INSECT PHYSIOLOGY AND BIOCHEMISTRY

JOURNAL DISCUSSION INTEGUMENT

JOSUA CRYSTOVEL

150320160005

Dosen Pengajar:

Dr. Ir. Danar Dono, M.Si

PASCASARJANA AGRONOMI

FAKULTAS PERTANIAN

UNIVERSITAS PADJADJARAN

SUMEDANG

2017

1

PEMETAAN MORFOLOGI INTEGUMEN BETINA DEWASA DIAPHORINA

CITRI KUWAYAMA, MENARGETKAN PENGEMBANGAN STRATEGI

PENGENDALIAN

Arnosti A.1, Delalibera Jr. I.

2, Conceschi M. R.

2, Travaglini R. V.

3 and Camargo-

Mathias M. I.1*

1 Sao Paulo State University, "Júlio de Mesquita Filho"- UNESP, Institute of Biosciences,

Biology Department.

2 University of Sao Paulo-USP, ESALQ Luiz de Queiroz, College of Agriculture,

Entomology and Acarology Department.

3 Sao Paulo State University “Júlio de Mesquita Filho”- UNESP, College of Agricultural

Sciences, Plant Protection Department.

ABSTRAK

Diaphorina citri Kuwayama saat ini hama pertanian yang paling penting bagi

citriculture di seluruh dunia, yang dilaporkan di benua Amerika dan Asia, menyebabkan

kerugian ekonomi dari dampak yang besar dan transmisi bakteri patogen "Huanglongbing"

(HLB, Yellow Dragon Disease), juga dikenal sebagai "Citrus penghijauan ". Tujuan dari

penelitian ini adalah untuk mengkarakterisasi morfologi integumen eksternal dan internal

daerah serangga yang memiliki area kontak yang lebih besar untuk agen entomopatogen:

wilayah dorsal anterior: prescutum (psc2) dan tameng (sc2), dan segmental ventral posterior

(Segmen III dan IV). alat Ultramorphological [Scanning mikroskop elektron (SEM)]

digunakan untuk karakterisasi eksternal dan teknik histologis untuk menganalisis integumen

internal yang (hematoxylin / eosin berair) dari kedua wilayah. Hasil yang ultra morfologi

menunjukkan adanya lilin dan sensilla di integumen eksternal, lebih sering ditemukan di

wilayah dorsal anterior dibandingkan dengan segmen ventral. histologi menunjukkan bahwa

kutikula tipis di kawasan segmen ventral bila dibandingkan dengan dorsal anterior, menjadi

lebih rentan terhadap infeksi oleh patogen serangga.

PENGANTAR

Diaphorina citri Kuwayama 1908 adalah serangga hama penting untuk citriculture

dunia, setelah itu adalah vektor dari beberapa patogen. Spesies ini telah layak perhatian

khusus dalam penelitian untuk transmisi bakteri "Candidatus Liberibacter americanus" dan

2

"C. Liberibacter asiaticus ", agen dari" Huanglongbing "(HLB, Yellow Dragon Disease), juga

dikenal sebagai" Citrus Greening "(Beloti et al, 2013;.. Pinto et al, 2012; Gottwald et al,

2007;. Bové, 2006) . Untuk transmisi penyakit ini, D. citri saat ini hama jeruk yang paling

penting di Amerika dan benua Asia (Burckhardt dan Ouvrard, 2012;. León et al, 2011;.

Tiwari et al, 2011;. Bonani et al, 2009). Integumen serangga adalah penghalang mekanik

sangat penting, melindungi terhadap pengeringan dan berkali-kali terhadap predator (Gullan

dan Cranston, 2012; Chapman, 1998). integumen dibentuk oleh epidermis dan kutikula, salah

satu struktur utama untuk keberhasilan biologis dari Insecta Order (Gullan dan Cranston,

2012; Chapman, 1998) dan yang fungsi utamanya adalah untuk membentuk exoskeleton kaku

yang memisahkan jaringan internal yang serangga dari lingkungan di mana mereka tinggal.

