Upload
dinhminh
View
220
Download
0
Embed Size (px)
Citation preview
73
LAMPIRAN
Lampiran 1. Pembuatan Larutan Standard Mc. Farland 1
Bahan-bahan untuk membuat larutan standard Mc. Farland 1
Larutan 1 = BaCl 0,1 g + Akuades 10 ml
Larutan 2 = H2SO4 1%
Mc. Farland 1 = 0,1 ml Larutan 1 = 9,9 ml larutan 2
Campuran larutan tersebut kemudian divortek dan disimpan dalam kulkas
Perbandingan komposisi BaCl dan H2SO4 1 % dalam Mc. Farland adalah sebagai
berikut :
Sumber : Bonang dan Koeswardono (1982) dalam Sumargono (2005)
No. BaCl (g) H2SO4 1% (ml)
1. 0,1 9,9
2. 0,2 9,8
3. 0,3 9,7
4. 0,4 9,6
5. 0,5 9,5
6. 0,6 9,4
7. 0,7 9,3
8. 0,8 9,2
9. 0,9 9,1
10. 1,0 9,0
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
74
Lampiran 2. Penyetaraan Suspensi Bakteri Dengan Larutan Standard Mc. Farland
Sumber : Bonang dan Koeswardono (1982) dalam Sumargono (2005)
Nomor Larutan Mc. Farland Kepadatan Sel ( x108 sel/ml)
1 3
2 5
3 9
4 12
5 15
6 18
7 21
8 24
9 27
10 30
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
75
Lampiran 3. Skema prosedur kerja penelitian
Persiapan :
Penyiapan ekstrak daun patikan kebo sebesar 2 gram ekstrak daun patikan kebo tanpa penambahan DMSO
Penyiapan ekstrak daun patikan kebo kembali sebesar 2 gram ekstrak daun
patikan kebo + DMSO 10% sebanyak 10 ml = konsentrasi ekstrak daun patikan kebo 20%, selanjutnya mengambil 2 ml dari konsentrasi ekstrak daun patikan
kebo 20% kemudian mengalami pengenceran berseri
Uji sensitifitas dengan metode dilusi konsentrasi 100%; 10 %; 5 %; 2,5 %; 1,25 %; 0,625 %; 0,312 %; 0,156 %; 0,078 %
Inkubasi 27-28º C selama 24 jam
Hasil MIC (larutan keruh/jernih) dan pengamatan spektrofotometer
Hasil MIC ditanam pada media TSA
Inkubasi 27-28º C selama 24 jam
Hasil MBC (ada/tidak ada pertumbuhan bakteri)
Analisa data
Identifikasi bakteri Aeoromonas hydrophila mikroskopis, isolasi makroskopis, mikroskopis dan uji biokimia Penyiapan suspensi bakteri Aeromonas
hydrophila yang setara dgn Mc Farland 1 (3 x 108), lalu mengalami pengenceran sebesar (3 x 106)
Pembuatan simplisia
Ekstraksi daun patikan kebo = pengeringan dan direndam 3 x 24 jam dgn Etanol 96%
Penyiapan ekstrak daun patikan kebo dgn berbagai konsentrasi uji
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
76
Lampiran 4. Skema kerja penentuan MIC dan MBC
2 ml suspensi bakteri A. hydrophila (3 x 106 CFU/ml)
(1) (2) (3) (4) (5) (6) (7) (8) (9) (10) (11)
100% 10% 5% 2,5% 1,25% 0,625% 0,312% 0,156% 0,078% K (-) K(+)
Inkubasi pada suhu 27-28º C selama 24 jam
Penentuan MIC (larutan keruh/jernih) dan pengamatan pada spektrofotometer
Penanaman pada media TSA dengan cara streak
Inkubasi pada suhu 27-28º Cselama 24 jam
Penentuan MBC (ada / tidaknya Pertumbuhan koloni bakteri)
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
77
Lampiran 5. Bahan-bahan dan peralatan penelitian
Daun patikan kebo kering Ekstrak daun patikan kebo Etanol 96 %
Alkohol 96 % Akuades steril Kloramfenikol
Mac. Farland 1 Etanol 96 % dan DMSO 100 %
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
78
Lampiran 5. Lanjutan
Pompa vakum Vortex
Centrifuge Autoclave Timbangan analitik
Spektrofotometer Rotary vacum evaporator
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
79
Lampiran 6. Laporan hasil uji isolat bakteri A. hydrophila
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
80
Lampiran 7. Hasil pengamatan secara mikroskopis, makroskopis dan uji biokimia bakteri A. hydrophila
Bakteri A. hydrophila secara mikroskopis pembesaran 1000 x dengan pewarnaan
Gram, bakteri berwarna merah, bersifat Gram negatif dan berbentuk batang.
Koloni A. hydrophila pada media TSA secara makroskopis, warna kloni putih krem, tepi koloni rata, struktur dalam koloni transparan.
