“Año de la Inversión para el Desarrollo Rural y la Seguridad Alimentaria”
UNIVERSIDAD NACIONAL“SAN LUIS GONZAGA” DE ICA
QUÍMICA BIOLÓGICA II (PRÁCTICA)
DOCENTE: BLGA. ISABEL YARMAS DUEÑAS
INTEGRANTES:
BENDEZÚ RAMOS, Alex
DOMINGYEZ MENDOZA, Fernanda
GARCÍA SORIA, Yovana
PERALES PAREJA, José Miguel
CICLO: VI
AÑO: 3ro
ICA – PERÚ
2013
PRÁCTICA N° 1
DETERMINACIÓN DE LA TASA METABOLICA BASAL
APARTIR DEL PESO Y DE LA ALTURA.
FUNDAMENTO:
El Metabolismo basal es la cantidad de energía que precisa nuestro
organismo en un día, aun cuando se encuentra en reposo, es decir el
gasto calórico mínimo, diario necesario para el desarrollo de la vida.
En un adulto en condiciones basales requiere 960 Kcal diarias por cada
m2 de superficie corporal es decir podemos calcular el metabolismo basal
a partir de la superficie cutánea mediante la forma:
MB (Kcal/día) = S.C (m2) x 960
Según Dubois:
S.C (m2) = (P0.425 X A0, 725X 71,84)/10 000.
P= Peso en kg.
A= Altura en cm.
1. OBJETIVOS:
Determinación de la taza metabólica basal a partir del peso y la altura,
realizando para ello los cálculos respectivos.
2. PROCEDIMIENTO:
Para hallar le metabolismo basal se realizara a partir del peso y de altura
de una persona.
a) Datos de la persona :
Peso: 56 kg
Altura: 1.64m
b) Para poder aplicar la formula se convertirá la altura en
metros a centímetros.
1.64x100=164
c) Aplicaremos la fórmula para hallar el metabolismo basal:
= (560.425 x 164 0.725 x 71.84) /10000
= 1.6
MB (Kcal/día) = 1.60x 960
= 1536
Nota: de acuerdo a la actividad la taza metabólica puede variar.
PRÁCTICA N° 2
SC (M2) = (P 0.425 x A 0.725 x 71.84) /10000
MB (Kcal/día) = SC (M2) x 960
URISTI K
(Examen químico de orina)
1. OBJETIVO:
Determinar la composición química de la orina, con la utilización de la
técnica de URISTI K.
La orina es un líquido que en su mayor parte está contenido de agua y
metabolitos.
Con esta técnica solo se determinara el lado cualitativo de la muestra,
determinaremos la presencia de compuestos orgánicos en la orina.
Este examen nunca debe ir solo, es necesario acompañarlo de un
examen físico y microscópico de sedimento urinario.
Ex. físico.
Ex Químico. URINALIS o Examen
completo de orina.
Ex Microscópico de sedimento.
2. MATERIALES:
Muestra de orina fresca.
Tubos de ensayo, gradillas.
Tira reactiva.
Equipo: centrifuga (para el examen microscópico de sedimento).
3. PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA
a) En un vaso de precipitación traemos la orina.
b) En un tubo de ensayo vertemos la orina hasta las ¾ partes, no se
centrifuga la orina.
c) Luego se inserta una tira reactiva en el interior del tubo del ensayo
por 30 a 60 seg.
d) Esta tira reactiva viene provista de colores que ya están
clasificadas, solo nos indican lo que queremos encontrar.
e) Para el examen de sedimento es necesario centrifugar la muestra a
5000 revol. por 10 min. , colocar una gota de sedimento en una
lámina portaobjeto y observar al microscopio. Anotar resultados.
Con esta tira podemos medir cualitativamente lo siguiente:
Glucosa.
Bilirrubina.
Cuerpos cetónicos.
Densidad (parámetro físico).
Presencia de sangre.
pH (parámetro físico).
Proteínas.
Urobilinógeno.
Nitratos.