Hal ini diketahui bahwa kutikula serangga disekresikan oleh epidermis dan didasari oleh: a)

epicuticle, lapisan tipis dan b) procuticle, tebal lapisan (Gullan dan Cranston, 2012;

Chapman, 1998; Binnington dan Retnakaran, 1991; Hadley et al, 1986;. Hepburn, 1985).

Permukaan terluar dari serangga ditutupi oleh epicuticle, yang dibagi menjadi epicuticle

internal dan eksternal. Kehadiran lilin diamati meliputi permukaan eksternal dari serangga,

mencegah mereka dari penderitaan dehidrasi (pengeringan), setelah lilin mengandung zat

lipid dengan perilaku hidrofobik (Gullan dan Cranston, 2012). procuticle ini terutama

dibentuk oleh kitin, dan juga dibagi menjadi dua lapisan: exocuticle (terluar dan tipis) dan

endocuticle (lebih tebal dan terdalam) (Gullan dan Cranston, 2012; Chapman, 1998;

Binnington dan Retnakaran, 1991; Hadley et al, 1986; Hepburn, 1985).

Penelitian yang sedang berlangsung telah dilakukan untuk menemukan metode baru

untuk mengendalikan serangga hama. Selain mengendalikan hama, metode harus efisien dan

tidak berbahaya bagi organisme non-target dan lingkungan. Dengan demikian, penelitian

lebih lanjut mendekati karakterisasi morfologi serangga "integumen, masih langka di

literatur, diperlukan untuk memahami fungsi penghalang penting untuk perlindungan dan

isolasi serangga dari lingkungan, yang bertujuan untuk mengembangkan strategi baru untuk

mengendalikan hama ini . Data ini akan berguna dalam pengembangan produk biologi,

terutama menggunakan cendawan entomopatogen, yang bertindak menembus integumen

(Alves, 1998). Mengingat semua terkena, penelitian ini memiliki tujuan untuk memetakan

morfologi integumen di D. citri betina dewasa, saat ini dianggap hama jeruk yang paling

penting, yang bertujuan untuk mengidentifikasi daerah-daerah dengan kerentanan lebih besar

terhadap adhesi dan penetrasi cendawan entomopatogen, sekali informasi ini dapat

mendukung penelitian lain pada kontrol biologis hama ini.

3

BAHAN DAN METODE

Koleksi dari imagon jantan dan D. citri betina dewasa dikumpulkan dari Laboratorium

Patologi dan Serangga Mikroba Pengendalian ESALQ / USP / Piracicaba SP, Brazil, dan

dipelihara di kamar climatized pada 25 ± 2 ° C; 65-80% HR dan 12 h photophase. Murta

Kemuning (L.) JACK (Rutaceae) tanaman disimpan dalam 60 × 60 × 50 cm kandang baja

ditutupi dengan layar anti-kutu. Sepuluh tanaman yang penuh dengan 30 orang imago dewasa

pasangan D. citri untuk oviposisi betina. Setelah 6 hari, semua serangga dikumpulkan dari

tanaman dan untuk melakukan sexing dan pemisahan 30 betina imago dewasa dengan 1 hari

usia yang akan digunakan dalam penelitian ini.

Pemindaian mikroskop elektron (SEM) Sepuluh D. citri imago dewasa betina itu dibius

melalui thermal shock (2 menit di lemari es pada suhu 4 ° C) dan tetap di paraformaldehyde

4% selama 48 jam, pada suhu 4 ° C. Setelah, betina yang dehidrasi dalam seri sabit aseton

(70, 80, 90, 95 dan dua kali di 100%, selama 10 menit setiap mandi). Setelah pengeringan di

titik kritis, mereka dipasang di bertopik baja dengan double tape perekat yang akan dilapisi

dengan emas di sputtering. Spesimen kemudian dianalisis dan difoto menggunakan

mikroskop elektron scanning Hitachi TM3000 (Hitachi higt-Technologies Corporation /

Jepang) di Laboratorium Mikroskopi dari Departemen Biologi, Biosciences Institute, UNESP

Rio Claro, SP, Brazil. Histologi Sepuluh imago dewasa D. citri betina dikumpulkan dan

dibius melalui thermal shock dalam kulkas menjadi posterior tetap di paraformaldehyde 4%

selama 48 jam pada suhu 4oC. Kemudian, bahan itu dehidrasi dalam seri sabit alkohol (70,

