B/ood Agar Base No. 2 BASE DE AGAR SANGRE N.2

Código CM271

FORMULA

Peptona protaoss Digerido de hfg.do Extracto de levadura Cloruro de sodio Ag.r

en gramos por litro 15.0 2,5 5,0 5,0

12,0 pH 7,4 (aprox. I

INSTRUCCIONES

Se suspenden 40 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave fr 121°C durante 15 minutos. Se enfria a 45-50oC y se añade 7% de sangre estéril.

Se mezcla con agitación suave y se vierte en placas de Petri (12 mi para una place de 9 cml u otros recipientes, LA RECONSTITUCIO"J y LA ME2CLA SE DEBE DESARROLLAR EN UN MATRAZ QUE TENGA AL MENOS 2 Y, VECES EL VOLUMEN DEL MEDIO PARA ASEGURAR UNA AIREACION ADECUADA DE LA SANGRE,

DESCRIPGION

La Base de Agar Sangre Oxoid NQ 2 se desarrolló para corresponder a la demanda de una base de agar sangre con calidades nutritivas especiales que permitiera la máxima recuperación de organismos delicados sin influir en sus reacciones hemoHticas. En comparación con el agar de digerido recién preparado, la base de Agar Sangre NO 2 puede mostrar unas propiedades estimuladoras del crecimiento iguales o superiores y las bacterias cromogénicas crecidas sobre el medio de Oxoid muestran una formación de pigmento superior. La comparación con otros muchos agares sangre ha mostrado que, con la Base de Agar Sangre Oxoid N9 2 se mejora, en forma considerable, el crecimiento de muchas bacterias, especialmente los estreptococos exigentes y neumococos, como se muestra por el desarrollo exuberante y precoz de las colonias.

El medio, con agentes nutritivos y selectivos añadidos, es especialmente adecuado para el aislamiento de especies de Mycoplasma (PPLO): se añaden 40 g de polvo de Base de Agar Sangre NQ 2, 5 g de dextrosa y 0,125 g de acetato de talio o sulfato de talio a 1 litro de agua destilnda y se hierve hasta disolver. Se mezcla y se vierte en placas con gran espe~or. Se inoculan y se incuban las placas durante 5 6 6 dfas a 37°C bajo condiciones aeróbicas y anaeróbicas respectivamente.

Para el aislamiento primario de las especies de Haemophilus a partir de muestras que contengan una flora mixta, se utiliza la BQse de Agar Sangre N92 con Sangre de Caballo Desfibrinada SR50. Se pueden obtener, incluso, mejores resultados utilizando placas de agar sangre de caba!lo p.xtendiendo en la mitad de cada placa dos gotas de saponina al 10% (Waterworth, 19551.

39

Cuando las ruacciones hemoliticas no sean importantes, p .e., cuando se trate de cu ltivos puros, se puede utilizar la Base para preparar Agar 'Chocolate': Se añade 10% de Sangre de Caballo Desfihrinada SR50 a léI Base a 80° C y se mantiene a esta temperatu ra dUI·ante 5 6 10 minutos, agitándola frecuentemente. Se enfría a 50°C, se mezcla bien y se vierte en placas.

REFERENCIA 1. Waterworth, Pamela M. 11955) 8rit. J. Exp. Path. 313(2), 186-194.

Bordetella Selective Supplement SUPLEMENTO SELECTIVO PARA IlORI)F.TELLA

Código SR82

Se trata de cefalGxini'l liofil izada, parg añadir al Agar de Carbón Vegetal (Charcoal Agar) CMl19 o al Agar de BOI"dut-·Gengou (Bordet-Gengou AgarJ CM267 para el aislamiento selectivo de Sordetell8 pertussis.

FORMULA (por vial)

Cefalexina 20 mg Equivalente a 40 mg de ce"1alexina por litro de medio.

INSTRUCCIONES Agar de Carbón Vegeta l Se añaden 2 mi de Jgud destilada estéril a un vial, disolviéndose el contenido por completo. Se añade esta solución a 500 mI de Agar de Carbón Vegeta l CM1 19 estéril, fundido y enfriado ó 50° C. adicionado de sangre de caballo desfibrinado SR50 al 10% v/ v. Se mezcla bien y se vierte en placas de petri es tériles. Agar de Bordet -Gengou El contenido de un vial rehidrótado puede añadirse igualmente a 500 mi de Agar de Bordet-Gengou CM267 e;¡f riarlo a 5f)° C, a los que se hallan añadido 75- 100 mi de sangre de caballo desfibrinada SR50 estéril.

Las placas con cefal8xina pueden almacenurse durante 1 semana a 4° C. M edio de Transporte para B. pertussis Puede añadirse el contenido -Je un vial a 500 .:r,1 de Agar de Carbón Vegetal de mitad de concentración + 10% v/ v dE' sangre de caballo desfibrinada SR50 para ut ilizarse corno medio de tran!)porte para B. pf:rtussis.

DESCRIPCION El Agar de Bordet·G8ngou Crl1267 con sangre de caballo desfibrinada estéri l o el Agar de Carbón Vegetal CM1 19 con sargre pueden utilizarse para el aislamiento de B. pertussis.

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Davis y cols. (1971) sugirieron los siguientes "':!cuentos bacterianos para valorar la calidad de los yogures en el momento de su venta .

Strept. thermophilus Lact. bulgadcus

REFERENCIAS

Satisfactorio >1(1' > 10'

DudoBO lo' - lc1 10' - 10'

Insatisfactorio <lo' <lo'

1. Davis, J. G., Ashton, T. F. Y McCaskill, M ., (1971) , Enumeration ' and 'viabiliW 1)1 L. bulgaricus a"d Srr. thermophilus in yog~ur(s, Cai,":, Ind. 36, 569 - 573.

2. $tocklin, P., (1969) , Production and handling 01 yoghurt on a commercial seal\!, Cultured Dairy Prad. J., 4, (3), 6-10.

3. Pette, J . W. y Lolkema, H., (1950), Yoghurt 111. Zuurvc.rminfl en aramovorming in yoghurt, Nerh. MJ7k Dalfy .1., 4,261 - 273.

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5. Sharp8, M. E. Y Fryflr, T . F., (1965), Madiü lor Lactic Adcf Btctaria, Laboratory Practice, 14, 497 - 701 .

6. Eloy, C. Y., Lacrosse. A. (1976) Bull. Rech. Agron. Gembloux 11, (1·2) , 83-86.

L ysine /ron Agar AGAR DE LlSINA y HIERRO

Código CM381

FORMULA

Peptona bacteriológica Extracto de levadura Dextrosa L·Usina Citrato férrico amónico Tiosulfato de sodio Púrpura de bromocresol Agar

en gramos por litro 5,0 3.0 1.0

10.0 0.5 O.O<! 0.02

14.5 pH ~.7 (aprox.1

INSTRUCCIONES Se suspenden 34 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve has~a disolver el medio por completo. Se distribuye en tubos y se esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Los tubos se cnfrfan en p.Jsici6n inclinada para formar pendientes con fondos profundos.

DESCRIPCION Edwards y Fife (1961) describieron la fe;rmulaci6n y el u~o d'3l Agar de Lisina y Hierro para detectar organismos del grupo Arizona que pudieran fermentar

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rápidamente la lactosa, Estas cepas producen colonias rojas o rosas sobre Agar de MacConkey o Agar de Desoxicolato y Citrato y colonias amarillas sobre Agar de Verde Brillante. En el examen normal para los patógenos entéricos, estos organismos pasarían desapercibidos. Además, muchos de estos cultivos, cuando se transfieren a tubos de Agar tie Tres Azúcares y Hierro (T.S.I,), producen condiciones ácidas en el medio tan rápidamente que se suprime le! reacción positiva esperada para el sulfhídrico. Puesto que los tipos de Arizona que fermentan rápidamen te la lactosa se encuentran ocasionalmente en brotes de infección alimenticia, es importante determinar su incidencia .

Los únicos grupos reconocidos de entero bacterias que regularmente decarboxilan la lisina de forma rápida y que producen grandes cantidades de sulfhídrico, son miembros de los grupos de salmonela y Arizona (Moeller 1954 y Ewin, Davis y Edwards, 1960).

Por consiguiente, el Agar de Lisina y Hierro es un medio sensible para detectar, tanto organismos de salmonela como Arizona. El medio se distribuye en tubos, ~e esteriliza y se deja solidifi car en forma inclinada con una pendiente corta y un fondo profundo . Se inocula con una aguja recta pinchando hasta la base del fondo y sembrando en estría la superficie de la pendiente. Los tapones de los tubos se deben colocar en forma floja para que prevalezcan las condiciones aeróbicas sobre la pendiente.

Se incuba a 37°C durante 18-24 horas . Los cultivos que producen rápidamente una lisina decarboxilasa originan

una reacc ion alcalina (color púrpura ) en todo el medio. Los organismos que no decarboxilan la lisina producen una pendiente alcalina y un fonda ácido (color amarillo ).

Los cultivos que producen sulfhídrico originan un ennegrecimient o intenso en el medio:

Debido a la desaminación de la lisina , los cultivos de Proteus y Providencia producen una pendiente roja sobre un fondo ácido.

