abstrak

Buah ekstrak kulit buah manggis ( Garcinia mangostana Linn . ) Dari mana aktif utama komponen α - mangostin , telah populer digunakan dalam suplemen makanan dan kosmetik herbal persiapan . α - Mangostin digunakan sebagai penanda analisis kuantitatif dan standarisasi baku bahan dan persiapan dari tanaman ini . Metode yang tepat untuk analisis konstituen tanaman biasanya kromatografi fase-balik cair kinerja tinggi ( RP -HPLC ) .

Tujuan ini penelitian adalah untuk mengembangkan dan memvalidasi metode RP - HPLC untuk penentuan kadar α – mangostin dalam ekstrak manggis buah kulit . Pemisahan kromatografi dilakukan pada Hypersil ® BDS C - 18 kolom ( 4,6 x 250 mm , 5 mm) pada suhu kamar menggunakan ponsel gradient fase yang terdiri dari 70-80 % dalam 0,1 % v / v asam orto fosfat pada laju alir 1 mL min - 1 dengan deteksi UV pada 320 nm. Metode ini divalidasi untuk linearitas , presisi , akurasi , batas deteksi ( LOD ) , dan batas kuantisasi ( LOQ ) . Linearitas yang diusulkan Metode ditemukan pada kisaran 10-200 mg mL - 1 dengan koefisien regresi 0,9999 . intraday dan

Studi presisi interday menunjukkan standar deviasi relatif kurang dari 2 % . Akurasi

Metode ditentukan oleh sebuah studi pemulihan dilakukan pada 3 tingkat yang berbeda , dan rata-rata

recovery adalah 100,01 % . LOD dan LOQ adalah 0,06 dan 0,17 mg mL - 1 , masing-masing. dua

sampel manggis buah kulit secara terpisah diekstraksi dan dianalisis menggunakan HPLC divalidasi

Metode . Isi serbuk α - mangostin dalam ekstrak kasar dan kering berada dalam

kisaran 8,36-10,04 dan 1,84-2,47 % b / b , masing-masing. Metode HPLC dikembangkan ini

terbukti tepat, spesifik , sensitif , dan akurat untuk penilaian kualitas rutin baku

bahan kulit buah manggis , ekstrak , dan produk .

Kata kunci : Garcinia mangostana , kromatografi cair kinerja tinggi , mangostin , kualitas

kontrol, metode validasi

pengantar

Saat ini, tanaman obat yang digunakan

seluruh dunia industri dan berkembang

sebagai pengobatan rumah dan bahan-bahan untuk

produk farmasi . Kurangnya

standarisasi dan pengendalian mutu untuk obat

tanaman masih menjadi masalah . Tampaknya menjadi

diperlukan untuk menentukan fitokimia yang

konstituen dari produk herbal dalam rangka untuk memastikan

keandalan dan pengulangan farmakologis

dan penelitian klinis untuk memahami mereka

bioactivities dan kemungkinan efek samping aktif

senyawa dan untuk meningkatkan kontrol kualitas produk

( Liang et al . , 2004) . Untuk kontrol kualitas herbal

produk , kromatografi cair kinerja tinggi

( HPLC ) adalah metode yang populer untuk analisis

obat-obatan herbal karena akurat , tepat dan

tidak dibatasi oleh volatilitas atau stabilitas

senyawa sampel ( Jandera et al , 2005; . Holcapek

et al, 2005 . ; Klejdus et al , 2007. ; Hellström dan

Mattila , 2008; Lee et al . , 2008) .

Manggis atau Garcinia mangostana Linn .

milik keluarga guttiferae dan secara luas

dibudidayakan di seluruh negara-negara Asia Tenggara ,

terutama di bagian timur dan selatan Thailand.

The kulit buah tanaman ini telah lama digunakan sebagai

obat tradisional untuk pengobatan perut

nyeri , diare , disentri , luka yang terinfeksi ,

supurasi , dan ulkus kronis ( Mahabusarakam et

al , 1987. ; Martin , 1980; Morton , 1987) . Sudah

terbukti mengandung berbagai senyawa fenolik

seperti tanin terkondensasi , anthocyanin , xanthones

dan turunannya ( Fu et al , 2007; . . Chin et al ,

2008; Maisuthisakul et al . , 2007) . beberapa studi

telah melaporkan bahwa xanthones terutama α -

mangostin ( Gambar 1 ) , yang merupakan santon utama ,

antioksidan pameran , antitumoral , antiinflamasi ,

anti - alergi , antibakteri dan

kegiatan antijamur ( Jung et al , 2006; . . Chen et al ,

2008; Chomnawang et al , 2007. ; Chomnawang et

al, 2005 . ; Gopalakrishnan et al , 1997. ;

Chairungsrilerd et al , 1996. ; Iinuma et al , 1996. ; Ee

et al , 2008. ; Nabandith et al . , 2004) . Karena nya

aktivitas farmakologi , yang populer diterapkan untuk

kosmetik herbal dan produk farmasi .