80, 90 dan 95%), selama 1 jam setiap mandi, dipindahkan ke Leica embedding resin (sistem

Leica Micro / Jerman), termasuk dan dipotong dengan mikrotom Leica RM2255 di 3 bagian

pM-tebal. Bagian dikumpulkan pada slide kaca dan diproses sesuai dengan teknik Harris

hematoxylin / eosin berair pewarnaan (Junqueira dan Junqueira, 1983). Untuk ini, bagian

yang direhidrasi dalam air suling selama 1 menit, diwarnai dengan hematoxylin selama 10

menit dan dicuci dalam air keran. Bagian itu kemudian diwarnai dengan eosin selama 10

menit, dicuci, dan dikeringkan pada suhu kamar. Pemasangan slide terakhir dilakukan di

Kanada balsam. Setelah dikeringkan dalam inkubator pada suhu 37 ° C bagian dianalisis dan

difoto dengan photomicroscope Leica DM4000 (Leica Microsystems / Jerman).

MORFOLOGI

Skema yang diuraikan dari bagian histologis median diperoleh untuk lebih

menggambarkan posisi dan komposisi setiap lapisan integumen. Semua hasil yang diperoleh

di sini digambarkan berdasarkan terminologi yang diusulkan oleh Ouvrard et al. (2002, 2008)

4

dan, Gullan dan Cranston (2012), setelah mantan sebelumnya telah menganalisis morfologi

eksternal dari beberapa spesies, termasuk serangga dari superfamili yang sama (Psylloidae)

belajar di sini, dan yang terakhir dilakukan karakterisasi integumen serangga. Studi yang

dilakukan oleh Chapman, (1998), yang juga telah mempelajari dan ditandai integumen

beberapa serangga, yang digunakan untuk deskripsi ini.

HASIL

Ultramorphology

Wilayah Dorsal

Penelitian ini menggunakan pemindaian teknik mikroskop elektron hadir untuk fokus

pada mesothorax, lebih tepatnya prescutum yang (psc2) dan tameng (sc2), daerah (Angka 1 A

e B), sekali, daerah ini memiliki wilayah terbesar dari kontak dengan lingkungan dan

akibatnya lebih rentan terhadap adhesi konidia jamur. Mereka menyajikan permukaan

eksternal dengan morfologi sangat mirip; itu., kehadiran patung di permukaan dan struktur

khusus, seperti achanti dan sensilla (terutama trichoid). The sensilla, dengan fungsi sensitif,

sekitar 15 m panjang dan diamati pada interval 16 m (Gambar 1B 1). Hal ini penting untuk

menyoroti bahwa wilayah tersebut menunjukkan jumlah besar lilin, yang dihasilkan oleh

kelenjar epidermal khusus dan disekresikan ke permukaan serangga melalui integumen pori-

pori (saluran) didistribusikan oleh tubuh serangga (Gambar 1 B1).

Wilayah Ventral

Di wilayah ventral (perut), terutama di segmen III dan IV, achanti tidak diamati;

Namun, permukaan eksternal heterogen, dengan deposisi lilin, dan sensilla trichoid. Yang

terakhir adalah 50% lebih jarang / µm2 diamati dan didistribusikan di seluruh permukaan

sekitar 30 pM interval, dengan panjang yang sama (15 m) dengan yang ditemukan di wilayah

dorsal (Angka 2A-C-C1).

HISTOLOGIS

Analisis histologis wilayah dorsal (Gambar 1C-E-E1) menunjukkan bahwa integumen,

khususnya prescutum (psc2) (Gambar 1C), didasari oleh: a) epicuticle (terluar); b) procuticle

(hanya exocuticle diamati); c) wilayah pembentukan kutikula dan d) epidermis (terdalam). Di

wilayah mana tameng (sc2) (Gambar 1E-E1) ditemukan, dan di ventral (perut) wilayah

lapisan berikut diamati: a) epicuticle (terluar); b) procuticle (dibagi dalam exo dan

5

endocuticle) dan c) epidermis (terdalam). Untuk lebih memahami histologi, lapisan dijelaskan

dari terluar ke daerah terdalam dari integumen, dan deskripsi sesuai dengan lapisan yang

menunjukkan perbedaan morfologi. Perbedaan ini terutama diamati pada lapisan sclerotized

(exocuticle) dan profil sel epidermis (kulit ari) dari daerah belajar di sini.

