC 125 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2005-10-26 Esta guía está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales. A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta guía a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología. 3M COLOMBIA -DIVISIÓN DE MICROBIOLOGÍA- ACEITES Y GRASAS VEGETALES S.A. ALGARRA S.A. ALPINA S.A. AQUALAB LTDA. ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS ASINAL LTDA ASOCIACIÓN COLOMBIANA DE MICROBIOLOGÍA AVESCO Y KLIK S.A. BIANÁLISIS BIOCONTROL LTDA. BIOIMÁGEN BIOMERIUX S.A. BIOQUILAB LTDA. BIOTRENDS LABORATORIOS CALIDAD MICROBIOLÓGICA CARULLA VIVERO S.A. CERCAL LTDA. COLEGIO MAYOR DE CUNDINAMARCA COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES S.A. CONGELAGRO CREPES & WAFLES S.A. EMPRESA DE ACUEDUCTO Y ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ –E.S.P.– ENZIPAN DE COLOMBIA LTDA. FÁBRICA DE ESPECIAS Y CONDIMENTOS EL REY S.A.
FARMACOOP FRIGORÍFICO GUADALUPE S.A. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. GASEOSAS COLOMBIANAS S.A.
HOSPITAL DE SAN CRISTÓBAL HOSPITAL SAN JOSÉ INSTITUTO NACIONAL DE SALUD IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. -LABFARVE- LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA VEGETAL LABORATORIO A.B.B.A. LABORATORIO DE CONTROL DE CALIDAD DEL EJÉRCITO
LABORATORIO LABCONTROL LABORATORIOS GRAM LARKIN LESNIAK E.U. LEVAPÁN S.A. MERCADEO DE ALIMENTOS DE COLOMBIA S.A. MERCK S.A. MICROBIÓLOGOS ASOCIADOS NULAB LTDA. PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA
QUÍMICOS Y REACTIVOS LTDA. -QUIMIREL- REPRESENTACIONES BIOTECNOLÓGICAS LTDA. ROCHE DIAGNOSTICS
SECRETARÍA DISTRITAL DE SALUD SUIZO S.A. SURTIQUÍMICOS LTDA. UNIVERSIDAD DE LOS ANDES
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas: ASESORÍAS MICROBIOLÓGICAS BAVARIA S.A. CASA LUKER CENICAÑA CONGELAGRO CONSULTORÍAS MICROBIOLÓGICAS COOPERATIVA DE GANADEROS DE CARTAGENA LTDA. EJÉRCITO FRIGORÍFICO SUIZO S.A. INGENIO PICHICHI S.A. INGENIO RIOPAILA INSTITUTO COLOMBIANO AGROPECUARIO -ICA- -INVIMA- INSTITUTO NACIONAL DE VIGILANCIA MEDICAMENTOS Y ALIMENTOS LABORATORIO MICROBIOLÓGICO SIS LLOREDA GRASAS S.A.
MERCK S.A. MINISTERIO DE PROTECCIÓN SOCIAL. NESTLÉ DE COLOMBIA S.A. PASIFLORA COLOMBIANA S.A. PRODUCTORA DE CONCENTRADOS Y JUGOS DE FRUTA PURIFICACIÓN Y ANÁLISIS DE FLUIDOS LTDA. QUALA S.A. QUIOS LTDA. -RICA RONDO- INDUSTRIA NACIONAL DE ALIMENTOS S.A. TECNIMICRO LABORATORIO DE ANÁLISIS UNIDAD ADMINISTRATIVA DE SALUD PÚBLICA UNIVERSIDAD CATÓLICA INGECAL VIKINGOS
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
DIRECCIÓN DE NORMALIZACIÓN
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
1
GUÍA DE REFERENCIAS DE MÉTODOS HORIZONTALES DE ANÁLISIS MICROBIOLÓGICOS PARA BEBIDAS, ALIMENTOS Y ALIMENTOS PARA ANIMALES 1. OBJETO 1.1 Esta guía brinda información sobre los métodos horizontales propuestos por diferentes entidades oficiales para el análisis de los alimentos. Son criterios mínimos que todos los laboratorios deberían considerar al establecer sus técnicas de análisis. 1.2 Esta guía fue diseñada para que la utilicen quienes son responsables de realizar los análisis microbiológicos de alimentos. 1.3 Esta guía presenta las características de los medios de cultivo, tiempos, temperatura y forma de expresión de los resultados para cada método horizontal propuesto. 1.4 Esta guía no pretende limitar solo el uso de los métodos horizontales, sino por el contrario presentar también las alternativas de las metodologías propuestas por entidades oficialmente reconocidas. 2. RESUMEN DE LA GUÍA Esta guía describe las directrices más importantes a tener en cuenta en la aplicación de un método horizontal, como son los medios de cultivo, los rangos de temperatura y los tiempos límites de incubación según el microorganismo a detectar. Aunque esta guía está prevista para aplicarla a todos los alimentos de consumo humano incluidos los productos lácteos, y alimentos de consumo animal, pueden existir ciertos alimentos a los cuales los métodos de ensayos descritos no aplican debido a la naturaleza de la muestra. 3. IMPORTANCIA Y USO La escogencia de un método horizontal para la evaluación de un alimento determinando su inocuidad o rechazo para consumo humano o animal y los resultados de los análisis, se usan para control de los procesos o evaluación de la conformidad con la reglamentación que establece los límites de aceptabilidad para un producto.
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
2
Los laboratorios que llevan a cabo muestreo de alimentos y generan datos estadísticos, y las personas que tienen la responsabilidad de seleccionar un laboratorio para realizar estudios de la calidad de los alimentos, necesitan utilizar criterios, directrices y recomendaciones de métodos oficiales para la evaluación de sus productos. La demostración y documentación por parte de un laboratorio de que hubo una selección apropiada del método para el análisis del alimento, incrementa la credibilidad de los datos producidos y promueve su aceptación. Por lo tanto, la guía proporciona recomendaciones para la selección de los diferentes métodos horizontales utilizados tanto a nivel internacional, como a nivel nacional para cada uno de los microorganismos que se pueden presentar en una muestra para analizar.
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
3
Tabla 1. Métodos horizontales para hongos y levaduras
Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
Filtración por membrana hidrofóbica
995.21 Todos los alimentos Agar YM - 11 25 oC ± 1 oC 50 h ± 2 h Número más probable (NMP) AOAC 2000
Capítulo 17 Recuento en
placa 997.02 Todos los alimentos Membrana hidrofóbicas Yeast and Mold Count
Plate 20 oC a 25 oC 5 d Contar cajas hasta 150 Colonias
Recuento en placa 1 OGY
Recuento en placa 2 DRBC
Recuento en placa 3 SMA + Clortetraciclina
STANDARD METHODS
Dairy Products 1992 16th
Capítulo 8.10 Recuento en placa 4
Todos los alimentos
PDA
25 oC ± 1 oC 5 d Se cuenta entre 15 y 150 colonias
ICMSF 1984 Recuento en placa 1 Todos los alimentos
Oxitetraciclina Gentamicina Extracto de levadura Glucosa (YGC)
20 oC a 24 oC 3 d a 5 d Se cuenta entre 30 y 300 colonias.
Calcular mohos y levaduras por aparte
INVIMA 1998 Recuento en placa 1 Todos los alimentos OGY 22 oC ± 2 oC 5 d a 7 d Se cuenta entre 20 y 100 colonias
Continúa . . .
