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LA PRIMA SPERIMENTAZIONE CON SILENZIAMENTO GENICO NEI PAZIENTI HD
Marina Frontali- Istituto di Farmacologia Traslazionale del CNR, Roma [email protected]
AICH-ROMA 21 Maggio 2016
Aggiornamenti
GLI ASO: oligonucleotidi antisenso
GACCCTGGAAAAGCT
HTT RNA
T
TTT
G G G
G
CC
C
A
A ASO
LA SOPPRESSIONE DELLA HTT MIGLIORA I SINTOMI DELLA MALATTIA? (Kordasiewicz et al 2012
Studio nei primati non umani (Kordasiewicz et al, 2013)
Riduzione HTT
25% nel nucleo caudato
50% nella corteccia
Riduzione dell’HTT dura 8 settimane dopo la somministrazione di ASO
COME FA IL FARMACO AD ARRIVARE AL CERVELLO
antisenso e i loro problemi
si disattiva sia il gene sano che quello espanso
La htt normale e’ necessaria?
Puo’ essere eliminata completamente o parzialmente?
DOVE SI SVOLGE LA SPERIMENTAZIONE?
CANADAEUROPA: INGHILTERRA E GERMANIA
3 centri in UK2 centri in Germania1 centro in Canada
SPERIMENTAZIONE CON ASOTOLLERABILITA’ E SICUREZZA DEL FARMACO
25% dei pazientiricevono placebo
75% dei pazientiricevono dosi diverse di
ASO
13 sett
4 dosi per pazientea distanza di 28 giorni
36-48 pazientiIn fase iniziale
di malattia
5 sett
osservazione
Valutazione di:- Eventi avversi- Stato generale di salute- ASO e HTT nel sangue
e nel liquor- Dose ideale
15 sett
Valutazione post-Trattamento
Schema sperimentale
10 mg
10 mg
10 mg
10 mg
Post-treatment Period
30 mg
30 mg
30 mg
30 mg
Post-treatment Period
50 mg
50 mg
50 mg
50mg
Post-treatment Period
70 mg
70 mg
70 mg
70 mg
Post-treatment Period
screen
screen
screen
screen
Gruppo C 8 pazienti
Gruppo D 16 pazienti
Gruppo A 4 pazienti
Gruppo B 8 pazienti
Non ancora risultati, ma dichiarazioni
Sara Tabrizi, che conduce lo studio all’UCL
“ E’ una vera emozione che questo farmaco antisenso sia stato somministrato ai primi pazienti senza danni. Le famiglie devastate dalla Malattia di Huntington hanno aspettato decenni che si potesse arrivare a questa pietra miliare. Spero che il prosieguo di questa prima sperimenatzione vada bene e di vedere , nel prossimo futuro, la sperimentazione sulla efficacia di ISIS-HTTRx e la sua autorizzazione all’impiego terapeutico.
Passi successivi
1) Aspettare I risultati complessivi (non prima del 2018). Se il farmaco e sicuro e tollerato, anche a lunga scadenza si passa alla fase 2
2) Avviare la fase 2 (efficacia del trattamento) in piu’ centri e con qualche centinaio di pazienti (durata almeno 4 anni)
3) Autorizzazione della Agenzie del Farmaco all’uso della terapia (durata 1-2 anni)
Nel frattempo? cercare soluzioni ad alcuni problemi
La diffusione delle molecole ASO nel cervello potrebbe non essere sufficiente in alcune aree del cervello
Il metodo di somministrazione via intratecale e’ di per se poco pratico e non sempre ben sopportato
LA TRANSFERRINA SUPERA LA BARRIERA EMATOENCEFALICA
brain shuttle corto.mp4
SILENZIARE ENTRAMBE GLI ALLELI O
SILENZIARE SOLO L’ALLELE MUTATO?
Agenti che tagliano il DNA in punti precisi1) Nucleasi a dito di zinco (zinc Finger Proteins) ZFN
2) Transcription activator-like effector nuclease TALEN
3) Clustered regularly interspaced short palindromic repeats CRISPR
CRISPR
CRISPR http://www.genecopoeia.com/product/crispr-cas9/?utm_source=GeneCopoeia&utm_medium=email&utm_campaign=Genome-Editing-20160510-NCBI-2&utm_unique=bWFyaW5hLmZyb250YWxpQGlmdC5jbnIuaXQ%3D%0A
ZFN
http://www.sigmaaldrich.com/life-science/zinc-finger-nuclease-technology/learning-center/what-is-zfn.html
Proteine zinc-finger che inibiscono la espressione del gene mutato
RepressoreZFP- CAG 11
Esone 1 mutato
Esone 1 wildtype
Wilson 2003
Garriga et al 2012
Limiti della tecnica: uso di vettori virali
https://www.jax.org/news-and-insights/jax-blog/2014/march/pros-and-cons-of-znfs-talens-and-crispr-cas
Scarsa capacita’ di passare BBB
Alcuni virus passano BBB, ma scarsa capacita di infettare cellule neuronali
Immissione di virus direttamente nel cervello
I nuovi virus possono:
1) essere iniettati nel circolo sanguigno e raggiungere il cervello
2) entrare nei neuroni piu facilmente di altri virus
3) diffondere in tutte la parti del cervello4) trasportare materiale per silenziare
geni
CONCLUSIONILe prima tappe della sperimentazione sul silenziamento genico con
ASO ci dicono che il farmaco sembra sicuro e ben tollerato
Se tutto va bene nelle tappe succesive della sperimentazione con ASO bisogna attendere almeno fino al 2025 perche’ il farmaco
possa essere approvato per l’uso pubblico
Nel frattempo si sperimentano altre strade che - facilitino la diffusione di silenziatori del gene in tutto il
cervello- utilizzino la via ematica senza ricorrere alla via intratecale, o
chirurgica
