12
Gq protein a subunits Gaq and Ga11 are localized at postsynaptic extra-junctional membrane of cerebellar Purkinje cells and hippocampal pyramidal cells Jun Tanaka, 1,2, * Shin Nakagawa, 1, * Etsuko Kushiya, 4 Miwako Yamasaki, 1 Masahiro Fukaya, 1 Toshihiko Iwanaga, 2 Melvin I. Simon, 3 Kenji Sakimura, 4 Masanobu Kano 5 and Masahiko Watanabe 1 1 Department of Anatomy, Hokkaido University School of Medicine, Sapporo 060-8638, Japan 2 Laboratory of Anatomy, Postgraduate School of Veterinary Medicine, Hokkaido University, Sapporo 060-0818, Japan 3 Division of Biology 147-75, California Institute of Technology, Pasadena, CA 91125, USA 4 Department of Cellular Neurobiology, Brain Research Institute, Niigata University, Niigata 951-8585, Japan 5 Department of Physiology, Kanazawa University School of Medicine, Takara-machi, Kanazawa 920-8640, Japan Keywords: cerebellar Purkinje cells, extra-junctional membrane, Gq protein a subunits, hippocampal pyramidal cells Abstract Following cell surface receptor activation, the a subunit of the Gq subclass of GTP-binding proteins activates the phosphoinositide signalling pathway. Here we examined the expression and localization of Gq protein a subunits in the adult mouse brain by in situ hybridization and immunohistochemistry. Of the four members of the Gq protein a subunits, Gaq and Ga11 were transcribed predominantly in the brain. The highest transcriptional level of Gaq was observed in cerebellar Purkinje cells (PCs) and hippocampal pyramidal cells, while that of Ga11 was noted in hippocampal pyramidal cells. Antibody against the C-terminal peptide common to Gaq and Ga11 strongly labelled the cerebellar molecular layer and hippocampal neuropil layers. In these regions, immunogold preferentially labelled the cytoplasmic face of postsynaptic cell membrane of PCs and pyramidal cells. Immunoparticles were distributed along the extra-junctional cell membrane of spines, dendrites and somata, but were almost excluded from the junctional membrane. By double immuno¯uorescence, Gaq/Ga11 was extensively colocalized with metabotropic glutamate receptor mGluR1a in dendritic spines of PCs and with mGluR5 in those of hippocampal pyramidal cells. Together with concentrated localization of mGluR1a and mGluR5 in a peri-junctional annulus on PC and pyramidal cell synapses (Baude et al., 1993, Neuron, 11, 771±787; Luja Ân et al., 1996, Eur. J. Neurosci., 8, 1488±1500), the present molecular-anatomical ®ndings suggest that peri-junctional stimulation of the group I metabotropic glutamate receptors is mediated by Gaq and/or Ga11, leading to the activation of the intracellular effector, phospholipase Cb. Introduction A large family of neurotransmitter and hormone receptors with seven transmembrane domains share structural topology and amino acid sequence similarity (Dohlman et al., 1991). Signals to these receptors are mediated via GTP-binding proteins or G proteins (Gilman, 1987; Simon et al., 1991; Neer, 1995). Upon receptor activation, the a subunit of heterotrimeric G proteins exchanges bound GDP for GTP, liberates the bg complex, and confers receptor and effector speci®cities. In vitro studies have revealed that the Gq subclass of the G protein is coupled to a wide variety of receptors, including group I metabotropic glutamate receptor mGluR1 and mGluR5 (Masu et al., 1991; Abe et al., 1992), and is responsible for the pertussis toxin-insensitive activation of the intracellular effector phospholipase Cb (PLCb). PLCb hydrolyses phosphatidyl-inositol 4,5-bisphosphate to yield a pair of second messengers, inositol 1,4,5-trisphosphate (IP3) and 1,2-diacylglycerol (Exton, 1996). IP3 mobilizes Ca 2+ from intracellular stores via IP3 receptors, while diacylglycerol stimulates protein kinases that phosphorylate various proteins and enzymes, both playing fundamental roles in neural function, regulation and development (Nishizuka, 1988; Berridge, 1993). There are four members of Gq protein a subunits: Gaq, Ga11, Ga14 and Ga15/16 (Strathmann & Simon, 1990; Wilkie et al., 1991). Polymerase chain reaction and Northern blot analyses have shown that Gaq and Ga11 represent the major isoforms in the adult brain. They share similarities in the amino acid sequence (88%), receptor speci®city, and ability to activate PLCb. Immunohistochemistry using antibody common to Gaq and Ga11 has shown that Gaq/Ga11 immunoreactivity is enriched in dendritic ®elds of the cerebellar cortex and hippocampus (Mailleux et al., 1992), where mGluR1 and mGluR5 are abundantly expressed (Abe et al., 1992; Shigemoto et al., 1992, 1993). Mutant mice lacking Gaq manifest profound cerebellar phenotypes: persistent multiple innervation of Purkinje cells (PCs) by climbing ®bres (CFs), impaired long-term depression (LTD) and motor discoordination (Offermanns et al., 1997; Miyata et al., 1998). These phenotypes are essentially the same as those found for mice lacking mGluR1 (Aiba et al., 1994; Conquet et al., 1994; Kano et al., 1997), suggesting that Gaq couples functionally to mGluR1 in the signal transduction pathway. However, subcellular localization of the Gq protein a subunits, particularly the synaptic localization, has not been demonstrated. Correspondence: Professor M. Watanabe, as above. E-mail: [email protected] *The ®rst two authors contributed equally to this work. Received 21 July 1999, revised 1 November 1999, accepted 15 November 1999 European Journal of Neuroscience, Vol. 12, pp. 781±792, 2000 ã European Neuroscience Association

Gq protein alpha subunits Galphaq and Galpha11 are localized at postsynaptic extra-junctional membrane of cerebellar Purkinje cells and hippocampal pyramidal cells

Embed Size (px)

Citation preview

�� ������ � ����� ��� � ���� �� ��� ����� ����� ���� ���� ������� � ����� � �� �������� �������� ���� � ������ �� � ��� ��� � ����

�� � � ����� !�� " � # $ ��� %���� &���� �' (�$ �� ) � ���� ( ���� *�� � �� �������� +$ # ��

(��,� +- !����. &��� ! ����� �' ( ��� & �/ ��� ( ���� 0 � ���

�������� �� ����� �������� ��������� ������ �� ��������� ������� ��������� ����!"�#������ �� ����� $��%���&�� ������ �� '�������� ��������� �������� ���������� ������� ��������� ������������� �� (����%� �)*�*+� ,��������� -���&� �� .�������%�� $�������� , /��!+� �� )������� �� ,���&��� 0�&��#����%�� (���� 1������� -���&�� 0��%�� ���������� 0��%�� /+���+�+� ����+������� �� $�������%�� 2���3�4� ��������� ������ �� ��������� .����������� 2���3�4� /!����)�� ����

��������5 ����#����� $&����6� ������ �7���6&������� �#����� 89 ������ � �&#&���� ���������� �������� �����

1��� ��

*����$�# ���� ��� �� �������� ���, ���� ��� � ����� �� ��� �� ���� �� ��������# ������ ���, �� ��� ��������������# ���# � ��$ �- 2��� $� �� ���� ��� ������� � ��� ��� ��� �� �� ������ � ����� � ��� ���� ���� �� � �� �� ������������ ��� � �����������������- 3� ��� ���� ������ �� ��� �� ������ � ������ ��� � ���� $��� �� ������������� ��� � ��� �� �- ��� ��#��� �� ������� � ��,�� �� ��� $ ����,�� � �������� � ������� ���� 4�56 � ������ �� ���� ��� � ����� $���� �� � �� ���� $ ���� � ������ �� � ��� ��� � ����- 1������ # �� ��� 5������ � ������� ����� ����� � ���� ���#�� � ������ ��� �������� � ������� � � ��� � ������ �� � ������� � ���- + ���� ��#��� �����#������������ ��� � ������ ��� ������ ��� � �� �� ���� ���� ���� ����� � �� �5 � ��� ��� � ����- +����� ������ $������������� ��# ��� ���� ������� � ���� ����� � �� ���� ������� � �� � � ��� $��� ���� �������� ���� ��� ������ ������ �- 7� ������ �����8��������� ���9���� $ �����,��� ����� ����� $��� ��� �������� #��� � �� �������� ����:��� �������� ��� �� �5 � $��� ����:/ � ���� �� ������ �� � ��� ��� � ����- ��#����� $��� ������ ��� ��� ��� ��� ������:�� � ����:/ � ����������� � ��� � �5 � ��� ��� � ���� � �� 47 ��� �� ��-� �;;.� ����� ��� <<�=<><?@�� A �� ��-� �;;B� �� � ������-� �� �'>>=�/CC6� ��� ����� ������� �� ����� � D��# �##�� �� � ����������� � ����� ����� ��� #���� + ��� �������� #��� � �� �������� � ���� ��� �� ��� �9�� ����� �� ��# �� ��� ���, ��� �� ��� ��� ������ � ������������������ � 5�-

