Upload
tyfngnc
View
277
Download
4
Embed Size (px)
Citation preview
Deneysel sepsis modelinde propranolol tedavisinin endotelyal
disfonksiyon üzerine etkisiEzgi Özyılmaz, Sinem Göktürk, Emine Kılıç Bağır, Leman Sancar, Özlem
Görüroğlu, İsmail Cem Eray, Yusuf Kenan Dağlıoğlu, Oya Baydar,
Gülşah Seydaoğlu, Ali Kocabaş
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Göğüs Hastalıkları AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Farmakoloji AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Patoloji AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Histoloji ve Embriyoloji AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Biyokimya AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Mikrobiyoloji AD, Deney Hayvan Laboratuarı
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Genel Cerrahi AD
Çukurova Üniversitesi Tıp Fakültesi Biyoistatistik AD
GİRİŞ
• Sepsis, enfeksiyona karşı aşırı sistemik inflamatuar yanıt ile karakterize bir sendromdur.
• Patofizyolojisi ??
• İmmun sistem
• Koagülasyon sistemi
• Otonom sinir sistemi
DIC, MODS, ŞOK
Endotel hücre aktivasyonu, sepsiste MODS’a neden olan mikrovaskülerdisfonksiyonun temel mekanizmalarından biridir Organ
disfonksiyonu
Adrenerjik Sistem• Organ fonksiyonu ve kardiyovasküler homeostazın anahtar
sistemi
• İmmun sistemin güçlü bir düzenleyicisi
• Dalak, timus, LN, Kemik iliği sempatik sistemle inn. edilir.
• Th2-lenf. dışındaki pek çok
lenfoid hücre, yüzeyinde beta
adrenerjik reseptör eksprese eder.
• En yüksek reseptör ekspresyonu +
• En güçlü adenilat siklaz bağlanma
Etkinliği: NK
De Montnollin E et al. Crit Care 2009; 13:230
Sepsis ve Adrenerjik Sistem
• Sepsiste kemik iliği, monosit-mf üretiminde anahtar rol oynar.
• Sempatik aktivasyon, β2 res. aracılığıyla;
1- Ki’den monosit üretimini arttırır
2- Monositlerin aktif mf’a dönüşümünü indükler
3- NFκB aracılı sitokin salınımına neden olur.
Muthu K, et al. J Neuroimmunol 2005; 165: 129-135
Sepsis ve Adrenerjik Sistem
• Sepsiste, adrenenerjik sistem aktivasyonu sonucu plazma katekolamin düzeyleri artar.
• Persistan katekolamin artışları hücresel immunitearacılığıyla immunsupresyona neden olur.
• Aynı zamanda mortalite ile ilişkilidir.
Ackland GL, et al. Crit Care Med 2010; 38: 388-394
Prass K, et al. J Exp Med 2003; 198: 725-36
β-Blokerler
• Beta bloker endik.: HT, inme, angina, kalp yetmezliği…
• Beta blokerler:
1- İmmunsupresyonu düzeltir
2- Katabolizmayı geri döndürür
3- Proinflamatuar sitokin ekspresyonunu azaltır
4- Sempatovagal dengeyi korur
ANTİİNFLAMATUAR *Prass K, et al. J Exp Med 2003; 198: 725-36•Herndon DN. NEJM 2001; 345:1223-9
•Prabhu SD. Circulation 2000; 101: 2103-9•Tracey KJ. J Clin Invest 2007; 117: 289-96
KOAGÜLASYON SİSTEM
Amaç
• Bu çalışmanın amacı, deneysel sepsis modelinde non-selektif bir β-bloker olan propranolol’ün endotelyaldisfonksiyon ve survi üzerine etkisinin araştırılmasıdır.
Yöntem
• Araştırma yeri: ÇÜ-DETAUM
• Çukurova Üniversitesi Deney Hayvan Etik Kurul onayı alındı.
• Erişkin erkek (300 gr) Wistar-Albino ratlar
• Uygun yaşama koşulları, yem ve su kısıtlaması yok.
• 4 grup ve her grupta 12’şer rat olmak üzere toplam 48 rat
• Sepsis yöntemi: CLP
• Anestezi: 5 mg/kg Ksilazin + 80 mg/kg ketamin
• Tüm gruplara laparatomi sonrası 2ml/100 gr sc SF
• Propranolol: 100 mg/kg ip uygulama (Sigma Lab.)
Gruplar
• Grup 1: Sham
• Grup 2: Kontrol (CLP öncesi 3 gün ip SF)
• Grup 3: PreCLP Prop (Sepsis oluşturulmadan önceki 3 gün, 100 mg/kg ip propranolol uygulandı)
• Grup 4: PostCLP Prop (Sepsis sonrası tek doz 100 mg/kg ip Propranolol)
Çalışma Akışı1.gün 2.gün 3.gün 4. gün 120
saate kadar
SHAM Takip Takip Laparatomi,manuel palpasyon-
Kapama-survitakibi
* Her gruptan 6’şar rat, anestezi altında
sakrifiye edildi.*İntrakardiyak yolla
kan alındı•Akciğerleri
çıkarıldı.* -80°C’de saklandı.
*Kalan ratlara 120 saate kadar saatlik survi takibi yapıldı.
Takip
PRE-CLP SF İP-SF İp-SF İp SF-60 dk sonra Laparatomi-CLP-
survi takibi
Takip
PreCLP-Prop İP-Prop İP-Prop İp Prop-60 dk sonra Laparatomi-CLP-
survi takibi
Takip
PostCLP-Prop Takip Takip Laparatomi-CLP-60dk sonra tek doz ip
Prop-survi takibi
Takip
Değerlendirmeler
A- Biyokimyasal analiz: Serum örneğinden TNF-α, PAI-1, VEGF düzeyleri
B- Işık Mikroskopi ve İmmunohistokimyasal inceleme:
2 kör histopatolog, HE boyalı ışık mikroskopi ve immunohistokimyasal olarak akciğer dokusunda TNF-α ve IL-6 incelendi, hscore ile raporlandı.