Wilayah dorsal dari prescutum (psc2) memiliki tebal sclerotized lapisan (Gambar 1 C),

diikuti oleh tameng (sc2) (Figsure 1 E dan E1) dan wilayah ventral (segmen III dan IV)

(Gambar 2 D). Mengenai profil sel epidermis (kulit ari), ada kesamaan antara prescutum

(psc2) (Gambar 1 C) lapisan dengan wilayah segmental ventral (Gambar 2 D), di mana

morfologi sel kubik, sementara wilayah dorsal tameng yang ( sc2) menampilkan sel dengan

bentuk pavementous (Figsure 1 E-E1).

Epicuticle (ep)

Terluar dan tertipis lapisan, diamati sebagai garis tipis dan gelap (panah hitam di Angka

1C, dan D dan 2 D dan E).

Procuticle

Lapisan ini dibagi menjadi dua lapisan lainnya, bernama exo (exo-terluar) dan

endocuticle (endo-terdalam) (Gambar 1 E-E1 dan F-F1). The exocuticle diamati di sini

menampilkan warna kecoklatan dan sekitar 5 pM tebal di wilayah tersebut (sc2); 3 pM tebal

di wilayah tersebut (psc2) dan 1 m tebal di wilayah ventral (Gambar 1 E-E1 dan F; Angka 2

D dan E). The sclerotization di wilayah ventral kurang intens dibandingkan dengan wilayah

dorsal. Hal ini penting untuk menyoroti bahwa, di (sc2) wilayah, itu tidak mungkin untuk

membedakan lapisan exo dari yang endocuticle, setelah serangga benar-benar sclerotized

(Gambar 1C dan D). lapisan terdalam dari procuticle itu, lemah ternoda oleh hematoxylin dan

eosin dibandingkan dengan exocuticle (Gambar 1 E-E1 dan F-F1; Gambar 2 D dan E).

Lapisan ini dari wilayah (psc2) dorsal tidak mudah diamati, mungkin karena sclerotization

sebelumnya, yang tidak memungkinkan untuk dibedakan dari exocuticle (Gambar 1 C dan

D).

Epidermis

Lapisan ini terbentuk atau oleh kubus berbentuk atau oleh satu pavementous yang

merupakan sebuah epitel kubik atau pavementous monolayed, masing-masing. Batas-batas

sel tidak diamati. Sel-sel ini merupakan epitel sederhana, bernama pavementous dan kubik

masing-masing. Epitel kubik diamati di prescutum (psc2) wilayah dorsal, di mana sel-sel ini

inti bulat (n) dengan kromatin decondensed, terletak di wilayah tengah dari sel (Gambar 1C

dan D). morfologi ini juga ditemukan di wilayah ventral (Gambar 2 D dan E). Ia juga

mengamati bahwa epidermis dijelaskan sebelumnya didukung oleh lapisan tebal adiposit (fb)

6

(Angka 1 C e D; Angka 2 D dan E). Epidermis dengan sel pavementous diamati di wilayah

dorsal tameng (sc2) (Gambar 1 E-E1 dan F-F1). Khususnya di wilayah ini, lapisan ini segera

yg terletak di bawah ke wilayah pembentukan kutikula (rf) dan yang terakhir didukung oleh

lapisan otot (m) thorax (Angka 1E-E1 dan F-F1). Masih di wilayah ini, epidermis sangat

tipis, dengan sel menyajikan inti datar (n). Selain itu, kutikula menunjukkan gangguan dalam

tameng (sc2), Korespon-genangan ke bukaan (saluran) kelenjar eksokrin dermal, di mana

sekresi yang dihasilkan (lilin) dilepaskan ke luar dari tubuh. Untuk pemahaman yang lebih

baik dari hasil, data yang dirangkum dalam Tabel 1.

