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1
Actualización en toma de muestra para prestaciones asociadas a Virología.
Mayo 2015
M. Judith Mora R.
Jefe Subdepto.Enfermedades ViralesISP
Laboratorio Nacional de Referencia y cumple acciones de vigilancia establecidas en el Reglamento sobre Notificación de Enf. Transmisibles de Declaración Obligatoria :
Exámenes por Algoritmos Diagnósticos
2
REQUISITOS DE LA MUESTRA¿Dónde encontrar información?
1. Ingresar a la página web www.ispch.cl2. Ingresar palabra clave (Ej: VIH) en la Pestaña Productos y Servicios
/Prestaciones.
TIPO DE TUBO:
Suero o plasmaTubo plástico tipo Khan estéril con tapa de 5 mL o similar(tubo propileno 12x75 mm).
Toda muestra debe venir acompañada con formulario (vigente) de envíode muestra http://formularios.ispch.cl
REQUISITOS DE LA MUESTRA
3
RABIA• Sd neurológico agudo
(encefalitis ) que progresa a coma , insuficiencia respiratoria y muerte. Pacientes con antecedentes contacto con animal sospechoso.
• Vigilancia Virus Rábico:
Diagnóstico en animales sospechosos: murciélagos, perros, gatos.
•Caracterización antigénica y genética para determinar variantes virales circulantes.
• Diagnóstico de Rabia en humanos: Casos de encefalitis con sospecha de rabia.
• Estudio de inmunidad: Mascotas que viajan a la comunidad europea, único laboratorio autorizado en Sudamérica.
.
NOMBRE DE LA PRESTACIÓN
TIPO DE MUESTRA REQUISITOS PREVIOS
VOLUMEN MUESTRA ADULTO PEDIATRICO
ALMACENAMIENTOTRANSPORTE
PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES)
DESCRIPCION DE PRESTACION
INMUNIDAD PARA RABIA ESTUDIO
Sangre s/anticoagulante, o suero en un tubo plástico estéril con tapa rosca o tapón de goma.En caso de sospecha de rabia humana (*)
30 días después de la vacunación antirrábica.
2 ml de sangre o 1 ml suero
<8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.
12
Detección de Acantirrábicos neutralizantes por la tecnica de inhibición de focos fluorescentes (RIFFT)
VIRUS RABICO VIGILANCIA
Animal
En caso de sospecha de rabia humana (*)
Sospecha de rabia.(recepción 24 hrs.)
No Aplica 5
Detección de Ag rábico por la técnica de inmunofluorescenciadirecta
* Ver siguiente tabla
4
Muestras para diagnóstico en caso sospecha de encefalitis rábica en humanos
Muestras antemortem (anticuerpos, antígeno y ácidos nucleícos)
Muestras postmorten (antígeno y ácidos nucleícos)
Biopsia: cerebro: Corteza cerebral, Cuerpo calloso, Cerebelo, Médula espinal
MUESTRA CONDICIONES DE ENVIO TECNICA DETECCION FRECUENCIA
Suero (3 ml) 4ºC /-20ºC RIFFT Anticuerpos2 veces por semana
LCR(1 a 2 ml) 4ºC /-20ºC°
RIFFT Anticuerpos 2 veces por semanaRT-PCR Nested Ácidos nucleicos
Saliva (1-2ml) Congelada-20ºC RT-PCR Nested Ácidos nucleicos Diariamente
Biopsia nuca Folículo piloso Congelada-20ºC IFD
RT-PCR NestedAntígenoÁcidos nucleicos
2 veces por semana
Virus Entéricos• Vigilancia PFA
Apoyo a erradicación del virus PolioÚltimo caso en América 1991 (Perú)
• Meningitis Viral Estudio brotes
Diarreas agudas con diferentes etiologías:• Vigilancia Rotavirus
Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS
• Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus):– Centinelas ambulatorios– Estudio Brotes
5
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previosVolumen de muestra
Transporte y conservación
Plazo de respuesta en días hábiles
Aislamiento de Enterovirus
Aislamiento en cultivos celulares
Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporteLCR: envase estéril, tapa rosca.Liq.pericárdico:envase estéril tapa rosca
0-5 días de evolución
Deposición: 1 cuch. de téLCR o LíqPericard: 1 ml ped2 ml adulto
Congelar (-18º a -20ºC) o refrigerar (2º a 8ºC) con envioinmediato
15
Vigilancia Poliovirus(sospechosos PFA)
Aislamiento en cultivos celulares
Deposición sin medio de transporte en envase estéril tapa rosca
0-14 días de evolución
10 grs. (1 cuch. de té)
15
Vigilancia Rotavirus (Centros Centinelas)
Técnicas Serológicas Inmunoenzimáticasytipificación
0-5 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados
21
Vigilancia de Virus Gastroentericos: Adenovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus y otros
Inmunoquímica y RT-PCR
• 0-3 días de evolución en niños menores 5 años :Centinelas ambulatorios
• **5 a 10 muestras por Brote notificado)
21
• Vigilancia Virus Respiratorios : ADV, VRS, PI , Metapneumovirus) e Influenza A y B– IRAG complicación frecuente de la
Influenza– Red Lab. Hosp. Centinelas IFI– Red Lab. Regionales PCR – Centro Nacional Influenza para OMS
Aislamientos Recepción hasta 12:00 hrs por tipo procesamiento
Virus Respiratorios
6
Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Transporte y conservación
Plazo de respuesta
en días hábiles
Aislamiento de Influenza A y B
Aislamiento en cultivos celulares
a) Gargarismo b) Aspirado ANF c) Tórula con secreción NF d) Biopsia tejidos
Máximo 3 días de evolución
Medio transporte viral Hanks´s 0,5% gelatina+antibiótico en frío c/refrigerantes T° 2 – 8 C
15
Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial , Adenovirus, Parainfluenza
a) ANF b) Tórulasecreción NF
c) Biopsia tejidosd )ADV: Tórula
secreciónconjuntival
Hasta 5 días de evolución 15
PCR para Influenza A, B PCR
Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón
Hasta 3 días desde inicio de los síntomas
5
InmunofluorescenciaIndirecta para Virus Influenza A, B
Inmunofluorescencia
Frotis fijado Aspirado NF
Hasta 3 días de evolución Otros VR :Hasta 5 días de evolución
En frío con refrigerantes. T° 2-8°C
3
• Vigilancia Integrada Sarampión-Rubéola:• Pacientes con exantema macular que puede ser
acompañado de fiebre, conjuntivitis, artralgia, linfoadenopatías , etc
• SRC malformaciones congénitas (1er trimestre embarazo)
Recomendaciones:– Muestra para aislamiento. Ideal: Aspirado
Nasofaríngeo– En su defecto, orina: mínimo 50 ml.Enviar siempre junto a la muestra de suero y FORMULARIO.
Virus Exantemáticos
7
Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos
previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo de
respuesta en días
hábiles
Vigilancia Sarampión Rubeola
ELISA, IF, aislamiento, RT-PCR (según algoritmo ISP)
Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca.
Muestra respiratoriaANF (Orina como segunda opción)
Enviar muestras conformulario de vigilancia con la totalidad de los antecedentes solicitados
1 ml suero. ANF en medio de transporte viral o 50 ml orina
2 ml suero. ANF en medio de transporte viral o 50 ml orina
Aspirado con medio de transporte viral Hanks´s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC.
4
Estudio Inmunidad Sarampión
Inmunofluorescencia(IF) (IgG)
Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca
No tiene 1 ml 2 mlEn frío Tº 2-8ºC. Con unidades refrigerantes
4
Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita.
