9
TECHNICAL ADVANCE An estrogen receptor-based transactivator XVE mediates highly inducible gene expression in transgenic plants Jianru Zuo, Qi-Wen Niu and Nam-Hai Chua Laboratory of Plant Molecular Biology, The Rockefeller University, 1230 York Avenue, New York, NY 10021, USA Received 2 May 2000; revised 1 August 2000; accepted 1 August 2000. *For correspondence (fax +1 212 327 8327; e-mail [email protected]). Summary We have developed an estrogen receptor-based chemical-inducible system for use in transgenic plants. A chimeric transcription activator, XVE, was assembled by fusion of the DNA-binding domain of the bacterial repressor LexA (X), the acidic transactivating domain of VP16 (V) and the regulatory region of the human estrogen receptor (E; ER). The transactivating activity of the chimeric XVE factor, whose expression was controlled by the strong constitutive promoter G10-90, was strictly regulated by estrogens. In transgenic Arabidopsis and tobacco plants, estradiol-activated XVE can stimulate expression of a GFP reporter gene controlled by the target promoter, which consists of eight copies of the LexA operator fused upstream of the ±46 35S minimal promoter. Upon induction by estradiol, GFP expression levels can be eightfold higher than that transcribed from a 35S promoter, whereas the uninduced controls have no detectable GFP transcripts, as monitored by Northern blot analysis. Neither toxic nor adverse physiological effects of the XVE system have been observed in transgenic Arabidopsis plants under all the conditions tested. The XVE system thus appears to be a reliable and ef®cient chemical-inducible system for regulating transgene expression in plants. Keywords: gene expression, estradiol-inducible, transgenic plants, estrogen receptor, LexA. Introduction Both in basic plant biology research and in biotechnolo- gical applications, it is highly desirable to express genes in a controllable fashion. Compared to constitutive pro- moters, inducible promoters offer numerous advantages and potentials in a variety of applications (reviewed by Gatz, 1997; Gatz and Lenk, 1998; Zuo and Chua, 2000). Under the control of an inducible system, a transgene can be expressed at a given developmental stage for a speci®c duration of interest. This ¯exibility is particularly important for studying the function of a gene whose expression is developmentally or tissue-speci®cally regulated. In add- ition, the use of inducible promoters will allow the generation of transgenic plants carrying a transgene whose constitutive expression is otherwise detrimental or even lethal to the host plants. To establish a reliable inducible expression system, several critical factors must be considered. First, the system must be highly inducible. Second, the system should be tightly controlled and respond only to speci®c inducers. Third, upon induction the system should specif- ically activate the target genes. Finally, activation of the system itself should not have any non-speci®c physio- logical or other undesirable effects on the host. Several chemical-inducible systems have been developed, in gen- eral based on transcriptional de-repression (Gatz et al., 1992), inactivation (Weinmann et al., 1994), and activation (Aoyama and Chua, 1997; Bruce et al., 2000; Caddick et al., 1998; Martinez et al., 1999) of the target gene. A dual- control system was recently developed in which a transactivator was subjected to both positive and negative regulation by two distinctive inducers (Bohner et al., 1999). Many of the above-mentioned inducible systems are based on transcriptional activation mediated by an animal steroid nuclear receptor. Thus far, the regulatory domains of the rat glucocorticoid receptor (GR; Aoyama and Chua, 1997; Bohner et al., 1999); the human estrogen receptor The Plant Journal (2000) 24(2), 265±273 ã 2000 Blackwell Science Ltd 265

An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

Embed Size (px)

Citation preview

Page 1: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

��������� �����

�� �������� �������� ��� �� �� ��� ��� ��� ���� ��������� �������� ���� ��������� �� �� ������ � ���

�� ��� ���� ������ ��� �� � �� � !��

���������� �� ��� �� ���� ������� �� ���� � � ���� ������ ���� ���� � �� � ! " ����� !� ������ �#