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
4
Tabla 1. (Continuación)
Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo Expresión de resultados
DRBC (M183)
DG18 ( M184) PCA (M124)+ Cloranfenicol
Agar maltosa (M185) Agar extracto Malta
(M182)
Recuento en placa/dilución Capítulo 18 Todos los alimentos
Agar Papa Dextrosa (M127)
25 °C ± 1 °C 5 d
DRBC (M183) Recuento en placa directo Capítulo 18
Habas, nueces, condimentos, café,
coco, etc. Alimentos que deben ser
abiertos con pinzas DG18 ( M184)
25°C ± 1 °C 5 d
Contar cajas entre 10 - 150 colonias
FDA - BAM 2001
Microscopia Fluorescencia Cuantificación
levaduras viables y no
viables
Capítulo 18 Bebidas y muestras liquidas Azul de Anilina NaOH
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
5
Tabla 1. (Continuación)
Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo Expresión de resultados
20.52 Todos los alimentos Agar Plate count+Cloramfenicol 22 °C a 25 oC 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
20.53 Cereales, arroz, nueces y condimentos Agar DG18 22 °C a 25 oC 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
20.541 Mohos acidofílicos Agar ADYS 25 oC 5 d a 7 d
20.542 Mohos Aflatosxigénicos Agar AFPA 32 oC 42 h a 48 h
20.543 Especies de Fusarium Agar CZID 25 oC 7 d
20.545 Especies De Mucor Agar MYCK 25 oC 5 d
20.546 Especies De Penicilium Agar DRYES 20 oC 7 d a 8 d
20.547 Levaduras resistentes a preservantes Agar Agar MAA o TGY 25 °C a 30 oC 3 d a 5 d
20.548 Hongos Xerofílicos Agar DG18 o MY50G 25 oC ± 1 °C 7 d
APHA Capítulo 20 Recuento
20.549 Levaduras dominantes en alimentos Agar MEA o TGY 25 oC ± 1 °C 3 d
Contar entre 15 - 150 colonias. Reportar como UFC por g o ml
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
6
Tabla 1. (Final)
Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo Expresión de resultados
NTC 4132 ICONTEC Recuento en
placa ISO 7954 Todos los alimentos
Agar extracto levadura, dextrosa,
cloranfenicol 25 oC ± 1 °C 3 d a 5 d Contar entre 15 - 150 colonias.
Reportar como UFC por g o ml
PDA
PLATE COUNT AACC Recuento en placa AACC 4250 Todos los alimentos
AGAR MALTA
22 °C a 25 oC 3 d a 5 d Contar entre 15 - 150 colonias. Reportar como UFC por g o ml
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
7
Tabla 2. Métodos horizontales para listeria monocytogenes
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Expresión de resultados
OXA, Iluminación de Henry
PALCAM,
35 oC/24 h a 48 h
Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa Prueba
CAMP Agar sangre
35 oC/48 h
LPM+esculin/Fe3+,
TSBYE*(A partir de este se inoculan
las bioquímicas
35 oC/24 h
LPM y pasar a:
30 oC/24 h a 48 h
Reducción de Nitrato (Caldo Nitrato M108)
35 oC/5 d
TSAYE 30 oC/24 h a 48 h SIM o MTM Amb/7 d
FDA-BAM 2001 Detección Capítulo 10 Todos los
alimentos Caldo EB 30 oC 4 h
EB+acrifla-vina, ácido nalidixico y ciclohexam
ida
30 oC 44 h
Caldo carbohidratos +: Dextrosa,
Esculina, Maltosa,
Ramnosa, Manitol, Xilosa
35 oC/7 d
Presencia ó ausencia
Continúa... * Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
8
Tabla 2. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo Tiempo y
Temperatura °C Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatuta °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Kits para Elisa FDA-BAM 2001
Detección Capítulo 10
Todos los alimentos Caldo EB 30 °C 4h
EB+acrifla-vina, ácido nalidixico y ciclohexamida
30 oC 44 h
Serología Agar Oxford y Agar Palcam.
Pasar a:
35 oC ± 2 oC/ 24 h ± 48 h Método Iluminación Henry
Agar Triptosa ácido
nalidixico. Pasar a:
Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa Productos
Lácteos Caldo EB 30 oC ± 2 oC/24 h -48 h
Agar movilidad-
nitrato modificado
Hatano Schuch
Temperatura ambiente / 2 d -
5 d
Hemólisis 35 oC ± 2 C/24 h
CAMP
Xilosa, Ramnosa,
Manitol
35 oC ± 2 oC/24 h - 48 h
INVIMA Detección No. 20
Productos cárnicos
Caldo LEB + acriflavina
1 %
30 oC ± 2 oC/18 h -24 h
Caldo LEB2+
acriflavina 0,2 %
30 oC ± 2 oC/18 h -24 h
Agar tripticasa soya extracto
Levadura TSA-YE
35 oC ± 2 oC/ 18 h a 24 h
Serología
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
9
Tabla 2. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Agar sangre 48 h 37 ºC Caldo TSYE: Utilización de carbohidratos
7 d 37 ºC
Agar para motilidad 2 d -7 d 25 ºC
Enriqueci-miento y
Aislamiento 993.12
Lácteos, derivados lácteos,
cárnicos, derivados cárnicos.
Medio de enriqueci-
miento selectivo completo
48 h 30º C Medio Oxford medio TSYE 48 h 37 ºC
Medio de test CAMP 18 h -24 h 37 ºC
AOAC
Inmunoprecipitación 997.03
Productos lácteos, carnes rojas, cerdo, aves y
derivados, productos marinos, frutas,
vegetales, pastas,
chocolate, huevos y harina de
hueso
caldo MFB +Lic. O Caldo Frazer
28 h ±2 h 30 ºC BLEB 24±2h 30ºC INMUNOPRECIPITACIÓN
Presencia ó ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
10
Tabla 2. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de resultados
Coloración Gram, Catalasa
Motilidad 25 ºC ± 2 ºC 2 d -5 d
Agar sangre de cordero
35 ºC ± 2 ºC 24 h ± 2 h
Fermenta-ción de
carbohidra-tos: ramnosa,
xilosa, manitol
35 ºC ± 2 ºC 24 h - 48 h hasta
5 d
NTC 4666 ISO 11290-1
Detección y aisla-miento
todos los alimentos
Caldo Fraser media
concentra-ción. Caldo
Leb 1 Caldo
Palcam
24 h 30 ºC ± 2 ºC
Caldo Fraser + agentes
selectivos. Caldo Leb
2 Caldo Palcam
24 h -48 h a 30 ºC ± 2 ºC
Agar Oxford Agar Palcam y
pasar a TSYEA
24 h - 48 h a 35 ºC ± 2 ºC
para TSYEA:18 h -24 h a 35 ºC ±
2 ºC
Serología, CAMP
Presencia ó ausencia
Agar Oxford y Palcam ó
24 h a 48 h 35 ºC
Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa
Agar LPM, y pasar a :
24 h a 48 h 30 ºC
36.511 leche y
productos lácteos
Caldo M52 48 h 30 ºC
TSA-YE 24 h - 48 h 30 ºC
Fermentación del manitol, ramnosa y xilosa
Caldo UVM y pasar a :
22 h ± 2 h 30 ºC ± 2 ºC
26 h a 48 h 35 ºC
APHA Capítulo
36
36512
Aisla-miento e Identifica-
ción
Productos cárnicos
Caldo FB 26 h -48 h 35 ºC
Agar MOX
26 h a 48 h 35 ºC ± 2 ºC
Hemólisis en agar sangre de caballo
Presencia ó ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
11
Tabla 2. (Final)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatu-ra °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de resultados
agar LMP 24 h a 48 h 30 ºC
Coloración Gram, Catalasa, Oxidasa
Agar oxford pasar a :
24 h a 48 h 35 ºC
Agar sangre de cordero 48 h 35 ºC
TSA-YE 24 h 30º C
Urea Red de nitratos
TSI
5 d 35 ºC
SIM 7 d temperatura ambiente
MR-VP 48 h 35 ºC
Fermenta-ción
carbohidratosTSBYE + Dextrosa, esculina, maltosa, ramnosa, manitol, xilosa
7 d 35 ºC
Standard Methods for Dairy products
Detección 5,4A todos los alimentos Caldo LEB 2 días 30 ºC
CAMP
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
12
Tabla 3. (Métodos horizontales para Salmonella spp.