Gambar 2. A, Skema representasi dari betina imago dewasa Diaphorina citri; B-C, photomicrographs (SEM)

dari posterior daerah ventral dari serangga. Khususnya di C-C1, perhatikan detail dari permukaan integumen

menunjukkan distribusi yang tidak teratur dari sensilla trichoid, serta kehadiran langka tetesan lilin; D, bagian

histologis median dari wilayah ventral posterior dari serangga, diwarnai dengan HE, menunjukkan sel dan

jaringan organisasi integumen di segmen (III-IV); E: representasi skematis dari integumen lapisan (III-IV) yang

diperoleh dari pengamatan bagian histologis median. ep: Epicuticle; pro: procuticle; exo: exocuticle; endo:

endocuticle; e: epidermis; tetesan lilin;: w n: inti; fb: lemak tubuh; m: otot; s: sensilla. Skala: A: 1 mm; B-C: 250

m; C1: 15 m D dan E: 5 m.

7

Tabel 1. Ringkasan hasil morfologi dan histologi diperoleh dari analisis integumen di D. citri

imago dewasa betina.

DISCUSSION (DISKUSI)

Serangga D. citri milik superfamili Sternorrhyncha, yang terdiri dari sekitar 3890

spesies yang sudah dijelaskan (Burckhardt dan Ouvrard, 2012; Li, 2011). Beberapa penelitian

berfokus pada serangga ini telah dilakukan, terutama menyangkut pengembangan strategi

kontrol (Conceschi et al, 2016;. Orduño-Cruz et al, 2016;. Hoy et al, 2010.). Namun, sedikit

yang diketahui tentang integumen serangga, penghalang pertahanan utama mereka. Dalam

hal ini, penelitian morfologi bertujuan untuk lebih memahami organisasi internal dan

eksternal dan biologi serangga ini telah sedikit dikembangkan, terutama menggunakan

individu imago dewasa, fase dispersi dari serangga, dan akibatnya fase penyebaran penyakit.

Secara umum, individu imago dewasa lebih tahan terhadap agen pengendali kimia dan

biologi. Pengakuan konstitusi morfologi organisme menyediakan data sangat diperlukan,

membawa perspektif baru dalam pencarian stra-tegies untuk mengendalikan serangga hama.

Studi yang dikembangkan pada D. citri biasanya telah difokuskan pada daerah tubuh

dianggap paling penting bagi kelangsungan hidup serangga: wilayah anterior, terdiri dari

kepala, dan perut, di mana sistem reproduksi, bertanggung jawab untuk generasi individu

baru, yang terletak (Dossi dan Consoli, 2014, 2010;. Garzo et al, 2012). Dalam spesies ini,

meskipun relatif besar jika dibandingkan dengan bagian tubuh lainnya, daerah dada dan perut

telah diabaikan dalam hal morfologi (Drohojowska et al., 2013).

Mengenai serangga dianggap hama ekonomi, diketahui bahwa integumen mereka

menjadi hambatan penting terhadap aksi patogen serangga yang infeksi dapat menyebabkan

serangga mati (Kecil dan Bidochka, 2005; Alves, 1998;. St. Leger et al, 1986a , 1986b). Oleh

karena itu, mengingat pentingnya ekonomi yang besar dari serangga ini, hama citriculture,

8

pemahaman dan morphohistolo-gically mencirikan integumen nya, penghalang pertama yang

memungkinkan kelangsungan hidupnya, akan memberikan informasi yang relevan untuk

pemahaman biologi dan akibatnya memungkinkan identifikasi yang paling daerah rentan

mengenai kontrol dari individu-individu. Sehubungan khusus untuk pengendalian hayati,

pengetahuan ini akan membantu untuk memetakan daerah serangga "tubuh yang lebih rentan

terhadap infeksi oleh agen entomopatogen.