Leucocitos (células que se encuentran en el Ex Microscópico).
4. RESULTADOS :
A) Exámen físico:
- color: amarillo
- olor: -
- pH: ligeramente acido
B) Exámen químico : La tira reactiva nos da una determinación
cualitativa de compuestos químicos presentes :
Glucosa: negativo
Bilirrubina: 5+
Cuerpos cetónicos (ketona): negativo
Densidad: 1.010
Sangre: negativo
pH: 6.5
Proteínas: negativo
Urobilinógenos: traza 16
Nitratos: negativo
Leucocitos: trazas
C) Exámen de sedimento urinario:
Se halló:
Células epiteliales y cristales
Muestras microscópicas:
PRÁCTICA N° 3
URICOSTAT
(Método URICOSTAT enzimático)
Fig.1- Restos orgánicos.
Fig.2 – Células epiteliales
Fig.3- Glóbulos blancos que nos indica algún tipo de infección. En
el paciente.
1. SIGNIFICACION CLINICA
El ácido úrico es un metabolito de las purinas, ácidos nucleicos y
nucleoproteínas. Habitualmente la concentración de ácido úrico en suero
varía de un individuo a otro de acuerdo a diversos factores tales como:
sexo, dieta, origen étnico, constitución genética, embarazo.
Niveles anormales de ácido úrico en suero son índice de desorden en el
metabolismo de las sustancias que lo originan de defectos en su
eliminación.
2. MATERIALES:
Muestra de sangre (paciente en ayunas)
Set de uricostat.
Pipetas ,micropipeta,tubos de ensayo
Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.
3. REACTIVO A USAR:
El set de URICOSTAT está formado por:
-C.C Estándar: 100 mg/l
-Buffer
-Enzimas: URICASA PEROXIDASA
Descripción:
Standard: solución de ácido úrico 100 mg/l.
Uricasa: solución de uricasa (UOD) mayor o igual a 3 kU/l.
Reactivo de trabajo
Reactivo 4-AF/POD: frasco conteniendo más de 100 U de peroxidasa
(POD), 12,5 mmol de buffer fosfatos para pH 7,3 y 3 mmol de 4-
aminofenazona.
Reactivo Fenol: solución de clorofenol 24 mmol/l.
UOD Y POD son las enzimas que participan.
4. PROCEDIMIENTO
a) Se obtiene el suero.
b) Marcar tres tubos de ensayo con “B (blanco)”,”S (Stándar)”,”D
(desconocido)” y colocar en orden lo siguiente:
c) Se mezcla suavemente y se incuba por 5 minutos en baño maria a 37
°C o a temperatura ambiente por 10 minutos.
d) Colocar un poco de las soluciones de los tubos en cubetas y realizar
la lectura a 505 nm/ 530 nm (luz verde).Luego se hace la lectura si
TubosComponentes(ml)
B S D
ESTANDAR --- 20ul --
MUESTRA --- -- 20ul
RX DE TRABAJO 1ml 1ml 1ml
es en Espectrofotómetro será a 505 nm y si es en Colorímetro será
a 530nm con filtro verde.
e) Realizar los cálculos correspondientes con la siguiente fórmula:
FÓRMULA PARA LOS CÁLCULOS
C.C Ac. Úrico (mg/l) = FACTOR x D.O (D)
Dónde:
Factor = 100/ D.O (S)
D.O (D): Densidad óptica del desconocido.
VN = 25-60 MG/L (HOMBRES)
20-50 MG/L (MUJERES)
5. RESULTADOS
• Las D.O de cada tubo son las siguientes:
D.O
B 0,000
S 0,057
D 0,066
• Hallando factor:
F= 100/ S (D.O)
F= 100/ 0,057
F= 1 754,39
• Hallamos cc.Ac. Úrico:
cc.Ac. Úrico (mg/l) = F x D.O (D)
cc.Ac. Úrico (mg/l)= 1 754,39 x 0.066
cc.Ac. Úrico (mg/l)= 115,79 mg/l.