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Huevos, leche, ponqués, bizcochos,
pan, formulas infantiles, caseína,
Harina de soya, fideos, macarrones,
spaghetti, queso, ensaladas
preparadas(con jamón, huevo, pollo, atún, pavo), frutas y
vegetales deshidratados,
carnes, crustáceos, pescados, coco, ancas de rana,
carcasas de conejo
Caldo Lactosa
35 oC/ 24 h ± 2 h
PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4
TSI, LIA Urea
conven-cional
35 oC/24 h ± 2 h
Cáscara De Huevo, Huevo Liquido, Huevo
cocido, colores, sabores
Caldo TS+Sulfato
Ferroso
35 oC/ 24 h ± 2 h
Rappaport Vassiliadis
(RV) y
42 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h
UREA Rápida
37 oC ± 0,5 oC/2 h Baño de María
Leche en polvo Solución
Verde Brillante
35 oC/ 24 h ± 2 h
Caldo Tetrationato
(TT)
43 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h
Antisuero flagelar
polivalente
48 oC a 50 oC/1 h Baño de María
FDA - BAM Detección Capítulo 5
Levadura seca, especias Caldo TS 35 oC/ 24 h ±
2 h
Agar BS, XLD y HE
35 oC/ 24 h ± 2 h
Antisuero somático
polivalente 1 min
Presencia ó ausencia
Continúa...
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
13
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Dulces
Reconsti-tuted
nonfat dry milk
35 oC/ 24 h ± 2 h
PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4
Caldo Rojo fenol
dulcitol o Caldo Base
Púrpura con 0,5 %
dulcitol
35 oC/48 h ± 2 h
Rappaport Vassiliadis
(RV) y
42 oC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h Para cultivos mixtos
Caldo Triptona o Triptofano
35 oC/24 h ± 2 h
XLD Caldo KCN 35 oC/ 48 h ± 2 h
Agar Mac Conkey
Caldo Malonato 35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Tetrationato
(TT)
35 oC ± 2,0 oC/ 24 h ± 2 h
Agar HE
35 °C/ 24 h ± 2 h
Test Indol
Caldo Lactosa
Rojo Fenol, o Lactosa Púrpura
35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Sacarosa
Rojo Fenol, o Sacarosa
Púrpura
35 oC/48 h ± 2 h
FDA - BAM Detección Capítulo 5
Jugo Naranja (Pasteurizado y No
Pasteurizado
Caldo Pre-
enriquecimiento
Universal
35 oC/ 24 h ± 2 h
Caldo MR-VP 35 oC/48 h ± 2 h
Presencia ó ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
14
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Agar Citrato Simmons 35 oC/96 h ± 2 h
FDA - BAM Detección Capítulo 18
Todos los alimentos
Agua De Peptona
Tamponada
35 oC ± 2 oC/
18 h -24 h Caldo Selenito Cistina y
35 oC ± 0,2 oC/ 18 h - 24 h
Coloración Gram
LIA Agar UREA
Lactosa Glucosa
Sacarosa Lisina
Movilidad Caldo Red
Nitrato TSI Citrato
Simmons Agar
fenilalanina Caldo
Triptofano Caldo MR-
VP
INVIMA Detección Leche en Polvo
Agua destilada +
5 ml de solución Verde
Brillante 0,1%
35 oC/18 h -24 h
Caldo Tetrationato (TT)+0,2 ml Solución de
Yodo + 0,1 ml Solución
acuosa de verde brillante
0,1 %
43 oC ± 0,2 oC/ 18 h - 24 h
Agar BS, Agar XLD y Agar Verde
brillante lactosa
sacarosa con novobiocina
35 oC ± 2 oC/ 24 h ± 2 h
Oxidasa
35 oC ± 2 oC/24 h - 48h
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
15
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expre-sión de resulta-
dos
Leche Cruda, leche
pasteurizada. Quesos, yogurt
Caldo Lactosa 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Selenito Cistina y
TSI, LIA 35 oC/25 h ± 2 h y 48 h ± 2 h
Leche en polvo, caseína, postres
congelados, mantequilla
Solución Verde
Brillante 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Tetrationato
(TT)
35 oC/24 h ± 2 h
Agar BS, Agar XLD y Agar HE
35 oC/24 h ± 2 h
UREA Convencional 35 oC/24 h ± 2 h
UREA Rápida 37 oC ± 0,5 oC/2 h Baño de María
Antisuero flagelar
polivalente
48 oC - 50 oC/ 1 h Baño de
María
Antisuero somático
polivalente 1 min
Agar Lisina Decarboxilasa 35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Rojo fenol dulcitol o Caldo Base Púrpura con 0,5% dulcitol
35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Triptona o Triptofano
35 oC/24 h ± 2 h
Caldo KCN 35 oC/48 h ± 2 h
Standard Methods Detección Capítulo 5
No. 5,4 B
Todos los alimentos
Caldo Lactosa 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Tetrationato
(TT)
35 oC/24 h ± 2 h
Agar BS, Agar XLD y Agar HE
35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Malonato 35 oC/48 h ± 2 h
Presencia ó
ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
16
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Test Indol Caldo Lactosa Rojo Fenol, o
Lactosa Púrpura
35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Sacarosa Rojo
Fenol, o Sacarosa Púrpura
35 oC/48 h ± 2 h
Caldo MR-VP 35 oC/48 h ± 2 h
Agar Citrato Simmons 35 oC/96 h ± 2 h
Standard Methods Detección Capítulo 5
No. 5,4 B Todos los alimentos
Caldo Lactosa 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Tetrationato
(TT)
35 oC/24 h ± 2 h
Agar BS, Agar XLD y
Agar HE
35 oC/24 h ± 2 h
Sistemas multitest Rápidos
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
17
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Expresión de
resultados
Agar Lisina Hierro
35 oC a 37 ºC durante
24 h
Presencia ó ausencia de Salmonella en g de producto.
Levadura desecada Agua destilada
leche en polvo descremada y
entera
Agua destilada + 2 ml de
solución verde brillante al
1 %
caramelos y dulces
Leche en polvo reconstituida
con verde brillante
ICMSF Detección. 1
Subproductos grasos de
animales, coco
Caldo lactosa + 1 % de
Tergitol o agua de peptona tamponada
con 0,22 % de Tergitol
Caldo tetrationato
verde brillante
43 ºC ± 0,05 ºC 24 h.
