“ Cursos de capacitaci ó n y actualizaci ó n para la prevenci ó n y vigilancia de EETs” Etiología y diagnóstico de las Encefalopatías Espongiformes Transmisibles

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  • Cursos de capacitacin y actualizacin para la prevencin y vigilancia de EETs Etiologa y diagnstico de las Encefalopatas Espongiformes Transmisibles de los animalesLaboratorio de Referencia para EET de los AnimalesCentro de Investigacin en Ciencias Veterinarias y Agrcolas - INTA Castelar

  • Origen de la EEB

  • Garrapatas, organoclorados????

    Enfermedad espontnea????

    Origen extico????

    Origen humano???? (Colchester & Colchester Lancet. 366, 856; 2005).

    Hiptesis sobre el origen Scrapie Scrapie?

  • Ovino:gen SipsA/sA 150-200 dassA/pA300 daspA/pAPRNP1936: Transmisin experimental de ScrapieScrapie: enfermedad gentica?

  • Agente etiolgico

  • Caractersticas del agente de EET

    -Hay cepas -Barrera de la especie-Tamao similar a virus

    -No hay respuesta de anticuerpos-Resistencia (calor, radiaciones, nucleasas)-Sensibilidad parcial a proteasas-cido nucleico?

    (tiempo de incubacin, lesiones SNC)

  • Modelo de agente de TSEDebe explicar-Falta de respuesta de anticuerpos-Existencia de cepas (tiempo de incubacin, lesiones)-Barrera de la especie (transmisin estocstica)

  • Calor hmedo121 C, 1 atm, 20 minIncompleta133 C, 3 bar, 20 min

    Calor seco138 CIncompleta

    Mtodos qumicos

    Hidrxido de Sodio 1N, 24 hsHidrxido de Sodio 2N, 2 hsHipoclorito de Sodio 12 hs

    Inactivacin del agente de EEB

  • Agentes hipotticos de "Scrapie" VirusLentosNo convencionales "Virino

    Agentes no convencionalesPRIONES

    Hipotticos

  • Alper et al., BBRC 22: 278 (1966)Pattison & Jones, Vet Rec 80: 2 (1967)Griffith, Nature 215: 1043 (1967) Merz et al., Acta Neuropathol 54: 63 (1981)SAF: Scrapie Associated Fibrils

  • PrP

    Pequeas partculas proteinceas que resisten la inactivacin por mtodos que modifican cidos nucleicosPrionesStanley B. Prusiner. Science 216: 136-144, 1982 PrPC: protena normal del huespedPrPSc: protena patognica de Scrapie

  • Isoformas de PrPNormal PrPC (33-35 kD)

    Asociada aenfermedad PrPSc (33-35 kD)

    PrP27-30 (27-30 kD)

    Proteinasa KDetergente ++--

  • Isoformas PrPC y PrPScPrPCPrPScDetergentessolubleinsolubleProteasassensibleresistente(PrP27-30)-hlice (%)4230hoja (%)343

  • Modelo de nucleacin-polimerizacinPrPC PrPSc(Equilibrio entre las dos isoformas)Nucleacin(muy lenta)Incorporacin de monmros PrPSc (rpida)Ncleo infecciosoEstructuraamiloideFragmentacinen ncleos infecciosos

  • PrP Tiempo de incubacin Aos Diagnstico preclnico No Prevencin No Signos clnicos Neurolgicos Tratamiento No Cura No Evolucin Rpida Desenlace Fatal Diagnstico definitivo Post mortemEncefalopatas Espongiformes Transmisibles

  • 108189LFTVMurinoBovino86Octapptidos136AV142154HR171QRHOvinoIMCaprinoELW/00Polimorfismos en PrP animalesScrapie:95% QQ171

  • Esquema del gen PRNP de los ovinos

  • Polimorfismo del gen PRNP

  • Alelos y genotipos ms frecuentes del gen PRNP

    Nivel de RiesgoPolimorfismoRAZASR1ARR / ARRCharollais, Bleu de Maine, Bluefaced Leicester, Hampshire, Suffolk, Blackface, Cheviot, TexelR2AHQ / AHQARR / AHQBluefaced Leicester, Blackface, Cheviot, TexelR3AHQ / ARQBluefaced Leicester, Blackface, Cheviot, TexelAHQ / ARHARR / ARHTexelARR / ARQ*Charollais, Bleu de Maine, Bluefaced Leicester, Texel Blackface, Cheviot, Hampshire , Suffolk R4VRQ / ARRBlackface, Cheviot, TexelVRQ / ARHCharollais, Bleu de Maine, TexelVRQ / AHQBlackface, Cheviot, TexelARQ / ARQCharollais, Bleu de Maine, Blackface, CheviotARQ / ARHARH / ARHTexelR5VRQ / VRQVRQ / ARQCharollais, Bleu de Maine, Blackface, Cheviot,Texel