PRÁCTICA N° 5
DETERMINACIÓN DE CREATININA EN SUERO U ORINA
La Creatinina se genera a partir de la degradación de la creatina es un
producto metabólico de desecho del metabolismo normal de los
músculos, lo cual es filtrada por los riñones y excretado por la orina.
1. MATERIALES:
Muestra de sangre (paciente en ayunas)
Set para la determinación de CREATININA.
Pipetas ,micropipeta,tubos de ensayo
Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.
REACTIVOS:
Acido Pícrico: 46.2 mmol/l de
ácido pícrico en solución.
Tampón Base: Solución
conteniendo 300mmol/l de NaO
adicionado con 1%, de
tensioactivo no iónico.
El reactivo premezclado
(ac.picrico + tampón base) debe
preparse máximo para 15 días y
deben ser embotellados en
frascos de vidrio color caramelo.
Estándar: Solución de creatinina
20 mg/l.
2. PROCEDIMIENTO:
a) Se extrae sangre 3ml aprox y se centrifuga.
b) Se trabajara con 2 tubos.
c) Mezclar inmediatamente. Se preparan las cubetas para realizar las
lecturas.
d) Hacer la lectura en Espectrofotómetro a 505 nm (longitud de onda)
a los 30 segundos en los tubos E1 y D1 (la primera lectura) y a los
5 minutos E2 y D2 (la segunda lectura).
TubosComponentes(ml)
S D
Rvo.PREMEZCLADOS 1ml 1ml
ESTANDAR 0.2ml --
MUESTRA(suero) --- 0.2ml
e) Realizar los cálculos correspondientes,usando la siguiente formula:
mg creatinina / l = D2−D1E2−E1
X 20
Dónde:
D1 y E1 = Corresponde a la 1° lectura (a los 30 seg.).
D2 y E2 = Corresponde a la 2° lectura (a los 5 seg.).
El número 20 es la concentración del Estándar.
3. RESULTADOS :
a) Se presentan las lecturas:
VN= 7-14 mg/L
LECTURA A LOS 30 SEGUNDOS
E1 D10,070 0,099
LECTURA A LOS 5 MINUTOS
E2 D20,152 0,143
La D.O del S = 0,058
b) Reemplazando en la fórmula:
mg creatinina / l = D2−D1E2−E1
X 20
mg creatinina /l = 0,040,08
X 20
mg creatinina /l = 10 mg/l
PRACTICA N° 6
DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS TOTALES Y ALBUMINA
I. DETERMINACIÓN DE PROTEINAS TOTALES
( METODO DE BIURET MODIFICADO)
1. FUNDAMENTO:
La reacción está dada por el reactivo de biuret en medio alcalino,
en la cual los enlaces peptídicos de las proteínas reaccionan con
los iones cúpricos del reactivo cupro –alcalino dando un complejo
de color Azul violáceo cuya concentración se mide
fotocolorimetramente a 540 nm.
2. MATERIALES:
•Muestra de sangre (paciente en ayunas)
•Set para la determinación de PROTEINAS TOTALES.
•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo
•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.
REACTIVO DE TRABAJO:
CUPRO-ALCALINO (Cu SO4 Y Na OH)
C.C ESTÁNDAR: 6,9 g/dl
3. PROCEDIMIENTO:
a) Centrifugar la muestra de sangre a 5000 rev. Por 5 min.
b) Realizar lo siguiente en cada tubo:
B S D
Stándar - 50 ul -
Muestra - - 50 ul
Reactivo de
trabajo
3.5 ml 3.5 ml 3.5 ml
c) Mesclar e incubar a 37°C por 15 min. en baño maria.
d) Realizar las lecturas a 540 nm.