Agar sulfito bismuto
35 ºC a 37 ºC durante 48 h
Agar triple azúcar hierro
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
18
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA MICROBIANA
CONSULTAR NORMAS NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4
Agar BS Agar XLD Agar HE
35 oC/24 h ± 2 h
TSI Urea
convencional 35 oC/24 h ± 2 h
Rappaport Vassiliadis
(RV)
42 ºC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h LIA 35 oC/48 h ± 2 h
Caldo TBG
43 ºC ± 0,2 oC/ 24 h ± 2 h UREA Rápida
37 ºC ± 0,5 oC/ 2 h Baño de
María Antisuero flagelar
polivalente
48 ºC a 50 oC/ 1 h Baño de
María
Antisuero somático
polivalente 1 min
APHA Método de Referencia 37.5
Huevos, leche, ponqués,
bizcochos, pan, formulas
infantiles, caseína, Harina de soya,
fideos, macarrones,
spaghetti, queso, ensaladas
preparadas(con jamón, huevo,
pollo, atún, pavo), frutas y vegetales
deshidratados, carnes,
crustáceos, pescados, coco, ancas de rana,
carcasas de conejo
Caldo Lactosa 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo Rojo fenol dulcitol o Caldo Base
Púrpura bromocresol con 0,5 %
dulcitol
35 oC/48 h ± 2 h
Presencia/ ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
19
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Caldo Triptona o Triptofano 35 oC/24 h ± 2 h
Caldo KCN 35 oC/48 h ± 2 h
Caldo Malonato 35 oC/48 h ± 2 h
PARA ALIMENTOS CON ALTA CARGA
MICROBIANA CONSULTAR NORMAS
NTC 4491-1 NTC 4491-2 NTC 4491-3 NTC 4491-4 Test Indol 35 ºC 24 h
Cáscara De Huevo, Huevo Liquido, Huevo cocido, colores,
sabores, Levadura seca,
Caldo TS 35 oC 24 h ± 2 h Caldo SC 35 °C/24 h ± 2 h
Caldo Lactosa púrpura
bromocresol o rojo fenol
35 oC/24 h a 48 h
Leche en polvo Solución
Verde Brillante
35 oC/24 h ± 2 h Caldo TBG
35 °C/24 h ± 2 h
Caldo Sacarosa Rojo
Fenol, o Sacarosa Púrpura
35 oC/48 h ± 2 h
especias de cebolla y ajo
Caldo lactosa 35 oC/24 h ± 2 h Caldo MR-VP 35 oC/8 h ± 2 h
Método de Referencia 37.5
Dulces Caldo lactosa 35 oC/24 h ± 2 h
Agar Citrato Simmons 35 oC/96 h ± 2 h
Agar Lisina y Agar HE
ó 43 oC/24 h
APHA
Filtración Por
membrana Hidrofóbica
37.72
leche en polvo, huevo
pulverizado, queso
pulverizado, pimienta,
chocolate y pollo crudo
Caldo lactosa,
Caldo TS, Solución
Verde Brillante
35 oC/18 h a 24h Caldo TBG
35 oC/6 h a 8 h
Agar EF-18 35 oC/24 h
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
20
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Expresión de
resultados
Todos los alimentos
Caldo lactosa, Caldo TS, Solución
Verde Brillante
35 oC/24 h ± 2 h Caldo TBG 35 oC/6 h a 8 h
Inmunodifusion 37.73
Carnes crudas
Caldo lactosa, Caldo TS, Solución
Verde Brillante
35 oC/24 h ± 2 h Caldo TGB 42 oC ± 0,5 oC/ 6 h a 8 h
1-2 TEST system 35 oC/14 h
Inmunoensayo Enzimático 37.74 Todos los
alimentos Medio no selectivo 35 oC/24 h ± 2 h Caldo SC o
TGB 35 oC/18 h a
24 h
Caldo -M
35 oC/6 h
APHA
Test Rápidos para la
detección de Salmonella
37.8
Todos los alimentos y muestras
ambientales
Métodos multitest aprobados por la AOAC
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
21
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Huevos deshidradatos, Caldo lactosa
24 h ± 2 h a 35 ºC
Agar TSI y LIA 24 h ± 2 h a 35 ºC
Leche entera en polvo
Agua + 1%
solución de
coloración verde
brillante
24 h ± 2 h a 35 ºC
Caldo selenito
cistina + 1-10 ml caldo tetrationato Test de
ureasa Baño de maría 2 h a 35 oC ± 0,5 ºC
Levadura activa desecada
Caldo tripticasa de soya
24 h ± 2 h a 35 ºC
Caldo selenito cistina
Caldo lactosa rojo de fenol
48 h ± 2 h a 35 ºC
Ajo y cebolla en polvo Caldo
tripticasa de soya
24 h ± 2 h a 35 ºC
Caldo sucrosa rojo de fenol
48 h ± 2 h a 35 ºC
Chocolates de leche y caseína
Caldo lactosa+
% solución
de coloración
verde brillante
24 h ± 2 h a 35 ºC
Medio MR/VP 48 h± 2 h a 35 ºC
Detección. 967.25
Leche en polvo instantánea libre de
grasa
Solución verde
brillante
24 h ± 2 h a 35 ºC
Caldo selenito
cistina + 1-10 ml caldo tetrationato
24 h ± 2 h a 35 ºC
XLD, Agar
Sulfito Bismuto, Agar para entéricos Hektoen
24 h ± 2 h a 35 ºC
Agar citrato de Simmons
96 h ± 2 h a 35 ºC
AOAC
Kit de identificación bioquímica
978,24 (a) Todos los alimentos Métodos multitest aprobados
por la AOAC
Presencia ó ausencia
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
22
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Test Serológicos Aglutinación Todos los alimentos
Método de búsqueda por anticuerpos
fluorescentes
975.54 Todos los alimentos
ISO-GRID 991.12 Todos los alimentos
AOAC
Método de búsqueda
monoclonal calorimétrico
EIA
986.35 Todos los alimentos
Positivo ó negativo
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
23
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Método de búsqueda
monoclonal calorimétrico
EIA
987.11
Todo tipo de alimentos excepto materias
primas de alimentos o alimentos con alta carga microbiana
Inmunoensayo enzimático
policlonal para salmonellas mótiles y no
mótiles
992.11 Todos los alimentos
Ensayo de inmunofluores-cencia unido a
una enzima
996.08 Todos los alimentos
AOAC
Inmunodifusión para
salmonellas mótiles
989.13 Todos los alimentos
Positivo ó negativo
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
24
Tabla 3. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Expresión de
resultados
MSRV 993.07 Cocoa y chocolate
MSRV 995.07 Productos lácteos deshidratados
Método de conductancia 991.38 Todos los alimentos
Pollo, ostras, setas, camarones, alimento para aves y alimentos
altamente contaminados
Caldo lactosa
24 h ± 2 h a 35 ºC Detección. 995.2
Ancas de rana Caldo lactosa
24 h ± 2 h a 35 ºC
medio Rappaport-Vassiliadis +1-10 ml
caldo tetrationato
Baño de maría
24 h ± 2 h a 42 oC ±
0,2 ºC
Agar Sulfito
Bismuto, agar para entéricos Hektoen y
XLD
24 h ± 2 h a 35 ºC TSI y LIA 24 h ± 2 h a
35 ºC
Inmunoensayo enzimático
policlonal con caldo RV y caldo
tetrationato
998.09 Todos los alimentos
AOAC
INMUNOPRECIPITACIÓN para salmonelas mótiles y no
mótiles
999.09 Todos los alimentos
Positivo ó negativo
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
25
Tabla 3. (Final)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Expresión de
resultados
medio Rappaport-Vassiliadis/ medio verde malaquita o Tetrationate
16 h a 18 h a 42,5 ºC ± 0,5 ºC
TSI, LIA y Urea
NTC Detección 4574
Alimentos de consumo
humano y para animales
Agua peptonada
tamponada, Caldo
lactosado
18 h - 24 h a 35 ºC ± 2 ºC
Medio Selenito/cistina
16-18 H a 35 ºC ± 2 ºC
Agar Rambach,
agar Hektoen,
agar McConkey, agar sulfito
bismuto, agar
salmonella-shiguella
(SS), agar verde
brillante A. XLD
24 h a 48 h a 35 ºC ± 2
ºC
Serología: sueros poli-
monovalentes
24 h - 48 h a 35 ºC ± 2 ºC
Presencia ó ausencia
de Salmonella en 25 g de producto.