Menurut informasi yang tersedia dalam literatur, permukaan eksternal dari serangga

dalam display umum beberapa spesialisasi kutikula, seperti: rambut, sensilla, achanti, bulu

duri multiseluler dan microtrichia. Selain itu, permukaan kutikula sendiri menunjukkan

penyimpangan (gambar), bernama patung (Richards dan Richards, 1979) dengan morfologi

yang paling beragam, yang akibatnya menyebabkan setiap serangga memiliki exoskeleton

kurang khusus lebih atau. Selain struktur dan sculpturation itu, pengendapan lilin menutupi

permukaan eksternal dari banyak serangga diamati, yang terjadi melalui siaran lilin melalui

saluran dan / atau pori-pori, dari kelenjar epidermal yang menghasilkan zat ini terhadap

permukaan serangga (Gullan dan Cranston, 2012). Sehubungan khusus untuk D. citri, studi

morphohistological ini juga memungkinkan pengamatan spesialisasi integumen seperti

sensilla trichoid dan achanti, keduanya lebih sering ditemukan di prescutum (psc2) dan di

tameng (sc2), (dorsal wilayah), dan kurang sering ditemukan di segmen daerah ventral.

Mengenai fisiologi sensilla, menurut Kristoffersen et al. (2006) dan Chapman (1998), ini

akan menjadi struktur mechanosensory. Oleh karena itu, di samping sel-sel epidermis,

sensilla yang juga akan disusun oleh sel-sel dengan aktivitas saraf (neuron) yang akan

memungkinkan serangga untuk mendeteksi variasi, seperti suhu dan kelembaban (Onagbola

et al, 2008.); sementara acanthi akan memberikan perlindungan fisik untuk serangga ketika

terkena variasi lingkungan (Richards dan Richards, 1979).

Diamati bahwa penutup permukaan imago dewasa D. citri didasari oleh pengendapan

wax baik pada punggung dan daerah ventral. lilin ini alam lipid terutama dibentuk oleh

hydrocarbonates, dan memiliki fungsi untuk mengurangi permeabilitas kutikula, melindungi

serangga terhadap pengeringan dan menghindari masuknya racun dan patogen, penghalang

fisik yang efisien sesuai dengan Gibbs dan rajpurohit (2010). Hidrofobisitas lapisan lilin pasti

akan mengurangi adhesi produk kimia dan biologi melalui aplikasi berair. Penyelidikan lebih

lanjut pada tenso-aktif untuk meningkatkan wettability daerah ini diperlukan untuk

meningkatkan efisiensi pestisida. Studi ultramorphologic lain telah dilakukan pada serangga

milik superfamili Psylloidae, dan di antara mereka adalah studi oleh Drohojowska et al.

(2013). Namun, para penulis ini, sebaliknya untuk penelitian ini, tidak melaporkan adanya

9

spesialisasi kutikula; Oleh karena itu, struktur ini sedang dijelaskan dan ditandai di sini untuk

pertama kalinya dalam spesies D. citri.

Dalam arti luas, hasil yang diperoleh dalam penelitian ini menunjukkan bahwa daerah

integumen yang berbeda dari kutu loncat D. citri betina tubuh lebih rentan terhadap jalan

udara-mination dan infeksi oleh agen entomopatogen. daerah Oleh karena itu, mesoscutum

dorsal (m) dan daerah ventral (segmen) dianggap mudah penetrasi unsur eksternal, karena

permukaan yang lebih besar yang tersedia dibandingkan dengan sisa tubuh serangga,

menawarkan area kontak yang lebih besar untuk adhesi konidia. Selain itu, kehadiran

spesialisasi kutikula (sensilla, patung dan lilin), terutama di daerah punggung, bisa

memfasilitasi penahan konidia. Mengenai daerah ventral, karakteristik morphohistological

dari integumen menunjukkan bahwa itu adalah lebih tipis dan kurang kaku dibandingkan

dengan wilayah dorsal, sebuah organisasi yang pasti akan memudahkan penetrasi patogen

serangga. Kesimpulannya, penelitian ini membawa informasi pertama pada ultramorphology

dan histologi dorsal dan integumen ventral D. citri, hama pertanian penting, menyediakan

data yang relevan untuk studi lebih lanjut mengarah pada pengembangan strategi kontrol

biologis yang lebih efisien.