�� ����� � ��� ����� ������� � ������ ����� � ����� � ������ ������ !� !�����!"��" � #$�% &� ��� '�( )'�(� �*+��, -��.�! /��%��! /�$�,,������0�

"��� ��

�� � �� �������� � �������� �������� ��� ���� ���������� ������ #�� ��� �� �� ������ � ���$ �

������ �� �������� ��� ���� ���� % � �������� �� #����� �# ��� &���������� ��� �� �# ���

� ���� � �������� '��� (�)� ��� ��� �� �� ��� ���� ��� �� �# �*+, (�) �� ��� ����� ���� ������ �#

��� ��� � �������� ������ (�- �.)$ /�� �� �� ��� ���� ������ �# ��� ������ ��� # ���� %����

��������� % � ��������� �� ��� ������ ����������� ������� 0+1�21� % � ������� ����� ��� ��

���������$ 3� �� ������ ��������� �� ��� � � ���� ���� ����� ��� ��� ��� � ������ ��

��������� �# �� ������� ���� ��������� �� ��� � ���� �������� %��� ������� �# ����� ���� �#

��� '��� ��� ��� #���� ����� � �# ��� 45, 67" ����� � �������$ 8�� �������� �� ���� ����� ��

��������� ������ � �� �����#��� ������ �� � �� � �� ������� #��� 67" �������� %���� � ���

�������� ������� � �� �� ����� ��� �� �� ������� � ��������� �� �������� ���� � �����$ �������

���� ��� ������ ��������� � �##��� �# ��� ��� ������ � �� ���� �������� �� �� ������ ���������

� ��� ����� �� ��� ��������� ������$ /�� ��� ������ ���� � �� �� �� ���� ��� �� �#9����

���� ���������� ������ #�� ����� ���� �� ������ ��������� �� � ���$

:��%����; ���� ���������� ���� �������������� �� ������ � ���� �������� ������� '���$

3����������

1!�- �" 2��� �,�"� 2�!,!�� ������ - �"� �" 2�!�� -"!,!*

�� �, ���,� ���!"�3 �� �� -��-,� ������2,� �! �%����� ��"�� �"

� !"��!,,�2,� $��-�!"� �!+����� �! !"��������� ��!*

+!����3 �"�� �2,� ��!+!���� !$$�� "�+��!�� ����"�����

�"� �!��"���,� �" � ������� !$ ���,� ���!"� #�����4�� 2�

5��63 �77(� 5��6 �"� ��"/3 �77)� 8�! �"� �-��3 ����0�

9"��� �-� !"��!, !$ �" �"�� �2,� �����+3 � ���"���"� �"

2� �%������� �� � ����" ����,!�+�"��, ����� $!� � ��� �:

������!" !$ �"������� �-�� ;�%�2�,��� �� ����� �,��,� �+�!���"�

$!� ������"� �-� $�" ��!" !$ � ��"� 4-!�� �%������!" ��

����,!�+�"��,,� !� ������*��� �: �,,� ����,����� �" ���*

���!"3 �-� ��� !$ �"�� �2,� ��!+!���� 4�,, �,,!4 �-�

��"�����!" !$ ���"���"� �,�"�� �����"� � ���"���"�

4-!�� !"��������� �%������!" �� !�-��4��� �����+�"��,

!� ���" ,��-�, �! �-� -!�� �,�"���

�! ����2,��- � ��,��2,� �"�� �2,� �%������!" �����+3

������, ���� �, $� �!�� +��� 2� !"�������� ����3 �-�

�����+ +��� 2� -��-,� �"�� �2,�� <� !"�3 �-� �����+

�-!�,� 2� ���-�,� !"��!,,�� �"� ����!"� !",� �! ��� �:

�"�� ���� �-���3 ��!" �"�� ��!" �-� �����+ �-!�,� ��� �$*

� �,,� � ������ �-� ������ ��"��� �"�,,�3 � ������!" !$ �-�

�����+ ����,$ �-!�,� "!� -��� �"� "!"*��� �: �-���!*

,!�� �, !� !�-�� �"������2,� �$$� �� !" �-� -!��� <�����,

-�+� �,*�"�� �2,� �����+� -��� 2��" ����,!���3 �" ��"*

���, 2���� !" ���"� �����!"�, ��*��������!" #5��6 � ��3

�77�03 �"� ������!" #=��"+�"" � ��3 �77>03 �"� � ������!"