Namun, ada informasi terbatas untuk kualitas

dan penentuan kuantitas α - mangostin dalam

ekstrak manggis . Jadi , metode analisis memainkan

peran penting dalam pengendalian kualitas yang baku

bahan dan produk . Dari penelitian kami sebelumnya ,

kami melaporkan metode analisis kuantitatif α -

mangostin oleh UV - spektrofotometri dan TLCdensitometry

( Pothitirat dan Gritsanapan , 2008a ;

Pothitirat dan Gritsanapan , 2008b ) . kedua

metode yang dilakukan murah dalam hal pelarut ,

jumlah sampel dan memakan waktu, tetapi kurang dalam

akurasi dan presisi . Oleh karena itu, tujuan ini

penelitian adalah untuk mengembangkan dan memvalidasi metode HPLC

untuk analisis kuantitatif kandungan α - mangostin dalam

kulit buah ekstrak buah manggis . HPLC

sidik jari ekstrak juga dilakukan .

Bahan dan Metode

Kimia dan Reagen

α - Mangostin dibeli dari Chroma Dex

Inc ( Santa Ana , CA ) . Bahan kimia lain dan

pelarut yang digunakan dalam penelitian ini adalah kelas analitis

yang dibeli dari Labscan Asia ( Thailand )

dan M & B Laboratorium Kimia ( Inggris ) , kecuali untuk

Gambar 1 Kimia struktur α - mangostin .

95 % etanol yang diperoleh dari Cukai yang

Departemen , Bangkok , Thailand .

Bahan tanaman

Buah matang dari G. mangostana adalah

dibeli dari dua pasar lokal di Bangkok ,

Thailand pada bulan Juni 2006 . Sampel diidentifikasi

oleh Dr Wandee Gritsanapan , Fakultas Farmasi ,

Mahidol University. Spesimen voucher

(WGM0614 dan WGM0615) diendapkan di

Departemen pharmacognosy , Fakultas

Farmasi , Mahidol University, Bangkok ,

Thailand . Buah dibersihkan dan dimakan

bagian aril telah dihapus . Para rinds buah dipotong menjadi

potongan-potongan kecil dan dikeringkan dalam oven panas pada suhu 50 ° C selama 72

h . Sampel dikeringkan tersebut digiling menjadi bubuk ,

dilewatkan melalui saringan ( 20 meshs ) . sampel

secara terpisah disimpan dalam wadah udara ketat dan

terlindung dari cahaya sampai digunakan .

Instrumentasi dan kromatografi

kondisi

Metode HPLC dilakukan pada Shimadzu

Sistem HPLC SCL - 10A , dilengkapi dengan model

Pompa LC - 10AD , UV - vis detector SPD - 10A ,

Rheodyne injector dilengkapi dengan loop 20 uL dan

auto injektor SIL - 10A . A Hypersil ® BDS C - 18

Kolom ( 4.6 × 250 mm , 5 ukuran m ) dengan C - 18

Kolom penjaga digunakan . Elusi dilakukan

dengan sistem pelarut gradien dengan laju alir

dari 1 mL menit - 1 pada suhu kamar ( 25-28 ° C ) .

Tahap mobile terdiri dari 0,1 % v / v ortho

asam fosfat ( pelarut A ) dan asetonitril

( pelarut B ) . Fase gerak disiapkan setiap hari , disaring melalui 0,45 pM dan disonikasi sebelum

gunakan . Waktu berjalan total adalah 37 menit dan

Program gradien adalah sebagai berikut : 70 % untuk B 0 -

15 menit , 70 % B 75% B selama 3 menit , 75 % B 80

% B selama 1 menit , konstan pada 80 % B selama 6 menit , 80 %

B 70% B selama 1 menit . Ada 11 menit dari postrun

untuk rekondisi . Sampel injeksi

Volume adalah 10 mL sedangkan panjang gelombang

UV - vis detektor yang ditetapkan sebesar 320 nm . senyawa

yang dihitung dengan menggunakan software CLASS VP .

