Upload
beebeejuly05
View
1.547
Download
0
Embed Size (px)
DESCRIPTION
Un studiu comparativ al diferitelor produse obtinure din struguri.
Citation preview
FACULTATEA DE FARMACIEUNIVERSITATEA OVIDIUS CONSTANŢA
ANALIZA HPLC A COMPUŞILOR FENOLICI DIN PRODUSE OBŢINUTE
DINSTRUGURI
Coordonatori ştiinţifici:
Conf. univ. dr. Laura Bucur, Ş.L. dr. Antoanela Popescu
Student:
Ivanof Bianca- Mihaela
INTRODUCERE
Vinul a fost folosit din cele mai vechi timpuri cu scop terapeutic şi medicinal.
Pasteur spunea că "vinul este cea mai sănătoasă şi igienică băutură”.
Hipocrate recomanda vinul pentru stimularea poftei de mâncare, hrănirea şi întărirea trupului.
INTRODUCERE
Numeroase studii au arătat că vinul consumat în cantităţi moderate poate duce la reducere riscului apariţiei bolilor coronariene, întârzie apariţia tumorilor incipiente, inhibă adeziunea şi agregarea plachetelor sangvine, având remarcabile capacitaţi antioxidante.
S-a dovedit că efecte benefice ale vinului sunt datorate compuşilor fenolici din compoziţia sa. Concentraţii mari de compuşi fenolici de găsesc mai ales în vinul roşu, comparativ cu cel alb.
OBIECTIVELE LUCRĂRII
Evidenţierea compuşilor fenolici din diferite produse obţinute din struguri, prin folosirea analizei HPLC.
Studiul comparativ a trei produse obţinute din struguri din punct de vedere al conţinutului de compuşi fenolici (cantitatea lor corelată beneficiului terapeutic).
MATERIAL ŞI METODĂ
Pentru identificarea şi cuantificarea compuşilor fenolici s-a folosit o metodă HPLC standardizată conform monografiei USP30-NF25.
MATERIAL ŞI METODĂ
Condiţiile de realizare ale analizei HPLC au fost urmãtoarele:
Aparatură: HPLC Agilent 1200, pompă cuaternară, DAD, termostat, sistem de degazare, autosampler.
MATERIAL ŞI METODĂ
Condiţii de lucru: coloană cromatografică tip
C18, 250 mm, 4,6 mm; 5 µm (Zorbax XDB);
fază mobilă: Soluţia A – acid fosforic 0,1%; Soluţia B – acetonitril
temperatură: 350C;
debit: 1,5 mL/min; detecţie: UV 310 nm;
volum de injecţie: 20 µL;
timpul de analiză: 22 minute.
MATERIAL ŞI METODĂ
Analiza HPLC s-a efectuat pe trei produse diferite, obţinute din struguri:
PRODUS
Sirop Vitagrapes
Vin de casă
Vin Pinot Noir Murfatlar
Tabel I. Produşii folosiţi la analiza HPLC
MATERIAL ŞI METODĂ
Siropul Vitagrapes (Ropharma) a fost diluat cu alcool 50K în diluţtie 1:5 ( 5 ml sirop la 25 ml alcool 50K).
Soluţia s-a filtrat (prin hârtie de filtru şi microfiltre), iar filtratul s-a testat la aparatul HPLC.
MATERIAL ŞI METODĂ
Vinul de casă şi Vinul Pinot Noir Murfatlar s-au filtrat prin hârtie de filtru şi microfiltre. Cele două filtrate s-au testat la aparatul HPLC.
MATERIAL ŞI METODĂSubstanţe de referinţă
(soluţii în metanol 70%):
E - resveratrol = 37 mg/mL;
Z – resveratrol = 0,22 mg/mL (obţinut prin expunerea soluţiei de trans-resveratrol radiaţilor UV 254 nm, timp de 12 ore);
acid cafeic = 0,36 mg/mL;
acid clorogenic = 0,37 mg/mL;
acid cinamic = 0,58 mg/mL;
vanilină = 0,42 mg/mL;
acid galic = 0,39 mg/mL;
acid ferulic = 0,50mg/mL.
Nr. crt. Compus fenolic Timp de retenţie ± DS
1. E - resveratrol 14,467 ± 0,017
2. Z - resveratrol 15,751 ± 0,058
3. acid cafeic 4,598 ± 0,036
4. acid clorogenic 3,501 ± 0,015
5. acid cinamic 15,867 ± 0,007
6. Vanilină 6,919 ± 0,051
7. acid galic 0,990 ± 0,025
8. acid ferulic 8,565± 0,058
Tabelul II. Timpii de retenţie ai compuşilor fenolici, substanţe de referinţă
MATERIAL ŞI METODĂ
Figura 1. Cromatograma HPLC a amestecului de standarde
MATERIAL ŞI METODĂ
min0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
mAU
0
250
500
750
1000
1250
1500
1750
2000
2250
14.