#�!��+� �"� �-��3 �77(� 1�� � � ��3 ����� ����� / � ��3

�77)� �����"�6 � ��3 �7770 !$ �-� ������ ��"�� � ���,*

!"��!, �����+ 4�� �� �"�,� ����,!��� �" 4-� - �

���"�� �����!� 4�� ��2?� ��� �! 2!�- �!������ �"� "�������

����,���!" 2� �4! �����" ���� �"�� ��� #1!-"�� � ��3 �7770�

��"� !$ �-� �2!��*+�"��!"�� �"�� �2,� �����+� ���

2���� !" ���"� �����!"�, � ������!" +������� 2� �" �"�+�,

����!�� "� ,��� �� ���!�� �-�� $��3 �-� ����,��!�� �!+��"�

!$ �-� ��� �,� ! !��� !�� �� ���!� #5�� �!��+� �"� �-��3

�77(� 1!-"�� � ��3 �7770� �-� -�+�" ����!��" �� ���!�

�� ��� $����� #����0 <5#�03 �@AB�('

� ���� 1,� /4�,, < ��" � ��� �@A

Page 2: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

#��� 1�� � � ��3 ����0� �"� �" �"�� � � ���!"� �� ���!�

#�����"�6 � ��3 �7770 -��� 2��" ���� �! !"���� � -�+���

���"�� �����!�� 4-!�� ���"� �����!"�, � �������� ��� ����*

,���� 2� ��� �: -!�+!"�� !� ���� ����,,� ��,���� !+*

�!�"��� �-��� �"�� �2,� �����+� -��� 2��" �� ���$�,,�

���� �" ����!�� �������3 2�� �-�� �,�! �-!4 �!+� ���4*

2� /� 4��- ����� � �! �"�� �2�,���3 � ��,�����,� -��- 2� /*

��!�"� �%������!" ,���,3 !� �����+�"��, �$$� �� �! �-� -!��

�,�"�� ���� 4� ���!�� � �����,�� -��� ����6���!" !$ �

��,��2,� �"� �$: ��"� -�+� �,*�"�� �2,� �����+3 ���+��

C� $!� ��%�*D�@*��� �-� C� � �����!� �� ���� �,� ����*

,���� 2� �������!, �" ���"���"� �,�"��3 4��- �"���� ��2,�

���"�� ������"� � ������ �" �-� �2��" � !$ �" �"�� ��� 9�!"

�"�� ��!" �-� � �����!� �� ���2,� !$ ���+�,���"� �%������!"

!$ � %& ���"���"� !��� ���-� ��+�� -��-�� �-�" �-��

!2���"�� 4��- � �'#(%& ���"���"�� �! ������"� �!%� ���

�! ����)�*��� ���"���"� �,�"�� 4�� ���� ��� 4��- �-��

�����+�

.������

+ ���� ��) ������������ �� �� ,-. ��)���� ���� /

�-� C� �� �!� !"����� !$ �-��� ���"� �����!" �"��� # �����

�0� �" �-� :��� ���"� �����!" �"�� 5��*7�3 � ���!"� !"�����*

���� ��!+!��� #��-��� � ��3 �77703 !"��!,� �-� ,-. $���!"