+���������

� ����� ���� �� �� ������������ ��� ������� ��������� ��� �����

������������� ������ ����� ��� �� ��� ������� ��� ���� ���

��� ���� ������ �������� �� ���� ������ ������ �� ����� ���������

��� ������� �� !"#����� ������� �� ������� � ����� ��$%&

���� �� ���� ����& '���� ���(�� )��� �������� ��������� ��� �� � �� �� ������������ ������� �*������� �� �� �" ��� !"�

�������� ��� �� ������*� ��� ������� �������� ��� ��������

����+����� �� ��� �� ��� ���� �������� ���� ��� � � ������ ��

��� ������ � �� ���� �� � ��� ����� �� ���������� ��� ���

��� � , ����������� �� ������ �������� � � -� ��� � � -( �.��

�� ���� ����& ��� �� ���� ���/�� ��� � ���������� ��� ��� ���� ���

��*�#�������� �������� �� ��� �������� ��� �������� ������������

0� �"10��� "10� �������� ����������#������ 2�(#������������� ��� � ��� �� ������ ����������� ������ ��2�(#������������

�,"3� ��� ��/#����������� �4*���� ���5�� ,"3 ����6�� 0�/7 ����

�������� ��� ������ �� ,"3 ���������� ���� ����������� ��� �����

������ 8����� ���� ������������ ���� � ������� ��� ��6����

���� ����� � ��������� ����� � �� ��� � ������ ��� ����� ���

����������� �'��6 8�� ��$$& 9������� ���3��

!���� ��� �� � ������� �� � ������ � � � ���: ��� ���� ��2 ��� ��(;�5 ����������� < ����� ���=& >�8� �� ���� ������"�������� ���� ������� ��� '������� ���� ������� ���� �����

���� �� ��� ��� ��������� ��� ��?�� ������� � ��� �� �� �����!�� ����� �������� � ��� ���� ��� ��� ���� �$$@�� ��������

����+��� ��� ���� �� ������� "10�� ,�� ������������� ��� ������ ������ �� �� ��� ��� ��� ����� ���� ��; ����� ��������� � ������� � ������� +���� �� ��� ����������

�����* ��� �������� � �.���� * �� ���� ���/�� ����� � � -� ���

� � -( ��� �� ������ �*������� ���� �� ���� ���/& �������� �� ����

���/� ���3�� . ���� ��� ���8�� �� ������� ����� �� �������������������: ��������� � ����� ��������� �� " �8�?� ����� �"0�� �

������ +���� �0A��� ������ ����#���� ��������� �1!�� ���

����� ������������ �B��������� �� ���� ���%& .��� �� ���� ���$��

!���� ��������� ��� ��������� ��� ���� �� ����� �� �� ��� ���

���8�� � � -� ���� �� ���� ���2& 0��� �� �� ���� ���2& C��� �� ����

���%�� � ������� ���� �� �� ���� � �������� �� � � -� � �������� ������ ���� ������� D������� � ����� ��� �����6���� �� ���

� ������ � � � ���� ����� ���� ��� ������ �����6����� ��� ������� �������������

��� ������: "�������� .� >�������� �� ������4#���: ��������E������8 ������?�F!�� +��� ��� � ����� ������ ��� �� ��� �� ��� ���8�

�������� �� ���� ����� ������ � ������ ����� ���� ��� �� ������ ����

�� ��� ����� � ����������� ��� ��� � !�" ��� �### � �� ��� ���������� $��������

,� �� ������� �� ��+�� ��� ���� ���#����+� ����� ������ ����

������ �� ���� �� ������� �� ���� ����6���� ��� �� ����#

��������� ��� � ������ � � � ���� D��� �� ���� ���� ����� ������ ����������� ������ �� �� � "0� ��� ���������� ������������� ��� �� ��� � ���������� ������� ������

,�� ������������� ��� ������ ������ �� �� ��� ��������������� ���� ����� �����6���� �� ��� ��������� ���� ��

���������� �*���#? ������� ��������� � "0 ��� ������� ������

A ���������� ��� ��; ��� �� ��������� � �*������� ����#���6�� ��� � � -�� � "0 ����� ��� ��� � � -( � ����������� ����� � �� ��� �� ��G ���������� !��������� ��� �������

�� � ������� ����� ���#��������� ������� ���� �� ��� ������ ��� ��?�� ����� ������ ���� ���������� �� ��� ��� � ,

����������� �� ������ ��������� � ����� �� �����

A, � �� �� ���� ����6���� ������ ������� �*������� �� � ������ � � � �� �-'�� � ��� �� �� �� �� ����� D���6���� ��� 3(�#�������� �������� ��������� �� ���� ��� �9�� ��2 �0� ��� ��(;�5 ��� �-'��� 0������ ����6���� � ��� �������� �� /=#���� �*���� ��� �� �� ��������� �������� ������ ��� �� �4� ��� ��� �A� �-'��� �� ��� ��� �� �� 3(�#�������� ����� ������ ��� �� � � ��� ��� �D� �-'��� 1��8 �� ������ ��� ��2 ��� ��(;�5 �-'����� ���� ���+���� � ����� ������� ����6���� ����� ��� ������� D���6���� ��� ��� �� �� ����� ���#���������� �������� ������ ��� �� �,� ��� ����H� �-'��� ��� ������ ��� ������� ����� ��8�� ������ ���� I#�� +�� � ������������ -������ � �� ��� ����� ��� ������ � �� ��� ���� 0�� �������� �& 0"��� ����#� �����& 0�� �����*& D� �������� �& D� ��������� �& .�� ������& .B� ��� ��� ���������& B9� �������� � ��& "�� ����& !�� ������ �� ����� �������� ��JH��

%$/ H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

A, � /� �� ���� ����6���� ������ ������� �*������� � ��� �������� � ��JA� ��� �������� � JH� �� �� ��� 9� ��� ,�� ��� �0� �� D ��� H�� ��2 �4� ��� ��(;�5 �A� �-'��� "���������� ��JA� ��� ������� � JH� ������� ���� �*����� �� � ����� ����8 �� ����� ��� ������������ � ���8#+��� ��� 0 ��� 4JD� ��������#+��� �9� �� , ��� H� ��������� A�� �����#+��� ��������� ������� ���� ����� �� ���������� ��� ��� ��� �� � �9 ��� �� �� �������*�� �, ��� H�������� � 9 ��� � ������ ��� ���� ��� �� " �8�?� ������ 0�� ��� 0�3� 0�� ��� 0�3 ������ �� ��� �����K� ����& � � ������� �� �& �� ���� ��� ����& .������� ��� ����& "� ������� ���� ����& �B� ����� � �����& �-� ����� � ����� �& >.� ���� ������� ��� ����� ����������� � A�� �� ����� ����� �==�� ��� 0��� 4JD�& �=�� �9� �� , ��� H��

4*���#? ������� �����6���� �� �� ��� ��� %$3

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

( ���� � � ������

�������

!�� �� �� 0(%91 �� �� ��� ��� � ��� ������� �� �� )����

������������ ���������� �� ��� ������ ����� ����� ��� �� ����

����6���� ���� ������ ������� ���� ��� �8 �� ��� ���6�� �

�������� �� ��� A��6�� ������� ���� �������� � ������� �/=��� ���8����� ��� �� ���� �� ����� ����� ��������� ��� 3#

���������������*����� ������ ��� 1� �� .B� )���� A��

�� �������������� ��� ���� +*�� ������������ ��� 2@

��������������� � =��. ��� � ��������� � ���� ��D %�/� ���

����#��������� �� ������*����� �� ��G ��������� ��� ����#

�������� �� ���������� ��������� �� ��� 2@ ������������#

���;=�/@ �� ���������� � =��. ��� � ��������� � ���� ��� ���#

�������� �� ���������� ��������� .�������� �������

�(=��� ���� ��� ���� ��� � ��� ������� ��������

+ ��� ������������

9��� �� �� ��� � ������� ��� ���� ������ � ��� ����� ������

2(#��� ����� ��� �������� ����� �������� ���� ������6�� ��� ���

3� ���#����� ����� �� � ������ � � � �� ��'��: (�#! 00!000� ���0! !!0!!000!000! ! !! !! #