ELISA IgM(algoritmo ISP)
Recién nacidos < 1 año
1 ml de suero 10
VIH• Diagnóstico de Infección
causada por VIH: Laboratorios: TamizajeISP: Confirmación de muestras reactivas al tamizaje en el país
Diagnóstico SIDA pediátrico (< 2 años)Recepción lu a Ju por tipo
procesamiento
• Estudios Genotipificación, FRVIH
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NOMBRE DE LA PRESTACIÓN ENSAYOS TIPO DE MUESTRA REQUISITOS
PREVIOSVOLUMEN MUESTRA
CRITERIO DE ACEPTACION, ALMACENAMIENTO-TRANSPORTE
PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES)
DOCUMENTO REQUERIDO
VIH ADULTO CONFIRMACION
Determinación de Ag HIVAc IgG anti HIV
Ácidos nucleicos:provirus y RNA de HIV
* Suero o plasma (Técnicas serológicas)* Sangre con anticoagulante EDTA (téc. moleculares)
Muestra doblementereactiva al tamizaje de VIH
Técnicas serológicas: 1 mlTécnicas moleculares: 4 ml
Suero o plasma: En frío Tº2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.
Sangre con anticoagulante: Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 hrs desde la extracción. 12 días,
(94,6% año 2014)
Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH
VIH PEDIATRICO CONFIRMACION
Detección de Antígeno-anticuerpo virus VIH, Ag P24, virus VIH (PCR , RNA)
Sangre con anticoagulante EDTA
En > 2 años asolicitud. En <2 años, hijos de madres VIH (+), protocolo diagnóstico de sida pediátrico (Resolución Minsal).
4 ml
Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 horas desde la extracción.
Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH pediátrico
FORMULARIOS
Clave adulta y definitiva de niños:Inicial del primer nombre y de los dos apellidos: MCVSi no tiene segundo apellido: MC#Si uno de los apellidos es compuesto como San Martín Perez : MSPFecha de nacimiento con el formato dd/mm/aa: 230569Tres últimos dígitos del RUT y dígito verificador: 698-KSi es extranjero reemplazar por :ABC-D
Cuando no se dispone de la clave definitiva del niño: se completa el cuadro de recién nacidoRN/ Iniciales de la madre + Fecha nacimiento del niño RN/MGV 200315
La clave materna nos ayuda a realizar la trazabilidad de las muestras de los pediátricos recibidas durante el protocolo diagnóstico.
Siempre: Solicitar CI al tomar muestra para verificar clave
Desde 06-10-2014, Ordinario 01729, se debe informar Nº de RUT enformularios de envío de muestras para confirmación VIH. Con el fin demejorar trazabilidad y calidad de registros referentes a VIH.
9
• Vigilancia HTLV I/II (Virus linfotrópico de células T humano) Confirmar muestras reactivas en tamizaje bancos de sangre y casos sospecha de Leucemia de Células T del Adulto (ATL) y Paraparesia Espástica Tropical (TSP/HAM)
• Diagnóstico y estudios Virus Papiloma Humano:Los VPH puede causar verrugas genitales y ciertos cánceres (CaCu).
• Estudio brotes Parotiditis: infección aguda con aumento volumen glándula parótida.
CELLULARRECEPTOR
gp46
95 kd
p14
HTLV-I
Tax (p40), Rex (p27,p21)
HTLV-
Virus Oncogénicos, otros
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo de respuesta
en días hábiles
Confirmación HTLV I/II
ELISA , IF, PCR (según algoritmo)
Sangre con anticoagulante (EDTA o citrato)
Muestra Doblemente reactiva y casos de sospecha de Leucemia de células T del Adulto y ParaparesiaEspástica Tropical*
3ml 5 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. *No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio
15
Estudio de Brotes de Parotiditis
Serología, PCR
Suero o plasma y Orina en tubo estéril
Sólo estudio de brote según circular MINSAL
1 ml suero y 3 ml de orina
3 ml suero y 3 ml de
orina7
Virus Papiloma Humano (VPH)
PCR
Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital / Biopsias de tejidos / condiloma ; tubo estéril tapa rosca con medio de transporte.