AACC 4225A Todos los alimentos
Caldo nutritivo
24 h ± 2 h a 35 ºC
Selenito cistina tetrationato 24 h ± 2 h a 42 ºC
Agar Hektoen, XLD, SB,
McConkey
24 h 35ºC Agar TSI, LIA y serológico
en BHI 24 h 35 ºC
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
26
Tabla 4. Métodos horizontales para aerobios
Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio
cultivo Temperatura Tiempo Expresión de
resultados
Recuento en placa 966.23
Desmenuzados, congelados, precocidos, preparados,
nueces y carnes
Agar Plate count 35 oC ± 2 ºC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g
Filtración por membrana Hidrofóbica
986.32
Leche Pasterizada, Huevos en
polvo y cremas
TSFA 32 oC 48 h ± 2 h Total de bacterias/g o ml
Recuento en Placa 988.18 Productos
Lácteos Gel de pectina 32 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h
Conteo: 25 - 250 UFC Reportar como:
UFC/g
AOAC 2000 Capítulo 17
Recuento en Placa 990.12 Todos los
alimentos
Membrana hidrofóbicas
Aerobic Count
35 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h Conteo 30-300 UFC
Reportar como UFC/g o ml
Recuento en Placa 6,2 Class O Productos
Lácteos
Standard Methods
Agar 32 oC ± 1 ºC 48 h ± 3 h
Conteo: 25 - 250 UFC Reportar como:
UFC/g o ml
STANDARD METHODS
Diary products 1992 16th Capítulo 6
Recuento en placa 6.3 Productos
Lácteos
Membrana hidrofóbicas
Aerobic Count
32 oC ± 2 ºC 48 h ± 3 h Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como: UFC/g
Recuento estándar en
placa Método 1 Todos los
alimentos Agar Plate
Count 29 oC a 31 oC 48 h 3d
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g Recuento en
placa de siembra por extensión en
superficie
Método 2 Todos los alimentos
Agar Plate count 29 oC a 31 oC
72 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g
Recuento en placa por
siembra de gotas en superficie con asa
calibrada
Método 3 Todos los alimentos
Agar Plate count 29 oC a 31 oC 48 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g
ICMS 1984
Recuento en placa por
siembra con asa calibrada
Método 4 Todos los alimentos
Agar Plate count 29 oC a 31 oC 48 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g
INVIMA 1998 Recuento en placa No. 2 Todos los
alimentos Agar Plate
Count 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como: UFC/g
Todos los alimentos 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g o ml FDA - BAM 2001
Recuento en Placa Capítulo 3
Lácteos
Agar Plate count
32 oC ± 1 oC 48 h ± 2 h Conteo: 25 - 250 UFC
Reportar como: UFC/g Continúa . . .
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
27
Tabla 4. (Final)
Incubación Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio
cultivo Temperatura Tiempo Expresión de
resultados
Recuento en placa 7.62 Todos los
alimentos Agar Plate
count
Recuento directo en
placa 7.63 Todos los
alimentos Agar Plate
count
Filtración por
membrana 7.71 Todos los
alimentos Agar Plate
count
Recuento en placa 7.72 Todos los
alimentos
Membrana hidrofóbicas
Aerobic Count
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar como:
UFC/g o ml
Método Pectin gel 7.73 Redi-gel
Método Membrana hidrofobica
7.74 Aerobic count hgmf
Método placa en espiral
7.75
Productos lácteos
Agar Plate count
Conteo: 25 - 250 UFC Reportar como:
UFC/g o ml
Método de asa
calibrada 7.76 Todos los
alimentos Agar Plate
count
Recuento en placa
por siembra de gotas en superficie con asa
calibrada
7.77 Todos los alimentos
Agar Plate count
APHA Capítulo 7
2001
7.78 Todos los alimentos Simplate
25 °C a 35 ºC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC Reportar
como: UFC/g o ml
ICONTEC Recuento Placa
NTC 4519/ISO
4833
Todos los alimentos
Standard Plate Count 35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como: UFC/g
Agar Plate Count
AACC Recuento Placa AACC 4211 Todos los
alimentos Buffer fosfato
(diluciones)
35 oC ± 2 oC 48 h ± 2 h
Conteo: 30 - 300 UFC
Reportar como: UFC/g
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
28
Tabla 5. Métodos horizontales para Staphylococcus. Aureus
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
1. Caldo BHI
35 oC - 37°C/ 18 h -24 h Número Más
Probable 987.09 Todos los alimentos
Caldo tripticasa
soya + 10 % NaCl + 1 % Piruvato Na
35 oC/48 h Agar Baird
Parker
35 ºC - 37 oC/ 48 h
2. Coagulasa*
35 oC - 37 °C/ 4 h -18 h máx 48
h
Reportar el NMP según
Tabla
1. Caldo BHI
35 oC - 37°C/ 18 h - 24 h
AOAC 2000 Capítulo 17.5.02
Aislamiento y enumeración en superficie
975.55 Todos los alimentos
Agar Baird
Parker 35 ºC-37 oC/48 h
2. Coagulasa*
35 oC - 37 °C/ 4h -18 h máx 48 h
Contar las cajas que
tengan entre 20 y 200 colonias
STANDARD METHOS
Diary products Cap 5
Aislamiento y enumeración en superficie
5.4 (f) Todos los alimentos
Agar Baird
Parker 35 ºC/45 h - 48 h 1. Caldo
BHI 35 oC/18 h - 24 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias
Continúa . . .
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
29
Tabla 5. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Expresión de
resultados
2. Coagulasa* 35 ºC/6 h
3. Catalasa
4. Glucosa 37 ºC/5 d
5. Manitol 37 ºC/5 d
6. Sensibilidad Lisostafina 35 ºC < 2 h
7. Nucleasa Termoestable 35 ºC/4 h
Numero mas probable 5.4 (f.4) Todos los
alimentos
Caldo tripticasa soya +
cloruro de sodio
35 oC/48 h Agar Baird
Parker 35 ºC/48 h
8. Produccion de enterotoxin
35 ºC - 37 ºC/ 18 h -24 h
Número más probable (NMP)
Aislamiento y enumeración en superficie
Productos lácteos
Agar Manitol
agar S110
37 oC/24 h Similar al anterior Contar cajas
entre 20 - 200 colonias
STANDARD METHOS
Diary products Cap 5
Número Más Probable
5.4 (f.5)
Leches
Caldo Giolitti cantoni Caldo
Lactosa salado
37 oC/24 h Similar al anterior Número más
probable (NMP)
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
30
Tabla 5. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial Principio de la técnica Método Alimentos
Medio (s) de
cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h 1 Caldo BHI 35 oC/18 h -
24 h Agar Baid
Parker 35 oC-37 oC/30 h -48 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
2
Agar yema de huevo polimixina
telurito 35 oC-37 oC/24 h
Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h
3 Agar Kranep
35 oC-37 oC/30 h -48 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
Aislamiento y enumeración en superficie
4
Agar difosfato de fenolftaleina
con polimixina
35 oC-37 oC/24 h -48 h Caldo BHI 35 oC/18 h -24 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias/
UFC por g o ml
ICMSF 1984
Numero mas probable 5
Todos los alimentos
Caldo telurito manitol glicina
35 oC - 37 oC/ 24 h -48 h
Agar leche sal 37 oC/24 h Coagulasa* 35 ºC/4 h -24 h
Número más
probable
1. Caldo BHI
35 oC ± 2 oC/18 h -24 h
INVIMA 1998 Capítulo 2 Numeral 8
Todos los alimentos
Agar Baid Parker 35 oC ± 2 oC/48 h
2. Coagulasa*
35 oC ± 2 oC/ 6 h y descartar a
las 24 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias.
