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Cursos de capacitacin y actualizacin para la prevencin y vigilancia de EETs Etiologa y diagnstico de las Encefalopatas Espongiformes Transmisibles de los animalesLaboratorio de Referencia para EET de los AnimalesCentro de Investigacin en Ciencias Veterinarias y Agrcolas - INTA Castelar
Origen de la EEB
Garrapatas, organoclorados????
Enfermedad espontnea????
Origen extico????
Origen humano???? (Colchester & Colchester Lancet. 366, 856; 2005).
Hiptesis sobre el origen Scrapie Scrapie?
Ovino:gen SipsA/sA 150-200 dassA/pA300 daspA/pAPRNP1936: Transmisin experimental de ScrapieScrapie: enfermedad gentica?
Agente etiolgico
Caractersticas del agente de EET
-Hay cepas -Barrera de la especie-Tamao similar a virus
-No hay respuesta de anticuerpos-Resistencia (calor, radiaciones, nucleasas)-Sensibilidad parcial a proteasas-cido nucleico?
(tiempo de incubacin, lesiones SNC)
Modelo de agente de TSEDebe explicar-Falta de respuesta de anticuerpos-Existencia de cepas (tiempo de incubacin, lesiones)-Barrera de la especie (transmisin estocstica)
Calor hmedo121 C, 1 atm, 20 minIncompleta133 C, 3 bar, 20 min
Calor seco138 CIncompleta
Mtodos qumicos
Hidrxido de Sodio 1N, 24 hsHidrxido de Sodio 2N, 2 hsHipoclorito de Sodio 12 hs
Inactivacin del agente de EEB
Agentes hipotticos de "Scrapie" VirusLentosNo convencionales "Virino
Agentes no convencionalesPRIONES
Hipotticos
Alper et al., BBRC 22: 278 (1966)Pattison & Jones, Vet Rec 80: 2 (1967)Griffith, Nature 215: 1043 (1967) Merz et al., Acta Neuropathol 54: 63 (1981)SAF: Scrapie Associated Fibrils
PrP
Pequeas partculas proteinceas que resisten la inactivacin por mtodos que modifican cidos nucleicosPrionesStanley B. Prusiner. Science 216: 136-144, 1982 PrPC: protena normal del huespedPrPSc: protena patognica de Scrapie
Isoformas de PrPNormal PrPC (33-35 kD)
Asociada aenfermedad PrPSc (33-35 kD)
PrP27-30 (27-30 kD)
Proteinasa KDetergente ++--
Isoformas PrPC y PrPScPrPCPrPScDetergentessolubleinsolubleProteasassensibleresistente(PrP27-30)-hlice (%)4230hoja (%)343
Modelo de nucleacin-polimerizacinPrPC PrPSc(Equilibrio entre las dos isoformas)Nucleacin(muy lenta)Incorporacin de monmros PrPSc (rpida)Ncleo infecciosoEstructuraamiloideFragmentacinen ncleos infecciosos
PrP Tiempo de incubacin Aos Diagnstico preclnico No Prevencin No Signos clnicos Neurolgicos Tratamiento No Cura No Evolucin Rpida Desenlace Fatal Diagnstico definitivo Post mortemEncefalopatas Espongiformes Transmisibles
108189LFTVMurinoBovino86Octapptidos136AV142154HR171QRHOvinoIMCaprinoELW/00Polimorfismos en PrP animalesScrapie:95% QQ171
Esquema del gen PRNP de los ovinos
Polimorfismo del gen PRNP
Alelos y genotipos ms frecuentes del gen PRNP
Nivel de RiesgoPolimorfismoRAZASR1ARR / ARRCharollais, Bleu de Maine, Bluefaced Leicester, Hampshire, Suffolk, Blackface, Cheviot, TexelR2AHQ / AHQARR / AHQBluefaced Leicester, Blackface, Cheviot, TexelR3AHQ / ARQBluefaced Leicester, Blackface, Cheviot, TexelAHQ / ARHARR / ARHTexelARR / ARQ*Charollais, Bleu de Maine, Bluefaced Leicester, Texel Blackface, Cheviot, Hampshire , Suffolk R4VRQ / ARRBlackface, Cheviot, TexelVRQ / ARHCharollais, Bleu de Maine, TexelVRQ / AHQBlackface, Cheviot, TexelARQ / ARQCharollais, Bleu de Maine, Blackface, CheviotARQ / ARHARH / ARHTexelR5VRQ / VRQVRQ / ARQCharollais, Bleu de Maine, Blackface, Cheviot,Texel
Grupos de riesgo de adquisicin de Scrapie por resistencia / susceptibilidad gentica
