注 2 大腸菌 TOP10 の genotypeF-mcrA ∆(mrr-hsdRMS-mcrBC)Φ80lacZ ∆ M15 ∆lacX74 recA1 deoR araD139 ∆(ara-leu)7697 galUgalK rpsL (StrR) endA1 nupG

注 5 大腸菌 DH5αの genotypeF-Φ80lacZ ∆ M15 ∆(lacZYA-argF) U 169 deoR recA1 endA1 hsdR17 (rK

-, mK+) supE44 λ- thi-1

gyrA96 relA1

注 1pCR-Blunt II-TOPO の遺伝子配置；別紙参照

注 3pSYNGCH の遺伝子配置；別紙参照

注 4pSC11 SBANK の遺伝子配置；別紙参照

SARS ウイルスゲノム RNA

RT-PCR スパイク蛋白質遺伝子 DNA

topoisomerase I によるpCR-Blunt II-TOPO 注 1 への挿入

大腸菌 TOP10 注 2 の形質転換

pSYNGCH 注 3 の EcoR I サイトとXho I サイトとの間への挿入

大腸菌 DH5α注 5 の形質転換

pSC11 SBANK 注 4 の Kpn I サイトと Not I サイトとの間への挿入

昆虫細胞への導入

野生型バキュロウイルスの感染

CV1 細胞への導入

野生型ワクシニアウイルスの感染

マウスへの感染

実　験　の　概　要

pCR-SARS-spike

大腸菌 DH5α注 5 の形質転換

スパイク蛋白質遺伝子 DNA スパイク蛋白質遺伝子 DNA

pSYNGCH-SARS-spike pSC11-SARS-spike

組換え体ワクシニアウイルスの作製

スパイク蛋白質特異的プライマーを用いた PCR

昆虫細胞およびカイコへの接種

SARS スパイク蛋白質の精製

マウスへの接種

組換え体バキュロウイルスの作製

組み換え体バキロウイルス 組み換え体ワクシニアウイルス

血中の抗 SARS スパイク蛋白質抗体の定量

Kpn I と Not I によるスパイク蛋白質遺伝子 DNA の切り出し

注 1PCR 断片クローニング用ベクター pCR-Blunt II-TOPO

注 3バキュロウイルス transfervector pSYNGCH

注 4ワクシニアウイルス transfervector pSC11 SBANK