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临床医学五年制 实验诊断学. 续 薇 教 授 博士生导师. 第三节 血细胞形态特征. 一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律. 血细胞发育规律 (1)细胞体积 胞体逐渐由大变小 (2)细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒 (3)细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜 (4)细胞核/细胞质 由大变小. 红细胞的细胞成熟过程(其他血细胞的成熟过程基本相同). 血细胞发育一般规律. 二、血细胞的正常形态学特征. 骨髓中各系血细胞形态特征. 三、血细胞的细胞化学染色. - PowerPoint PPT Presentation
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临床医学五年制
实验诊断学
续 薇 教 授 博士生导师
2
第三节
血细胞形态特征
3
一、血细胞发育过程中形态演变的一般规律
• 血细胞发育规律( 1)细胞体积 胞体逐渐由大变小( 2)细胞质 ①量 ②颜色 ③颗粒( 3)细胞核 ①大小②染色质③核仁④核膜( 4)细胞核 /细胞质 由大变小
4红细胞的细胞成熟过程(其他血细胞的成熟过程基本相同)
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细胞体积
细胞质 细胞核 核质比值
量 颜色 颗粒 大小 染色质 核仁 核膜
一般变化
大↓小
少↓多
深蓝 ↓浅蓝、淡红
无↓有
大 规则↓ ↓ 小 不规则
疏松↓
致密
有↓无
不明显 ↓
明显
大↓小
特别变化
巨核小↓大
淋巴变化不大
红系变为桔红色
红系无颗粒
巨核: 小 ↓ 大红系: 核消失
巨核小↓大
血细胞发育一般规律
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二、血细胞的正常形态学特征
7
骨髓中各系血细胞形态特征
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三、血细胞的细胞化学染色
•(一)过氧化物酶染色 (POX) (二)苏三黑 B 染色( SB)•(三)中性粒细胞碱性磷酸酶染色( NAP) (四)酸性磷酸酶染色 (ACP) (五)特异性酯酶染色 (SE) •(六)非特异性酯酶染色 (NSE)•(七)糖原染色 (PAS)•(八)铁染色
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1 、过氧化物酶染色( POX)
H2O2 O2
联苯胺 联苯胺蓝 亚硝基铁氰化钠(无色) (胞浆中)
POX(细胞中)
+
原 理
蓝黑色颗粒
(试剂)
(蓝色)
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临床意义
•用于鉴别:急性白血病类型 急性淋巴细胞白血病(阴性) 急性粒细胞白血病 (强阳性) 急性单核细胞白血病(弱阳性或阴性)
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POX染色
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3 、中性粒细胞碱性磷酸酶染色( NAP)
1. 偶氮偶联法
α萘酚 重氮盐 灰黑色沉淀
NAP(细胞内)
2. 钙钴法
NAP(细胞内)
磷酸钠硝酸钙
硝酸钴
硫化胺
不溶性棕黑色沉淀
(胞浆)
(胞浆)
+
+
原 理
β甘油磷酸钠
α磷酸萘酚钠
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临床意义 •正常人:积分< 80 (分)•鉴别慢性粒细胞白血病与类白血病•增高:急性化脓菌感染、类白血病反应、 急性淋巴细胞白血病;再生障碍性贫血。
•减低:急性粒细胞白血病;病毒感染、阵发性睡眠性贫血。
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原 理
α萘酚 重氮染料 不溶性有色沉淀
非特异性酯酶(细胞中)
(试剂) (试剂)
+
(胞浆中)
6 、 α醋酸萘酚酯酶染色( α-NAE)
α醋酸萘酚
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临床意义
•用于鉴别: 急性单核细胞白血病(强阳性) 急性粒细胞白血病(阴性或弱阳性)
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7 、糖原染色( PAS )
原 理
糖原 醛基 + 品红
(胞浆中)(试剂)
过碘酸(试剂)
(细胞中)紫红色化合物
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临床意义
• 用于三种白血病类型鉴别• 急性粒细胞白血病(阴性或弱阳性)• 急性淋巴细胞白血病(阳性)• 急性单核细胞白血病(阳性)
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8、铁染色原 理
铁 铁氰化铁沉淀低铁氰化钾
(普鲁士蓝反应)
铁染色 存在部位
参考值 IDA 非 IDA
( 如感染)
铁粒幼细胞贫血
MDS-RA
细胞外铁细胞内铁
BM 小粒幼红细胞
+~++不定 65%
-<15%
>3~4+正常
>+++
>15%
>+++>15%
环铁 >15%
HCL+ +
(细胞内外)
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临床意义
• 诊断缺铁性贫血• 指导铁剂治疗
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四、细胞免疫分型
(一)检测方法•免疫荧光法•免疫酶染色法: APAAP(碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶)法 PAP(过氧化物酶抗过氧化物酶)法 ABC(亲和素 -生物素 -酶复合物)法
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1 、流式细胞仪计数