Preparasi Larutan Standar

Sebuah solusi stok referensi α - mangostin

standar ( kemurnian 97 % ) dibuat dengan melarutkan

sebuah akurat ditimbang 10 mg α - mangostin dalam 10

mL metanol dalam labu volumetrik . berbagai

konsentrasi larutan standar diencerkan

untuk mendapatkan konsentrasi akhir pada 200 , 100 , 50 , 25 ,

dan 10 mg mL - 1 dengan metanol .

Persiapan Sampel Solusi

Setiap sampel ( 10 g ) secara terpisah ditempatkan dalam

bidal dan diekstraksi dengan 400 mL dari 95 %

etanol dalam alat soxhlet selama 15 jam dengan 5

siklus h- 1 . Setiap ekstrak disaring melalui

Whatman no . 1 kertas saring dengan pengisapan . filtrat

terkonsentrasi di bawah mengurangi tekanan pada suhu 50 ° C

menggunakan evaporator vakum rotary . Berat akhir

dari ekstrak kasar ditimbang dan dihitung untuk

hasil . Ekstraksi masing-masing sampel dilakukan

dalam rangkap tiga .

Setiap ekstrak kering ( 10 mg ) adalah akurat

ditimbang dan ditransfer ke volumetrik 10 mL

labu . Metanol ditambahkan ke volume ( akhir

konsentrasi 1.000 mg mL - 1 ) . Aliquot dari

solusi ( 2,5 mL ) diencerkan dengan metanol dalam

10 mL labu volumetrik untuk membuat konsentrasi

250 mg mL - 1 . Sebelum analisis , solusi yang

disaring melalui 0,45 pM filter membran .

Analisis Kuantitatif α - Mangostin Konten

Penentuan kadar α - mangostin adalah

dilakukan oleh HPLC di bawah kondisi yang sama seperti

metode yang diusulkan . α - Mangostin konten dalam

ekstrak dihitung dengan menggunakan kurva kalibrasi

dengan sehubungan dengan faktor pengenceran . isi

dari α - mangostin dalam ekstrak kulit dan buah

dinyatakan sebagai gram per 100 gram

ekstrak dan bubuk kering , masing-masing. masing-masing

Penentuan dilakukan dalam rangkap tiga .

Validasi Metode

Validasi metode analisis dilakukan

menurut Konferensi Internasional tentang

Pedoman Harmonisasi ( ICH , 1996) . metode

divalidasi untuk linearitas , presisi , akurasi ,

batas deteksi ( LOD ) dan batas kuantitasi

( LOQ ) .

linearitas

Linearitas ditentukan dengan menggunakan α - mangostin

larutan standar 1000 mg mL - 1 dalam metanol . sepuluh

200 mg mL - 1 dari larutan standar adalah

disiapkan ( n = 3 ) . Grafik kalibrasi yang

diperoleh dengan memplot area puncak versus

konsentrasi larutan standar.

ketelitian

Presisi ditentukan dengan menganalisis 10 ,

25 , dan 50 mg mL - 1 dari larutan standar α -

mangostin ( n = 3 ) pada hari yang sama untuk intraday

presisi dan pada 3 hari yang berbeda untuk interday

presisi dengan mengusulkan metode . presisi

dinyatakan sebagai standar deviasi relatif

( RSD ) .

ketepatan

Keakuratan metode ini diuji oleh

melakukan studi pemulihan pada 3 tingkat α -

standar acuan mangostin ditambahkan ke sampel .

Tiga volume yang berbeda ( 0.5 , 1 , dan 1,5 mL ) dari

larutan standar ( mengandung 200 mg mL - 1 dari α -

mangostin dalam methanol) ditambahkan ke sampel

solusi ( 150 mg mL - 1 ) dan dianalisis oleh

metode HPLC yang diusulkan . Pemulihan dan rata-rata

recovery dihitung . tiga penentuan

dilakukan untuk setiap tingkat konsentrasi .

Batas Deteksi ( LOD ) dan Batas

Penghitungan ( LOQ )

Menurut Konferensi Internasional tentang

Harmonisasi Persyaratan Teknis untuk

Pendaftaran Farmasi untuk Manusia Gunakan

rekomendasi , pendekatan berdasarkan SD dari

respon dan lereng yang digunakan untuk menentukan

deteksi dan batas kuantisasi .

