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SIGNIFICACION CLINICAEl cido rico es un metabolito de las purinas, cidos nu-cleicos y nucleoprotenas.Habitualmente la concentracin de cido rico en suerovara de un individuo a otro de acuerdo a diversos factorestales como: sexo, dieta, origen tnico, constitucin gentica,embarazo.Niveles anormales de cido rico en suero son ndice dedesorden en el metabolismo de las sustancias que lo ori-ginan o de defectos en su eliminacin.

FUNDAMENTOS DEL METODOEl esquema de reaccin es el siguiente:

UODcido rico + 2 H2O + O2 > alantona + H2O2 + CO2

POD2 H

2O

2 + 4-AF + 3,5-DHS > quinonimina roja

REACTIVOS PROVISTOSS. Standard: solucin de cido rico 10 mg/dl.A. Reactivo A: viales conteniendo uricasa (UOD), peroxida-sa (POD), 4-aminofenazona (4-AF) y ferrocianuro de potasio.B. Reactivo B: solucin de diclorohidroxibenceno sulfnico(DHS) en buffer fosfatos pH 7,4.

Concentraciones finalesUOD ..................................................................... 100 U/lPOD ..................................................................... 600 U/l4-AF .................................................................. 0,10 mmol/lFerrocianuro de potasio ........................................ 6 umol/lDHS ................................................................... 2,0 mmol/l

REACTIVOS NO PROVISTOSCalibrador A plus de Wiener lab.

INSTRUCCIONES PARA SU USOStandard: listo para usar.Reactivo de Trabajo: disolver el contenido de un vial deReactivo A en un frasco de Reactivo B. Enjuagar varias ve-ces el vial con Reactivo B. Mezclar hasta disolucin com-pleta. Homogeneizar y fechar.

PRECAUCIONESLos reactivos son para uso diagnstico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habitua-les de trabajo en el laboratorio de qumica clnica.Todos los reactivos y las muestras deben descartarse deacuerdo a la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOReactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. No man-tener a temperaturas elevadas durante lapsos prolonga-dos.Reactivo de Trabajo: en refrigerador (2-10oC) es estable 1mes a partir de la fecha de su preparacin.

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOSREACTIVOSDurante el uso, el Reactivo de Trabajo puede desarrollar unligero color rosado que no afecta el funcionamiento siem-pre que se procese un Blanco con cada lote de determina-ciones y un Standard peridicamente. Desechar cuandolas lecturas del Blanco sean superiores a 0,160 D.O. o laslecturas del Standard sean anormalmente bajas.

MUESTRASuero, plasma u orinaa) Recoleccin: se debe obtener suero o plasma de la ma-nera usual. Separar el cogulo lo antes posible, dentro delas dos horas posteriores a la recoleccin. Si la muestra esorina, utilizar preferentemente fresca.b) Sustancias interferentes conocidas:- Medicamentos: las sustancias fuertemente reductoras,

tales como el cido ascrbico (vitamina C), la Buscapina(butil bromuro de hioscina), etc. en dosis elevadas inter-fieren. Por tal razn debe suspenderse la medicacin,siempre que sea posible, 24 hs antes de la toma de mues-tra.

- No se observan interferencias por bilirrubina hasta 120 mg/l,triglicridos hasta 840 mg/dl ni hemoglobina hasta 180 mg/dl.

Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de lasdrogas en el presente mtodo.c) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: lasmuestras deben ser preferentemente frescas. En caso deno procesarlas en el momento, las muestras de suero oplasma, pueden conservarse 3 das a 20-25oC, 7 das a 2-10oC o 6 meses a -20oC sin agregado de conservantes.Las muestras de orina pueden conservarse 4 das a 20-25oC a pH > 8. No refrigerar ni congelar.

MATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Espectrofotmetro o fotocolormetro.- Material volumtrico adecuado.- Tubos o cubetas espectrofotomtricas de caras parale-

las.

Para la determinacin de cido rico en suero, plasma uorina

Uricostatenzimtico AACCCCC

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- Bao de agua a 37oC.- Reloj o timer.

CONDICIONES DE REACCION- Longitud de onda: 505 nm en espectrofotmetro o en foto-

colormetro con filtro verde (490-530 nm).- Temperatura de reaccin: 37oC o 18-25oC- Tiempo de reaccin: 5 minutos a 37oC o 20 minutos a 18-

25oC- Volumen de muestra: 20 ul- Volumen de Reactivo de Trabajo: 1 ml- Volumen final de la reaccin: 1,02 mlLos volmenes de Muestra y de Reactivo pueden dismi-nuirse o aumentarse proporcionalmente (Ej: 50 ul de Muestra+ 2,5 ml de Reactivo de Trabajo o 100 ul + 5 ml).

PROCEDIMIENTOEn tres tubos o cubetas espectrofotomtricas marca-das B (Blanco), S (Standard) y D (Desconocido), colocar:

B S D

Standard - 20 ul -

Muestra - - 20 ul

Reactivo de Trabajo 1 ml 1 ml 1 ml

Mezclar suavemente e incubar 5 minutos en bao deagua a 37oC o 20 minutos a temperatura ambiente (18-25oC). Retirar, enfriar y leer en espectrofotmetro a 505nm o en fotocolormetro con filtro verde (490-530 nm),llevando el aparato a cero con el Blanco.