d) Realizar los cálculos correspondientes, usando la siguiente
formula:
P.T (g/dl)=D.O del D x F
Dónde:
F= c.c estándar/ D.O del S
4. RESULTADOS:
a) Se presenta las D.O correspondientes:
b) Reemplazamos los valores en la fórmula:
F= c.c estándar/ D.O del S
F= 6,9 g/dl / 0,370
F = 2,55
II. DETERMINACIÓN DE ALBÚMINAS (MÉTODO DE
UNION A COLORANTES) :
1. FUNDAMENTO :
V.N = 6,5- 8,0 g / dl
P.T (g/dl)=D.O del D x F
P.T (g/dl)= 0,205 x 2,55
D.OB 0,000S 0,370D 0,205
Unión a colorantes. En medio de reacción tamponado a pH 3.6 y
con adecuada fuerza iónica, la albumina presente en la muestra se
une específicamente con el colorante verde de Bromo-Cresol. El
cambio en las propiedades ópticas que muestra el complejo
albumina colorantes traducido a un incremento de la absorbancia
medida a 625nm respecto de la solución del colorante libre, permite
cuantificar fotométricamente a la albumina de forma proporcional a
su concentración en la muestra.
2. MATERIALES:
•Muestra de sangre (paciente en ayunas)
•Set para la determinación de ALBUMINA.
•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo
•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.
REACTIVO DE TRABAJO:
Verde de bromocresol (90 umol/l
adicionado con 1% de tensoactivo no
iónico) + solución tamponada pH 3,6.
C.C. ESTÁNDAR: 3,5 g/dl.
3. PROCEDIMIENTO:
a) Centrifugar muestra de sangre.
b) Realizar lo que se indica en la tabla:
TUBOSCOMPONENTES
E D
ESTÁNDAR 10 ul --
MUESTRA -- 10 ul
RVO. DE VBC 3.5 ml 3.5ml
c) Mezclar.Reposar a temperatura ambiente 15 minutos.
d) Leer en espectrofotómetro a 625 nm o fotocolorímetro a 620-
650 nm llevando a cero con reactivo de trabajo.
e) Realizar los cálculos correspondientes con la siguiente formula:
4. RESULTADOS:
a) Se presentan las D.O de cada tubo :
D.O
ALBUMINA (g/dl) = D.O del D x F
Dónde:
F= C.C Estándar / D.O del estándar
V.N = 3,4 – 4,5 g/dl
B 0,000S 0,250D 0,300
b) Reemplazamos los datos en la fórmula:
F= C.C Estándar / D.O del estándar
F= 3,5 g/dl / 0,250
F= 14
Entonces:
ALBÚMINA (g/dl) = D.O del D x F
ALBÚMINA (g/dl) = 0,300 x 14
ALBÚMINA (g/dl) = 4,20
PRÁCTICA N° 7
DETERMINACIÓN DE LA FOSFATASA ALCALINA EN
SUERO O PLASMA.
1. FUNDAMENTO :
La fosfatasa alcalina está distribuida en diversos tejidos siendo
particularmente importante su presencia en el hígado, riñón e
intestinos.
La actividad enzimática esta aumentada en hepatitis
enfermedades óseas y normalmente también se eleva en la
niñez.
2. MATERIALES:
•Muestra de sangre (paciente en ayunas)
•Set para la determinación de FOSFATASA ALCALINA.
•Pipetas, micropipeta, tubos de ensayo
•Equipos: centrifuga y espectrofotómetro.
REACTIVO DE TRABAJO:
Dietanolamina con cloruro de Mg (10 ml) +
fosfodionitrofenilfosfato de sodio (2 ml).
3. PROCEDIMIENTO:
a) Centrifugar la muestra.
b) En una cubeta colocar 1 ml de reactivo de trabajo y 10 ml de
muestra (suero).
c) Se mescla y se toma el tiempo:
1° LECTURA se realiza a los 30 seg. y a una longitud de
onda de 403 nm.
2° LECTURA consta de tres lecturas más:
-A los 60 seg. -Alos 120 seg. -A los 180 seg.
d) Se realizan los cálculos correspondientes:
Fosfatasa alcalina (u / l) = 5 460 x A
Dónde:
A = Diferencia de lecturas c/ 60 “ (promedio)