REACCIONES

Cultivos Pendiente Fondo SH,

Arizona Alcalina Alcalino + Salmonella Alcalina Alcalino + Proteus Roja Acido Providencia Roja Acido Citrobacter Alcalina Acido + Escherichia Alcalina Acido o neutro Shigella Alcalina Acido Klebsiella Alcalina Alcalino

Thatcher y Clark (1968) describieron un procedimiento para el aislamiento de salm ::melas a partir de alimentos en los que se purificaban las colonias sospechosas a partir de placas con agar selectivo y, después, se inoculaban en Agar de Lisina con Hierro y en Agar de Tres Azúcares con Hierro. Util izando esta combinación de medios, se puede hacer una mayor discriminación entre

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los organismos coliformes, p.e., Escherichia y Shigel/a. Timms (1971) describió las técnicas de aislamiento e identificación de

infección por Arizona en pavos, utilizando Agar,de Usina con Hierro.

REFERENCIAS 1. Edwards, P. A. Y Fife, Mary A. (1961) 'Lysj~u-lron Agar in the dete~t'ion of Arizona cultures'

Appl. Microbio/. 9. 478 _ 400. f • I ,

2. Ewing, W. H., Devis, B. A. Y Edward5, P. R. (19601 'Tlls decalboxylose reactions of Enterobacteriaceae and their value in t.1xonomy' Pub. Hllh. I .abs. 18. n - 83.

3. Moeller, V. (19541 'Oistribution of emino·acid decarboxylase, in Enterobacteriaceae' Acta. Pathol. Microbio/. Scend. 35, 259 - 2n.

4. Thatcher, F. S. y Clark, D. S. (19681 'Micro-organisms in Foo:l' University of Toronto Press, p. 100.

5. Timms, l. (1971) 'Arizona Infection in Turkays in Grest BlitAin Med. Lab. Techn. 28, 150 - 156.

Lysine Medium MEDIO DE LISINA

Código CM/9/

FORMULA

Dextrosa Fosfato monopotásico Sulfato de magnesio Cloruro de calcio fundido Cloruro de sodio Ad&nina OL-Metionina L-Histidina DL Tript6fano Acido bórico Sulfato de cinc Molibdato amónico Sulfato de manganeso Sulfato ferroso Lisina Inositol Pantotenato de calcio Aneurina Piridoxina Acido p-'aminob'!nzoico Acido nicotfnicd Riboflavina Biotina Acido fólico Agar

INSTRUCCIONES

en gramos por litro

I " , ,

"

44.5 1.78 0.89 0.178 0.089 ,0.00178 0.000891 0.000891 0.000891

,0.1lOOOOa9 0.0000366 0.0000178 0.0000366 G.OOO2226 1.0 0.02 0.()(¡2 0.0004 0.0004 0.0002 0.0004 0.0002 0.000002 0.000001

17.8

Se suspenden 6,~ gramos en 100 mi. de agua destilada qu e conte:1ga 1,0 mi de L~ctato de PotasIo al 50% l Potasslurn Lactate 50%) SR3,. Se hierve hasta dIsolver el medio por completo . Se agita cún frecuencia para impedir el

144

sobrecalentamiento. Se enfría a 5Q°C y se añade 0,1 mi de Acido Láctico al 10% (Laetie Aeid 10%) SR21 para ajustar el pH a 5.0 (aprox.). Se distribuye en placas de Petri y se elimina la humedad de la superficie secándolas a 37°C.

DESCRIPCION Se trata de un medio complejo, descrito originalmente por Morris y Eddy (1957) para el aislamiento y enumeración de levaduras salvajes en la masa de levadura de cebada. Walters y Thiselton (1953) examinaron 180 especies de levaduras en un medio líquido sintético que contenía lisina como única fuente de nitrógeno. Encontraron que ninguna cepa normal de cerev;s;ae o carlsbergens;s utilizaba la lisina mientras que otras muchas levaduras, incluyendo levaduras salvajes, sí la utilizaban. Mantuvieron sus cultivos 'stock' sobre pendient.es de aQar de extracto de malta o en agar ce extracto de malta tiza· en el caso de especIes de Brettanomyces. Posteriormente, Morris y Eddy (1957) describieron un medio de lis ina sólido para el aislamiento y enumeración de las levaduras salvajes en la masa de levadura de cebada. El Agar de Lisina Oxoid se fabrica de acuerdo con su fórmula.

TECNICA Se lava y centrifuga la muestra de masa de levadura de ccbada tres veces con agua destilada. Se quitan 0,2 mi de la suspensión que con tenga aproximadamente 107 células por mi y se extiende con un asa de platino curvada sobre la superficie de una placa de Medio de Lisina. Se incuba a 25°C y se examina diariamente para observar el crecimiento. Se recuenta el número de colonias que se desarrollan y se expresa el grado de conté:lminación como el número de células salvajes por millón de células del inóculo original. El número de células en el in6culo es importante, ya que Morris y Eddy han demostrado que un número escaso de células (aproximadamente de 100 a lCXX>l son todavía capaces de crecer hasta cierto punto sobre el medio. Cuando el número de células de levadura de la fermentación sobrepase aproximadamente 10.000, un recuento de las colonias en desarrollo proporciona una medida directa de la contaminación por levaduras salvajes.

REFERENCIAS ,. Morris, E. O. y Eddy, A. A. (19571 'Method for ¡he Measurement of Wild Veas! Infeclion in

Pitching Yeast J. Inst. Brew. 63(1), 34 - 35. 2. Walters, L. S. V Th iselton, M. A. 0953) J Inst. Brew. 59, 401.

MacConkey Agar AGAR DE MACCONKEY CÓdigo - Polvo CM7

Tabletas CM8

FORMULA Peptona Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio Rojo neutro Ag.,

en gramos por litro 20,0 10.0 5.0 5.0 0,075

12.0 pH 7.4 laprox.1

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INSTRUCCIONES

Polvo: Se suspenden 52 gramos en 1 litro de agua de~ tiiada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121°r:: durante 15 minutos. Antes de la inoculación, se seca la superficie del gElI. Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi Je agua destiléJda y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteril:za en el autoclave a 121 {'C dur\m~e. 15 minutos.

DESCRIPCION

Se trata de un medio diferencial para la detección, ú,:lamiento y enumeración de coliformes y patógenos intestinales en agua, productos lácteos y muestras biológicas. El Agar de MacConke\' CM7 c;orn~sponde al medio recomendado por la Org:mizaci6n r..1'Jndial de la Salud (19631, el Ministerio de Sanidad británico (1969) y por Windle Taylor (1958) para el examen bacterio lógico del agua.

Este medio, aunque utiliudo r rincipalmente para 'os coliformes, puede ser ut ilizado también para la diferenciación de otl·as bacteri~s entéricas (incluyendo patógenos) y es adecuado para la di f~ren(;iación de las especies de Pasteurella (p.e., Hoogendijk, 1962).

TECNICA

Muestras patológicas Debido a su capacidad para favorecer el crecimier lto de los cocos Gram­positivos patógenos (p.e., esta filococos y emerococosl, as; como entero bacterias, el Agar de MacConkey CM7 se recomienda especia lmente para el cu ltivo de patógenos qUE' puedan estar presentes Rn diversas muestr3s tales como la orina, heces e hísODos de heridas. Si bien por una parte es selectivo, por otra no elimina una flan! bacteriana mixta erlla medida en que lo hacen otros medios inhibidores (incluyendo otros ágares :le MacConkeyl. Proporciona otras indicaciones diagnósticas aparte de la tolerancia a la bilis, tales como la morfología de la colonia y la crorno[lér.esis. El Agar de MacConkey se debe utilizar en paralelo con ot((\S medios indicadores selectivos tales como el Agélr de Desoxicolato y Citróto, Agar Sulfito de Bismuto, Agar de Verde Brillante y Caldo de Verde Brillante y Bilis (2%), y un medio no selectivo como el Agar Sangre.

Análisis de agua IWindle Taylor, 1958) (Ministerio de Sanidild británico. 19691. Este medio puede usarse para el recuento directo de bacterias coli-ae!'ogenes, utilizando placas preparadas a partir de volúmenes conocicos de lü muestra de agua, pero una función más exacta de este medio es la diferencinción de los organismos productores de ácido \' gas en Caldo de MacConkey a 37°C: todos los caldos positivos se siembran en Agar de MacConkey, incubándose las placas durante 24 horas a 37°C y examinando si hay colonias típicas (véase abajo). Las colonias com~uestas de bacilos Gram-negativm. no esporulados se subcultivan para identificarse a cont inuación. 3e pUflde confirmar la presencia de estreptococos fecales en medios con a:z:ida o telurito por subcultivo en Agar de MacConkey.

Véase abajo para la morfología de las colonias.

Diferenciación de Pasteurella El medio CM7 de Oxoid puede ut ilizarse para prob<lr la capacidad de los bacilos de Pasteurella para crecer en Agar de MacConk9Y con la finalidad de

146

diferenciar sus especies (p.e., Hoof¡lendijk, 19621. PasteureJ,'a pestis y P. pseudotuberculosis muestran un crecimiento escaso, pero visible después de 24 horas a 37°C aunque éste puede desaparecer después de unos días, se supone que debido a la autólisis (Wilson y Miles, 1964) . P multocida fP. septica) y P. haemolytica no producen crecimiento visible. Organismos pectinolfticos (Stewart, 1962) Stewart utili.'!ó el Agar de MacConkey Oxoid como base de un medio selectivo de diagnóstico para 10s organismos pectinolít icos con la finalidíld de aislar especies de Erwini8 a partir de muestras pútridas que contenían otras enterobacterias. Se inoculan placas de Agar de MacCankey con cloruro de calcio (5,2 g de polvo CM7, 0,4 g de Gl2 Ca y 75 mI de agua desti lada ) se cubren con una capa de pectato-EOTA (0,1 % de EDTA que contenga un 2% de palipectate de sodio) y se incuban durante 48 horas a 25°C. Las Erwinia fermentadoras de lactosa producen colonias rojas en unos huecos sujJerficiales, formados por la licuefacción del pecrato.

CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Después de 24 horas a 37°C, las colonias típicas ~on como siguen:

Organismo Color OlJservacion-as ~~~~~~------~~~------== Eschcrichia coli rojo no mucoi je Aerobacter aerogenes rosa mucoic1e Enterococcus

(p.e ., estreptococo fecal) Staphylococcus Pseudomonas aeruginosa

rojo rosa pálido verde pálido

diminuta, redonda opaca crecimiento fluorescente

Estas características son variables y las colonias sospechosas deben cultivarse en A~ua de Peptona CM9 o Agua de Triptona CM87 para llevar a cabo pruebas diferenciales.

REFERENCIAS 1. Hoogendijk. J . L. (1962) Pasteurel/8 Strains Isolated from Human Sputum' Antonie van

Leeuwenhoek J. Micro bio/. Seral. 28(3), 315 - 320. 2. Dept. 01 Health & Social SecurilV (1969) 'The Baclerio!ogical Examinalion of Water Supplies' 4th

ed., H.M.S.O .. London. 3. Stewarl, O. J. (1962) 'A Selective-Oiagnostic Medium for the Isolalion of Peclinolytic Organisms

in the Enterobacteriaceae' Nature 195(4845). 1023. 4. W ilson, G. 5. y Miles, A. A. (1964) 'Topley and Wilson's PrincipIes 01 lJacteriology and

Immunity' 5th ed., Edward Arnold ltd., London vol. 2. 5. Windle Taylor. E. (1958) 'The Examination 01 Waters and Water Supplies' 7th ed .• Chu rchiU Lid ..

London. 6. Organización Mundial de la Salud (1963) 'Normas internacionales para el agua potable' , 2a ed ..

OMS. Ginebra.

MacConkey Agar IWITHOUT SALTI AGAR DE MACCONKEY (SIN SAL) Código CM7b

FORMULA Peptona Lactosa Sales biliares Rojo neutro Agar

en gramos por litro

pH 7,4 laprox.)

147

20,0 10,0 5,0 0,Q75

12,0

Enumeración de psicrófilos en el agua 1. Se tratan 50-100 mi de la muestra de agua en el momento de la recogida

con 0,5-1,0 de tiosulfato de sodio 0,1 N para eliminar el cloro residual. 2. Se filtra la muestra a través de una Membrana Filtrante Oxoid estériP. 3. Se sigue la técnica (puntos 4-8) descrita para el requesón.

REFERENCIAS StandarG Methods for the ElIamination of Dairy Products. Eleventh Edirion, APHA Inc., New York, 1960.

2. Repon 71 (1969), " The Bacteriological ElIamination of Water Supplies," Founh Edition , London, O.M. S.

Mueller Hinton Agar AGAR DE MUELLER HINTON

Código CM337

FORMULA

Infusión de carne de vaca Hidrolizado de case(na Almidón Agar nO 1

en gramos por litro 300,0 17,5 1,5

10,0 pH 7,4 (aprox. l

INSTRUCCIONES

Se suspenden 35 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minuto:) .

DESCRIPCION

El Agar de Mueller Hinton se ideó como un medio de cultivo reproducible para el aislamiento de especies patógenas de Neisseria (Mueller y Hinton, 1941 ,. La inclusión del almidón asegura que los factores tóxicos que se encuentran durante el crecimiento sean absorbidos, siendo su prttSencia a menudo esencial para que se establezca el crecimiento a partir de inóculos muy pequeños.

El Agar de Mueller Hinton se utiliza ampliamente en la actualidad para las pruebas de sensibilidad a los antibióticos (incluyendo las sulfamidasL La inelusiórl de un agar especiamente seleccionado en el Agar de Mueller Hinton Oxoid asegura que las zonas de inhibición, amplias y ciarAS, sean evidentes cuando los organismos sensibles se enfrentan a Ic.s antibióticos y las sulfamidas activas, y que los tamaños de~ la zona correspondan con los de otros medios estándar. Sin embargo, para la prueba con las sulfamidas, es esencial que se diluyan al menos 100 veces los cultivos en caldo de los organismos. Las sulfamidas pueden ser antagonizadas por los factores de crecimiento en los caldos de cultivo y son susceptibles a los efectos de los grandes in6culos, cuando los organismos pueden llevar suficientes antagonistas de las sulfamidas para multiplicarse durante 3 Ó 4 generaciones en presencia de una concentración bacteriostática del fármaco.

173

Las técnicas utilizadas para la prueba de sensibilidad incluyen métodos cualitativos en los que un(j mJe3t ra primaria se puede inccular ~obre un medio y se registran las zonas que no muestren crecimientcj alrededor de los discos de antibióticos (A.C. P., 1966), y l o~ métodos semicuantitativos de Ericsson (1960) y Bauer y colaboradores (1966). . I

La técnica do Ericsson (1560) utiliza discús co1ocac1os en medios estandardizados de un volumen y profundidad conocidos, en recipientes de fondo plano. El in6culo se mide muy cu idadosamente y se inocula por inundación sobre la superlide del medio. Después dn retira r el exceso de liquido, se colocan sobre el medio los discos de amibi6ticos, dejándose un periodo de preincubaci6n aurante el cual se produc.g la difusión de los antibióticos antes de c¡ue se incuben las placas. Este proc~dimiento asegura que los antibióticos de difusión lenta no Elstén en desventaja ell ~resencia de los or,9anismos de crecimiento rápido. Después dG la incubación, se miden los tamanos de las zonas de inhibición y se comparan cop las gráficas de las pendientes de regresión a partir de las pruebas hechas rorl gran ca ntidad de organismos. Los informes pueden emiti rse en t érminos de sensibilidad o resistencia, o en va lores de e.u....,.

La técnica de Kirby-Bauer (1966) utiliza Afilar de M~I>3 l le r Hinton y discos de alta concentración. El inóculo se estandardiza aj'Jstando la turbiedad de un caldo de cu ltivo en fase de crecimiento a un estándar de ~ulfato de bario. Las placas de Agar de Mueller Hinton se inoculan con hisopos de algodón humedecidos en esta suspensión . Barry y colaboré'dores ('19701 describen un método más sencillo de preparación de Jos organ ismos en el cual se añade una pequeña asa de un caldo de cultivo al agar fundido, el cual se viene entonces sobre la superficie del medio. Se dice que una siembra del égar en capa fina produce zonas de inhibición mejor definidas qup. los métodos de inundación o de estriado sobre la superficie. Después. de colocar les discos de sensibilidad, se incuban las placas inmediatamente o se e:ipera 30 minutos. Después de 18-24 horas de incubación a 37°C, se miden los diámetros de la zona y se comparan con los reproducidos en la tabla de la página siflu ien te, tomados de Bauer (1966) y Ryan y colaboradores (1970L

No se inform8 sobre las medidas de la zona, sólo las interpretaciones de Resistente, Sensible o Intermedio.

Esser y Elefson (1970) observaron que el método de Kirby -Bauer era sencillo, exacto y reproducible.

Dewees, Poupard y Morton (19701 investi¡::¡aron el efecto del almacenamiento de las placas con Agar de Mueller Hinton y mostraron que el almacenamiento hasta 3 semanas a 4°C, en bolsas de plástico cerradas, no afectaba los tamaños de las zonas de inhibición en forma apreciable.

También se dispone de Caldo de Mueller Himon (Mueller Hintún Brothl CM405 para los estudios de sensibil idad antibiótica .

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PrBC(. 5,91 - lOC.

174

Taylor-Aobinson y colaboradores {197H describieron p.1 uso de medios de caldo para el aisl&miento y titulaci6n de micop\asmas viables por el metabolismo de la arginina y de la glucosa. midi13ndo el cambio ele pH en el medio. ,1

Kraybill y Crawford {196S1 describieron un medio selectivo para Mycoplasma pneumoniBe,

Se pueden utilizar el Suplemento G para Micoplasma SFl59 y el Suplemento P para Micoplasma SR60 con este medio - véasf! Mycoplasma Asar Base CM401.

La mayorfa de las cepas de micoplasma se favorecen r.cn el crc¡;imiento en el medio bifásico, en el cual una capa de caldo cubre é. una Ci'l¡::a basal de A~ar de Micoplasma. (Véase Mycoplasma Agar Base CM401) ,

REFERENCIAS 1. Kraybill, W. H. y Crawford, Y. E. (1965) 'A selective rnedium antl colOllr test l or Mycoplasma·

pneumoniae' Proe. Soco Exp. 8iol. Moc'. 118,9(.,5 - 967. 2. Shepard y lanceford "970) 'Urease Colour Test Medillm U·!=l for the Dete ction and Identific.ation

01 "Too Mycoplasmas in Clinieal Material' ApP/. Microbio/. 20, 539 - 543. 3. Taylor·Robinson, D., Manin·Bourgon, e., Watanable, T. y AJdey, J. P. 119711 '(sola tion 01

T·mycoplasmas from Dogs and SQuirrel Monkey:; : Biological alld Sorolugi-::al Corllparison with those IsoLated from Man and Caltle' J. Gen. Microbio/. 68, 97- 107.