��"�� �-� ,����� �" !��� � -�+��� ���"� �����!"�, � ��*

���!� !"�����"� !$ �-� ��*2�"��"� �!+��" #10 !$ �-�

2� �����, �������!� ��%� #C� �������� �B)(0� �-� � ���

���"�� ������"� �!+��" !$ D�@ #� �������� >�'B>(7�

�,��+�,� � ��3 �7)A0� �"� �-� ��2!%�, ����!" !$ �-�

-�+�" ����!��" �� ���!� #� !� ��� �������� �)�BA7A�

5���"� � ��3 �7)@0� �� �-� ��*2�"��"� �!+��" �"� �-�

��+���6���!" �!+��" !$ ��%� ��� 4�,, ��������� #�!���

� ��3 �7)�� ��/� � ��3 �7)�03 ��+���6���!" �"� ��2��E��"�

2�"��"� �! �-� ������ �� !$ � ��%� 1* !"���"�"� $� �!�

�" 2� ���-�,� ����,���� 2� -����!,!�!�� ����,��!�� �,�+*

�"�� $���� �! ��� �-� �� ��E��" � ���� �" C� !"���"� �-�

����,��!�� ����!"3 �" ,���"� �-� 2�"��"� ����� $!� � �,,�,��

����,��!�� !+�,�% �"� $!� ����!��" -!�+!"��3 !���,��*

��"� 4��- �-� ���"�� ������!" $�" ��!" � #�� �0 �!+��"

#�!�� � ��3 �7)7� =�2���� � ��3 �7))0� =� 4��- �! �!�"�

!�� �-�� �-� -!�+!"�*2�"��"� �!+��" #�10 �,!"� ��

�"��$: ��"� �! ��!���� �"� ����,���!" �! �-� $���� -����!*

,!�!�� 1� �,���,�3 -!�+!"� �"�� �2�,��� ��E����� �-�

2�"��"� �!+��" $!� �-� ,���"� �� 4�,, �� �-�� $!� �

����,��!�� !+�,�% !"�����"� !$ ������, �,,�,�� ��!���"�

�" ,���"� �<D7�3 �,�-!��- �!+� �"��������!�� ��$�� �! �-�

�� ���!� ��E��" � �" � -�+��� $� �!� �� �1� =� �������

�-�� �� �� +!�� ����!������ �! ��� F�-� ����,��!�� ����!"G

�!+��"H !� ��� �: �!+��" "�+�� �� �� !++�"���

#���"�3 �7))� ���� �"� IH��,,��3 �77>0 4-�" ��$����"� �!

�-� �� ���!� ��E��" ���

�" �-� �� !"� ���"� �����!" �"��3 ���-� !���� !$ �-� ��%�

!�����!� ��E��" � 4��� $���� �! �-� B>@ 'A< +�"�+�,

��!+!��� #1�"$�� � ��3 �77�0 �! !"��!, ���"� �����!" !$

������ ��"��� �-��� �4! ���"� �����!" �"��� ��� ���������

2� � ��,� ��2,� +��/�� $!� �,�"� ���"�$!�+���!"�

0��� ��)�������� ��) ����� ������ �� �� ,-. ���� / ��

������ ��� *����

�! ���,���� �-� �����+3 4� �"������ � �� �" !��"� �-�

����" ;�!��� �" � ��!���" #%&0 �"�! �-� ������ �%����*

��!" ������� !$ �" C� �� �!� #���)� ��� ����� �0� �-�

���)B5 D !"���� � 4�� �-�" ���"�$!�+�� �"�!