TECNICA EN ORINAUtilizar la misma tcnica diluyendo la orina 1/10 con agua osolucin fisiolgica. Para el clculo de los resultados,multiplicar por el factor de dilucin utilizado.

ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE REACCION FINALEl color de reaccin final es estable 30 minutos, por lo quela absorbancia debe ser leda dentro de ese lapso.

CALCULO DE LOS RESULTADOS

10 mg/dlcido rico (mg/dl) = D x f donde f =

S

METODO DE CONTROL DE CALIDADProcesar 2 niveles de un material de control de calidad(Standatrol S-E 2 niveles) con concentraciones conocidasde cido rico, con cada determinacin.

VALORES DE REFERENCIAEn adultos normales, con ingesta normal de protenas, seobservan los siguientes rangos de valores:

Hombres: 2,5-6,0 mg/dlMujeres: 2,0-5,0 mg/dl

En la literatura (Tietz, N.W.) se menciona el siguiente rangode referencia:

Suero o plasmaHombres: 3,5-7,2 mg/dlMujeres: 2,6-6,0 mg/dl

Orina250 a 750 mg/24 horasSe recomienda que cada laboratorio establezca sus pro-pios intervalos o valores de referencia, teniendo en cuentala edad, sexo, hbitos alimenticios y dems factores.

CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SIAcido rico (mg/dl) x 0,059 = Acido rico (mmol/l)Acido rico (mg/24 hs) x 0,0059 = Acido rico (mmol/24 hs)

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.Otras causas de resultados errneos son:Contaminaciones: los reductores disminuyen la respuestade color, mientras que los oxidantes colorean el Reactivoaumentando los Blancos.Los detergentes, metales pesados y cianuros son inhibi-dores enzimticos.

PERFORMANCELos ensayos fueron realizados en analizador automticoEx-press Plus(*).a) Reproducibilidad: se obtuvieron los siguientes datos:

Precisin intraensayo (n = 20)

Nivel D.S. C.V.5,4 mg/dl 0,094 mg/dl 1,75 %9,6 mg/dl 0,170 mg/dl 1,78 %

Precisin interensayo (n = 30)

Nivel D.S. C.V.5,61 mg/dl 0,146 mg/dl 2,61 %9,69 mg/dl 0,232 mg/dl 2,39 %

b) Recuperacin: agregando cantidades conocidas de ci-do rico a distintos sueros, se obtuvo una recuperacinentre 97 y 101%, para un nivel de uricemia de 10 mg/dl.c) Sensibilidad: el mnimo lmite de deteccin es 0,040 mg/dly la sensibilidad analtica es de 0,473 mg/dl.d) Linealidad: la reaccin es lineal hasta 20 mg/dl. Paravalores superiores, repetir la determinacin empleando lamitad del volumen de muestras y multiplicar el resultadofinal por 2.e) Correlacin: se determin el valor de cido rico en 107muestras, utilizando Uricostat enzimtico AA de Wienerlab. y otro kit comercial basado en el mismo principio, obte-nindose el siguiente coeficiente de correlacin:r = 0,9961; pendiente b = 1,0321; interseccin a = - 0,0427

PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programacin debe consultarseel Manual del Usuario del Analizador en uso.Para la calibracin, se puede utilizar Calibrador A plus deWiener lab.

(*) Marca registrada de Ciba Corning Diagnostics

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PRESENTACION- 2 x 50 ml (Cd. 1840106).- 4 x 50 ml (Cd. 1840105).

BIBLIOGRAFIA- Chu, S.Y. - Can. J. Med. Technol. 40/5:154 (1978).- Day, J.H. - La Prensa Mdica Argentina Vol. 58 N 15:786 (1971).- Donadon, V.; Barbieri, E.; Menin, A.; Canterin, A. - LAB Vol. III

N 4:473 (1976).- International Federation of Clinical Chemistry - Clin. Chim.

Acta 87/3:459 F (1978).- Trinder, P. - Ann. Clin. Biochem. 6/24 (1969).- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",

AACC Press, 4th ed., 2001.- Henry, R. J. - Clinical Chemistry, Principles and Technics;

Harper & Row, publisher; 1964.- Tietz Fundamentals of clinical chemistry - Burtis, C.,

Ashwood, E. (5 Edition) WB Saunders, 2001.

SIMBOLOSLos siguientes smbolos se utilizan en todos los kits dereactivos para diagnstico de Wiener lab.

CCCCCEste producto cumple con los requerimientos previstospor la Directiva Europea 98/79 CE de productos sanita-rios para el diagnstico "in vitro"

PPPPP Representante autorizado en la Comunidad Europea

VVVVV Uso diagnstico "in vitro"

XXXXX Contenido suficiente para ensayos

HHHHH Fecha de caducidad

lllll Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

FFFFF Riesgo biolgico

Volumen despus de la reconstitucin

Contenido Cont.

ggggg Nmero de lote

MMMMM Elaborado por:

NocivoXn

Corrosivo / Castico

IrritanteXi

iiiii Consultar instrucciones de uso

CalibradorCalibr.

Controlbbbbb

bbbbb Control Positivo

ccccc Control Negativo

hhhhh Nmero de catlogo

G

2000 Rosario - Argentina

MMMMM Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Tc.: Viviana E. CtolaBioqumicaProducto Autorizado A.N.M.A.T.Cert. N: 2150/97

UR120514

Wiener lab.

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