Nutrient Agar AGAR NUTRITIVO

Código - Po/va CM3 Tabletas CM4

FORMULA 'Lab-Lemco' en polvo Extracto f1e Levadura Peptona Cloruro de sodio Agar

INSTRUCCIONES

pH 7.4 (aprox. )

eh qra'ff,vs por litro 1 2 ¡; 5

15

Polvo: Se suspenden 28 gramos en 1 Ii~ro de ag "J a destilajCl y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121°C dl.Jrante 15 minutos. Tabletas: Se añade una tacleta a 5 mi de agua destilélda y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121 °C duran:e ') minutos,

DESCRIPCION Se trata de un medio sencillo, uno de los primeros en la gama de Oxoid que ha demostrado su valía en repetidas ocasiones: entre I()~ muchos trabajos publicados que mencionan el medio de Oxoid hay informe~ sohre el cultivo de miembros de los siguientps género.:; : Alysiella, Agrobacterium, Arthrobacter, Bacdlus, Brucell8, Escherichia, F1avobacterium, Micromon()spora, Pseudomonas, Rhizobium, Sarc;na, Simonsiell'J, Staphylococcus, Streptomyces, Thermopolysora, Thiobacillus y Xantáomonas.

182

El agar nutritivo es un medio barato V, por consiguiente, es adecuado para los propósitos docentes V de demostración. Contiene una concentración de agar de 1,5% que permite añadir hasta el 10% de sangre u otro líquido biológico, según se requiera. El medio, sin adiciones, puede ser utilizado para el cultivo de organismos que no sean exigentes en sus requerimientos alimenticios.

Para un medio más rico en sustancias nutritivas, véase Base de Agar Sangre nO 2 CM271 (BloOO Agar Base No. 2) .

Nutrient Broth CALDO NUTRITIVO Código - Polvo CMI

Tabletas CM2

FORMULA 'L'lb-Lemco' en polvo Extracto de levadura en polvo Peptona Cloruro de sodio

pH 7.4 (aprox.)

INSTRUCCIONES

en gramos por litro 1 2 5 5

Polvo: Se añaden 13 gramos a 1 litro de agua destilada. Se mezcla bien y se distribuye en los recipientes definitivos. Se esteriliza en el autoclave a 121 °C durant~ 15 minutos. Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua destilada V se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos.

DESCR;PCION Se trata de un medio muy económico para el cultivo de organismos que no sean muy exigentes en sus requerimientos nutritivos. 5(X} g de polvo de Caldo Nutritivo Oxoid hacen más de 38 litros de caldo. El medio reconstituido y esterilizado puede enriquecerse con otros ingredientes, tales como hidratos de carbono, sangre, suero, etc, en la medida en que se requiera para fines especiales. Véase también Caldo Nutritivo W~ 2 CM67 (Nutrient Broth No. 2l.

Nutrient Broth No. 2 CALDO NUTRITIVO N9 2

Código - Polvo CM67 Tabletas CM68

FORMULA 'Lab-Lemco' en polvo Peptona Cloruro de sodio

pH 7.5 (aprox )

183

en gramos por litro 10 10 5

impurificados de caseína en medios para la produccl6:1 de toxina tetánica, se producen var iaciones ocasionales en 1<1 producción dA toxina debido a sustancias inhibidoras. Este problema fue resuelto por el tratamiento con fosfato cálcico, el cual eliminn de una manera eficcz In's inhibido ~es de la producción de toxina ,

REFERENCIAS 1. Mueller, J. H. Y Miller, Pau!ine A , : 19!:4) 'Variable fac t~rs influ(Jncir,g lhe production of tetllnus

toxin' J. BlIct. 67,271 - 2n.

Tryptose TRIPTOSA Código L47

La Triptosa Oxoid es una peptona mixta con propieciades nutritivas únicas que la hacen idónea para usarla en medios para el aislamiento V cultivo de especies de Brucel/a, estreptococos y otros organismos exiyentes. Su composición altamente nutritiva la hace idónea para uso en medios rara el aislamiento de bacterias más exigentes en donde se requiera un Grecimiento rápido o profuso, p.e., en el hemocultivo. ~a Tript0sa Oxoid S6 ~ecomienda, también, para usarla en agar sangre y otros medios para la determinad6n de las reacciones hemolíticas, yer. medios para la producción de indol.

Peptone Water AGUA DE PEPTONA

Código - Polvo CM9 Tabletas CM10

FORMULA Peptona Cloruro de sodio

INSTRUCCIONES

pH 7,2 (aprox .1

en gramc-s por litro 10 5

Polvo: Se añaden 15 g a 1 litro de agua desti lada. Se mezcla bien y se distribuye en tubos. Se esteriliza en el autoclave a 1'21 oC durante 15 minutos. Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua de3ti lada y se esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minutos.

Cuando se hayan de añéJdir soluciones estériles después del autoclavado, se reduce el volumen de agua para recons~itución en Igual cantidad.

DESCRIPCION El Agua de Peptona puede utilizarse como un medio dE.: crp.cimiento o como medio de base para la fermentac ién de hidratos de carbono, mientras que un cultivo puro en Agua de Peptona es un inóculo cómodo para una serie de tubos de fermentación u otros medios diagnósticos.

198

Se dispone Lie soluciOnes estériles de otros hidratos de carbono y otros reactivos para añadir al medio.

El Agua de Peptona, ajustada a pH 8,4 es idónea pera el cultivo y enriquecimiento de Vibrio comma a partir de material infectado (Cruickshank, R., 1968).

El medio se utilizó anteriormente para la realizaciÓn de la prueba del indol, pero, en la actualidad, se obtienen mejores resultados utilizando Agua de Triptona (Tryptone Water) CM87.

Se dispone tambii3n de este medio con indicador de Andrade (Agua de Peptona, Peptone Water, CM61 / 62) o con indicador de r(¡jo de Fenal (Agua de Peptond con Rojo de Fenal, Phenol Red Peptone Water, CM63J. El medio con indicador de Andrade cambia el color de~:je el incoloro hasta el rosa si hay producción de ácido, El medio con rojo de fenal es naranja cuando es neutro, amarillo cuando es ácido, y rojo oscuro cuando es alcalino. Ambos medios se preparan y esterilizan de la misma manera que el Agua de Peptona excepto en que se incorpora un tubo de Durham invertido para la if"dicación de la producción de gas. Si se añaden soluciones de hidratos de carbono, antes o después del autoclavado, se debe reducir el volumen de agua utilizado para su reconstitución por una cantidad equivalente, El medio con indicador de Andrade es rosa cuando está caliente, pero se hace incoloro cuando .c;e vuelve a enfriar,

REFERENCIA 1. Cruickshank, A. ('1968) 'Medical Microbiology' 11th &d ., Livingsto08ltd.' London, p. 268.

Perfringens Agar ro. P. s. P.) AGAR PARA PERFRINGENS (P.O.S.P.J

Código CM543

FORMULA Triptona Extrllcto de levadura Peptona de aoja Extracto de hrgado Citrato férrico amónico Metablsulflto de sodio Tampón tria Aga,

en gramos por litro 15 5 5 7 1 1

1,5 la

pH 7,3 (aprox.)

SUPLEMENTO A SR76 SUPLEMENTO B SR77

Cada vial contiene Sulfadlaclna de sodio 50 mg

INSTRUCCIONES

Cada vial contiene Fosfato de

ola8ndomiclna 0.25 mg Sulfato de polimixina B

5000 unidades i.

Se suspenden 22,8 gr en 500 mi de agua destilada y se hierve suavemente hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121°C

199

Se put:lden obtener los detalles completos de la técnicu y las gamas disponibles solicitando el folleto correspondiente de Oxoid.

Medios para la Prueba de Sensibilidad Oxoid fabrica una ar:1plia gama de productos para su uso ei"l la preparación de los Medios para la Prueba de Sensibilidad. A continuación se d<l una lista de estos productos pudierdo encor.trarse todos los detalles de cada uno de ellos por orden alfabético en Inglés:

Agar Diagnós~jco para In Prueba de Sensibil idad - CM261 (Diagnostic Sensitivity Test Agar) Agar de Mueller Hinton - CM337 (Mueller Hinton Agar) Caldo de Mueller Hinton - CM405 (Mueller Hlnton Brothl "Agar Iso-Sensitest" - CM471 ("Isosensitest Agar" ) " Caldo Iso-Sen;itest" - CM473 ("Isosensitest Broth") Productos de Sangre (Sangre de Caballo Lacéldn - SR-?8, Laked Hors. 810od)

Sheep Blood, Deflbrinated (NO PRESfRVATIVE)

SANGRE DE CARNERO DESfl8RINADA (SIN PRESERVATIVO)

Código SR5/

Se trata de un producto para incluirlo en medios dI':: ,;ultivo bacteriológicos. Véase Blood Products .

Simmons Cífrate Agar AGAR DE CITRATO DE SIMMONS

Código - Polvo CM/55 Tabletas CM/56

FORMULA

Sulfato de magnesio Fosfato de amonio dihfdrico Fosfato amónico de nodio Citrato de sodio, tribásico Cloruro de sodio

en grómos pOI' litro 0,2

Azul de bromotimol Agar

pH 7.0 (aprox.1

224

D.2 0.8 2.0 5.0 0.08

16.0

INSTRUCCIONES Polvo: Se suspenden 23 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 121 ° C durante 15 minutos. Tabletas: Se añade 1 tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121 ° C durante 15 minutos.