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
81
Lampiran 7. Lanjutan
TSIA (+) LIA (+) MIO (+)
Urease (+) Citrat (+) MR (+)
VP (+) O/F (Fermentatif) Ornitin (-) ; Gelatin (-)
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
82
Lampiran 7. Lanjutan
Keterangan :
Arabinosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Glukosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Laktosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Sukrosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Maltosa : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Manitol : (+), berwarna merah menjadi berwarna kuning
Inositol : (-), tetap berwarna merah
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
83
Lampiran 8. Tabel nilai OD uji MIC Tabel data sebelum inkubasi
Konsentrasi Nilai OD Uji MIC
Total Rata-rata Ulangan I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0 10% 1,894 1,921 1,875 5,69 1,896 5% 1,670 1,783 1,682 5,135 1,711
2,5% 0,811 0,787 0,723 2,321 0,773 1,25% 0,514 0,544 0,471 1,535 0,511 0,625% 0,246 0,231 0,216 0,693 0,231 0,312% 0,093 0,087 0,161 0,341 0,113 0,156% 0,062 0,059 0,058 0,179 0,059 0,078% 0,042 0,049 0,052 0,143 0,047
Kontrol + 0,029 0,031 0,032 0,092 0,030 Kontrol - 0,021 0,023 0,018 0,062 0,020
Tabel data setelah inkubasi 24 jam
Konsentrasi Nilai OD Uji MIC
Total Rata-rata Ulangan I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0 10% 1,285 1,379 1,332 3,99 1,332 5% 1,302 1.255 1,304 3,86 1,287
2,5% 0,522 0,588 0,423 1,53 0,511 1,25% 0,286 0,377 0,173 0,83 0,278 0,625% 0,095 0,086 0,094 0,275 0,091 0,312% 0,044 0,027 0,031 0,102 0,034 0,156% 0,017 0,012 0,017 0,046 0,015 0,078% 0,016 0,017 0,023 0,056 0,018
Kontrol + 0,016 0,014 0,018 0,048 0,016 Kontrol - 0,017 0,020 0,016 0,053 0,017
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
84
Lampiran 8. Lanjutan Tabel data selisih antara sebelum dan setelah inkubasi 24 jam rata-rata nilai
OD uji MIC
Konsentrasi Selisih Nilai OD Uji MIC Total Rata-rata Ulangan I Ulangan II Ulangan III
100% 0 0 0 0 0 10% 0,609 0,542 0,543 1,694 0,564 5% 0,368 0,528 0,378 1,274 0,424
2,5% 0,289 0,199 0,3 0,788 0,262 1,25% 0,228 0,167 0,298 0,693 0,231 0,625% 0,151 0,145 0,122 0,418 0,139 0,312% 0,049 0,06 0,13 0,239 0,079 0,156% 0,045 0,047 0,041 0,133 0,044 0,078% 0,026 0,032 0,029 0,087 0,029
Kontrol + 0,01 0,017 0,014 0,041 0,013 Kontrol - 0,004 0,003 0,002 0,009 0,003
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
85
Lampiran 9. Hasil analisis varian (ANAVA) OD uji MIC (SPSS 16 for Windows) Oneway Oneway
Test of Homogeneity of Variances
OD Levene Statistic df1 df2 Sig.
5.520 9 20 .001
ANOVA OD
Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Between Groups .988 9 .110 57.535 .000 Within Groups .038 20 .002 Total 1.026 29 F. hit > F. tab 0,05 maka terdapat perbedaan yang signifikan (P < 0,05) berarti 10 macam perlakuan tersebut memberikan perbedaan yang signifikan terhadap pertumbuhan A. hydrophila.
Descriptives
N Mean Std.
Deviation Std.
Error
95% Confidence Interval for Mean
Minimum Maximum Lower
Bound Upper Bound
0 3 .00300 .001000 .000577 .00052 .00548 .002 .004 0.01 3 .01367 .003512 .002028 .00494 .02239 .010 .017 0.078 3 .02900 .003000 .001732 .02155 .03645 .026 .032 0.156 3 .04433 .003055 .001764 .03674 .05192 .041 .047 0.312 3 .07967 .043936 .025366 .02948 .18881 .049 .130 0.625 3 .13933 .015308 .008838 .10131 .17736 .122 .151 1.25 3 .23100 .065552 .037846 .06816 .39384 .167 .298 2.5 3 .26267 .055411 .031991 .12502 .40031 .199 .300 5 3 .42467 .089629 .051747 .20202 .64732 .368 .528 10 3 .56467 .038397 .022169 .46928 .66005 .542 .609 Total 3
0 .17920 .188065 .034336 .10898 .24942 .002 .609
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
86
Lampiran 9. Lanjutan
Post Hoc Homogeneous
OD Duncan
konsentrasi N
Subset for alpha = 0.05
1 2 3 4 5
0 3 .00300
0.01 3 .01367
0.078 3 .02900
0.156 3 .04433
0.312 3 .07967 .07967
0.625 3 .13933
1.25 3 .23100
2.5 3 .26267
5 3 .42467
10 3 .56467 Sig. .066 .110 .385 1.000 1.000
Kesimpulan :
Hasil terbaik pada perlakuan 10 % yang berbeda nyata dengan perlakuan 5 % dan perlakuan lainnya.
Hasil terendah pada perlakuan kontrol positif yang tidak berbeda nyata dengan perlakuan 0,156 % dan 0,078 %.
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI
87
Lampiran 10. Hasil uji MBC
Ulangan I
Ulangan II
Ulangan III
ADLN_PERPUSTAKAAN UNIVERSITAS AIRLANGGA
SKRIPSI POTENSI EKSRAK DAUN .... KHOIRUNNISA ASSIDQI