����)�*��� �"� �!2� !3 �"� �%������!" !$ �-� %&

��"� 4�� ��������� <�+�,�� ����,�� 4��� !2���"�� $�!+

2!�- ��� ���� ���� 4� �����"� ���� !2���"�� $�!+ �

�����,�� �"�,���� !$ �� ����)�*��� ���"���"� ,�"���

���"���"� �,�"�� 4��� �"����,,� � ���"�� 2� �����, �"��� *

��!" !$ ����,�"�� ���+�"���� �" �-� �2��" � !� �����" � !$

�"�� ��� #� +�%���� !$ � �� �(*�*�������!, �"� ��A �� >*

-���!%�, ��+!%�$�"0 �"��� � !"��"��!"�, ;�!��� �" �

+� �!� !��� �" �-� �2��" � !$ �"�� ���3 "!"� !$ �-� ��

,�"�� -�� ���� ��2,� 5 D ���"�,�3 ��������"� �-�� �-� C�

�����+ �� ���-�,� !"��!,,��� =-����� !"� ,�"� #70 ��� "!�

-��� �"� ���� ��2,� ;�!��� �" � ���"�,� �"��� �,, !"��*

��!"� ������3 �-��� !�-�� ,�"�� #��3 ��3 ��0 �-!4�� � ��� -�

�%������!" ������" ��!" �"�� ��!" # ����� ��03 �����+�2,�

����� 2� � �!����!"�, �$$� � !" �-� ���"���"�� �-��� $!��

,�"�� 4��� "!� �"���������� $���-��� 9�!" �"�� ��!"3 �-�

��+��"�"� �) ,�"�� �-!4�� �"�$!�+ ;�!��� �" � ���"�,�

4��- �����"� �"��"������ �" �!�"� ����,�"�� # ����� �2B�0�

�-� ��+� !2�������!"� 4��� +��� 2� ���"�$����"� ���"�*

��"� �,�"�� $�!+ � "!"*�"�� ���� !"�! �" �"�� ����

+����+3 �"� �-� 5 D ���"�, 4�� ����,,� ���� ��2,� AB

@ - �$��� �-� ���"�$���

�-� �2!�� ����,�� 4��� $���-�� !":�+�� �" �,, �!������

,�"�� 2� �!��-��" 2,!� �"�,���� !$ �-� %& ���"� �����

�!"�����"� 4��- �-� �����, �"��� ��!" ����3 4-����� �,,

�%�+�"�� ,�"�� ���"� ��2�� �-� ���!���� ��"� �� �����"�

,���,� ��!" �"�� ��!"3 "!"� -�� ���� ��2,� %& ���"� �����

�" �-� �2��" � !$ �"�� ��� #��� ����� '� $!� �%�+�,��0�

�-� %& ���"� ���� ,���, 4�� 4�,, !���,���� 4��- �-�

;�!��� �" � �"��"����� �-� -��-��� ,���, !$ �-� %&

���"� ���� 4�� $!�"� �" ,�"�� ��3 �(3 �3 ) �"� ��� �

��!,!"��� �" �2���!" �������� �! ,��� �! � ���� ��

���"� ���� ,���, #���� ��!4" $!� �B' 4��/� �" �-� �����" �

!$ �-� �"�� �� ������ � �@ - �"�� ��!"� !+���� ,�"�� 2

�"� �" ����� '�0� �-�� ��+�*����"��"� ���� ��!" 4��

�,�! !2������ �" �,, !�-�� �����!��,� ���!���� �"�� �2,�

�����+� #���� �!��+� �"� �-��3 �77(� �����"�6 � ��3

�7770� �! ���� 4-��-�� �-�� ���� ��!" !$ %& �%������!"

4�� ����� 2� �"�� �� �"���2�,��� !� 2� � ����"����6���!" !$

�-� C� �����+3 4� ���"�$����� '*4��/*!,� ����,�"��

���+�"���� �"� ��!4" �" �-� �����" � !$ �-� �"�� ��

�@@ $����� 1�� �� �,�

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 3: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

!"�! � $���- �"�� ���� +����+3 �"� �-� ���!���� ��"�

� ������ 4�� �������� 2� �!��-��" 2,!� �"�,�����

����� '#20 �-!4� �-�� �-� �� !"� �"�� �� �����+�"� 4��

�2,� �! $�,,� ��� ������ �-� �����+3 ��������"� �-�� �-�

���� ��!" �" 5 D �%������!" ����"� �-� :��� �"�� ��!" 4��

��!2�2,� ��� �! �"�� �� �"���2�,����

<!+� ���� �����"��� �2!�� 4��� !2���"�� 2� ���"� �

+�%���� !$ �4! �"�� ���3 �(*�*�������!, �"� >*-���!%�,

��+!%�$�"� �-� ,����� �� �" �������!, ��!"��� �-�� � �� �� �

���!"� �"�� �� �" �����" �"�+�, �,,�� �! �����"����- 4-� -

!$ �-� �4! �� � ���� !� +!�� � ����3 ���"���"� �,�"�� #,�"��

�3 A �"� ��0 4��� ��������,� ������� 4��- ��$$���"�

!" �"�����!"� !$ �(*�*�������!, !� >*-���!%�, ��+!%�$�"