DESCRIPCION El Agar de Citrato de 5immons se recomienda fEwing y Edwards, 1960) para la diferenciación de la familia de enterobacterias y se basa en la utilización o no del citrato como única fuente de carbono.

El medio es vinualmente una forma solidificada del medio de citrato de Koser el cual, en su forma original, tenia la desventaja de dar lugar a falsos crecimientos cuando se utilizaban grandes in6culos. La adición del indicador de azul de bromotimol al medio fue una mejora considerable. Véase el Medio de Citrato de Koser IKoser Citrate Mediuml CM65.

TECNICA El medio puede utilizarse bien en agar inclinado en tu bar. de ensayo o bien en placas de Petri. En ambos casos se inocula ligeramente la superficie del medio en estría y, cuando'se utilice un agar inclinado, se inocula el fondo del medio por picadura. Se recomienda una incubación a 37°C durante 48 horas.

El crecimiento positivo fa sea, utilización de citrato) produce una reacción alcalina y el medio cambia de un color verde al azul blill3nte, mientras que en una prueba negativa (o sea, no utilización del citrato) el color del medio permanece inalterado.

Eschericihia coli no crece en el medio, mientras que la mayoría de los otros organismos coliformes lo hacen . Todos los miembros de Klebsiella­Aerobader-Serratia-$almonella-Arizona-Citrobacrer y algunos miembros de las divisiones Proteus-Providencia utilizan el citrato. Proteus morganii y los serotjpos de Escherichia coli de enteritis infantil ~::>idémjca no Jo utilizan (Kauffmann, 19541. El Agar de Citrato de Simmons puede utilizarse para diferenciar Salmonella schortmuellefl~ S. enteritidis y S. typhimurium de S. typhosa, S. paratyphi y Shigella. Este último grupo no crece sobre el medio, mientras que los miembros del primer grupo utilizan el citrato y producen la coloración azul característica .

REfERENCIAS 1. Ewing, W . H. y Edwards, P. R. (1960) Internar'/. Bull. SacI. Nomen and 'Taxon. 10(1), 1- 12. 2. Kauffmann, F. (1 954) 'EnterobacteriaceBe : 2nd ed ., tAunksgaard . Copenhagen.

SIMMedium MEDIO SIM Código CM435

fORMULA Triptona Peptona P Sulfato ferroso de amonio Tiosulfato de sodio Agar nO 1

en gramos por litro 20,0 6.1 0.2 0.2 3.5

pH 7.3 (aprox .)

225

REFERENCIAS 1. Kelsey, J. C. (19581 'The Tesl ing of Sterili zers' , Lancet 1, 3b6 -' 309. 2. Kelsey, J. C. 119611 'The Tes¡ing 01 Sterilizers. 2. Thermophilic Srore Papers' , J. c1in. PlHh.

14(3),313-319. 3. Nl,lffield Provincial Hospitals 7rus! (1958) 'Presen t Sterilizing PI.1Ctic,l in Six Hospitals', NPHT.

Landan.

S.S. Agar AGAR S.S.

Agar para Salmonella y Shigella Código - Polvo CM99

Tabletas CM/OO

FORMULA

'Lab-lemco ' en polvo Peptona l actosa Sales biliares NQ 3 Citrato de sodio Tiosulfato de sodio Citrato férrico Verde brillante Rojo neutro Agar

en gramo~' por Uro 5.0 5.0.

10.0 e.5

10.U 8.5 1.0 0.00033 0.025

15,0 pH 7.0 laprox I

INSTRUCCIONES

Polvo: Se suspenden 63 gramos en 1 litro de agua destilDda y se hierve a fuego lento y con agitación frecuente hasta disolver el aga r. NO SE DEBE AUTOCLAVAR. Se enfría hasta aproximadamente 5l10C, se mezcla y se viene en placas de Pe tri . Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destil3ca y se deja embeber durante 5 minutos. Se lleva a e,bull ic ión en un baño ha!')!a disolver el medio por completo. Se mezcla bien antes de verter. NO SE [ 'ESE AUTOCLAVAA.

DESCRIPCION

El Agar 5 .5, es un medio diferenci'3 l y selectiv'c, ¡Jara el aislamiento de especies de Shigella y Salmonella a partir de muestras patológica$, muestras alimenticias sospechosas, etc. Los organismos Gram-positivos y co litormes se inhiben por la acción de una nlezcla de sales biliares e$pecialmente preparada.

TECNICA

Se inocula el medio fuertemente con la muestra, extendiendo un'.! porción del inóculo original con el fin de oblener colonia!:. bien sepa-adas en alguna parte de la placa. Se incuba durante 18 a 24 horas '3 37Cl C: los no fermen tadores de la lactosa forman colonias ir.coloras, mientras que los ccliformes ocasionalmente resistentes u otros fermentadores ne la lactosa produ cen colonias rosas o rojas.

232

En paralelo con la placa de Agar S.S. se inocula un tubo de medio de enriquecimiento de Caldo de Selenita {Selenite Brothl CM395; se incuba durante 12 horas a 37°C y se subcultiva en otra placa de Agar S.S.

Standard Plate Count Agar IAPHAI

AGAR PARA RECUENTO EN PLACA ESTANDAR IA.F.H.A.I

Código - Polvo CM463 Tabletas CM464

FORMULA

Extracto de levadura en polvo Digerido pancreático de caseína Glucosa Agar

pH 7,0 (aprox.)

INSTRUCCIONES

en gramos por litro 2,5 5,0 1,0

15,0

Polvo: Se suspenden 23,5 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se distribuye en frascos y se esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeber duranre 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos.

DESCRIPCION

El Agar para Recuento en Placa Esténdar CM463 se ajusta a la formulación del Agar de los métodos estándar, descrita en: "Stand~rd Methods for the Examinatíon 01 Dairy Products", lla edición, 1960.

Es la misma formulación que la descrita para el Agar Deshidratado para el Recuento en Placa (Agar de Triptona con Glucosa y Levadura) en "Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater" , 118 edición, 1960 de A.P.H.A. Es, igualmente, la misma formulación qlle 131 Agar de Triptona con Glucosa y Levadura IU.S.P. XVI y A.O.A .C., 10' edición, 19651. ,

Los ingredientes del Agar para Recuento en Placa Estándar CM463 se ajustan a las especificaciones señaladas en "Methods for the Examination of Dairy Products" , 12' Edición , 1967, páginas 232 - 233 de la A.P.H .A.

Las cualidades físicas del medio reúnen las especificaciones descritas por la A.P.H.A., 12' Edición, 1967, página 233.

La producción del medio se controla con las pn.:ebas descritas en la publicación arriba mencionada, páginas 234 - 242, en donde las muestras de leche cruda y pasteurizada se examinan en paralelo con las del Medio Estándar de Referencia. t

El Agar para Recuento en Placa Estándar puede utilizarse también en el examen microbiológico de alimentos, tal y como describe la lO Association of Official Agricultural Chemists", 9 Edición, 1960 y "Recommended Methods for Microbiological Examination of Foods" , A.P.H.A. , 1958.

233

Trichomonas vagina"s permanece viab le, en el medio, hasta 24 horas, mientras f1ue Cooper (1957) ha informado sobre la recuperación de patógenos del tracto respiratorio superior y :" '"'Itérico después de 8 a 12 semanas de almacenaje. Stuart y cols. (1954) l,; .:izaron con éxito ¡JI rnétodo de transporte para recuperar H. influenzae, Str. pneumoniae, Str. pyogenes y e, diphlheriae a partir de muestras que habían estado en tránsito durante 3 a 5 días,

REFERENCIAS 1, Beakley, J. W. ( 1957) 'The Toxicity of Wooden Applicator Sticks for Nei.<;seria gonorrhoea ', Pub,

Hlth , Lab, 15(1). 11-16. 2, Cooper, G. N, (1957) 'The Prolonged Survival 01 Upper Respiratory Trac! and Intestinal

Pathogens on Swabs' . J . e/in. Path. 10(3), L1fi - 23Q. 3. Crookes, Eileen M. L. Y Stuart, R. D. (1959) 'The Valueol Aerosporin in the isola tion 01 Neisseria

from Swabs forwarded to the Labora tory in rransport Medium'. J. Path. Suet. 78 (1 ),283 - 288. 4. Moffen, Mary, Young , Jean L. y Stuart, R. D. (1948) 'Centralized Gonococcus Culture lar

Dispersad C¡¡nics'. Srit. Med. J. 2.421 - 424. 5. Stuart, R, D " Toshach, Shiela R. y Patsula , Teresa M . 0954) 'The Problem of Transport 01

Specimens for Culture 01 Gonococci'. Canad. J, Pub/o H/th. 45(:;: ), 13 - 83, 6. Stuart. R. :l . (1959) 'Transpon Medium for Specimens ,n PlIblic Health Bacteriology' . Pub, Hlth ,

Rap. Wash. 74(5),431 - 438. 7. Wilklnson, A. E, ( 1958) 'Sorne Recent Advances in the LaboratolY Diagnosis 01 Venereal

Disease', J . Med. Lab, Techno/. 15(3) , 184 - 195,

Sucrose 10% SACAROSA AL 10%

Código SRI3

Se trata de una solución esterilizada por filtración, disponible en ampollas de 5 mi en cajas de lO,

T. C. B. S. Cho/era Medium MEDIO T.C.8.S. PARA COLERA Código CM333

FORMULA Extracto de levadura en polvo Peptona bacteriológica Tiosulfato de sodio Citrato de sodio Bilis de buey Sacarosa Cloruro de sodio Citrato férrico tlzul de bromotimol Azul de timol Ag.r No. 1

en gramos por litro 5 10 10 10 8

20 10

1 0.04 0.04

14 pH 8.6 (oprox .1

237

INSTRUCCIONES Se suspenden 88 gramos en 1 litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. NO SE DEBE AUTOCLAVAR.