Hasil dan Diskusi

Metode HPLC dengan elusi gradien adalah

dikembangkan untuk kuantifikasi α - mangostin dalam

G. mangostana buah kulit ekstrak . Campuran

0,1 % orto asam fosfat dan asetonitril memberikan

pemisahan kromatografi optimum α -

mangostin dengan puncak lainnya dalam ekstrak

( Gambar 2 ) . Ditemukan bahwa resolusi itu sangat

baik ( nilai resolusi > 1,5 ) . Panjang gelombang pada

320 nm digunakan untuk semua pengukuran karena yang

serapan maksimum .

Metode ini divalidasi untuk linearitas ,

presisi , akurasi , LOD , LOQ dan . itu

kalibrasi grafik untuk α - mangostin adalah dalam

rentang konsentrasi 10-200 mg mL - 1 , dengan

koefisien korelasi ( r2 ) dari 0,9999 (Tabel 1 ) . itu

interday dan intraday presisi dari α - mangostin yang

disajikan pada Tabel 2 . Hasil penelitian menunjukkan diterima

ketepatan metode , dengan nilai yang lebih rendah RSD

dari 2% . Pemulihan pada 3 tingkat yang berbeda dari α -

mangostin adalah 105,10 , 95,00 , dan 99,93 % , dengan

rata-rata 100,01 % ( Tabel 3 ) . Nilai ini menandakan

akurasi metode ini. LOD dan LOQ untuk

α - mangostin yang ditemukan 0,06 dan 0,17 mg

mL - 1 , masing-masing, yang menunjukkan sensitivitas tinggi

metode (Tabel 1 ) .

α - Mangostin konten dalam sampel G.

kulit buah mangostana yang diperoleh dari

pasar lokal yang berbeda di Bangkok selama bulan Juni

2006 ditentukan dengan metode HPLC dikembangkan adalah

diberikan dalam Tabel 4 . Isi α - mangostin dalam

ekstrak etanol Sampel A dan B Contoh

adalah 10,04 ± 0,33 dan 8,36 ± 0,17 % b / b , sedangkan di

bubuk kering adalah 2,47 ± 0,08 dan 1,82 ±

0,04 % b / b , masing-masing ( Tabel 4 ) . HPLC

kromatogram dari kedua ekstrak menunjukkan mirip

pola dengan puncak utama α - mangostin di

waktu retensi 16,32 menit ( Gambar 2 ) . identitas

dari puncak α - mangostin dalam sampel

kromatogram dikonfirmasi oleh spiking dengan perusahaan

standar dan penentuan waktu retensi .

Yodhnu et al . (2009) melaporkan bahwa isokratik yang

Metode RP - HPLC dapat digunakan untuk kuantitatif

penentuan α - mangostin dalam ekstrak dari

G. mangostana . Dalam pekerjaan kami , kami menggunakan RPHPLC gradien

yang menawarkan keunggulan dibandingkan RPHPLC isokratik

untuk pemisahan berbagai senyawa

dengan resolusi tinggi . Bandingkan dengan yang lain

metode analisis seperti TLC - densitometri dan

Metode spektrofotometri - UV, HPLC mempromosikan

presisi tinggi , akurasi dan sensitivitas . meskipun

a spektrofotometri UV adalah cepat dan ekonomis

metode tetapi tidak memberikan informasi setiap

komponen mangostins , yaitu α - mangostin , sementara

HPLC dapat digunakan untuk pemisahan , identifikasi dan

kuantifikasi mangostin individu. TLCdensitometry

adalah tepat ketika banyak sampel

yang perlu dianalisis secara rutin , dan tidak tinggi

akurasi diperlukan .

kesimpulan

Metode HPLC yang diusulkan dipromosikan tinggi

presisi , sensitivitas dan akurasi untuk kualitas

pengendalian bahan baku buah G. mangostana kulit

dan ekstrak . Ini akan berguna untuk kuantitatif

analisis isi α - mangostin dalam produk

berasal dari G. mangostana buah kulit ekstrak tersebut

sebagai gel manggis anti - jerawat yang kini dilakukan

di laboratorium kami . α - Mangostin dianjurkan

untuk menggunakan sebagai penanda untuk analisis manggis karena

untuk mayoritas dan aktivitas biologis . ini

metode yang diusulkan akan berguna untuk kuantitatif

analisis dalam standardisasi dan penilaian kualitas

G. mangostana buah kulit ekstrak untuk

farmasi dan bahan kosmetik .