REPORTAR como UFC por g o ml
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
31
Tabla 5. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas
Entidad oficial Principio
de la técnica
Método Alimentos Medio (s) de cultivo
Tiempo y
Tempe-ratura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
1. Caldo BHI 35 oC ± 2 oC/ 18 h -24 h
2. Coagulasa* 35 oC ± 2 oC/6 h y descartar a las
24 h
3. Catalasa
4. Glucosa 37 oC/7 d
5. Manitol 37 oC/7 d
6. Sensibilidad Lisostafina
35 ºC/2 h
Recuento
Agar Baid Parker 35 ºC/45 h - 48 h
7. Nucleasa Termoestable 35 ºC/4 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias
1. Caldo BHI 35 oC ± 2 oC/ 18 h -24 h
FDA -BAM 2001
NMP
Capítulo 12
Productos en los que se espere un pequeño
numero de S.aureus y alimentos
que contengan una gran
población de especies
competitivas
Caldo Tripticasa
Soya+NaCl+Piruvato de
sodio
35 oC/48 h ± 2 h
Agar Baird Parker 35 ºC/48 h
2. Coagulasa* 35 oC ± 2 oC/6 h y descartar a las
24 h
Reportar el NMP según
Tabla de NMP
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
32
Tabla 5. (Continuación)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Expresión de
resultados
1. Caldo BHI
35 ºC - 37 ºC/ 18 h - 24 h Procedimiento
de Enriquecimiento
selectivo
39.51
Alimentos que
contienen una pequeña población de
células injuriadas
Caldo Tripticasa
Soya + NaCl
35 ºC - 37 ºC/ 24 h ± 2 h
Agar Baird Parker
35 ºC - 37 ºC/ 46 h ± 2 h 3.
Coagulasa: plasma +
EDTA
35 oC-37 oC/ 6 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias
1. Caldo BHI
35 oC - 37 oC/ 18 h -24 h
Procedimiento de
Enriquecimiento selectivo
39.52
Ingredientes alimenticios
crudos y alimentos no procesado
de los cuales se espera
que contenga grandes
poblaciones de especies competitivas
Caldo Tripticasa
Soya+NaCl+Piruvato de sodio
35 ºC -37 ºC/ 48 h ± 2 h
Caldo Giolitti
Cantoni
35 ºC - 37 ºC/ 24 h - 48 h
Agar Bard Parker
35 oC-37 oC/48 h ± 2 h 3.
Coagulasa: plasma +
EDTA
35 oC - 37 oC/ 6 h
Reportar NMP de
Estafilococos Coag /g
1. Caldo BHI
35 oC - 37 oC/ 18 h - 24 h
Conteo en Superficie
39.53 Alimentos
crudos y no procesados
Agar Baird Parker
sembrar 0,3 ml en 3
cajas 35 ºC-37 ºC/45 h - 48 h
3. Coagulasa: plasma +
EDTA
35 oC - 37 oC/ 6 h
Contar cajas entre 20 -
200 colonias
APHA 2000 Capítulo 39
Enumeración directa de S.aureus
Coagulasa Positiva
39.57
Quesos, leche y
postres a base de
leche
Agar Fibrinoge-no Plasma de conejo
35 ºC-37 ºC/48 h
REPORTAR como # de
S.aureus por g o ml de producto
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
33
Tabla 5. (Final)
Preenriquecimiento Enriquecimiento Aislamiento Bioquímicas Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio (s)
de cultivo
Tiempo y Tempera-
tura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura
°C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Medio (s) de cultivo
Tiempo y Temperatura °C
Expresión de
resultados
Agar Baid Parker sin yema de
huevo
35 oC - 37 oC/ 48 h
APHA 2000
Capítulo 39
Enumeración directa de S.aureus
Coagulasa y Termonucleasa
positiva
39.58 Alimentos crudos y
procesados
Agar Baird Parker + Plasma Telurito
fibrinogeno+piruvato de sodio
35 oC - 37 oC/8 h Agar DNA
Azul de toluidina
35 oC - 37 oC/4 h
Contar entre 10-100
colonias típicas
Agar Baid Parker 35 oC ± 2 oC/24 h
ICONTEC NTC 4779 Todos los alimentos Medio
plasma de conejo
fibrinogeno
35 oC ± 2 oC/18 h - 72 h
Coagulasa: plasma +
EDTA 35 oC/4 h -24 h
Contar entre
20-200 colonias
1. Caldo BHI 35 oC -37 oC/ 18 h - 24 h
AACC Todos los alimentos
Agar Baid Parker
35 oC - 37 oC/48 h
2. Coagulasa: plasma +
EDTA
35 oC-37 oC/18 h - 24 h
Positivo o negativo
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
34
Tabla 6. Métodos horizontales para Bacillus cereus
Incubación Entidad oficial
Principio de la
técnica Método Alimentos Medio cultivo Tempera-
tura Tiempo
Expresión de resultados
Recuento en placa 980.31 D Todos los
alimentos Agar MYP 30 ºC 24 h a 48 h
Conteo: 15-150 colonias típicas con
halo de lecitinasa
30 ºC 48 h ± 2 h NMP de B
cereus confirmados
AOAC 2000 Capítulo 17 NMP para
alimentos que
contienen 103 UFC/g
980.31 E Todos los alimentos
Caldo tripticasa soya
polimixina/ confirmar en
MYP 30 ºC 24 h a 48 h
ICMSF 1984
Recuento en placa siembra
por estria en
superficie
Todos los alimentos
Agar yema de huevo
polimixina o yema de huevo sal polimixina cloruro de
trifeniltrtrazolio
35 ºC -37 ºC 24 h
Reportar como presuntos de B cereus las
colonias típicas. Hacer confirmación
INVIMA 1998
Recuento en placa siembra
0,1 ml en superficie con varilla de hockey
9 Todos los alimentos
Agar selectivo para Cereus
según Mossel 35 oC ± 2 oC 18 h a 24 h
Reportar como presuntos de B cereus las
colonias típicas. Hacer confirmación
Recuento en placa
siembra de 0,1 ml en superficie
D Todos los alimentos
Agar manitol yema de
huevo polimixina
MYP
30 ºC 24 h
Reportar UFC/g7ml de B cereus las
colonias típicas.
Caldo tripticasa soya
polimixina 30 ºC 48 h ± 2 h
FDA - BAM 2001 Capítulo
14
NMP E Todos los alimentos
Agar MYP 30 ºC 24 h
Hacer confirmación Hacer lectura
tabla NMP
APHA Capítuloítulo 32
2001
Recuento en placa 32.21 Todos los
alimentos
Agar MYP y Agar KG (Kin-
Goepfert) 30 oC -32 ºC 20 h a 24 h Conteo: 30-
300
NMP 32.22 Todos los alimentos
Caldo tripticasa soya
polimixina 30 ºC 48 h Hacer lectura
NMP
ICONTEC
Recuento Placa
siembra de 0,1 ml en superficie
NTC 4679 Todos los alimentos Agar MYP 30 ºC ± 2 oC 18 h a 24 h
Conteo entre 15-150
colonias
AACC Recuento Placa Todos los
alimentos
79 oC - 80 ºC 12 min Standard methods Diary
Products Capítulo 8
Esporas de Bacillus 8.9 Leche
cruda
SMA + 0,1 % almidón soluble 30 ºC ± 1 oC 48 ºC
Esporas aerobias
mesófilas/ ml
* Hacer confirmación mediante pruebas bioquímicas
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
35
Tabla 7. Métodos horizontales para Clostridium
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio
cultivo Temperatura Tiempo Pruebas
confirmativas TO Tiempo Expresión de
resultados
Medio de tioglicolato
fluido 35 ºC 18 h a 24 h TSC sin
yema de huevo
35 ºC 20 h caldo de
esporulación 35 ºC 24 h
Medio gelatina lactosa y
nitrato motility 35 ºC 24 h
Recuento en placa 976.3 Todos los
alimentos TSC con yema de
huevo 35 ºC 24 h
Caldo PY para colonias atípicas
35 ºC 24 h
20- 200 UFC/ g o ml
AOAC 2000 Capítulo 17
Número más probable 993.10 Mariscos IMM 45 ºC en baño
de maría 16 h a 18 h Medio
modificado de C. perfringens
45 ºC 24 h NMP Bacterias/g o ml
Agar leche lactosa yema de huevo + antitoxina polivalente
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis 18 h a 24 h
Tipificación serológica
Fermentación de
carbohidratos/ medio de carne
cocida
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis 18 h a 24 h
ICMSF Recuento en
placa e identificación
1 británico Todos los alimentos
Agar sangre de
caballo
35 oC a 37 ºC en
anaerobiosis y aerobiosis
48 h
caldo peptona + lactosa, glucosa,
sacarosa, maltosa
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis 48 h
30 - 300 UFC/g o ml
Continúa . . .