Se vierte en placas sin más calentalT'iento y se seca éntes de utilizar .

DESCRIPCIOI\

Kobayashi, Enamoto, Sakazaki y Kuwahara (1963) desarrollaron el medio T,C .8.S. a partir del agar de aislamiento se lectivo dfl Nakanishi (19631.

El medio T.e.8.S. de Oxoid está de acuerdo con la formulación de Kobayashi y colaboradores, excepto en Que contiene 'Jna bilis de buey especialmente transformada, libre de los defectos obsflrvados por Nakanishi y Kobayashi.

El medio de Oxoid es particu larmente adecuado para el crecimiento de Vibrio chalerae biotipo el tor " V. parahaemol'lticus, además del clásico V. chalerae.

Sakazaki (1963) describió el aislamiento :ie V. palahaemolyticus y V. alginolyricus en medio T. C.8.S.

La mayoría de las enterobacterias que se hallan en les heces quedan suprim idas totalmente durante, al menos 24 horas. Se puede producir un crecimiento ligero de Proteus spp. y Strept. faocalis, pero las colonias se distinguen fácilmente de las colonias de Vibr;o.

El medio T .C.8.S. Oxoid es completo y no requiere 3d:tivof. o adiciones asépticas de sangre . Muestra , por tanto, una ventaja t:onsideré'ble sobre el Agar de Telurito y Sulfato de Lauril que requiere adiciones ulteriores después de la esteril ización . Aparte de este factor de comodid<Jd, posee también unas características de crecimiento superiores para Viário spp., en comparación con los medios de telurito. Mient ras que inhibe a los no vibrios, fav0rece el crecimiento rápido de V;br;o SP~'I despuós de una incubación a 37°C durante la noche.

ASPECTO DE LAS COLONIAS EN AGAR T.C.B.S.

Después de 24 horas de incubación a 37°C. V. cholerae - colonias amari llo pa ~das , de 2-3 mm d~ diámetro, con un

color amarillo en el medio. V. parahaemo/yticus (grupo 1) - colonias incol0ras con un centro verde.

de 3-4 mm de diámetro. V. parahaemolyticus Igrupo 2) - colonias amarillo pa rdas de 3A mm de

diámetro con color amarillo en el medio . Escherichia coli Slamonel/a typhi Klebsie/la spp. Shigella spp. Pseudomonas aeruginosa Proteus spp.

Crecimiento ligel o cnrl colonias diminutas. No hay cu lor iJmarill o en el medio.

Stlepto~occus faeca/is - ligero crecimiento con cole.nias diminutas. Color amarillo en el mt;dio.

TECNICA

Las heces o el material de prueba S8 siembrsn en estría a trav9s ne la superficie del Medio T.C.8.S. para Cólera Oxoid y se incuba du~ante 18-24 horas 3 37°C.

238

Todas las cepas de V. chalerae producen colonias grandes, lisas, elevadas, y amarillas con un color amarillo en el medio de cu ltivo.

Las cepas de V. parahaemalyticus producen colonias similares, con la excepción Ge Jos organismos pertenecientes al grupo 1 que producen colonias verdes sin alterar el color del medio.

REFERENCIAS l. Saktlzaki, R. (1963) Vibrio parahaemolyticus Tokyo, Osseido. 2, Nakanishi, Y. ¡'963) 'An 150lation Agar Medium for Cholera and Enteropethogen ic Halophillc

Vibrios'. Modern Media 9, 246. 3. Kobayashi, T., Enomoto, S., Sakazaki, R. y Kuwahara , S. (1963) 'A New Selective Medium for

Pathogenic Vibrios: T.e.a.S. Agar (Modified Nakanishi's Agar) '. Jap. J. Bacterio/. 18, 10-11 , 387 - 391.

Tellurite Medium Hoy/e MEDIO DE TELURITO DE HOYLE

Véase Base de Medio de Hoyle (Hoyle Medium Base) CM83.

Test Tube Caps IALUMINIUMI

TAPONES DE ALUMIN IO PARA TUBOS DE ENSAYO

Se trata de tapones cilrndricos de aluminio que se util izan para proporcionar un.cierre bacteriológico a los tubos de ensayo, botellas y matraces. Para esta finalidad, los Tapones para Tubos de Ensayo Oxoid poseen muchas ventajas sobre los tapones de algodón convencionales. (i) Los tapones pueden utilizarse en repetidas ocasiones; (ii) No se pegan al cuello del recipiente, y se quit.'3n y sustituyen fácilmente; (iii) No existen fibras que contaminen los medio~ (un factor de importancia

considerable en los estudios de nutrición bacteriana y en los trabjaos sobre análisis microbiológicos).

(iv) Los tapones se pue.den marcar fácilmente con un lá piz O rotulador que resista el autoclavado;

(v) Se asegura la esterilidad durante un largo período, au nque se pueden fijar los tapones al tubo con cinta adhesiva si fuera necesario.

Los Tapones para Tubos de Ensayo Oxoid se suministran para tubos de ensayo sin bordes conforme a normas británicas, de 12, 16, 19 Y 25 mm y el de 30 mm que se ajusta a los frascos de 3 onzas, para muestras de leche. Además, John Moncrieff Ltd ., de Perth, Escoda, fabrica una gama de matraces cónicos "Monax" que pueden cerrarse con Jos Tapones Oxoid .

Para facilitar la identificación, los Tapones de Tubos de Ensayo Oxoid se suministran en los siguientes colores anodizados:

Verde, azul, negro, plata, malva, oro, cobre, rojo . Es particularmente importante evitar el uso de álcal is fuertes y abrasivos

cuando se laven los tapones coloreados o no coloreados. Preferiblemente, se deben lavar en agua ca liente que contenga una pequeña cantidad de detergente no alcalino (p.e., "Taepol", "Quix", etc.) , se aclaran bien en agua ca liente, y se secan en una estufa a l 00- 120°C.

239

Ensoyo8 ollnlC08 han ostablocldo quo 01 Modio paro I rlcornonu tJ NII ') UtJ muy sa tisfactorio para el cultivo do r richomon8s vaginal/s, a partir de aislamientos primarios. Una combinación del cultivo d~ laboratorio y un examen en porta proporciona la mejor probabilidad d~ establecer la presencia de este patógeno.

El Medio para Tricomonas NQ 2 contie ne suero y antibiótico y, por consiguiente, está preparado para su inoculación inmediata. Se puede almacenar a 4°C durante varios meses sin deterioro.

TECNICA 1. Se inocula el medio directamente con un hisopo vaginal, raspado sub­

prepucial , raspado uretral, liquido prostá:ico o el dé pasito de una orina centrifugada ligeramente (Stenton, 1951).

2. Se incuba a 34°C (Thomas, 1964). 3. Se examina al microscopio cada 24 horas. 4. So incuban los cultivos que, vistos al microscopio, hayan sido negativos,

hasta cinco días.

REFERENCIAS 1. Bushby, S. R. M. Y Copp, F. C. (1955) 'The Antitr ichomonal Activity 01 Amidonitrothiazoles' . J.

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Tochnol. 21 (1).48 - 50.

!:ffPo!~RE~lffl~fs !~~[Jo Agar Código - Polvo CM277

Tabletas CM278

FORMULA 'lab·lemco' en polvo Extracto de levadura Peptona Cloruro de sodio lactosa Sacarosa Dextrosa Citrato férrico Tiosulfato de sodio Rojo de fenol Agar

INSTRUCCIONES

pH 7.4 (aprox. 1

en gramos por litro 3,0 3.0

20.0 5.0

10.0 10.0

1.0 0.3 0.3

q.S. 12.0

Polvo: Se suspenden 65 gramos en , litro de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se mezcla bien y se distribuye. Se esteriliza en el autoclave a 121 °C durante 15 minutos. Se deja solidificar el medio en

251

posición inclinada para formar un fondo de aproximadamente una longitud de 2,5 cm. Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua dest iladA y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos. Se deja solidificar en pendie.f1tf! con un "(onda amplio'.