�� �#3� �� ��� �� �� �� ��'� �� ������� ���� �� ��/=J��52��������� ��� .((2�/� ���������� < ����� ���=�& (�#0 0�! 0! 00�00� 00� 0!!00!00 0�!00 #

!0�00#3� �� ��� �� �� ��� ��'� ���2=J��$2� .((2���

���������� < ����� ���=�& (�#� ! !0!!!��!!0!!0�0! #!0!��0!0!!!!0!0 00!!!! #3� �� ��� �� �� ��2 ��'���3%(J�2��� .$=53�� >�8� �� ���� ����� ��� (�# �0� #��0000�� 0 0 �0 0 !0 ! 0 � �0�!�00#3� ��

��� �� �� ��(;�5 ��'� ���%�J�/�(� .$=53/� >�8� �� ����

������ A ���������� ���#���������� �������� ����� ������� ������

���� ������6�� ��� �� �� ������� ���� �� �//=J�/52� ��� �����//�J�/5(�� B���� �������� ���� �������� ��� 3(�#��!" �� �

����+� ����� �� =�(� �=� ������;�� �'�� ��� ������� ���*#���� ������� ����������� �9-1� 9�������� .�� )����

A���� ���6�� ������� ���� ��������� ��� +*����� �������������

�������6����� ����6���� ��� ������� �� �������� ����� ��

�>������� �� ���� ���$��� ���� ����� ���� �*����� �� I#�� +���

�D���+��#� ��*� ��������� 9 �8���������� )C� ��� 3���8� ���� � ����� ����8 �� ���� �'!9#/� C���8� -��������� 'L� )��� ���

/�������

��������

>� � ������� ��+��#� �+�� ����� 0#�� ������ �� ��; ������� ����� 0� 6 9���������� ������ 0� 6� 0�� )���� ���� ���

���� ����� ������ ��� 0#������� �� ���� ��� ���� �� ������ ��

�� ��� ���� ���#�� ���#�� �� � � -�� ��� � � -(

�������� ���� ���� ��� �� �������� !� ������ �� �*������� ��������

�� ����+�� � ��������� ���� ������� � (2�#�� ������ �� �� ��

� � -�� ��'� ��������� ��� )$�$��� ������������ �� �2(J

��/% ���� ��� ���� �� �� ��� ��� � � -�� �D� ���� �� ���� ����&.�� �� ���� ����& .5�=��� ��� � ���#�� ������ �� ��� �� ��

� � -( ��'� ��������� ��� �A�2=32�� ���� ������� ��� ����

������ ��� ���� ������������ �� �=%(J���� ���� ��� ���� �� ��

��� ��� � � -( ���� �� ���� ���/& ��=$���� "����� ��� �*������� ��

� �� ������� �#����������� � �!� � ��� ������� ��� � 4I#2!#/

������ ������ �"������� 9����� �9� )������� ��������

A������� ������� �������� ��� � � -�� �� � � -( ������������ ��������� ���� �! � ��������#����� ���#����������� �� �

�������������� !�� ���� ���� ��� � �+����� �� ���������

�������� ���� ��������� �� �������� ����� �� �>������� �� ����

���$���

����������

9���� ���� �������6�� � �= ��� ��� �� � ���� ��=�. !��JD0��

�D %�/� (�. 4�!�� =�3/. � ������ ��. ����������� ������

G ���� ��� �=��;1 �� ������ ���� 3�� �� ����������� ���

������ ��� �� %== � ��� �=�� �� ����� � ����� ����� ��������

"����� ����������� ��� ������� � ��� ������ �� 1��� �1���

�� ���� ��(��� 4� �� ��� ��� �� ��� ������ ���� ����������� � �/@

��� � ������� ������J����������� ��� �������������� ����J

"� 4�� ��� �������������� ���� � �������� ���� ��������

���������� ��� ��� ���� ������� ������� !�� ���� ��� �� ���#

������ ��� ��� ����� ������ �� ���;�1� ��� ��� �� ��6�� ������ ��������� �401 �������� ������ ����������

�������������������

��� �� ������������� �� ������ ���� ��������� �� ����

�������� ��� A�� �� ������*����� ������� ���� �� ����� ����#

���� ��� ����� ���# ��; ��� ������ �=�3��;�1�� � ���#�����#� � -�� ������ �=����;�1� �� � ���#�� ���#� � -(

������ �=�(��;�1�� !�� ���� �� ����� ��� ���������

�������� �������� ��� � �� ��� ���� ��� ����#����*���� ���

3=��� ��� � D���+�� ��9#"B�-� 8� �'����� !�8�� H������

!�� �� ��������� ��� �� ��6�� ��� 3�3�#��������6���� �������������� ���� ��8�� ��� �� B��� � �I#$= ���� ���������

�!�8�� H������

A�� ���#�������� �����#�����+�� �� ������� ������� ����

�� ��������� ��� ���# ��; ��� ������ �=�=(��;�1�� ���� ����� �� ����� ��� ���#����� ,� ��������� ��8�� �� ��2 ��

���� �������� �'�������� '���������� ���� 9���8� 'L� )����

A������� ����� ����������� �DM ������ '����������� �������

���� ���+������ ��������� ��� �������� � 4��� $�/� )�������

������� ���� �������� ��� � -������ ������������� ��� ������

��� �� �� �� � ��� ��� �� /@ ���� �������� "���#��������

�� ������ ��� ��������� �� �������� ����� �� �1������� �� ����

���%�� 9��G� �������� ������������ ��� 3=@ ������� ����

����� ���6�� � �� � ������� � � ���+*���� �� �0"0� 1����

N����� � ������ !�� �������� ���� ����������� �� =�(@ ����

������� � �������� � � ���� ���� ��� �� ��A�� 1����� ���

�������� � 1����� D./= ���� �1��� >���8��� ��� �������

)������� ������� �� ��8�� ���� ���� �� ��������� ��� ���#

��; ��� ������ ����;�1� ��� / �� ��� ���� ��� �������� ������( ��� ���? ����� ��� ���#����� ,� �9���� 9�����

,������������ 0������ )C�� ��� ���� ������ ��� /@ ����

������� ��� �=��� 4������� ���������� ���� ��8�� ��� � D����

D#%�== �������� ��������� �!�8�� H������

A, � 3� �������� �� 0#������� �� ���� ��� ��� ���� �� �� � � ������ �� � ���� ������8� ������ ������� ���� ��� ���� �� ������� ��������!�� � ���� �� ��� +��� ���� ��� ���� � �� ��� ��� ���� � ������� �� ��������

%$2 H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

A�� �� ��G ��������� ��� � �������� ����� ������� ����#

����� �A� ����� B��� ��� ������� ���� �� ����� ��� � �*� ��

�� ����� ���# ��; ��� ������ ����;�1� ��� � ���#�� ���#� � -�� ����;�1� �� � ���#�� ���#� � -( �/��;�1��,�� ���������� � ��� ����� ��� � ���#�� �������� ����

�� ��6�� � / � �� ����� ��� 03#�������� ���8� ���#�����

,� �� : /==� H��8��� ,�� ��-�������� >��� ����� "�� )��� ��

A,!0#�������� ���8� ���#� ���#�� ,� �� : /==� H��8���

,�� ��-��������� �����������

������������� �� ���������� ���������

M �������� ���� ���� ��������� ���� ��� ������ � �?��� �� �����#

�����+�� �� ������ �� ������ 4������� ���������� ���� ��8�� ��

��� ������ ����+����� �� � �= === ��� ������ �� ��� +���

����+����� ��� 33 ===� "0 ����� ����� ����� ���� ���� ��� �����

���������� ������6���� ���� �������� ��� ���� �������� ��� O �(=

����� ���� ������� � ���� �� ��� !�� ���� �������� �� ��� ����

���� ��� ����� ��� 5=#�� ��� ���� ��� ������� ���� �� ��� ������

�������� ���� ��� �*������� �� ��� ���������� �� �������� ��������

�������� �� ��� ����� �� ���� �������� � � ���� �� �A�� 5��

:����

+ ��� ������������

)��� 3(�#�������� �������� ����� ������� ������� ��� �������

�*������� �� �-'�� ��� �� � � ������ � � � ��� ���

����������� �*����� � ��� �� �� �� �� ���� � I#�� +��

������ ����������� �A�� ��� �� ��� ��� �-'�� ����

A, � 2� ,�� ������ ��� �� ������*���� ��� 0#�� ������� ��� � ����� ������ ���� �� 2/ 8�� � �������� � 0#�� ������ � ��� �������� �����* ���� ����������� � ����� ,�� ������*���� ��� ��� �� �� �� �� ����� �9� � ������� ���� �� ��� ������ ������� !�� �������� � � 0 ��� ��� �������� � � � ������#����� ���� ��8�� ���� 9� 0������ �� ������*���� � � ���� ��� �� 0#�� ������ ��� ������ ����� ,� �4� �� �� ������ �A�� �1� ����� � � �� �&�1.� ����� � ��� ��� �#����� ����& �.� ����� � ����� ����� ��� ����� ����������� � A�� � ��� /� ����� ����� �==�� �9JA��

4*���#? ������� �����6���� �� �� ��� ��� %$(

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

%$5 H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

�*������� ����������� � ���� � ������ �� ��� ��� ������� ���

��� ������ � ��� �������� � ��� �������� � �A�� �� ��� 9�� ,�

������� ���� ���8 ������ ���� �������� ��� ��� � ��� ����

������� � ������� ���� �*�������� >�� ��� ���� �*��� �� ����

��2 ��� ��(;�5 �-'�� ���� �������� �� ��� ��� ������ � �������� ��� � ����� ��� �� � ��� �������� � �A�� �0 ��� ��� !��

����+�� �� ��� ����6���� ������ ��� ���+�� � �����

������������ � ��� �������� �� ��������� �������� ����� ����#

���� �A�� �4 ��� A�� �� ��� ��� �� �� ����� ������ �A�� � ��� D��

��� ��� ���� ���+���� � ����� �������� �� �*������� ��� ��� ��

�� ���#���������� �������� ����� ������� ������ �A�� �, ��� H��

������� ����� ��� �� ���������� � ��� �������� � ���

�������� � ��� �*����� � �� ���� ����� �����������

�A�� /�� ,� ��� �������� �� �� �-'� ��� ���� ������������ �

��� "0 ����� ����� "0 ������ ���� �������� �A�� /� ��� 9�� 1����

������ ���� ���� �� �� � ����� ���������� ������� ��� ��� ���

���� ��� ����� ����� ��� ���� ��� ���� ������� B� ��� ����� �����

��� �-'� ��� ��������� �*������� � ���� � ����������

������& ��� "0 ��� ���� ��� ����� ���� �������� �� ����� ������

�A�� /0 ��� ��� N�� ���� ������ ��� ��2 �-'� ���� ��������

���� � ��� ���� ������ �� ��� �������� � �A�� /4�� ������� �����

��� ��(;�5 �-'� ���� � ��� ���� ��� ���� �A�� /A�� ,� ���

�������� �� �������� ������ ��� �� ��� ��� �-'�� �������� ������������ � ��� ������� ���� ����� ����� ����� �����

���� ��� � ����� ���� ���� ����� �A�� / JH�� !���� ��� ��� ������

���� �� ��� ��� ��� ��� ��?�� � ������ � � � ��� ����������� ��� �� �� ����� ��� ����� ��� �� ������ �� �� �-'� �

���������� "0� ��� ���������� ������� ������ ��� �� ��� �-'�� ���������� ������� ������

���������������

!� �*���� ��� �����6���� �� �� ��� ��� �������� �� ����8������ � �������� ������ �������� ������ ������� B� �������

�������� ���� ������6�� ���������� ������ ����� �� 2/ 8�� ��

�� ������� �A�� 2��� ��� ��������� �� ������*���� ������

�A�� 29� ��� ������� ��� 0#�� ������� ���� ��� ���� �����

������ ��� 0#������� �� ���� ��� ��� ���� ������ �� �� ��� ��� ��� ���� �������� � �� ��2 �A�� 3�� !�� ������ ������� ���� ���������� � ��� ���� �A�� 29� ��� ����� �� ���� �� �� ��� ��� �-'�� �A�� �� ��� 9�� A ���������� ����������� �� ��� 0#�������� ��� ������ ����� ,� �� ������ �� ��� 0#�� ������

�������� ��� �� ���������� �A�� 24 ��� A�� 9��� �� �� ��� ��� ��� ��� ��?�� ������� ���������� � ��� �� �� �����

�� ���������� �������� � ��� ������ ��� ��� ��������� �����

�� ��� ��� �������� >� �� � ��� ��� 0#�� ������ ���� ��� � ���

������� �������� ��� �������� ���������� �� ��; ��� �� ��#��������

��; ��� �� ��������� ��� ���� ����� ��� � ��� �����A�� 29�� !�� ������ �� ��������� ��� �������� � ���

����� ��� ���� �� ��� �������� � �A�� 20�� ��� � ������� ��

�� ���� ����� �� ��� �������� � �A�� 2��� >��� ��� �������#

� �� ��� ������ ����� ��� ����� � �� ��� �����K� ���� ��� ����� �

����� ���� �� ��� ������� �� � ������ ����� ������ ���� ��� ������

��� ��� �#����� ���� ��� � �� � �� ��� �����K� ���� �A�� 2���

9 ��������� ���� ����� �� ���������� "0� ��� ����� �� ����������

������� ��� ���� �� ����� ���� �������� ���8� �� �� �����#

����� � �� �� ������ �������� �� �� �������� ���� ����������

�� �� � ����� ���� ������� ��� ��� ��� �������� �����*� �� ����#

� ������ �������� � �� ��� �������� ����� ����� � ��� � �A�� 29��

������������� ���������

A���� �� ������� ���#�������� �� ������*���� ��������

�������� �� �����6� ��� �� ���������� ��� �� ���� )�� ��

��� ���� �� ��������� ���8�� ���� ��������6���� ��������

��������� �� ��� �������� �� �������� ��� ������� ����� �

"0� �A�� (�� ��� ���������� ������� ����� ����� ��� ������� '�

�� ��������� ���� ��� ���� �� �� � ��������� ����� ���������

"����� �����6���� �� ��; ��� �� ��������� ��� ���������� ���#�������� �����#�����+�� �� ������ �A�� (9J4 ��� %��

,� ��� ���������� ����� ��� ����� ���� �� ��� ����� ���� �����

���8��� ���� �������� � ��������� ��� ��� ��������� ���� ��

��� ���� �������� �� "0 ������� �������� ��� ������ ���� ����

����+�� � ��� ����#��������� �������� �� ��� ������ ����������

���� � � ��4-�� B� ����� �� ����� ��������� ��� ���� ������

�������� ��� �� �� �� "0 ����� ������ �������� ������� ���

�������� +��� �"A� �������� �A�� (9�� ���� ���� ����+�� � ���

�6� ����� �� "0 ����� ��� ��� �������� ��� � ����� �� ������

������� ���� ��� ? ����� ���� �� ��� "AJ"0 ������� �� �����#

����� ���� ��������� ��� ��� �*���#? ������� ��������� �������

��� ? ������� �������� ����������� � A�� (9 ��� 0� ��� ������

�*�� ��� ���� ��������� >��� ������� ���� �������� ����#

� ������ �� ���������� �� ��� �*���#? ������� �������� ����

A, � 5� ����� ��� �� ��; ��� �� " �8�?� ���� ����� � ������� ����������� +��� ��������� !�� ������ ���� � ������� �� = ��� ��� ���������� ���� ��� ���� � ����� � ��� �������� !�� ������� ������� ������������� �� �������� �������� �������� � ���� 5=#�� ��� !�� ������������ ��������� ��� ��� ����� ��� � ���� �� �������� �������� ��� ������� ���� ��������� A�� ��� ���� ���� �� ? ������� �������� ���������P������K � ��� ��������� ��� ������ �������� ��������� ��� ������������� ����� ��� ����� ��� 5=#�� ��������� ��� � �������*������� �� ��� ���������� �� �������� �������� ������� �� ��� ����� �� �������������

A, � (� ,�� ���������� �������� ������ ��� � ����� ��� �����6���� �� ��; ��� �� ��������� � ��� ���������� " �8�?� ������ ���,�� ������*����� ���8 �� ��������� ���� ��� ��� ����� ��� ��� ��� ���� "0 ����� �F� � ������� ��� �������� +��� �������� �"A�� �9J4� "��#��#������ �����#�����+�� �� ������� �A� "���#�������� �� ������� 0��� �������� �������� � �� �� �� "0 ����� �F� ��� �������� ����� '��� ���� ���? ������� �������� ������������ � ������� ��� ��� �������� +���� ������ +���� �0A� �� ������ ��� �*�� �,�� ������ ���8� �� �����������,�� ���������� ��� �������� �� �� ��� �� ��� �4- ������� � 9� 0 ��� 4�� ����� ����� =�(�� ��JA��

4*���#? ������� �����6���� �� �� ��� ��� %$%

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

A, � %� "��#�������� �����#�����+�� �� ������ ��� ��; ��� � ��� ���������� ������� ������ ��� ����� � ����� � �� ��� 0�� ������ �9� ����� �� �� � �� ��� 0�3 ������ ,�� ���������� ��� �������� ����� �� ��� �*���#? ������� ���� �������� �� ������� ����� �F� ��� �������� ����� � � ��� ������ ���� �� ��� ? ������� ���� �������� ������������� ������ � 9 ������ �� ���������� ��� �� ��� �4-� .A� ���� +��� �������& '!� ���+��� �������������� ����� ����� =�(���

A, � $� 0��������6���� �� � ���#�� ���#� � -�� �� ��� 9� ��� ���#� � -( �0� ��������� ��� ,�� ������ ��� � � -�� ������� � ����� ������ ������ �2( 8�� � �������� � ��� �������� � ����� � � ��� � ��� �������� �����* ����� ,�� ������*���� ��� � � -�� �9� ��� � � -( �0� � ��� �� �� �� �� �����0�� �������� �& 0"� �� ����#� �����& 0�� �������� �����*& D� �������� �& ,0� ������ ����� � �& B9� �������� � ��& �0� � ����� ����� � �& �'� � �����������& ��� �������� ����� ����� � ��� �& !�� ������ �& ! � �������� � ������� ����� ����� ��� �9 ��� 0��

%$$ H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

A, � �� �� ��� �� ��G ��������� �� ��; ��� ����� ��� � � -�� ������� � ��� ���������� ����� ��� ���� �� ��� 9� �� ��� � � -( ������� � ������������� 0�� � �+��� �0 ��� ��� �� ��� 9� !�� � ����� �� ���*��� "0 �������� ������������ � ����������� �������� ��� ��; ���� ������� ����� "0�������� �������� ��� �� ���� ��� � ���� � "0 ����� ����� ���� ��; ��� ��� � � -��� ������8� ������ ��� ���� ��� �� " �8�?� ������ �0 ��� �� '������ ����� �����6���� �� �� � ���� ����� ���� ��; ��� ��� � � -( � ��� �� ���� �� ��� ����� � ����� ��B� ��� ����� � ��-�� ��; ��� ��� � � -(��� ��� �������� � ��� ������ �� ������� ���� ������ � ��� ����� � �������� �"� �� � ��� ������ �� ����� �������� ������������ � ��� ����� � ����� ��������8� ������ �������� �� ���� �������� ����������� ��� � � -(� ����� ����� /=���

4*���#? ������� �����6���� �� �� ��� ��� %$�

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

�������� �*������ ���� ��� ���� ��� ���8 �� ��� ���� �� ���

������� ����� �A�� (0�� !� � ���� ��� �������� ����� ���� ���

� ���� �� �� ���������� ��� �� ���� �� � � ����� �� �������

�5=#��#��� ���� ���� ��� ? ����� ���� �� ��� "AJ"0 ������

�A�� 5�� � � �� ������� � ����� �� �� ���� �������� �������� �

��������� ���� ��� �������� ����� ��� �*������� �� ��� ����������

�� �������� �������� ������� �� ��� ����� �� ���� �������� ���� �

���� ��� >��� �������� ��� ��� ���������� ? �������

�������� �������� � P������K � A�� 5�� ��� �*���#? �������

���� �������� �� "0 ����� ��� �������� �� � �� ����� �������

>��� ��� �*���#? ������� ��������� ������ �� �������� ������ �

���� ��� � � ��� ������ ������ � ������� �� ��� ������� ���� ���

������ �����

,�� ���������� ���� ���� �������� �� ����� "0 �������� !��

0AJ"0 ������ ��� ����+�� �� �������� �*�#���� � ��������

������ ������� � ����� ����� ����� ������� +���� ��� � ���� �

������ ������� ��� � ����� "0 ����� �A�� (��� ���� ������ �#

��J"0 ������� ���� �������� �� ������� �*�#������� �� �*�#

������ �������� �A�� (4�� �� ����� �������� �������� ��� ����

�����6�� ����� �� ��� �*���#? ������� ��������� "���#��������

�� ������ � ����� ���+���� ���������� �*���#? ������� �����#

6���� �� ��; ��� �� "0 ������� �A�� (A�� ����� �� ��� �������������� ��� ���8�� ���� ���#�������� �� �������

,� ������ �� ��� ����� ���� �������� ��������� � ���

�� ���������� ���� �������� �������� ����� ,� "0 ���������

�� ���������� ���� ����� ������� ��� �� ��� �������� �� �4- ? ��

������� ��� ���� �������� �� �� ������ ������ ������� ��� ����

�������� ��� �4- ������� � A�� (9 ��� 0�� ,� ��� �����

�������� ��� �������� ��� �� �� ��� �� �������� �� ��� ���

������� � ����� ��� �������

,� ��� �������� �� ����� �������� �� �� ������ �������� ����

�������� �A�� %�� ��; ��� �� ��������� ��� �����6��

������ �� ��� �*���#? ������� �������� �� ����� ������� �� �8

��� ����� � ���� 0�� �A�� %�� ��� 0�3 �A�� %9� ������� ������

� ��� �� ���������� ���� ��������� ��� �������� �� ��� �4- ���

��� ������� � ������� � A�� %9�� )�� �� ������ ����� ,�

��� ���� � �� ���+���� �������� � ���� ��� �������� � ���

�������� � ����� ��� �������

����������������

!�� ��� � , ����������� �� ������ ���������� � � -� ��� � � -(�

��� �� ����� � "0� ��� ���������� ������� ������ �����������

��� �� ��� �� ��� � � ������ �� ��� ������ �.�� �� ���� ����&

��� �� ���� ���/& �������� �� ���� ���/& 9� �� �� ���� ���3�� !�

������� ��� �����6���� �� ��; ��� ��� ����� � � -�� ��

���� ��� � ���#�� ���#� � -�� ��� ���#� � -( �������� ����� ��� �� ��G ���������� 9 �� ������� � � -�� ������

�������� � ����� ������ ���� �� �2( 8�� � ��� �������� �� ��

�*������ �A�� $��� B�� ����� ���� �*��� �� ��� � ���� ����

�������� � ��� �������� �����* ����� ��� ������� 9 �� ������*#

����� � � -�� ������ �������� ��� ���������� ����� ��� ���� ����� ������ ����� ��� �������� �������� � ��� ������ � ���

�������� ������ � �A�� $9�� ��������� ��� ����� � ��� ��� � ��

���� ����6���� ��� �� ������������� �.���� �� ���� ���/&

�������� �� ���� ���/& 9� �� �� ���� ���3& 1 ?�Q� �� ���� ���5��

.�������� ������������ �� ��� ������ ��� ������ ���������

�������� ��� �� ���������� ����� ��� ������� ������� ���

����+�� �� � � -�� ������� B� ��� ����� ����� � � -(

������ ������� �������� ���� � ������������ ��� �� ���� �

����� ��� ��� ���������� 0�� � �+��� �A�� $0�� !�� �������� ��

�� �������� ���� � �� ����� �� � ����� � ������ ���������

�� ���� ���3�� ,� ������� ������������ ��� ��� ������ �������� ���

�� �������� ����� ��� ������� D������� ��� ������ ����� ��

������ �� ������ ����� �� �� ������� ����� ��� ���� ��

������ ����� �� ���#����� ��� � � -(�

)��� ����� ��������� �� ��� �� ��G ��������� ��� ���#

������ ��� �*������� ��� �������� ����� ������� ��������

�A�� ��� ,� ��� �������� �� ��� �� ���� �� ��� ����� ��� ���� ���

������� ������ ��� ���� ��; ��� ����� ��� � � -�� ��������

����� � � ��� ����� ���� � �A�� �� ��� 9�� ������ ��� ������

�� ������ ������� ��� ������ �� "0 ������ ��� ���8 �������� ���

�������� �� ������� ���� ������ �*���� ��� � ��� � ������ ���������

� ��� ���8���� ���� ���� ��� ��� ������� �� �� � �����

����+������ ��; ��� ������ ������� � �� �������� ���

� ����� �� ���8 ���*��� �������� �������� � ���������� �

A�� �9� ��� ������ �� "0�� �� "0 �������� ������ ������ � ����

����� �������� � ���� � �� ��� �� ���� ���� ���� ������ ��� ����

��; ��� ��� � � -��� �������� �� ���� ���� �� ��� ��������� �8� �� � ���� "0 ����� �� ����������� 4��� � ����� ���������

��� �� �8 ��� �������� ����������� ��� ��; ���� !���� ������ ����� ���� ��; ��� �� ��������� � �*������� �������6����� � � -�� � "0 ������ ��� ���� ��� ������ � ����� ��� �������� �� ��� ������#������� �������� ���� ��� �������

,� ��� ���������� 0�� � �+���� ��� �� ���� �� ��� ������

����� �� ����� ��� ��� ��� �#����� ���� ���� ������� ������

��� ��; ��� ����� ��� � � -( ������� A�� �0�� �� � ���������+������ ��� ����� �� ������ ������ ��� �� �� �� ������ ��

� ���� � �� � ����� ���� �� ���� ������ ���� �� ��������#

��� �A�� ���� ������ �� ������� ����� ���� � ��� ���� ��#

����� � �� � �� � ���� ��� ���� �� ������������

B���������� � ��� �� ���� �������� ��� ������ �� � � -(� � �

��� ��; ���� ���� �������� ����� ������� ����� �������� �������8� � A�� �0 ��� ���

E�����

,� ��� ������� �� �� ��� �*������� ��� �����6���� �� ��� � ������

� � � ��� ���� �*����� � ��� �� �� �� �� ����� !�� �� �������� ��; ��� �� ��������� � ������� +���� �� ��� ���������������* ��� �������� � � ��������� ��� � ����� � �� � �

.���� * �� ��� ����/�� >� ���� � ����� ����+�� ��� � ����� ���

�����6���� � ���������� "0� ��� ���������� ������� ������

�� !��"" �� ������������ ��������� �� ��� ����������������#$��������� ������� �� ������#�������� ���������������

,�� ��G ��������� ��� ��; ��� �������� ��� � ����� �� ������#������� �������� �� "0� ��� ���������� ������� ������ "��#

�������� �� ������ �������� ���� ����� ���� ���8��� ���������#

�� ��; ��� ���� �����6�� ����� �� ��� ��������� ���� ���*���#? ������� ���� ��������� -����� �� ������������ �� ���

���� ����� ���� ���#�������� �������� � �������� �������

���� ��� ������ � ������ �� ����� ��� ��������� �� ���

���������� ? ������ ���� �������� �� ������ ��������� ��� "��#

�(;��"�= ������ ���� �A����� �� ���� ���$& A 8�� �� ���� ���$&

.�� �� ���� ���$& >������� �� ���� ���$��� � �� ��+� ���� ���

�������� � ������ ������������ ��� ���������� ������ �������

�� ����� ������ ��� � ����#�������� �� ������ �A����� �� ����

���$& B������� < 1�������� ���$& >������� �� ���� ���$��� !�

������� ������� ��� ���8 �� ���������� ? ������� �������� � ���

����� �� ������ �������� ������������ ��� ����#���������

�� �������������� ��� �� �� �� ���������� ������� � ���

������� ��� ������ �� � �� ������ ������ ,� ������� ��

������� ����#�������� �� ������� ���� ��� ���� � � �����

%�= H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

�*���#? ������� �������� �A�� (A�� A��� ����� +������ �� ����� ��

���� �� ��� ��� ��� ����������� �����6�� � ����� ������������ ������#������� �*���#? ������� ��������� �� ������ �� "0�

��� ���������� ������� ������

�� �� ��� ����������� ���� �������� �����6����� �� ��� �� ���

���� ������� ���� ��� ���+������ �� ��� '#����� � �� ���� ��

��������� ��� �������� ��������� �� ������* ��� ������������� � ��� �������� ���������� �� ��� � � � �� �� ���� �

������ � �������� �9�������� < ������ ���%& >������������ ���$��

!�� ������� ��� �� � ������ ���� � �� �������� �������� ������#

��� ���8 ��������� � �� ���� �� ���� ��� � ����� ���� �����

��������� �� ������ � ������ � � � ��� �� ��� �*���#? ��������������� �� �� �*�� �� ���� ���� ��� ? ������� �������� ����

���� ���8 � ������#������� �� ����� ���������

%��������� &��� ���� � ����������� ��������� ������� ��'%� ��� ����������� �������� �����

� � -� ��� � � -( ��� ������� �� ��� ��� � , �����������

�� ������ ��������� ���� ����� �� ��� �������� �� �������������

�������� ������ ���� �� ��� � ������ � � � �� �'�8�����

���2& "� < � ����� ���(�� ����� ��� ������� �� ���� �� ���

���� ������ �����6���� � ��� �������� � ��� �������� � �9� ��

�� ���� ���3& ' ���� �� ���� ���2& 1 ?�Q� �� ���� ���5& ���%�� 9���

� � -�� ��� � � -( ��� ������� �� ��� P���#������K ���� ��

��� � � � ��� ���� ��� ���� �� ��� ������ ? ������ ,� "0��

� � -�� � ������� �� ��� ���#������ �� �*�#���� � ������� �"A��� 0A ��������� ��� ���� �������� ��� �� �*�#������� �������

�9� �� �� ���� ���3& ' ���� �� ���� ���2�� !� �� ��� �����������

�*���#? ������� �����6���� �� ��; ��� � ��������� ������������ ���� �� ����� ��� � , ����������� �� ������ ���������� A��� ���

+������ �� ���;�� ��� �� �� ��� ��?�� ����� ������ �������������� �� ����� � � -�� !� � ��������� ���� �� ������

�� ��� �������� ����� �� �� ��������� � � � �� �� ����

>� �������� � �� ��� �� ��G ��������� ���� � � -�� ���

��; ��� ���� �������6�� � "0 ������ � � ��� ������� �� �8 �������������� �������� ��� ��; ���� !�� ������ ���� ��� ���� ���� � -( ��� ��; ��� � ���������� ������� ������ � ���� ����*����� � ������ ������� � ��� �� ����� 1 ?�Q� �� ��� ����%� ����

�������� ���� ��� ���#������ ���� �� � � -�� �� "0 �������

�O (=@� � ����� ���� ���� �� � � -( �� ���������� �������

�O /(@�� !��������� � � ��� ��� ���� ���#������ ��� ����� ��

� � -� �� �� ������ �� ��� ������#������� ���� � ����� �� ��� �����

�� ������� ����� ���� �� "0 �������� ������������ ��� ����

����� ��� �� ��; ��� ���� � � -�� � "0� � ������ ���� ����������� ���� ���� ������ ��� �������� �� ����� ������#�� ����

��������� ���� ��� ���� ��� ���# ��� �*��������� ��������

�������

'��������� ���������������� ������ ����������� ����&��� ��'%� ��� ����������� �������� �����

.�� ���8�� �� ������� ��������� � ����� 0A ��������� ��"0�� ������ 1!� �� ��� "AJ"0 ������� ��� ����� ������������

�B��������� �� ���� ���%& .��� �� ���� ���$�� !���� ����������

��������� ��� ������ �� ����� �������� ��� ��� ���8�� � � -�

���� �� ���� ���2& 0��� �� �� ���� ���2& C��� �� ���� ���%�� �����

��� "10� ����� "10�2 ���������� ��� ��?�� ������ � "0� �� ���

������� �������� � �C��� �� ���� ���$& >������� �� ���� ���$��� ����

� ������ ��� ��������� ��� ����� ����������� ��$$�� .�� ���8��

"10�2 ����� ��������� � ����� 0A ��������� � "0� �� ���

������� �������� � �� ���� �� ���*� �C��� �� ���� ���$�� ���

��������� �� ������ 8���� 0� �"C0��� �� ������ �� ����� � "0��D ��� �� ���� ��$$& ���� �� ���� ��$$& L� ��� ��$$�� ���� ��������

��������� � ����� 0A ��������� ��� ���*� �C��� �� ���� ���(�� !��

��� ������ �� ������ ��������� � ������ ��� ����� ���� ��� ��?��

������������� �������� ������ ���������� �� � � -� �

������� ���� �� ��� "10�2 ��� "C0� �� "0 �������� �� ��

��� ���� ���� ��� ���8�� ��� �� ��� ���� �� ���� �� �����

������������ �B��������� �� ���� ���%�� ��� ���� �� �� � "0����� ���� ��������� ��������� ���� �� � ����� ���� ���

������� ��� ��� ��� �����������!�� �������� � �*������� ��� ������ �� � � -( ��� "10��

���� �� ���� ���/& �������� �� ���� ���3& >������� �� ���� ���$���

.�� ���8�� � � -( ���� � ���+���� ��� ���� �� �#�����#�#

��������� �'.��� ��������#��������� ���������� ����#���� ��#

�������� �1!"� 1 �� ���� ���%�� D������� ��� ��������� �� ���

"10�� ���� ������ �������� ���� �� � ������ �������������������� � ��� �������� �� � � ��� ���� �� �����������

�� ������ ��������� �C� �� ���� ���%�� D��� �� ������ ����

������� ����� ���� �*������� �� ��� ��� �� ���� ���

����������� ��� ������ ������� !�� �������� � � ��# ��� ���#��+���� ��� ��� �� �� ������ � � � �� �� ��� �� ����� ������ �� �� ��� ����� ������ ���� ������ ���������� �� ������#

�� ���� ��������� � ��� ������� ������

���������� ������������ �� �� !��"" ����� �������� �� ��(��� ����� ��������

�������� �������� ��� �� ���������� ��� ��; ��� ��� �� ����� �� �������� �� ��� ��� ������� � ��� �4-� 9��� �� ��� ����

�� ��� �������� ��� ��� ��� ������ �� �� ��G �������� �������

�������� �4- ���� �� �� � �� ����� ��������� ���� ��� ������� ? ��

������� ��� �������� �� ��� ���� ��������� !�� � �� ����� ������ �

���� ��������� � "0� �"��� < 0���#"���� ��%2�� ��� ��� ��� ��

��� � ���� �� � 0�/7 ����� ����� � ,"3 ��������� ������ �� ���� ���=��

!�� �������� �� � ������ � � � �� � 8���� �� �� �� � ����

���� �� ��� ������ ���� � ��������#�� �� ������� �� � ��� ���

����������� �1��� < 9� ���� ���/�� A��� ����� ��� ���� ��; ����� ��������� ��� �� � �� ����� �������� �� ��� �����

��������� � ��������� ����� � � ���� ���� ���������� �� ����� �

����� � ������������ ���� ���� ��� ���� �������� ���� ���� �� ��8 ���

���� � ����� �������� �������� �� ������ ��������� ���� �����

1���$���#����

>� ����8 .� D��� )����� .� D��� ���6 ��� .� L����8� B���� ����� D�88��� )������ ������ �� .����� ��� ���� �������� ����������!�� ���������� ��� � ������� � ���� � ����#�#�� ��� �����+�-������� �� "���� ���� ���� ��� .���� �� 4� ������ ������� ���������� 0 �� ��� H����� ��� ���� � ������ 0��������� A ��� ��� "������������� ��� !�������� ���� ��� ������ ��� !�������� ������ H�����

1����,� ���

0A� ������ +���& �!� �� ������� �#�����������& ,"3� ������ ��2�(#������������& 1!�� ����#���� ���������& 1!"� ����#���� ����������&� � -� ����������� �� ������ ��������& '.��� �#�����#�#���������&"0� " �8�?� ����& "A� �������� +���& "C0� ������ 8���� 0& "10������������� 0& ���J"� 4� ��� � ������ � ������J����������� �����������������& �4-� ������ ���������� ���� � ��

:�������

���� !�� � ������ D�� '���� D�� ��������� -�� .6 ��� '� < '�8����� ������/� .���� ��� ���������6���� �� � ����� ����������� �� �������������� � � -( �� ���� �� ������ ���������;0�/7 ����� ������ ����� ��%��� �&���� ���� �3 35�J�3 35$�

���� ��� C���� .�� 0���� 0�� �������� .�4�� A�*� ���� D��� �� C��R������� !��� < !�������� �� ����2� ��+���� ���������� ����#����

4*���#? ������� �����6���� �� �� ��� ��� %��

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/

��������� ��� ������ ����� ������� � � � -� � ���� ���� ����� ���3%%J3$$�

���������� ��.� ���$$� !�� � �������� ������� �� �������� ���������� ��'&����� �(����� ���� �J3%�

9� ��� ��� ' ����� R�� -������� H���9�� . ������ 4�� .�,������ -���H� <������ "� ����3� !�� ����������� �� ������ �������� �� � -��� ������������� �� ��������� �������� �� �� ����� � ���� ������ ���������� � �� ������ �������� ����� ��� %%�J%$%�

9������� .�H� ����3� ,������ ������������ ��� ���� � ��������� �������� 3�(J3/(�

9��������� -��� < ������ H�,� ����%� )����������� �������� ���+�������� ������� � ����: ����� ���� ����� ��� ������� ������ )���� ����%���� �� �2J/=�

0��� ��� A�� 9����� R�,�� ������ 0�D�� ������ D�� A����� �� A�� 9���� A��A���6#9����� C�� -������ ��� .�������� N�� 0����Q� A� < 0���������� �1� 0��Q���� A� ����2� .���� ��+�� ��� �������� �� ������ ������� ���� ���8�� � � -�� ������ ��� /3%J/23�

�������� D�� !������� H�� 0����� .� � < 1��8���6� -�H� ������ .���������� ��� ��� �� � �� �����#�������������#������� ���������� $�������� %��&���� ��� 5(3J5$$�

4*���� H�D� ����5� -�� ����� �� ������������� ������������� ���������� �� �������������� ��� ����� ������� ��8�� �� ��������$���� ���� '&������ )*����� �� 2$�J(=��

A������ H�#.�� >������� B�� >��6��� �� < 9��8�� �� ����$� ������#����+� �����6���� �� '.�� ��� �9�� �������� � � ��� �������� �������#�������� �� �������������� �� �� � ������ ��� ��2J/�=�

A 8��� .�� >�������� .� < ,�� �� L� ����$� "��������� ? ������������6���� �� "��;��" ������ ���� �� �������� � �������������� ������ ��� ��������#���������� �� �������������� +�� �������$����� ��� 32=�

����� �� � ���$%� �������: ������ ��� �� ��������#��������� �������$���� ���� %��&���� ��� 5�(J52��

D� ����� C�.�� C ?���� H�1�� ������ !�1�� D�������� 9���� BKD���� "�H��. ������ 4�-�� ������� >� < D����� A��� ������ 0������ �*�������� ������� ��� �� �� �� � ������#�� ���� �� ������ �������� ���� ��� �����+������� ���� �3�$J�3/��

D ���� A�1�� L������ L�� '�8������� D�� L� �� ,,,� >��� < D ���� C�#"����$$� ,�� ������������ �����6���� �� ������ 8���� 0 ��6��� ���� ����� �� �������� � 2%32J2%22�

C���� .�� D�������� C�� 0���� 0�� ��������� ��� ���� ��� C ������ D��>�������� .�� ,�� �� L� < !�������� �� ����(� ,������ �������������� � ��� ���������� ����������� � "C0� � ���� ���� ����� ��//3J�/3��

C���� .�� D�������� C�� C ������ D�� >�������� .�� ,�� �� L�� ���� �� <!�������� �� ����%� "�������� � ����� ������ +��� ��������� ������������ " �8�?� ����� � ��� ���8�� � � -�� ����� �� %�J%��

C���� .�� D�������� C�� >�������� .�� C ������ D�� B���������� ��� H����D�� > � L�� H �� C�� ���� D�#��� ,�� �� L�� ����� .�,� < > � �� ����$�"����������� 0 �2 � ����+���� ������� � ������ +��� �������������� � ��� ��������� �������� �� '�� ���� $���� +��� ,+$� ����( %/2J�( %/��

C�� ��� H �� C���� 1��� ��9�� C���� '�# �� .�� ����� C�� L�#D�� - � ��D���� � "�# � < ���� D�#�� ����%� "����������� 0 ��6��� ����������� ��� �� ����+� �� ������������ ���������� ������ �� /�=J/�3�

1�������� ����� ���#.��������� .�� .��� ����� ��� 9��������� 1��)���� ��� >�������� -�H� < B�������� B�"� ����%� ���������� �����6������ �/ �� ������ ��������� � ��� ��� �������� �: ���*������� ��� �."���������� � �������� +���#���� ������� ��� ������� ���� ������ +���#���� �������� �� �������� ��� $32J$2/�

1���� .�H� < 9� ���� D�-� ����/� �������� �� ��� � � � �� �� � � ���������� ������ �� �� ������� ���� �� ����������� ��� �������� ����� �� ����%���� ���� �/�%J�3=%�

1���� B�D�� -������ ��� '�H�� A���� ��1� < -������� -�H� ���(�� "��������� ������ ��� ��� ���� ������ �������� �� %��� �&���� ��� /5(J/%(�

1 � L�#.�� H�� R�� H�� �� 0�� D��������� H�!�� ����� -�� >�?����6� H�.� <-����� H�0� ����%� .�� ���8�� ����������� �� ������ �������� ( ���������� ������� ��� ��� ��� 0�� ����#���� ���������� �1!"� � ������� 0�3 1!"� �� �������� ��� (��5J(/=(�

1 ?�Q�� -�� ' ����� R�� -������� H���9�� ��������� -� < ������ "� ����5�"�������� ������� �� ����������� �� ������ ��������� � � -� ���� � -( �� �������� ��� ������� ����� � ��� ��� �������� �� ��� ���������� � �2$$J�(==�

1 ?�Q�� -�� -������� H���9�� ��������� -�� B���� D� < ������ "� ����%����������� ������ �������� ����� ��� �� ����������� �� ������

��������� � � -��� � � -/ ��� � � -(� ������� �� �� ������������������� ����� �� �&��� ��������� �� /��J/2��

.���� *� "�� .������� A�� N������������� H�#H�� .������ � < 4��� *� 0�����/� ,�� ������������� ����� ��� �� �� ���� �������� ��� #������� ��; ��� � ��� �� �� ��� ����� ����������� ��� 3��J3�5�

.����� 1�H�� 9���8������ 0���� D ����� -�1� < "���� ��1� ����/� 0��� ��������6���� �� � ����������� �� ������ �������� � ��� ����� ����� ��/(�J/%=�

.�� � .�� !������ L�� !� ����� C�� ��������� -� < '�8����� �� ��������� ���� ��� �*������� �� � ����������� �� ������ ��������� ������ ��%5=J%5(�

.���� .�� D�������� C�� B���������� ��� ����� .�,� < C���� .� ����$���+���� ���������� 1!� � ��� ���8�� ��� � � � �� �� ������������ ������ �� +�� ������� $����� ��� �(%=�

.��� D�� .������ !�� >�������� .�� � 6 8� '�� !�8� ��� '�8�� ��� C��L��� !�� C ���� 4�� !�8������ !�� ,�� �� L�� ��8� ��� C� < .����� .�����$� -��� �� ��� �����*�#������� ����� �� ��� � -/ � � �� ������� �����6���� �� ��� '.�� �������� ������� � ���� ����� ���(%�J($=�

'�8����� �� ����2� .���������� �� ������ ���������: ������ �������������� ������ ��� �������� ����� �� �=3�J�=3%�

'���� 4�H� ����(� D����������� �������: �����6��� �� �������������������� ����� �� /2�J/(%�

'��6 8�� L� ���$$� !�� ����� ��� ����������� �� ������ 8���� 0 ��� ���������� ��� ���� ��� ��� ������ ������ �� 55�J55(�

' ����� R�� . ������ 4�� ������ "� < ������ "� ����2� � ����������������� �� ����������� ��� �������� �� ������ ��������� �� ��������� �� ������ �����6����� ����������� ��� 2/�J2/%�

B���������� ��� D�������� C�� >�������� .�� � �� >�� C ������ D��!�������� -�A�� ,�� �� L�� C���� .� < ����� .�,� ����%� ,������ ����������������� ��� ��������� � ����� ������ +��� ��������� ������������ " �8�?� ����� � ��� ���8�� ��� '�� ���� $���� +��� ,+$���� �2 =$�J�2 =�2�

B�������� B�"� < 1�������� ���� ����$� B����6���� �� �� ������ ��������� ����� ������� ��� �� �������� �� //��J///2�

"���� ��1� < 0���#"���� N� ���%2� �������� ���*� �������� '�� L��8�"�� H�#"� < � ����� -� ����(� !�� ����������� �� ������ ������������� �� �� ��� � ������� ��� &�����-�� �� �J/5�

����� '�� C88���� )�� '��6 8�� L� < !���8�� 0� ���$$� ����� ��� �������� 8���� 0#�8� �� ��������� �� ���� � ��� ����� �� �������� �35�J3$/�

������ !�� -���� 0���� N���� ��� � ���������� ��� "�66��� !�� ������ ��D� <.�������� H� ����=� !�� ������ ��2�(#������������ �������� � ����������" �8�?� �����: � �������� �� ������ ������� ������� ������������ � ��4- � ������������� �� ���� %���� ���� 5�(J5/2�

��������� -�� '�8����� �� < .6 ��� '� ����/� ����� ��� �� ��� �-'���� � ����������� �� ������ �������� �� � -�� � ��� ������� ����� ������: �� � �� ����6���� �� � � �� �� ��� ��������� ���� �� �� ������� ��� �/�J�3(�

��������� -�� '�� ��� ��� B���� D�� � ������ D�� '�8����� �� < .6 ���'� ����3� ,�� ������������� �����6���� �� � ����������� �� ��������������� � � -(� � ��� ��� ����� ������� (����� ��� (3J(%�

����� .�,�� ����������� .�"� < � ���� '� ������ ������ �� ������� ������ ������ ����� +������� ���� $=/J$=$�

����������� .� < ����� .�,� ����=� ������ ������: � ������ ����� �� �� � ��� � ������� � ����������� ��� ������������� '�� ���� $���� +���,+$� �� ���3J���%�

>�������� .�� '�8�� ��� .�� ����� C�� C���� .�� ����� .�,� < ,�� �� L�����$�� "������� �� �*������� ��� ��� �-'� ������������ �� ��� �� �������� �� ������������ 0� � �� �� ����� ��� �� �������� ��� /=�5J/=/(�

>�������� .�� A 8��� .�� ��8� ��� C�� .������ !�� .����� .� < ,�� ��L� ����$�� �������� ������ �� '.�� �������� ������� � � ��� � �������� � � �� � ����� +���#������� ����� �� ��� ���������� 0�3� �+���� ��� �� �������� ��� 2%$J2$%�

>������������ "�9� ����$� 1�� ���+������ ��� �������� �������� �� �� %��� +�-���� ���� ��� �� �/(J�3(�

>�8�� !�.�� �������� "���� ����������� .�"�� �����8� N�R� < ����� .�,������� 0��������6���� �� #������ � � � ��� � ��� � �����: �*�������� � ��� ��� � ��� � ������� ��� ����������� ���� ����� '�� ����$���� +��� ,+$� � �= =2�J�= =(3�

L� �� ,,,� ��>� ���$$� 4*������� �� ����� ���� � � ����� �� �� ������8���� 0 ����� � ����� �� ��� ��� ������ �� �&��� ��������� �� ��%J��2�

%�/ H� !���8� �� ���

� /=== 4 ������ '� �������� ���������� �� ��� ����� � ����������� ��� %$�J%�/