ACKNOWLEDGEMENTS (UCAPAN TERIMA KASIH)

Penulis berterima kasih kepada FAPESP - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado

de São Paulo (Hibah nº 2014 / 19240-4), ke Conselho Nacional de Desenvolvimento

Cientifico e Tecnológico - CNPq / Hibah nº 300.625 / 2012-0 / M.I. Camargo Mathias

beasiswa penelitian operator akademik, untuk dukungan keuangan dan Mr Gerson de Mello

Souza dan Karim Christina Scopinho Furquim untuk dukungan teknis.

REFERENSI

Alves S. B. (1998). Microbial control of insects. 2. ed. FEALQ, Piracicaba. 1163p.

Beloti V. H., Rugno G. R., Felippe M. R., Do Carmo-Uehara A., Garbim L. F., Godoy W. A.

C. & Yamamoto P. T. (2013). Population dynamics of Diaphorina citri Kuwayama

(Hemiptera: Liviidae) in orchards of „Valencia‟ orange, „Ponkan‟ Mandarinand

„Murcott‟ Tangor trees. Florida Entomol. 1:173-179.

Binnington K. & Retnakaran A. (1991). Physiology of the insect epidermis. CSIRO

Publications, Melbourne. 334p.

10

Bonani J. P., Fereres A., Garzo E., Miranda M. P., Appezzato-Da-Gloria J. B. & Lopes R. S.

(2009). Characterization of electrical penetration graphs of the Asian citrus psyllid,

Diaphorina citri, in sweet orange seedlings. Entomol. Exp. Appl. 134:35-49.

Bové J. M. (2006). Huanglongbing: A destructive, newly-emerging, century-old disease of

citrus. J. Plant Pathol. 88:7-37.

Burckhardt D. & Ouvrard D. (2012). A revised classification of the jumping plant-lice

(Hemiptera: Psylloidea). Zootaxa. 3509:1-34. Chapman R. F. (1998). The insects:

Structure and function. The English Universities Press, New York. 788p.

Conceschi M. R., D‟Alessandro C. P., Moral R. A., Demétrio C. G. B. & Delalibera I. J.

(2016). Transmission potential of the entomopathogenic fungi Isaria fumosorosea and

Beauveria bassiana from sporulated cadavers of Diaphorina citri and Toxoptera

citricidato uninfected D. citri adults. Biocontrol. Retrieved March 19, 2016. Available

online at: link.springer.com/article/10.1007/s10526-016-9733-4/fulltext.html

Dossi F. C. A. & Cônsoli F. L. (2010). Ovarian development and analysis of mating effects

on ovary maturation of Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae) Neotrop.

Entomol. 3:414-419.

Dossi F. C. A. & Cônsoli F. L. (2014). Gross morphology and ultrastructure of the female

reproductive system of Diaphorina citri (Hemiptera: Liviidae). Zoologia. 2:162-169.

Drohojowska J., Kalandyk-Kołodziejczyk M. & Simon E. (2013). Thorax

morphology of selected species of the genus Cacopsylla (Hemiptera, Psylloidea).

Zookeys. 349:27-35.

Garzo E., Bonani J. P., Lopes J. R. S. & Fereres A. (2012). Morphological description of the

mouthparts of the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera:

Psyllidae) Arth. Struct. & Dev. 41:79-86. Gibbs A. & Rajpurohit S. (2010). Cuticular

lipids and water balance. In: Blomquist, G. J.; Bagnères, A-G. (Ed.). Insect

hydrocarbons: biology, biochemistry, and chemical ecology. New York: Cambridge

University Press. Pp. 100-120.

Gottwald T. R., da Graça J. V. & Bassanezi R. B. (2007). Citrus Huanglongbing: The

pathogen and its impact. Retrieved June 19, 2007. Available online at:

https://www.ars.usda.gov Gullan P. J. & Cranston P. S. (2012). Insects: A summary

of Entomology. Roca Ltda, São Paulo. 480p.

Hadley N. F., Machin J. & Quinlan M. C. (1986). Cricket cuticle water relations:

Permeability and passive deter insect cuticular lipids minants of cuticular water

11

content. Physiol. Zool. 1:84-94. Hajek A. E. & St. Leger R. J. (1994). Interactions

between fungal pathogens and insect hosts. Ann. Rev. Entomol. 39:293-322.