• 原理:将标本细胞用荧光标记制备成悬液,使荧光标记的细胞一个个地通过仪器的毛细管,分别辨认细胞形态大小和荧光特征,称为荧光活化细胞分选法。其优势是可快速地对大量细胞进行多参数定量分析。
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2 、碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶标法 (APAAP)
• 原理:( 1)特异性第一抗体(鼠抗人)单抗与标 本内的细胞抗原相结合、
( 2 )用第二(桥)抗体(兔抗鼠)与细胞抗原结合的第一抗体 结合、
( 3 )底物经酶作用、染色、脱水、透明、封片、镜检。
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3 、生物素-亲合素免疫细胞化学技术( ABC )
• 原理:( 1 )第一抗体为未标记的特异性抗体,能 与待测抗原结合。
( 2 )第二抗体为生物素化的桥抗体,能与第一抗体结合。
( 3 )第三抗体是结合了过氧化物酶的亲合素复合物( ABC),
( 4 )底物、显色、脱水、透明、封片、镜检。
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CD是淋巴细胞和其他白细胞表达的表面抗 原分化群,即 cluster of differentiation简称, 1993年国际会议统一命名,现已有 CD1-CD78 。
(二)细胞免疫分型的临床应用
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1.识别不同系列的细胞• 髓系: CD33 , CD34 , CD13 , CD14• 淋巴: CD4 , CD8 , CD10 , CD19• 巨核、血小板: CD41 , CD42• 红细胞:血型糖蛋白 A/B
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2. 识别不同的淋巴细胞:• T 细胞: CD4 , CD8 , CD2 , CD3• B 细胞: CD19 , CD20 , CD22
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3. 识别 T 细胞亚群• 全 T 细胞: CD4 , CD8• TH细胞 : CD4+,CD8- • TS细胞 : CD4-,CD8+• TSI细胞 : 诱导抑制 T 细胞 CD29低密 度表达• THI细胞:诱导辅助 T 细胞 CD29高密度表达
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4. 识别不同分化阶段的细胞•如造血祖细胞标志、 T 、 B 淋巴细胞不同分化阶段
5. 识别不同功能状态的细胞•如记忆 T 细胞,活化 T 细胞
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6. 对不同系列和不同分化阶段的细胞进行分离和研究7. 各种白血病细胞的免疫表型分析8.白血病微小残留病的检测
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(三)急性白血病免疫表型特点
CD19 CD7 CD33 CD13 HLA-DR TdT
B-ALL + – – – + +/ –
T-ALL – + – – –/+ +
AML – –/+ + + + –
1. ALL 与 AML细胞免疫表型特点
注:少数 AML( <10%) CD7可为阳性;少数 AML(M1型) TdT可为阳性;少数 T-ALL( <10%)可为 HLA-DR表达。
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2.急性淋巴细胞白血病( ALL)免疫表型特点 系 列 亚型 主要的蛋白标记 B 系列 早期 B 型 CD19
+ , CD10-
普通型 CD19+ , CD10
+
前 B 型 CD19+ , 胞质链 +
T 系列 B 细胞型 CD19+ , 胞膜 Ig+
前 T 型 CD7+ , CD2
-
T 细胞型 CD7+ , CD2
+
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3. 急性髓细胞白血病的免疫学分类亚 型 典 型 的 蛋 白 标 记 M0 CD 34 ,33 ,13
M1 CD 34,33,13
M2 CD 34,33,15,13
M3 CD 33,13(HLA-Dr 阴性 )
M4 CD 34,33,15,14,13
M5 CD 33,15,14,13
M6 CD 33 血型糖蛋白 M7 CD 33,41,42 , 61
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五、细胞遗传学分析(一)染色体检查方法
(二)染色体分析
1.染色体命名
2.核型分析及其书写
3.染色体畸变
(三)临床常见白血病的染色体改变
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急性白血病 染色体异常 见于各种亚型 预后价值急性髓细胞白血病 t(8;12) M2 预后较好 t(15;17) M3 同上 inv(16);del(16q) M4E0 同上 + 8 各种亚型 预后不良 +21 M1,M7
+13 双表型 预后不良 5q–,–5, –7 继发性白血病 同上 t(8;16) M5b 同上 t(9;22) M1等 同上 t(4;11) 双表型 同上
急性白血病常见的染色体异常
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急性白血病 染色体异常 见于各种亚型 预后价值急性淋巴细胞白血病 t(4;11) L2 预后不良 t(1;9) L1 预后较好 t(8;14) L3 预后不良 超二倍体 L1 L2 预后较好 t(9;22) 同上 , 预后较好 t(10;14) T 细胞型
急性白血病常见的染色体异常
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要 点:
• 1 、血细胞发育规律• 2 、正常血细胞形态特征• 3 、常用细胞化学染色的方法及临床意义
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