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
36
Tabla 7. (Continuación)
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio
cultivo Temperatura Tiempo
Pruebas confirmativas Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
Detección por enriquecimiento*
Todos los alimentos de baja carga
microbiana
Medio de carne cocida
35 oC a 37 ºC 18 h a 24 h Agar sangre de caballo
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis y aerobiosis
24 h Presencia ó ausencia
Número más probable *
Todos los alimentos
Medio de carne cocida
35 oC a 37 ºC en
anaerobiosis 24 h Agar sangre de
caballo
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis 48 h NMP Bacterias/ g o
ml
Recuento en placa
Todos los alimentos
Agar sulfito cicloserina/
Agar triptosa sulfito
cicloserina Agar
perfringens de Shahidi-Ferguson
35 oC a 37 ºC en
anaerobiosis 20 h a 24 h
Agar movilidad nitrato
suplementado Caldo gelatina lactosa Yema
de huevo Hemólisis
35 oC - 37 ºC 24 h 20 - 200 UFC/ g o ml
ICMSF
Detección por enriquecimiento
2 norteamericano
Todos los alimentos de baja carga
microbiana
medio fluido
tioglicolato
46 ºC ± 0,5 oC 37 ºC ± 0,5 oC
4 h a 6 h 18 h a 24 h
Agar yema de huevo de
McClung y Toabe Agar sangre de
oveja
35 oC - 37 ºC en
anaerobiosis 24 h Presencia ó ausencia
Recuento de esporas No. 10 Todos los
alimentos
Agar SPS Agar sulfito cicloserina
35 ºC ± 2 oC 72 h 5 - 50 colonias
Caldo tioglicolato
Caldo de carne 35 ºC 24 a 48 h
20 - 200 UFC/ g o ml
INVIMA 1998
Recuento en placa No. 11 Todos los
alimentos
Agar SPS Agar
triptosa sulfito
cicloserina
35 ºC ± 2 oC 48 h
Bioquímicas: Catalasa, movilidad nitrato, lactosa y gelatina
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
37
Tabla 7. (Final)
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Pruebas confirmativas/ bioquímicas Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
medio de carne cocida 24 h a 48 h
Caldo de tioglicolato fluido
35 ºC
18 h a 24 h FDA- BAM 2001
Recuento en placa Capítulo 16 Todos los
alimentos
Agar TSC sin yema de
huevo
35 ºC en anaerobiosis 20 h a 24 h
medio leche-hierro modificado
46 ºC en baño de maría 2 h
20-200 UFC/g o ml
Recuento en placa 34.71 Todos los
alimentos
Caldo hígado Caldo
peptona-glucosa
extracto de levadura
35 ºC a 37 ºC 20 h a 24 h Agar TSC + yema de huevo 35 ºC 18 h a 24 h UFC/g ó ml APHA
Capítulo 34 2001
Recuento en placa 34.72 Todos los
alimentos Agar TSC 35 ºC a 37 ºC 18 h a 24 h Agar TSC sin yema de huevo 35 ºC - 37 ºC 18 h a 24 h 20-200 UFC/g ó ml
Medio fluido de tioglicolato
35 ºC ± 2 ºC en
anaerobiosis 18 h a 24 h
Método A. Medio SL
46 ºC en baño de agua 18 h a 24 h
ICONTEC Recuento en placa NTC 4834 Todos los
alimentos
Agar triptosa sulfito
cicloserina libre de yema de huevo Agar
SPS Agar TSN
35 ºC ± 2 ºC en
anaerobiosis 24 h a 72 h
Método B. Caldo fluido de
tioglicolato Caldo de carne cocida
46 ºC ± 0,5 ºC 35 ºC
3 h a 4 h 24 h a 48 h
15-150 UFC/g ó ml
* Hacer las pruebas bioquímicas indicadas en el recuento en placa e identificación
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
38
Tabla 8. Métodos horizontales para Coliformes
Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo Medio cultivo Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
recuento en gel de pectina 989.11 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 25-250 UFC/g o ml
Película rehidratable Membrana
hidrofóbicas
986,33 989,10
leche y productos lácteos
Placa membrana hidrofóbicas para
recuento de coliformes
32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml
Película rehidratable Membrana
hidrofóbicas
996.02 Productos lácteos HSCC 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h > 150 UFC/g o ml
Película rehidratable Membrana
hidrofóbicas
991.14 Todos los alimentos
Membrana hidrofóbicas E. coli
count plate 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/ml
Discos 992.30 Todos los alimentos Caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Discos SSD
+ MUG 35 ºC 24 h a 48 h Presencia / ausencia E. coli
m-FC 35 ºC TSAM 44,5 ºC ± 0,5 ºC 24 h ± 2 h Coliformes/ ml o g
AOAC 2000
Capítulo 17
Filtración por membrana hidrofóbica
983.25 Todos los alimentos TBA para E. coli 44,5 ºC ± 0,5 ºC
24 h ± 2 h Coliformes fecales/ ml
o g
Recuento en placa 7.8 VRBA 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h >150 UFC/g o ml
Número más probable 7.9 caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h NMP/ g ó ml
L- EMB Tubo SMA 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Test Completo
en medio líquido 7.10
Productos lácteos
caldo LST 35 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h
Tubo LST 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h
Presencia ó ausencia
Medio rehidratable 7.13 Productos lácteos Membrana
hidrofóbicas VRBA 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h >150 UFC/g o ml
Gel de pectina 7.14 Productos lácteos VRB redigel 32 ºC ± 1 ºC 24 h ± 2 h Caldo BGB 32 ºC ± 1 ºC 48 h ± 3 h 25-250 UFC/g o ml
Medio caldo para coliformes 35 ºC 3 h
Standard Methods
Capítulo 7
Impedancia para detección de coliformes
7.15 Leche, materia prima, crema y
mezcla de helado Impedancia 35 ºC 14 h
Caldo BGB 32 ºC 48 h Recuento por impedancia de coliformes/ ml
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
39
Tabla 8. (Continuación)
Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos Medio cultivo
Temperatura Tiempo Medio cultivo
Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
Número más probable
1 Nortea-mericano
Todos los alimentos
Caldo lauril sulfato triptosa 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Caldo lactosa bilis verde
brillante 2 % ó Agar eosina
azul de metileno ó Agar Endo
35 ºC a 37 ºC 24 h a 48 h NMP Coliformes/ ml o g
Número más probable
2 británico
Todos los alimentos Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/
ml o g
Número más probable 3 Todos los
alimentos Caldo lactosa bilis
verde brillante 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Agar bilis lactosa rojo
neutro ó Agar Endo
35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/ ml o g
Recuento en placa 4 Todos los alimentos
Agar bilis lactosa rojo neutro verde
brillante 35 ºC a 37 ºC 24 h < 150 colonias
UFC/ml o g
Número más probable
coliformes fecales
1 norteame
ricano
Todos los alimentos