DESCRIPCION Se trata de un medio mixto para la diferenciación de enH~robacterias de acuerdo a su capacidad de fel·mentar la lactosa, sacaro:.;a y dextrosa, y producir sulfhídrico. No solamente rjesarrolla este medio fa mayoría de fa s funciones del Agar con Hierro de 1~liger sino que además su contenido en sacarosa permite el reconocimiento y la exclusión de especies de Paracolobactrum y Proteus. Estos organismos atócan la jactosa lentamente o no lo hacen en absoluto durante el paríodo de incubnci0n, pero pueden atacar fácil mento la sacarosa. Puesto qt.:e alguna~ ,aspecies de Proteus y otros organismos pueden dar reacciones s;mil<3res a las salmonelas y shigelas, es necesario distinguirlas por su capacidad de hidroHzar la ureó. Por esta razón, el Agar de Tres Azúcares y Hierro se debe utili.!ar en paralelo con Calrlo de Urea o Agar de Urea . I '

Al principio, se consideró que este medio era intercambiable con el Medio de Kliger para la det.ección de las enterobacterias productoras de sulfhídrico . En la actualidad, se piense que el Agar de Tres Azúcares y Hierro no es adecuado para la detección de la producción de .sulfhídrico por los organismos fermentadores de la sacarosa, tales como especies de f:itrooacfer y Proteus, en los que la fermentación de la sacarosa enmascara el indicador de sulfhídrico en el medio (Bulmash y r-u lton, 19(4).

Se recomienda el Agar de Tres Azú cares y Hierro para la identificación presuntiva de las cJlon ias o subcultivos a partir de merl;of, en placa tales como Agar para Salmonela y ShigeJa (S.S. Agar.' CM99, Agar de Sulfito de Bismuto (Bismuth Sulphite Agarl CM201, Agar de Verde Brillante (BriUiant Green Agarl CM263, Agar de lvIacConkey NQ 3 IMacCon<ey Agar No. 31 CM115 o Agar de Desoxycolato y Citrato (Hynes) (Oesoxycholate Citrate Agar, HynesJ CM227. TECNICA Las técnicas americanas SP, describen en otra pane (American Public Health Association , 1963, 1963; Edwards y Ewing, IOOZ y Society of American Bacteriologists, 19571, sugiriérdose io siguiente como una alternativa sencilla: 1. Se pica una colonia de la superficie de un meoio selectivo en placa y se

extiende sobre una placa de Agar de MacConkey (MacConkey Agar) CM7. Se incuba durante 18 horas a 37°C y se inocul:1n dos tubos diferentes de medio a partir de una colonia aislada: (i) Agar de Tres Azúcares y Hierro - se ext iend'3 sobre la pendiente y se

pica el fondo. (ji) Base de Caldo de Urea (Urea BrothJ CM71 (con Soluciórl de Urea (U rea 4O%ISA401.

2. Se incuba a 37°C. 3. Se examina el Caldo de Urea después de :; nora :; y otra vez después de 18

horas de incubación. Se desechan los tubcs q·.le muestren una coloración roja o rosa, lo cual es debido a la hidrólisis de Id ureé! de las especies de Proteus o paracolon.

4. Cuando no haya hidrólisis de la urea, se t,::<ami(lan 105 tubos de Agar de Tres Al.úcares y Hierro después de 18 h ()~as v 48 horas. l.as reacciones siguientes son típicas:

252

Organismo

Aerobacter aerogenes Aerobacter cloacae Escherichia coli Proteus vulgaris Proteus morganii Shigella dysenteriae Shigella sonnei Salmonella typhosa Salmonella paratyphi Salmonel la schottmuelleri Salmonel la choleraesuis Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium

Fondo

AG AG AG AG

A o AG A A A

AG AG AG AG AG

Pendiente

A A A 1\

NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC NC o ALC

SH,

+

+

+

+ +

La nomenclatura está de acuerdo con la '¡a Ediciórl del " Bergey's Manual of DetArminative Bacteriology" .

AG ácido (amarjllo) y formac'ión de gas A ácido (amarillo)

NC sin cambio ALK alcalino (rojo)

+ (negro) sulfhídrico no sulfhídrico (no negro)

véase nota en la página anterior.

La prueba presunta obtenida de esta manera se puede con firmar serológicamente después de subcultivar el organismo <l partir del Agar de Tres Azúcares y Hierro en Caldo Nutritivo NQ 2 (Nutriem Broth No. 2) CM67.

REFERENCIAS 1. American Public Health Association (19631 'Oiagnostic Pror.edures and Reagents' . 4th OO ., pp .

150 and 294 - 295. APHA Inc .. New York . 2. American Public Heallh Association (1966) ' Recommended Melhods for the Microbiological

ElCamination of Foods' . 2nd OO., APHA Inc., New York, pp. 158 and 185. 3. Bulmash, J . M . Y Fulton. M . (1966) 'Discrepan! Tests for H\'drogen Sulphide' . J. 8ect. 88(6),

1813. 4. Edwards, P. R. Y Ewing, W . H. (1962) 'Identification of Enrerobecterisceee' Burgess Publishing

Co., Minneapolis. 5. $ociety of American Bacteriologists (1957) 'Manual of Microbiological Methods'. McGraw·

HiIIBook Co. Inc., London .

Tryptone TRIPTONA

Tryptone T Véase Peptones and Hydrolysates.

TRIPTONA T

253

Urea40% UREA AL 40% CÓdigo SR20

Para incluir en el Medio de Dos Tubos de Kohn No. 1 (Kohn's Two-Tube Medium No. 1) CM179, Base de Agar de Urea (Urea Agar Base) CM 53, y Base de Caldo de Urea (Urea Broth Base) CM71. Esta solución esterilizada por filtración es particularmente útil puesto que la solución de urea no puede ser esterilizada por la aplicaCión del calor. Se dispone en ampollas de Yí mi y de 5 mI.

!-!!:~A~qf1~E~ase Código - Polvo CM53

Tabletas CM54

FORMULA Peptona Dextrosa Cloruro de sodio Fosfato bisódico Fosfato de potasio Rojo de fenal Ag.'

INSTRUCCIONES

en gramos por litro 1.0 1,0 5,0 1,2 0,8 0,012

15,0 pH 6,8 {aprox. 1

Polvo: Se suspenden 2,4 9 en 95 mi de agua destilada y se hierve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliza en el autoclave a 115°C durante 20 minutos. Se enfrfa hasta 50°C y se introducen 9sépticamente 5 mi de una solución de urea estéril al 40 % (Urea 40 % ) SR20. Se mezcla bien , se distribuye en cantidades de 10 mi en recipientes estériles y se deja que se solidifique en posición inclinada. Tabletas: Se añade una tableta a 9,5 mi de agua destilada . Se esteriliza en el autoclave a 115°C durante 20 minutos. Se enfrfa hasta 55°C, aséptica mente se añaden 0,5 mi de una solución de urea estéril al 40% (Urea 40% ) SR20. Se mez¡,;;la bien y se deja en posición inclinada .

DESCRIPCION Se recomienda la Base de Agar de Urea para la preparación del medio de Christensen (Christensen , 1946) para la detección ae los organismos desdobladores de la urea tal como Proteus vulgaris. El medio de urea puede utilizarse para la detección de la hidrólis is de la urea por otros micro­organismos incluyendo ciertos micrococos y organismos paracolon.

TECNICA Se hace un in6culo fuerte con un cultivo puro del organismo en cuestión sobre la superticie de un agar de urea inclinado. La reacción se completa generalmente después de 3 a 5 horas a 37°C. Los organismos productores de

261

ureasa hidrolizan la urea para formar amonio, y el medio cambia a Jn co lor rojo pú rpu ra.

Para preparar este medio cómodamente, la solución de urea al 40% se suministra como una solución estéril en amp'Jlles .

REFERENCIAS 1. Christensen, W . B. 11946) 'Urea Decomposition as a means 01 Dif1erentiating Proteus and

paracolon Cultures f rom each other and from Salm?nella and Shigella Tvpes'. J. 8aet. 52, 461 - 466.

Urea Broth Base BASE DE CALDO DE UR~A Código CM71

FORMULA Peptona Dex trosa Fosfato bisódit:o Fosfato de potasio Cloruro de sodi o Rojo de fenol

INSTRUCCIONES

en gr8('705 por litro

pH 6,8 (aprox. ) I

1,0 1,0 1,2 0,8 5,0 0,004

Se añaden 0,9 9 a 95 mi de sgua desti lada. Se esteri liza en el autoclave a 115°C durante 20 minutos . Se enfría a 55°C v se Infroducen aséptica mente 5 mi de una solución de urea estéril 3140% (U rea 40%) SR20. Se mezcla bien y se distribuye en cantidades de 10 mi !'Jn recipien tes ':!stériles.

DESCRIPCION Se trata de una modificacióri líquida del medio de Christensen (Maslen, 1952l. La modifi cación AS indicada paró la difere:lciación de los organismos productores de urea de los grupos SalmonellD y Shigella, du rante el examen ord inario de los hisopos rect<~ Jes y heces . Maslen obse.rvó Que, Rn el examen rutinario de las heces para Sa/manella y Shige/la, muchas co lonias no fermentadoras de la lactosó pertenecía n a los yrupos Proteu5 y paracolon . Desarrolló este medio de forma que estos organismos pudieran ser detectados rápidamente y eliminados, ahorrando du esta forma 'jlla cantidad considerable de tiempo y medios. Maslen expone que las ventujas :::lel meJio liquido son: (i) Se puede utilizar un pipeta Pasteur para inocular otros medios

diag nósticos. (i i) Sobreviene un rápido crecimiento y e~ posible discernir una reacción

claramente pnsitiva en 2 a 5 horas a 37°C. (iii) Es mas fác il aetectar cualqu ier co;¡taminaci6n durante el almacencje.