GenotipoGrupo NSPGrado de resistencia / susceptibilidadARR / ARR1Ninguna restriccin para su reproduccinARR / AHQARR / ARHARR / ARQ2Ninguna restriccin para su reproduccinAHQ / AHQARH / ARHAHQ / ARHARQ / ARHARQ / AHQARQ / ARQ3Dependiendo de la raza, tiempo mximo para su venta o uso limitado para su reproduccin en campos asociados a NSPARR / VRQ4Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovinoARQ / VRQARH / VRQAHQ / VRQVRQ / VRQ5Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino
Determinacin de las frecuencias de genotipos
Determinacin de las frecuencias de los diferentes alelos
Determinacin de las frecuencias de los grupos de riesgo
GenotipoGrupo NSPGrado de resistencia / susceptibilidadPorcentajeARR / ARR1Ninguna restriccin para su reproduccin16,38ARR / AHQARR / ARHARR / ARQ2Ninguna restriccin para su reproduccin25,25AHQ / AHQARH / ARHAHQ / ARHARQ / ARHARQ / AHQARQ / ARQ3Dependiendo de la raza, tiempo mximo para su venta o uso limitado para su reproduccin en campos asociados a NSP50,51ARR / VRQ4Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino1,36ARQ / VRQARH / VRQAHQ / VRQVRQ / VRQ5Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino6,48
Cepas de Scrapie20 definidas por pasaje en ratn- Nor 98: aislada de casos de campo:
Definida por:- Clnica- Histopatologa- R en 171: susceptible
Casalone et al. Proc Natl Acad Sci 101:3065, 2004 Cepas de BSEBASE: Bovine Amyloidotic Spongiform Encephalopathy1: Italia
Biacabe et al , EMBO reports, 5: 110, 2004Molecular analysis of ovine prion protein identifies similaritiesbetween BSE and an experimental isolate of natural scrapie,CH1641. Hope et al., J Gen Virol. 80: 1, 1999Distinct molecular phenotypes in bovine prion diseases
Diagnstico de EET
Solamente en el post mortem
Test del tercer prpado (in vivo) para scrapie
-Histopatologa
-Deteccin de PrP:
InmunohistoqumicaSAF Western Blot ELISA
Histopatologa(Lesin espongiforme)Inmunohistoqumica(Depsitos de PrP)
En ovinosSAF: Scrapie Associated Fibrils
Medula Oblongata (Regin del Obex)1) Mdula espinal2) Cerebro3) Regin del Obex4) Area utilizada para WB/ELISA5) Muestra de eleccin
Tests rpidos
Scrapie- IDEXX Herdchek- InPro CDI-5BSE-Prionics Check Western-Prionics LIA-TeSeE (BioRad)-CDI InPro- CediTect BSE Test- Enfer TSE Kit version 2.0, automated sample preparation- IDEXX HerdChek BSE Antigen Test Kit, EIA- Institut Pourquier Speedit BSE- Prionics Check PrioSTRIP- Roboscreen Beta Prion BSE EIA Test Kit- Roche Applied Science PrionScreen
Mtodos utilizados en el Programa de Vigilancia de Argentina
Test rpidos:-Western blot (Prionics)
- Enfer TSE (ensayo piloto-2003)
Deteccin de PrPSc en sangre (Scherr et al., J. Chromat 697: 223, 1997) Unin de PrPSc a plasmingeno en soporte slido (Fischer et al., Nature 408: 479, 2000)Deteccin de PrPSc en orina (Shaked et al., J Biol Chem 276: 31479, 2001) Protein misfolding cyclic amplification(Saborio et al. Nature 411: 810, 2001) Deteccin de secuencias cortas de ADN asociadas a EET en sangre ( Schtz et al, Clin Diagn Lab Inmunol. 12 (7): 814-820, 2005)
Algunos mtodos en estudio (in vivo)
Laboratorio de referencia para el diagnstico de EET de animalesB. J. Carrillo F.J. Blanco Viera E. L. WeberM. AlegreF. CapellinoF. DelgadoS. DuffyD. FunesL. JimnezE. LenA. MarcosS. MartnezG. PintoC. SotoC. VallejosC.HirschvogelA. MarcosG. FigueroaS. CarcellerA. Elisei
Centro de Investigacin en Ciencias Veterinarias y AgronmicasCastelar
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