Caldo lauril sulfato triptosa 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h Caldo EC 44,5 ºC ± 0,2 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/
ml o g
ICMSF
Número más probable
coliformes fecales
2 Europeo
Todos los alimentos Caldo MacConkey 35 ºC a 37 ºC 24 h y 48 h
Caldo lactosa bilis verde
brillante 2% e Indol
44 ºC ± 0,1 ºC 24 h y 48 h NMP Coliformes/ ml o g
Número más probable No. 13 Todos los
alimentos
Caldo lactosado bilis verde brillante
2 % 35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h
Agar EMB Agar VRBA
Agar Endo 35 ºC ± 2 ºC 24 h y 48 h NMP de
coliformes/ g ó ml INVIMA
1998 Número más probable de
coliformes fecales No. 14 Todos los
alimentos
Caldo lactosado bilis verde brillante
2 % 35 ºC ± 2 ºC 24 h a 48 h
Caldo lactosado bilis verde
brillante 2 % y Caldo triptófano
44,5 ºC ± 0,5 ºC en baño de agua 48 h NMP de coliformes
fecales/g ó ml
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
40
Tabla 8. (Continuación)
Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio cultivo To Tiempo
Medio cultivo To Tiempo
Expresión de resultados
Número más probable Caldo lauril triptosa 35 ºC ± 1 ºC 48 h ± 2 h Caldo
BGLB 35 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes /g ó ml
Recuento en placa
Todos los alimentos
VRBA 35º C 32ºC para prod. lácteos 18 h a 24 h Caldo
BGLB 35 ºC 24 h - 48 ± 2 h 25- 250 UFC/ g ó ml
Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h
FDA - BAM 2001
Número más probable para
coliformes fecales
Capítulo 4
Mariscos Caldo lauril triptosa 35 ºC 48 h ± 2 h Caldo L-EMB 35 ºC 18 h - 24 ±
2 h
NMP de coliformes fecales /g ó ml
Número más probable 8,71- 8,72 Caldo lauril sulfato
triptosa 35º C ± 0,5 ºC 24 h - 48 h ± 2 h
Caldo bilis verde
brillante 35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes /g
ó ml
Recuento en placa para
microorganis-mos no
estresados
8.73 VRBA 35 ºC 18 h - 24 h
Sugiere Caldo bilis
verde brillante
35 ºC ± 0,5 ºC 48 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml
TSA Temperatura ambiente 2 h ± 0,5 h Recuento en
placa para microorg
estresados
8.74
VRBA 35º C 32 ºC para productos lácteos 18 h - 24 h
15-150 UFC/g ó ml
Recuento en Membrana
hidrofóbicas 8.75 VRBA 35º C 32 ºC para
productos lácteos 24 h ± 2 h UFC/g ó ml
APHA Capítulo 8
2001
Gel de pectina Redigel 8.76
Todos los alimentos
Medio VRB Redigel 35 ºC 32 ºC para productos
lácteos 24 h ± 2 h
UFC/g ó ml
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
41
Tabla 8. (Final)
Prueba presuntiva Prueba confirmativa
Incubación Incubación Entidad oficial
Principio de la técnica Método Alimentos
Medio cultivo Temperatura Tiempo
Medio cultivo Temperatura Tiempo
Expresión de resultados
Membrana hidrofóbica 8.77 Agar m-FC 35 ºC 24 h ± 2 h
NMP coliformes/g ó
ml
Número más probable para
coliformes fecales 8.81
Caldo lauril sulfato
triptosa 35 ºC ± 0,5 ºC 24 h -48 h ± 2 h Caldo EC 45,5 ºC ± 0,2 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes
fecales /g ó ml
Número más probable para
coliformes y E. coli 8.931 Todos los
alimentos Caldo LST+ MUG 35 ºC 24 h h± 2 h L-EMB 35 ºC 18 h a 24 ± 2 h
NMP de coliformes/g ó ml
Recuento en placa para coliformes y E.
coli 8.933 Todos los
alimentos Agar VRBA+MUG 35 ºC 18 h a 24 h 15-150 UFC/g ó ml
Recuento en placa HGMF+ MUG para coliformes y E. coli
8.934 Todos los alimentos LMG+MUG 35 ºC 24 h ± 2 h NMP de coliformes/g
ó ml
Recuento en Membrana
hidrofóbicas 8.935 Todos los
alimentos
Membrana hidrofóbicas E.coli
count plate 35 ºC 24 h ± 2 h 15-150 UFC/g ó ml
APHA Capítulo 8
2001
Recuento en Colichrome 8.936 Todos los
alimentos Redigel colichrome 35º C 32 ºC
para productos lácteos
24 h - 48 h
15-150 UFC/g ó ml
AACC Número más probable para
coliformes y E. coli 4215 Todos los
alimentos Caldo LST 35 ºC 48 h ± 2 h Caldo BGLB 35 ºC 48 h ± 2 h NMP de coliformes/g ó ml
* Hacer pruebas bioquímicas de acuerdo a cada entidad oficial
GUÍA TÉCNICA COLOMBIANA GTC 125
42
BIBLIOGRAFÍA Official methods of Analysis of AOAC International. 17th Edition. Dr. William Horwitz, Volume I y II. 2000. USA. STANDARD METHODS for the Examination of Dairy Products 16th Edition. Pul. Health Association, INC, Washington, D.C. Mc Gugan, W.A.1992. ICMSF, 1984, Ecología microbiana de los alimentos. Volumen 2. Productos alimenticios. Ed. Acribia, Zaragoza. Ministerio de Salud. INVIMA. Manual de Técnicas de Análisis para Control de Calidad Microbiológico de Alimentos para Consumo Humano. Bogotá Colombia. 1998. Bacteriological Analytical Manual.. U.S. Food and Drug Administration Laboratories for Detection in Food and Cosmetic Products. FDA - BAM 2001 NTC 4132:1997, Microbiología. Guía general para el recuento de mohos y levaduras. técnica de recuento de colonias a 25°C. ISO 7954:1987, Microbiology. General Guidance for Enumeration of Yeasts and Moulds. Colony count technique at 25°C. American Association of Cereal Chemists. AACC 4250. 2004 ISO-GRID. For Detection and Confirmation of Salmonella spp. Method AOAC 991.12. 2000. NTC 4666 - ISO 11290-1: 1999, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Método horizontal para la detección de Listeria monocytogenes. Parte 1. Método de detección. ICMSF, 1986. Ecología microbiana de los alimentos. Volumen 1. Significado y métodos de Recuento. Ed. Acribia, Zaragoza. NTC 4574:1999, Microbiología de alimentos y de alimentos para animales. Guía general sobre métodos para detección de Salmonella. NTC 4491-1:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 1. Reglas generales para la preparación de la suspensión inicial y de diluciones decimales. NTC 4491-2:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo. Suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 2. reglas especificas para la preparación de carne y productos carnicos. NTC 4491-3:2004, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 3. Reglas especificas para preparación de muestras de pescado y productos de la pesca. NTC 4491-4:2005, Microbiología de alimentos y alimentos para animales. Preparación de muestras para ensayo, suspensión inicial y diluciones decimales para análisis microbiológico. Parte 4: Reglas especificas para la preparación de productos diferentes de leche, productos lácteos, carne, productos cárnicos, pescados y productos de la pesca.
Recommended