Sospecha de infección viral *
10
10
Virus HepáticosDetección hepatitis virales: HBsAg, VHC:Hepatitis que pueden evolucionar a cronicidad, cirrosis y carcinoma hepático.Confirmación Muestras reactivas al tamizaje
Estudio de brotes Hepatitis A:(3 a 5 casos).Hepatitis de transmisión entérica, no desarrollan infección crónica.
Nombre exámen / Prestación
Método Tipo de muestra Requisitos previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo de respuesta en días hábiles
Confirmación Antígeno de Superficie Hepatitis B
ELISA, neutralización (según algoritmo ISP)
Suero o plasma en tubo estéril tapa rosca o de goma
Muestra con tamizajedoblemente reactivo a HBsAg
1 ml 3 ml
En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
15
Confirmación de Virus Hepatitis C
ELISA, RT-PCR, Inmunoblot(según Algoritmo)
Plasma extraídocon anticoagulante (EDTA) . En tubo estéril tapa rosca o de goma
Muestra Doblemente reactiva a Ac-VHC.
1 ml de plasma
3 ml plasma 15
Vigilanciabrotes de Hepatitis A
ELISA (IgM) Suero en tubo estéril tapa rosca .
0-10 días desde inicio los síntomas
1 ml de suero
3 ml suero 7
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Virus Enf. Emergentes: Hantavirus
Enf. Febril que puede producir SCPH compromiso respiratorio y evolucionar a shock y muerte. Transmitido por O. longicaudatus
• Virus Dengue : Enf febril aguda con cefalea, mialgias, erupción , etc transmitida por Aedes aegyptiVigilancia y casos importados
• Chikungunya: enfermedad febril con artritis y artralgias, transmitidas por el mosquito del dengue.
• Virus Nilo Occidental : Enf febril con manifestaciones neurológicas como cefalea a encefalitis. El vector mosquitos (Culex pipiens), se mantiene en la naturaleza mediante un ciclo de transmisión mosquito-ave-mosquito
Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos
previos
Volumen de muestra pediátrica
Volumen de muestra adulto
Transporte y conservación
Plazo respues
ta dshábiles
Vigilancia Infección por Hantavirus
ELISA, RT-PCR (según algoritmo del ISP)
a)Sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja)
b)Tejido de pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes.(punción cardiaca)
Caso sospechoso(recepcion 24 hrs.)
3 ml de sangre
5 ml sangre
En frío Tº<8ºC. Enviar con unidades refrigerantes
3
Vigilancia Dengue / Fiebre Amarilla
* ELISA *Aislamiento/ PCR(según algoritmo del ISP)
Suero extraído en forma estéril. En tubo estéril tapa rosca .
Con 6 o más días de evolución.
IdentificaciònBrote muestra dentro de los 3 primeros días de evolución
2 ml 3 ml 10
Vigilancia Virus del Nilo Occidental
Técnicas Serológicas ELISA
LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca .
> a 8 días de evolución.
1 ml suero y 1 ml de LCR
3 ml suero y 2 ml de LCR
10
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Factores a revisar:• Demora en envío de las muestras desde laboratorio• Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº, uso
refrigerantes). • Volumen de muestra solicitado , 1 tubo por muestra• Formulario indicado y vigente• Completar antecedentes del formulario: F. Obt Mtra, F.Inicio
síntomas, Tecn Tamizaje/Absorbancias, Vacunas, Correo @ de responsable envío, - Etc.
• Identificación correcta del paciente • Diferencias entre el código del tubo y del antecedente. • Estafeta Acreditado: El retiro de resultado no siempre es
periódico Inscribir laboratorios plataforma On-line Formularios Registro de datos solicitados en formulario on-line (c/clave
asignada para laboratorios (SURVIH para lab. públicos). Imprimir el formulario y adjuntarlo a la muestra enviada al
ISP (se genera un N° solicitud) Acceso Rd
Gracias