  • Grupos de riesgo de adquisicin de Scrapie por resistencia / susceptibilidad gentica

    GenotipoGrupo NSPGrado de resistencia / susceptibilidadARR / ARR1Ninguna restriccin para su reproduccinARR / AHQARR / ARHARR / ARQ2Ninguna restriccin para su reproduccinAHQ / AHQARH / ARHAHQ / ARHARQ / ARHARQ / AHQARQ / ARQ3Dependiendo de la raza, tiempo mximo para su venta o uso limitado para su reproduccin en campos asociados a NSPARR / VRQ4Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovinoARQ / VRQARH / VRQAHQ / VRQVRQ / VRQ5Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino

  • Determinacin de las frecuencias de genotipos

  • Determinacin de las frecuencias de los diferentes alelos

  • Determinacin de las frecuencias de los grupos de riesgo

    GenotipoGrupo NSPGrado de resistencia / susceptibilidadPorcentajeARR / ARR1Ninguna restriccin para su reproduccin16,38ARR / AHQARR / ARHARR / ARQ2Ninguna restriccin para su reproduccin25,25AHQ / AHQARH / ARHAHQ / ARHARQ / ARHARQ / AHQARQ / ARQ3Dependiendo de la raza, tiempo mximo para su venta o uso limitado para su reproduccin en campos asociados a NSP50,51ARR / VRQ4Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino1,36ARQ / VRQARH / VRQAHQ / VRQVRQ / VRQ5Prohibido su uso para reproduccin dentro del plan NSP, tampoco para su venta. Reglamentacin de castracin / sacrificio del ovino6,48

  • Cepas de Scrapie20 definidas por pasaje en ratn- Nor 98: aislada de casos de campo:

    Definida por:- Clnica- Histopatologa- R en 171: susceptible

  • Casalone et al. Proc Natl Acad Sci 101:3065, 2004 Cepas de BSEBASE: Bovine Amyloidotic Spongiform Encephalopathy1: Italia

  • Biacabe et al , EMBO reports, 5: 110, 2004Molecular analysis of ovine prion protein identifies similaritiesbetween BSE and an experimental isolate of natural scrapie,CH1641. Hope et al., J Gen Virol. 80: 1, 1999Distinct molecular phenotypes in bovine prion diseases

  • Diagnstico de EET

  • Solamente en el post mortem

    Test del tercer prpado (in vivo) para scrapie

  • -Histopatologa

    -Deteccin de PrP:

    InmunohistoqumicaSAF Western Blot ELISA

  • Histopatologa(Lesin espongiforme)Inmunohistoqumica(Depsitos de PrP)

  • En ovinosSAF: Scrapie Associated Fibrils

  • Medula Oblongata (Regin del Obex)1) Mdula espinal2) Cerebro3) Regin del Obex4) Area utilizada para WB/ELISA5) Muestra de eleccin

  • Tests rpidos

    Scrapie- IDEXX Herdchek- InPro CDI-5BSE-Prionics Check Western-Prionics LIA-TeSeE (BioRad)-CDI InPro- CediTect BSE Test- Enfer TSE Kit version 2.0, automated sample preparation- IDEXX HerdChek BSE Antigen Test Kit, EIA- Institut Pourquier Speedit BSE- Prionics Check PrioSTRIP- Roboscreen Beta Prion BSE EIA Test Kit- Roche Applied Science PrionScreen

  • Mtodos utilizados en el Programa de Vigilancia de Argentina

    Test rpidos:-Western blot (Prionics)

    - Enfer TSE (ensayo piloto-2003)

  • Deteccin de PrPSc en sangre (Scherr et al., J. Chromat 697: 223, 1997) Unin de PrPSc a plasmingeno en soporte slido (Fischer et al., Nature 408: 479, 2000)Deteccin de PrPSc en orina (Shaked et al., J Biol Chem 276: 31479, 2001) Protein misfolding cyclic amplification(Saborio et al. Nature 411: 810, 2001) Deteccin de secuencias cortas de ADN asociadas a EET en sangre ( Schtz et al, Clin Diagn Lab Inmunol. 12 (7): 814-820, 2005)

    Algunos mtodos en estudio (in vivo)

  • Laboratorio de referencia para el diagnstico de EET de animalesB. J. Carrillo F.J. Blanco Viera E. L. WeberM. AlegreF. CapellinoF. DelgadoS. DuffyD. FunesL. JimnezE. LenA. MarcosS. MartnezG. PintoC. SotoC. VallejosC.HirschvogelA. MarcosG. FigueroaS. CarcellerA. Elisei

    Centro de Investigacin en Ciencias Veterinarias y AgronmicasCastelar

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