457
15.
793
cis resveratrol
trans resveratrol
Figura 2. Cromatograma HPLC trans resveratrolului după expunere la UV
MATERIAL ŞI METODĂ
min0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
mAU
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
DAD1 A, Sig=310,4 Ref=360,100 (FERULIC15MCL.D)
8.5
78
acid ferulic
Figura 3. Cromatograma HPLC a acidului ferulic
REZULTATE ŞI DISCUŢII
În urma analizei HPLC, s-au identificat, E şi Z resveratrolul, vanilina şi acizii clorogenic, cafeic, galic şi ferulic. Cele trei produse diferă din punct de vedere al compuşilor identificaţi.
S-au cuantificat în urma analiziei HPLC următorii compuşi, în concentraţii diferite în cele trei produse analizate: E resveratrolul, vanilina, acizii clorogenic, cafeic, galic şi ferulic.
REZULTATE ŞI DISCUŢII
Produs E-
resveratrol mg%
Z-resveatrolul mg%
Acid clorogenic
mg%
acid cafeic mg%
vanilină mg%
Acid galic mg%
Acid ferulic mg
%
Sirop Vita Grapes
neidentificat neidentificat neidentificatneidentificat
neidentificat
95,770neidentific
at
Vin de casa neidentificat identificat neidentificat 0.374 0,451 5,868 0,116
Vin Pinot Noir 0.322 identificat 0,182 0,374 0,582 29,155 0,608
Tabelul III. Compuşii identificaţi şi concentraţiile lor în mg/100 mL produs
REZULTATE ŞI DISCUŢII
min0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
mAU
0
200
400
600
800
1000
1200
DAD1 A, Sig=310,4 Ref=360,100 (VITA.D)
1.0
67
acid galic
Figura 4. Cromatograma HPLC a compuşilor polifenolici din Siropul VitaGrapes
REZULTATE ŞI DISCUŢII
min0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
mAU
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
DAD1 A, Sig=310,4 Ref=360,100 (VIN DE CASA PROBA BUNA.D) 1
.102
4.6
28
7.1
76
8.2
80 15.
779
cis resveratrolacid ferulic
vanilinaacid cafeic
acid galic
Figura 5. Cromatograma HPLC a compuşilor fenolici din Vinul de casă
REZULTATE ŞI DISCUŢII
min0 2.5 5 7.5 10 12.5 15 17.5 20
mAU
0
50
100
150
200
250
300
350
DAD1 A, Sig=310,4 Ref=360,100 (VIN PINOT NOIR.D)
1.0
92
3.5
18 4.6
23
7.1
77
8.5
61
14.
407
15.
990
cis resveratrol
trans resveratrol
acid ferulic
vanilinaacid cafeic
acid clorogenic
acid galic
Figura 6. Cromatograma HPLC a compuşilor fenolici din Vinul Pinot Noir de la Murfatlar
CONCLUZII
Prezenţa compuşilor fenolici în produsele analizete justifică folosirea lor pentru efectul antioxidant, antiinfecţios, vasoprotector, compuşii identificaţi avănd numeroase acţiuni, cum ar fi:
Acid galic – proprietăţi antifungice şi antivirale, acţiune citotoxică asupra celulelor tumorale, fără a le afecta pe cele sănătoase, este folosit în tratamentul albuminuriei şi al diabetului;
Acid cafeic – activitate imunomodulatoare şi imunostimulatoare, este antioxidant in vitro, dar şi in vivo, s-au demonstrat efecte antiinflamatoare şi anticanceroase pe celulele pielii;
CONCLUZII
Acid clorogenic – antioxidant in vitro, putând preveni apariţia Diabetului tip 2 şi a bolilor cardiovasculare;
Acid ferulic – antioxidant in vitro, reducând radicalii liberi (ce pot duce la apariţia cancerului, accelerarea îmbătrânirii celulare şi modificarea ADN-ului);
Resveratrol – acţiune estrogenică, antiinflamatoare, antitumorală in vitro pe diferite tipuri de cancer, hipocolesterolemiantă in vitro, are efect împotriva îmbătrânirii celulare, antioxidant in vitro şi antiagreagant plachetar, influenţând incidenţa bolilor coronariene .
VĂ MULŢUMESC PENTRU TIMPUL ACORDAT!