9.2 apakšprojekts: “Vīrusinfekciju veicinātu autoimūno sistēmas slimībuautoimūno sistēmas slimību

imunoģenētiskā izpēte, jaunu diagnostikas un terapijas pieeju izstrāde”un terapijas pieeju izstrāde

PĒTĪJUMI LABORATORIJĀPĒTĪJUMI LABORATORIJĀ

Dr.med. Modra Murovska

IL-10 un IL-12 ekspresijas līmeņa izmaiņas plazmāIL 10 un IL 12 ekspresijas līmeņa izmaiņas plazmā RA un OA slimniekiem un kontroles grupas

indivīdiem

HemokHemokīnuīnu CCR1 un CCR2 receptorus saturošo šūnu daudzums CCR1 un CCR2 receptorus saturošo šūnu daudzums BB--šūnu šūnu subpopulācijāssubpopulācijās

B š P kti ki li d i (6) O t t īt li i ki (5)B šūnu subpopulācijas

Praktiski veseli donori (6) Osteoartrīta slimnieki (5)

CCR1 CCR2 CCR1 CCR2 nenobriedušās (CD19+nenobriedušās (CD19+, CD10+, CD27-, CD5+,CD38+) B šūnas

10,4% 5,92% 30,2% 21,1%

Plazmatiskās 2%(CD19+, CD10-, CD27+, CD5-, CD38++) B šūnas

4,18% 0,74% 25%2%

naivās (naive, CD19+, CD10 CD27 CD5+/ 8 68% 3 6% 20 8 %

19%CD10-, CD27-, CD5+/-, CD38+/-) B šūnas

8,68% 3,6% 20,8 %

(memmory, CD19+, CD10-, CD27+, CD5-, CD38+/-) B 4,23 %

1,64%50% 30,9%, , )

šūnas4,23 % 50% 30,9%

80 75.5%72%

60

70

57.1%

72%

30

40

50 44%

32%

trešā diena

sestā diena

10

20

30

8%

0RA                            OA                     Veseli indivīdi

RA pacienti Pacienti ar citiem artrītiemRA pacienti

0%

Pacienti ar citiem artrītiem

14%

86%

Pozitīvs rezultātsNegatīvs rezultāts 100%

Pozitīvs rezultātsNegatīvs rezultāts

COX2 mRNS ekspresija OA pacientu sinoviālajosCOX2 mRNS ekspresija OA pacientu sinoviālajosCOX2 mRNS ekspresija OA pacientu sinoviālajos COX2 mRNS ekspresija OA pacientu sinoviālajos audosaudos

B19 B19 infekcijas marķieri un ILinfekcijas marķieri un IL--6 ekspresijas līmenis ar B19 inficētās 6 ekspresijas līmenis ar B19 inficētās HOS šūnāsHOS šūnās

B19 infekcijas marķieri IL-6

Infecējošā deva*

ekspresijas līmeņa

pieaugums B19 DNA VP1 mRNA NS1 mRNA

(kārtas)

1000 11 pas. 2 pas. 2 pas. 1,8300 7 1 1 1 5300 7 pas. 1 pas. 1 pas. 1,5100 4 pas. 1 pas. 1 pas. 1,3

HOS šūnas inficētas ar B19 1000 v. g./šūnu sestajā dienā pēc inficēšanasg / j p(a) – Normālu un apoptotisku (bultas) šūnu ar kondensētu fragmentētu kodolu gaismas mikroskopijasmikrofotogrāfija. (b) – Normālu HOS šūnu elektronmikrofotogrāfija un (c) ‐ HOS šūnas ar hromatīnakondensāciju (bultu galvas). Skatīt Doonan and Cotter, 2008. Nogrieznis (B) = 500 nm. Nogrieznis (C) =1000 nm1000 nm.

B19 kapsīda proteīna ekspresija ar B19 inficētās HOS šūnās, noteikta ar imūnfluorescences krāsošanu  un imunoelektronmikroskopiju ar zelta daļiņām

a un b – Netiešā imūnfluorescences krāsošana: (a) – ar B19 inficētas šūnas; (b) – kontroles neinficētas HOS šūnas.Spilgta fluorescence redzama kodola perifērijā un granulāra fluorescence atsevišķu sarāvušos B19 inficēto šūnukodolos (c un d) ‐ Imūnelektronmikroskopija: Imunozelta daļiņu klasteri redzami kodola (N)perifērijā, nukleoplazmā un kodolā. Atsevišķas iezīmes atrodamas arī citoplazmā (melnās bultas norāda kodolaperifērijā, nukleoplazmā un kodolā. Atsevišķas iezīmes atrodamas arī citoplazmā (melnās bultas norāda kodolamembrānu).

Ar B19 inficētu un neīsti inficētu HOS šūnuAr B19 inficētu un neīsti inficētu HOS šūnuAr B19 inficētu un neīsti inficētu HOS šūnu Ar B19 inficētu un neīsti inficētu HOS šūnu proliferatīvāproliferatīvā aktivitāteaktivitāte

7

8

5

6

ndek

ss

3

4

Mito

tiska

iin

Infected HOS cells

Control HOS cells

1

2

0

2 3 4 6 7

Pasāžas pēc inficēšanas

BB19 19 infeinfekcijaskcijas ietekme uz HOS šūnu ietekme uz HOS šūnu proliferatīvoproliferatīvo aktivitātiaktivitāti

8000

m)

6000

7000

rporācija

 (cp

4000

5000

timidīnainko

Mock HOS cells

1000 geq

1000

2000

3000

3 H –t g q

300 geq

100 geq

0

1000

1 passage 2 passage 4 passage 6 passage 7 passage

Intakta un mutanta B19 VIntakta un mutanta B19 VP1u proteP1u proteīna ietekme īna ietekme uz HOS šūnu proliferatīvo aktivitātiuz HOS šūnu proliferatīvo aktivitāti

