Результати циклів ПГС-ПГГ у пацієнтів з багаторазовими невдалими спробами ДРТ

Д. О. Микитенко2014

2

• Метод селекції ембріонів, що не несуть хромосомної / генної патології.

Преімплантаційні генетичні дослідження

Методи ПГДОбмеженого хромосомного

скринінгуТотального хромосомного

скринінгу

•ПЛР-діагностика•Секвенування•Мас-спектрометрія/мінісеквенування

•FISH-аналіз

Array-CGHSNP-arraysСеквенування “нового” покоління

3

Що таке Порівняльна Геномна Гібридизація (aCGH)?

M Shinawi, S. W. Cheung. Drug Discovery Today. 13 (17/18). 2008

aCGH – технологія високороздільного повногеномного скринінгу, що дозволяє діагностувати анеуплоідії та мікроструктурні хромосомні аномалії

(M Shinawi, S. W. Cheung. 2008 )

Дизайн дослідженняКлінічні показання

•Вік матері понад 35 р.•Звичне невиношування вагітності•Невдалі спроби ДРТ•Високий рівень анеуплоїдії сперми (>5%)•Підтверджений випадок анеуплоїдії плода•Носійство хромосомних перебудов / генних дефектів

-Дослідження проводилось в рамках циклів ДРТ з інформованої згоди пацієнтів-Досліджуваний матеріал – клітини трофектормальної оболонки ембріонів (5 доба)-Ембріони якості не нижче “3ВВ” з хетчінгом, що розпочався-Ембріони вітрифікувались на час дослідження та використовувались у подальшому в кріоцклах-Платформа дослідження - ВАС-aCGH 24sure (BlueGnome, UK)

Selection of single blastocysts for fresh transfer via standard morphologyassessment alone and with array CGH for good prognosis IVF patients: results from a randomized pilot study Molecular Cytogenetics 2012, 5 :24 Zhihong Yang et al.

Array CGH with Day 5 biopsy:Results from centers with >20 cycles

total rangeper

center

Maternal age: 37.0 36 – 38.6

# zygotes 6.4 5.2-8.3

cycles: 433 20-55Implantation after PGD 61% 52-83%Pregnancies / cycle 50% 26-73%Pregnancies / transfer 67% 53-100%

Reprogenetics data to 9/2011

7

Результативність aCGH-PGD

Вибірка– 16 неплідних пар (носії траслокацій)Доімплантаційна діагностика: PGD-aCGHЄмбріонів - 132Результат отримано за 93,7% эмбріонів (121)Еуплоїдних ембріонів – 22,3 % (27)Цикл закінчило 15 пар Частота вагітностей – 31,3% / пункцію - 33,3% / перенос (5 пар)

Результативність aCGH-PGSв групах пацієнтів несприятливого прогнозу

Результативність aCGH-PGDу носіїв хромосомних перебудов

Сумарно за 2011-2013 рр

Досліджено 550 ембріонів.

132 ЕТ – 71 вагітність (53,8% / ЕТ)с/а до 12 т.в. – 5 (7% від зареєстрованих вагітностей)На сьогодні: 42 пологів, 54 дітей.

Характеристика Відн. кількість, %Збалансований хромосомний набір 51,9Незбалансований хромосомний набір 48,1

З них випадки: - Числові хромосомні аномалії 59,3

З яких: Трисомії 53,4Моносомії 46,6

- Структурні хромосомні аномалії 16,8- Множинні хромосомні аномалії 20,9

CGH Aneuploidy Screening in poor prognosis IVF patients

IVF Hammersmith experience

• 85 embryos transferred in 53 cycles 57%• Clinical pregnancy rate/cycle started 16/93 17%• Clinical pregnancy rate/ET 16/53 30%

<37 years CPR/ET 5/14 36% >37 years CPR/ET 11/39 28%

• 1 ectopic, 2 miscarriages, 5 livebirths, 8 ongoing pregnancies

13:58 9

10

Розподіл ембріонів за статтюХарактеристика Стать P

Жіноча Чоловіча

Збалансований хромосомний набір

121 112 0,03

Незбалансований хромосомний набір

68 98

Розподіл ембріонів за часом біопсіїХарактеристика День біопсії P

5 6/7

Збалансований хромосомний набір

131 101 0,0005

Незбалансований хромосомний набір

67 105

Порівняльна оцінка можливостей FISH тa aCGH

Досліджені ембріони (aCGH)Точність діагностики FISH (екстраполяція)

FISH 5 FISH 9 FISH 12

  абс абс отн абс отн абс отн

Еуплоїдні 169 169100,0

% 169 100,0% 169 100,0%

Анеуплоідні 176 55 31,3% 89 50,6% 101 57,4%

Загалом 345 224 64,9% 258 74,8% 270 78,3%

Аномалії преімплантаційних ембріонів (розподіл за частотою залучення хромосом)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22