262

DESCRIPCIDN

El Agar con Rosa de Bengala y Cloramfenicol es un meaío selectivo para la enumeración de las levaduras y mohos a partir de una gran variedad de muestras alimenticias. El medio tiene un pH neutro y el cloramfenicol se utiliza como agente selectivo para suprimir el crecimiento bacteriano. Varios investigadores han observado ventajas al utilizar medios a un pH neutro que contengan antibi6ticos1.2 , Las colonias de mohos y levaduras captan el rosa de Bengala y por ello se facilita la enumeración de las coloniéls pequeñas1. El rosa de Bengala controla también el tamaño y la altura de las colonias de mohos, tales como Neurospor8 y Rhizopus spp. De esta forma se evita que las cepas de crecimiento lento queden cubiertas por las especies de crecimiento más rápido, facilitándose el recuento de la placa.

La elección de un medio adecuado para la enumeración de las levaduras y moho:i depende en gran medida de la naturaleza de las muestras alimenticias a investigar y de los organismos que se suelen presentar en ellas4

• Se recomienda el Agar con Rosa de Bens;¡ala y Cloramfenicol para los alimentos proteináceos frescos cuya flora asocIada consta prinr.ipalmente de bacilos Gram·ne~ativos , aunque debe advertirse que el cloramfenicol solo puede no ser suficIente para inhibir el fondo bacteriano. Debido a la estabilidad del cloramfenicol, el Agar con Rosa de Bengala y Cloramfellicol resulta también adecuado cuando se requiera una incubación prolongada a temperaturas mas elevJ3das, de unos 35°C.

TECNICA

Se añaden alícuotas de 1 mi de una serie de diluciones decimales adecuadas a placas de Petr; vacías de 9 cm. Se utilizan dos placas para cada dilución. A continuación se añaden a cada placa unos 15 mi de medIo enfriado a 50°C. Se mezcla con suavidad, girando las placas tres vueltas en sentido dextrógiro y tres vueltas en sentido levógiro.

S€: deja que el medio se solidifique, se invierten las placas y se incuban durante cinco días a 22°C±2°.

Se inspeccionan las placas y se cuentas las colonias de aquellas que con tengan unas 5Q..l00 colonias.

Se calcula el número de levaduras o mohos por 1 g o por 1 mi multiplicando el número de colonias por el factor de dilución .

REFERENCIAS 1. Mossel, D. A. A. , Visser, M., Mengerink. W. H. J . 11 962) Lab. Pract. 11 ,109- 112. 2. Kobvrger, J. A. 11968) 8act. Proc. 13, A73. 3. Jarvis, B. (1973) J . Appl. 8aa 36,723-727. 4. Mossel. D. A. A" Vega, C. lo V Put, H. M. C. (1975) J. Appl. 8act. 39. 15-22.

Sabouraud Dextrose Agar AGAR DE SABOURAUD CON OEXTROSA

Código - Polvo CM41 Tabletas CM42

FORMULA Peptona micológica Dextrosa

en gramos por litro 10

Agar nO 1 pH 5.6 (arrox.)

215

40 15

INSTRUCCIONES

Polvo: Se suspenden f.5 gramos en 1 litro de agua desti lada y se hielve hasta disolver el medio por completo. Se esteriliziJ en el au~oc\ave a 121 °C durante 15 minutos. Tabletas: Se añade una tableta a 5 mi de agua destilada y se deja embeber durante 5 minutos. Se esteril iza an el autoclave a 121"C du ran te 15 minutos.

OESCRIPCION

Esta modificación del agar de Sabouraud (Carlier, 194€) e~, arropiad¡:¡ para el cul tivo y diferenciación de los hongos.

Carlier demostró que el medio proporciona unos result.::tdos fiables con Microsporum audou¡m~ M. can/s, Tricophy tor. fT'entagrophyte5', T. flavum, T. rubrum y Candida alb/cans. El Agar de SabouraucJ C:)i1 Dextrosa puede utilizarse en lugar del Medio Americano Standurd de Hodges 1.1928), Los hongos mantienen sus aspectcs cu lturales : ípicos, pudiéndose, por consiguiente, identificarlos fácilmente de acuerdo n las caraterísticas macroscópicas típicas descritas por Sabouraud (191Oi.

TECNICA

El medio se utiliza frecuentemente con antibióticos para el aislamiento de los hongos patógenos, a partir de material Que contenga gr~n can tidad de otros hongos o bacterias. Georg y co ls. (1954) añadieron asépticam~nte 0,5 g. de cicloheximida, 20.000 unidades de penicilina ' '1 40 ,000 unidades de estreptomicina n cada litro de medio autoclavado y e'lfriado. Cryptococcus neoformans, Aspergl1lus fumiga tus y Allescheria b':Wdli son sensibles a la cicloheximida; Actinomyces bovis y Nvcardia asteroides son !;ensibles a la penic ilina y estreptomicina .

Por otra parte, se puede añarlir 0,4 'J de clor:mfenicol y 0,5 9 de cicloheximida a cada litro de medio reccn~t i tuido antes de autoclavar I Ajello, 1957). Los mismos microorganismos 'son sensibles a esta nueva combinación , véase arriba.

Williams Smith y Jones (1963) emplearon Agar de Sabnuraud con Dextrosa Oxoid que con tenía 20.0Cú unidades de penicilina y 0,04 g de neomicina por litro, para el recuento de levadura'5 en el tracto alimentario del cerdo .

El Agar de Sabouraud con Dextrosa Oxoid puede utilizarse también como base para el medio de Pagano-Levin (Pagano y cols. 1957 - 58) para el aislamiento de Gandida albicans. Se añ ade O, 1 g de cloruro de trifeniltet razolio (como solución esterilizada por filtración) a cada litro de medio fundido, autoclavado, enfriado a 5!)OC. E-I medio se hace generalm~nte inhibitori o para la mayoría de los hongos no patógenos V bacterias al añ adi r los antibióticos como se ha descrito arriba . Después de la incubación dura n~e 3 días a 25°C, las colonias de Gandida albir.afls qOJedan sin pigmentar o rosa páclidú mientras que otras especies de Gandida y otrO$ hongos forman colonias rosa oscuro o rojas. La técnica de Pagano-Levin ha sido inv(;st igada por Kutscher y cols (1959), Sinski (1969), rlidley (1960) y varios otros: la pru~ba es suficiente para fi nes de cribado, pero se deben utilizar otros criterios. diagnósticos para la identificación de Gandida albicans.

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REFERENCIAS 1. Ajello, libero 119571 'Cultural Methods for Human Pathogenic Fungi' J. Chron. Dis. 5(51.

545-5!;1. 2. Carlier, Gwendoline L M. 119481 Dri,. J. Dem. Syph. 60. 61 - 63. 3. GeO(ge, Lucille 1<:. , Ajello. L. y Papageorge, Calomira (1954) J. Lab. elin. MfJd. 44131, 422 - 428. 4. Hodges, R. S . 11928) Arch. Derm. Syph .• New York, 18, 852. 5. Kutscher, A . H. , Saguin , l. , Zegarelli, E. V., Aankow, A. M. , Mercadante, J. y Piro, J. O.

(1959a1 ' Growth Charactetistics 01 Cllndids a/bicans on Pagano-Levin Cultu re Medium' J ¡nvest, Darm. 33.41 - 47.

6. Kutscher, A. H., Saguin, l., Zegarelli, E. V., Rankow, R. M., Campbell, .J. B. Y Mercadante, J. 11959b1 ' Pagano-levin Culture Medium lor Differentiation of Candida Il/bicans' American Type Cult lJrt! Collection Studies, 1. Antiobiotics and Chemotherapy 9( 11 " 649 - 659.

7. Pagano, J., levin, J. G. y Treja, W . 11957 -58) 'Oisgnostic Medium lar Oifferentialion of Species 01 Candida' Antibiotics Annual 1957 - 58, 137 - 143.

8. Ridley, M. F. I1960J 'A Comparison 01 Methods lar Identification of Candida albicans Ausrralian J. Dermar. 5(4), 209 - 213.

9. Sabouraud, R. (1910) 'Les Teignes', Masson, Paris. 10. Sinski, J . T. 11960) 'The EHectiveness 01 Pagano-Levin Medium for the Oetection and

Identification 01 Candida albicans in Clinical Specimens' J. invest. DeJ"mllt. 35(3), 131- 133. l1.Willians Smith, H. y Jones, J. E. T. (1963) 'Observalions on tilo Alimentary Trael and ils

Bacterial Flora in Healthy and Diseased Pigs' J. Path. Sect. 86 (2), 387 - 412.

Sabouraud Liquid Medium MEDIO LIQUIDO DE SABOURAUD

Código - Polvo CM/47 Tablet.s CM/48

fORMULA

Digerido pancréatico de caseina Digerido péptico de carne fresca Dextrosa

pH 5,7 (aprox .)

INSTRUCCIONES

en gramos por litro 5 5

20

Polvo: Se añaden 30 gramos a 1 litro de agua destilada. Se mezcla bien, se distribuye en los recipientes definitivos y se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos. Tabletas: Se añade una tableta a 10 mi de agua destilada y se esteriliza en el autoclave a 121°C durante 15 minutos.

DESCRIPCION

El Medio Líquido de Sabouraud sirve para probar la esterilidad micológica de acuerdo con el medio descrito en I~ Farmacopea de EE.UU. (1965) para la determinación de la actividad tungistática de 105 productos farmacéuticos para evitar pruebas de esterilidad falsas . También se recomienda para el cultivo de hongos. levaduras y bacterias acidofílicas .

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