REZULTATĪVIE RĀDĪTĀJIREZULTATĪVIE RĀDĪTĀJI

Publicēti raksti• Kakurina N., Kadiša A., Lejnieks A., Kozireva S., Mikažāne H.,

Murovska M Cilvēka parvovīrusa B19 infekcija sievietēm un vīriešiemMurovska M. Cilvēka parvovīrusa B19 infekcija sievietēm un vīriešiem ar reimatoīdo artrītu. RSU 2010.gada Zinātniskie raksti (Internā medicīna, Ķirurģija, Medicīnas bāzes zinātnes, Stomatoloģija, 

ij ) 20 j 8Farmācija), 2011, 1.sējums: 77‐85;

• Kadiša A Bratslavska O Kakurina N Kozireva S Lejnieks AKadiša A., Bratslavska O., Kakurina N., Kozireva S., Lejnieks A., Mikažāne H., Murovska M.. Parvovīrusa B19 infekcijas nozīme reimatoīdā artrīta etiopatoģenēzē un klīniskajā gaitā. RSU 2010.gada Zinātniskie raksti (Internāmedicīna Ķirurģija Medicīnas bāzes zinātnesZinātniskie raksti (Internā medicīna, Ķirurģija, Medicīnas bāzes zinātnes, Stomatoloģija, Farmācija), 2011, 2.sējums: 126‐133.

REZULTATĪVIE RĀDĪTĀJIREZULTATĪVIE RĀDĪTĀJI

Iesniegti publicēšanai rakstiIesniegti publicēšanai raksti• Kakurina N., Kadisa A., Lejnieks A., Mikazane H., Kozireva S., Murovska M.

An evaluation of the association between the clinical activity of rheumatoid arthritis and human parvovirus B19 infection usingrheumatoid arthritis and human parvovirus B19 infection using Exploratory Factor Analysis. Medicina (Kaunas);

• Bratslavska O Kozireva S Baryshev M Russev R Alexandrov MBratslavska O., Kozireva S., Baryshev M., Russev R., Alexandrov M., Uzameckis D., Murovska M. Parvovirus B19 infection increases proliferative activity of non‐permissive cells. Virus Research, iesniegts publicēšanai (Ms. Ref. No.: VIRUS‐D‐11‐00359);

• Kadiša A., Bratslavska O., Kozireva S., Studers P., Lejnieks A., Murovska M. Parvovīrusa B19 infekcija osteoartrīta pacientiem. Pieņemts publicēšanai RSU 2011 d Zi ā i ki k i (I ā di ī Ķi ģij M di īRSU 2011.gada Zinātniskie raksti (Internā medicīna, Ķirurģija, Medicīnas bāzes zinātnes, Stomatoloģija, Farmācija). 

Konferenču/kongresu tēzes

• Kadiša A., Bratslavska O., Kozireva S., Studers P., Lejnieks A., Murovska M. Parvovīrusa B19 infekcijas nozīme reimatoīdā artrīta un osteoartrīta etiopatoģenēzē. Pasaules apvienotais latviešu zinātnieku 3. kongress un letonikas 4. kongress, Medicīnas zinātne un Latvijas latviešu zinātnieku 3. kongress un letonikas 4. kongress, Medicīnas zinātne un Latvijas sabiedrības veselība XXI gadsimtā. Tēzes, Rīga, 2011, Tēzes, p. 44;

• Parvovirus B19 VP1 protein stimulates proliferative activity of B19 non-permissive cells. Baryshev M.M., Bratslavska O., Kozireva S., Russev R., Pavlova E., Murovska M. XV International Congress of Virology 11 16 September 2011 Sapporo Japan VI PO9 3 (p 110International Congress of Virology, 11-16 September, 2011, Sapporo, Japan, VI-PO9-3 (p.110 in Final Program);

• Murovska M., Bratslavska O., Kadisa A., Kozireva S., Studers P., Lejnieks A. Parvovirus B19 infection in ostearthritis and rheumatoid arthritis patients. XV International Congress of p gVirology, 11-16 September, 2011, Sapporo, Japan, VI-PO9-7 (p.110 in Final Program); 

• Bratslavska O., Baryshev M., Kozireva S., Pavlova E, Murovska M. Stimulation of cells’ proliferative activity by parvovirus B19 VP1 protein., RSU 2011.gada Zinātniskā konference. Tēzes p 196;Tēzes, p. 196;

• Kadisa A., Bratslavska O., Kozireva S., Studers P., Murovska M., Lejnieks A. Parvovirus B19 infection in osteoarthritis patients., RSU 2011.gada Zinātniskā konference, Rīga, Latvija, 14.-15.aprīlī. Tēzes, p. 222;p , p ;

• Vainauska D., Baryshev M., Bratslavska O., Kozireva S. Increase of COX2 and NF-kB mRNA expression in coolon adenocarcinoma HT-29 cells transfected by B19 VP1u expressing plazmid. , RSU 2011.gada Zinātniskā konference, Rīga, Latvija, 14.-15.aprīlī. Tēzes, p. 137.

Apakšprojekta 9 2 izpildītājiApakšprojekta 9.2 izpildītāji

• Dr.biol. Mihails Bariševs• Dr.med. Olga Bracslavska• Prof. Valērija Groma• Dr.biol. Irina Holodņuka• Dr. Anda Kadiša• Gunita Kučere• Dr.biol. Svetlana Kozireva• Prof., Dr.med. Aivars Lejnieks• Irina Maksimova• Dr.med. Modra Murovska• Dr.med. Zaiga Nora-Krūkle• Jeļena Pavlova• Santa Rasa• Dr.med. Pēteris Studers