Половые

0

5

10

15

20

25

7.3

1.83.2

4.12.7

1.8

3.7

1.83.2

5.5

1.42.3

5.9

3.7

7.3

14.2

2.71.4

5.5

2.3

8.2

5 5

Преимплантационные эмбрионы

Хромосома

Частота вовлечения, %

Розподіл ембріонів на стадії бластоцисти у носіїв збалансованих транслокацій

29.7%

16.2%

16.2%

37.8%

Хромосомні аномалії, асоційовані з батьківською перебудовою

Хромосомні аномалії, асоційовані з транслокацією, з залученням других хромосом

Хромосомні аномалії, не пов'язані з батьківською перебудовою

Нормальний /збалансований хромосомний набір

Микитенко Д. А. Оценка явления межхромосомного эффекта у эмбрионов пациентов с хромосомными аномалиями методом полногеномного скрининга / Д. А. Микитенко, Л. Я. Пилип, В. Д. Зукин, К. В. Лаврова // Редкие (орфанные) заболевания и врожденные пороки развития.Севременные возможности диагностики, профилактики, лечения и реабилитации. К 45-летию Медико-генетического центра. – Санкт-Петербург, 2014. – С.340-347.

Розподіл кількості отриманих ембріонів та бластоцист в залежності від віку пацієнтки

24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44

Вік паціє нт ки, р.

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

100

Еф

екти

вніс

ть б

лас

тул

яції,

%

0

2

4

6

8

10

12

14

16

18

20

Сер

едня

кіл

ькіс

ть о

трим

аних

ем

бріо

нів

/ Бл

асто

цист

Середня к ільк іс т ь от рим аних ем бріон івСередня к ільк іс т ь от рим аних блас т оцис тЕфект ив ніс т ь блас т у ляції

Розподіл ембріонів (стадія бластоцисти) за кількістю хромосомних аномалій в залежності від віку пацієнтки

62,5

75

59,1

7575,5

61,8

69,8

61

48,352,9

57,5

51,2

40 40,6

52,6

34,8

50

28,6

37,5

5,68,3

24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44

Вік паціє нт ки, р.

0

20

40

60

80

100

Час

тка,

%

62,5

75

59,1

7575,5

61,8

69,8

61

48,352,9

57,5

51,2

40 40,6

52,6

34,8

50

28,6

37,5

5,68,3

3 т а більше х ром ос ом ні аном алії 2 х ром ос ом ні аном алії 1 х ром ос ом на аном алія Еу плоїдні

Частка еуплоїдних ембріонів (від вихідної кількості), доступних для переносу після проведення ПГГ-ПГС

24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44

Вік , роки

0

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

70

75

80

85

90

95

100

Дол

я ем

бріо

нів,

дос

тупн

а на

пер

енос

, %

N

Прогноз наявності еуплоїдних ембріонів для трансферу після проведення ПГГ-ПГС в залежності від віку та кількості отриманих бластоцист

Досліджених бластоцист

Вікова група, р.

<30 31-35 36-40 41-42 43-44

1-3100 86 66 50 3045 52 38 25 11

4-5100 86 86 73 3560 45 41 50 30

6-867 53 47 29 4167 53 47 29 41

>8100 100 100 100 10048 61 45 56 66

Примітка: «жирний» кегль – частка пацієнтів з принаймні одним еуплоїдним ембріоном, %;«курсив» - частка еуплоїдних ембріонів, %.

Микитенко Д. О. Прогноз отримання еуплоїдних ембріонів у програмах ДРТ із застосуванням ПГС / Д. О. Микитенко, К. В. Лаврова, Ю. В. Маслій, В. Д. Зукін // Здоровье женщины. Научно-практический журнал – 2014. - № 4 (90). – С. 164-167.

Заключення1. В групах пацієнтів з множинними невдалими

спробами ДРТ та носів транслокацій найбільш оптимальним вбачається використання методів повногеномного скринінгу з метою проведення преімплантаційних досліджень

2. Проведення ПГС/ПГД методами повногеномного скринінгу є одним з методів підвищення ефективності програм ДРТ

3. Встановлені закономірності можуть бути використані при проведенні консультування подружніх пар перед включенням до програм ДРТ.

19

Не так легко бути хорошим ембріоном…

Але ще важче знайти його…..

Подяка співробітникам Клініки репродуктивної медицини «Надія»

• Лаврова Катерина, к.б.н., лабораторія молекулярної діагностики• Мазур Павло, лабораторія ембріології• Нагорний Віктор, лабораторія ембріології