Desarrollo de Terapia génica suicida a través de liposomas conjugados con el ligando del receptor MC1R en melanoma maligno

Antonio E. Serrano

Melanoma

Melanoma Uveal

Antígenos Asociados A Tumor

Productos de genes silentes Proteínas oncogénicas Antígenos derivados de

proteínas virales

Antigenos oncofetales Antígenos tejido-específicos Productos de mutaciones

puntuales

Antígenos Asociados a Melanoma Melan-A/Mart-1, MAGE 1,2 y 3 gp-100 Gp75 TRP-2 tirosinasa MC1R

Receptor Melanocortina 1

-MSH

MC1R en melanoma

Objetivo

Desarrollar una estrategia de entrega no viral de un gen suicida utilizando liposomas conjugados con -MSH, específicos para el receptor MC1R sobreexpresado en células de melanoma maligno humano.

Objetivos específicos:

1) Clonar el gen de la HSV-TK en un plásmido comercial y transfectarlo a células de melanoma humano y evaluar lisis del gen suicida en presencia de ganciclovir mediante esnsayos de citotoxicidad por liberación de Cr 51

2) Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE por parte de melanomas MC1R positivos a través de inmunodeteccion y radiomarcación.

3) Evaluar eficiencia de transfección y funcionlidad del complejo pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE in vitro mediante rt-pcr y ensayo citotóxico respectivamente.

4) Evaluar citólisis in vivo de pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE en células de melanoma murino B16 que espresan MC1R humano en superficie mediante análisis histológico y macroscópico en metástasis pulmonares.

1) Clonar el gen de la HSV-TK

Clonar el gen de la HSV-TK

Lipofectin

Cr51

· Chromium Release· PCR

Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE

PEG

distearoylphosphatidylethanolamine

Evaluar reconocimiento del complejo -MSH-PEG–DSPE

Rhodamina

FACS

Eficiencia de transfección y funcionlidad del complejo pCMV-HSV-TK-Neo -MSH-PEG–DSPE.

Cr51

· Chromium Release· PCR

Evaluar citólisis in vivo

hMC1rLipofectin

Melanoma B16

GCV

Resultados esperados

Análisis histológico

Perspectivas

Perspectivas

Desarrollo de entrega adenoviral del gen HSV-Tk a melanoma utilizando MC1R como receptor.

Modificaciones del péptido -MSH para mejorar selectividad y afinidad.

Estudio Clínico de estrategia de liposomas vía nebulización en metástasis pulmonares de melanoma

Estudio Clínico de Ad-HSV-tk