Hassan A. E. M. & Charnley A. K. (1989). Ultrastructural study of the penetration by

Metarhizium anisopliae through Dimilin-affected cuticle of Manduca sexta. J.

lnvertebr. Pathol. 54:117-24. Hepburn H. R. (1985). Structure of the in. In:

Comprehensive insect physiology, biochemistry and pharmacology. Pergamon Press,

Oxford, 1st Edn. 3:2-53.

Hoy M. A., Singh R. & Rogers M. E. (2010). Evaluations of a novel isolate of Isaria

fumosorosea for control of the Asian citrus psyllid, Diaphorina citri (Hemiptera:

Psyllidae). Flo. Entomol. Soc. 1:24-32.

Junqueira L. C. U. & Junqueira L. M. M. S. (1983). Basic techniques of cytology and

histology. Editora Santos, São Paulo. 123p. Kristoffersen L., Hallberg E., Walle´n R.

& Anderbrant O. (2006). Sparse sensillar array on Trioza apicalis (Homoptera,

Triozidae) antennae - an adaptation to high stimulus levels? Arth. Struct. & Dev.

35:85-92.

León J. H. D., Sétamou M., Gastaminza G. A., Buenahora J., Cáceres S., Yamamoto P. T.,

Bouvet J. P. & Logarzo G. A. (2011). Two separate introductions of Asian citrus

psyllid populations found in the American continents. Ann. Entomol. Soc. Am.

104:1392-1398.

Li F. (2011). Psyllidomorpha of China (Insecta: Hemiptera). Science Press, Beijing, China.

1976p. Onagbola E. O., Meyer W. L., Boina D. R. & Stelinski L. L. (2008).

Morphological characterization of the antennal sensilla of the Asian citrus psyllid,

Diaphorina citri Kuwayama (Hemiptera: Psyllidae), with reference to their probable

functions. Micron. 39:1184-1191.

Orduño-Cruz N., Guzmán-Franco A. W. & Rodríguez-Leyva E. (2016). Diaphorina citri

populations carrying the bacterial plant pathogen Candidatus Liberibacter asiaticus

are more susceptible to infection by entomopathogenic fungi than bacteria-free

populations. Agric. Forest Entomol. 18:95-98.

Ouvrard D., Bourgoin & Campbell B. C. (2002). Comparative morphological assessment of

the psyllid pleuron (Insects, Hemiptera, Sternorrhyncha). J. Morphol. 252:276-290.

Ouvrard D., Burckhardt D., Soulier-Perkins A. & Bourgoin T. (2008). Comparative

morphological assessment and phylogenetic significance of the wing base articulation

in Psylloidea (Insecta, Hemiptera, Sternorrhyncha). Zoomorphology. 127:37-47.

12

Pinto A. P. F., Batista Filho A., Almeida J. E. M. D. & Wenzel I. M. (2012). Beauveria

bassiana pathogenicity to Diaphorina citri and compatibility of the fungus with

phytosanitary products. Pesq. Agropec. Bras. 12:1673-1680.

Richards A. G. & Richards P. A. (1979). The cuticular protuberances of insects. Int. J. Insect

Morphol. Embryol. 8:143-157. Small C. L. N. & Bidochka M. J. (2005). Up-

regulation of Pr1, a subtilisin-like protease, during conidiation in the insect pathogen

Metarhizium anisopliae. Mycol. Res. 3:307-331.

St. Leger R. J., Charnley A. K. & Cooper R. M. (1986a). Cuticle degrading enzymes of

entomopathogenic fungi: Mechanisms of interaction between pathogen enzymes and

insect cuticle. J. Invertebr. Pathol. 1:295-302. St. Leger R. J., Charnley A. K. &

Cooper R. M. (1986b). Cuticle degrading enzymes of entomopathogenic fungi:

Synthesis in culture on cuticle. J. Invertebr. Pathol. 1:85-95.

Tiwari S., Gondhalekar A. D., Mann R. S., Scharf M. E. & Stelinski L. L. (2011).

Characterization of five CYP4 genes from Asian citrus psyllid and their expression

levels in Candidatus Liberibacter asiaticus-infected and uninfected psyllids. Insect

Mol. Bio. 20:733-744.