C- Elektron Mikroskopi: Reichert Ultracut S ultramikrotomuve Jeol JEM 1400 Transmisyon Elektron Mikroskopu
D- Survi takibi: 120 saate kadar
İstatistiksel Değerlendirme
• Sürekli değişkenler normale uygunluk açısından değerlendirildi.
• Normal dağılım göstermeyen değişkenler için Nonparametrik testlerde Mann-Whitney U ve Kruskal Wallis
• Kategorik değişkenlerin analizinde ise Ki kare ve FisherExact test kullanıldı.
• Survival analizi Kaplan Meier yöntemi ile yapıldı. • İstatistiksel fark p<0.05 anlamlı olarak kabul edildi.
• SPSS 20.0
SonuçlarBiyokimyasal İnceleme
Tablo 1: Serum TNF-alfa, Serum PAI-1, Serum VEGF düzeylerinin karşılaştırılması (mean ±SD) (median)(min-max)
SHAM KONTROL (SF)
PRE-CLP PROP.
POST-CLP PROP
p
Serum TNF-α (pg/ml)median(min-max)
70,8±6.871.8
(58-77)
193 ± 27682
(75-757)
76.7±1,976.2
(75-81)
100.5±3,499.0
(97-106)0,0040,003
Serum PAI -1 (AU/ml) median(min-max)
14,5±1,6 14.1 (13-18)
18,9±2,3 18.2 (16-23)
19,8±3,2 19.2 (16-26)
15±2,5 15.8 (10-18)
0.0100,002
Serum VEGF (ng/L)median(min-max)
631±56 612 (564-707)
652±212697(290-920)
742±114758(568-884)
865±336783(401-
1376)
0.6310,147
SHAM KONTROL (SF) PRE-CLP PROP.
POST-CLP PROP
p
IL-6 Skoru Median(min-max)
163(125-205)
185(145-235)
218(190-255)
218(155-260)
0,069#
0,077*0,200¶
0,107₱
0,810ɸ
TNF-alfa skoruMedian(min-max)
22(2-139)
130(119-192)
205(180-245)
139(112-261)
0,002#
0,016*0,749¶
0,010₱
0,055ɸ
Tablo 2: Akciğer dokusunda immunohistokimyasal olarak h-score ile değerlendirilen TNF-α ve IL-6 sonuçları
#: 4 grup arası*: Sham- post arası¶: Kontrol-post arası₱: Kontrol- pre arasıɸ: Pre- Post arası
İmmunohistokimyasal İnceleme
Sonuçlar-3Elektron Mikroskopi
Şekil 1. Sham grubuna ait akciğer dokusunun elektron mikroskobik görünümü. Kapillerendotel hücrelerinin (E), çekirdek (Ç) ve sitoplazmik organelleri normal yapıda izlenmektedir. endotel hücreleri altındaki bazal lamina (BL) normal yapısını korumaktadır. M; Makrofaj, ER; Eritrosit, KAP; Kapiller. Bar: 1µm.
Elektron Mikroskopi
Şekil 2. Kontrol grubuna ait akciğer dokusunun elektron mikroskobik görünümü. Endotelhücrelerinin çekirdeğinde (Ç) heterokromatin artışı , hücre sitoplazmasında vakuolizasyonlar, mitokondrial genişleme ve mitokondri kristalarında harabiyetizlenmektedir. İnterstisyumda makrofajların (M) sitoplazmalarında fagositik cisimlerin varlığı görülmektedir. BL; kapiller endotel hücrelerinin bazal laminası, AH; Tip 2 alveolarhücre. Bar: 1µm.
Elektron Mikroskopi
Şekil 4. Pre-propranol grubuna ait akciğer dokusunun elektron mikroskobik görünümü.Kapillerendotel hücreleri (E) ve bazal lamina (BL) birçok alanda normal ince yapısını korumaktadır. Bununla birlikte bazı alanlarda endotel hücre çekirdeklerinde (Ç) heterokromatin artışı ve mitokondrialarda hafif dejeneratif değişiklikler izlendi. KAP; kapiller, ER; eritrosit. Bar: 1µm.
Elektron Mikroskopi
Şekil 3. Post propranol grubuna ait akciğer dokusunun elektron mikroskobik görünümü. Kapiller endotel hücreleri (E) ve bazal lamina (BL) birçok alanda normal yapısını korumaktadır. Bununla birlikte bazı alanlarda endotel hücre çekirdeklerinde hafif heterokromatin artışı izlendi. N; nötrofil, KAP; kapiller. Bar: 1µm.
Sonuçlar 4: Survival analizi
Gruplar Survival (Saat)
Mean (Medyan)
Kontrol(SF) 28.3 (14.0)
Pre-CLP Prop 118,3 (120)
Post-CLP Prop 38,9 (29,5)
P değeri
(3 grup arasında)
0,003
P değeri
(Kontrol ve Post –CLP
arasında)
0,325
Tartışma
• Bugüne kadar pek çok deneysel ve klinik sepsisaraştırmasında, özellikle survi üzerine olumlu etkileri gösterilmiş olan beta bloker tedavinin etki mekanizması “endotelyal sistem” olabilir.
• Bu konuda yapılacak ileri araştırmalar, sepsistemikrovasküler bozuklukların düzeltilmesi sonucu tedavi algoritmasını ve prognozu ciddi ölçüde değiştirebilir.