#���A3 ���3 �3 � �"� A ��3 ����� ����,�03 �"� �-� %&

���"� ���� ,���, 4�� �"�,�6��� =-����� 2!�- -�+� �,�

4��� ���2,� !$ � ������"� �-� ���!���� ��"�3 �������!,

�������� �! ��!�� � � �,��-�,� -��-�� ���"� ���� ,���, #����

"!� �-!4"0� �-�� ��$$���" � 4�� ��!2�2,� ��� �! �-� $� �

�-�� �-� �� �� � $�" ��!" �" 2� � ������� 2� ����!��" 2��

"!� >*-���!%�, ��+!%�$�" #=�2���� � ��3 �7))0� 1� ���� >*

-���!%�, ��+!%�$�" �� !"������2,� +!�� �%��"���� �-�"

�(*�*�������!,3 4� ���� �-� ,����� �" �,, ��2��E��"� �%����*

+�"���

�� ,-. ���� / � �*��)� �� � ����) ���� �� ����)��

���� ���������

�! ���� �-� �!��*����!"�� !$ �-� C� �"�� �2,� �����+3 �*

4��/*!,� ���"���"� �,�"�� ���+�"���� �"� �,����� �" �-�

�2��" � !$ �"�� ��� 4��� ���"�$����� !"�! +���� !"���"*

�"� �����"� !" �"�����!"� !$ �������!,3 �"� �,����� $!� �"

������!"�, �@ -� �4! �"����"��"� �'#(%& ,�"�� #J!��

� ��3 �77)0 4��� ���� �� !"��!,�� ��� ���)B5 D ,�"�� #�3

)3 ��3 �( �"� ��0 4��� ������ �"� ��+�,�� ����,�� 4���

!2���"��� ����� > �-!4� ����,�� !2���"�� $�!+ ,�"� �(�

9"��� �-� ����� !"����!"�3 �-� 5 D ���"� ���� 4�� "!�

���� ��� �" ���-�� 4�,�*���� !� �"������� ���"���"� �,�"���

�-� 5 D ���"� ���� 2� �+� ���� ��2,� !" �����+�"� 4��-

) "� �������!,3 �"� ��� -�� � ,���, !+����2,� �! �-!�� !$

�-� 'A<B5 D ,�"�� ��!�"� ��� �� �������!,� �-� �����+

�������� �! 2� ��������� �� A �� �������!,3 �� -��-��

�"�� �� !" �"�����!"� ��� "!� ���"�: �"�,� �" ����� �-�

=����� +$ � � -�+��� ������+ !$ �-� C� �� �!��I",� �-� ����!" 2��4��" �-� ���-� �"� ,�$� 2!����� �� �-!4" #"!� �! � �,�0� %��(2�3 � ��"�-��� ��!+!��� #��-��� � ��3 �7770 !"��!,,�"� C�� C�3 ����E��" �� �" !��"� � -�+��� ���"� �����!" $� �!� !"���"�"� �-� ��*2�"��"� �!+��" !$ ��%� #�������� �B)(03 �-� ���"� �����!" � ������!" �!+��" !$D�@ #�������� >�'B>(70 �"� �-� ����,��!�� ����!" !$ �-� -�+�" ����!��" �� ���!� #�������� �)�BA7A0� �.23 ���# .2 �!,�#�0 ������!" ��E��" �� ���3"!��,�"� ��"�-��� ��!+!���� �D�3 -���!+� �" �-!��-!���"�$����� �� !��"� ��E��" �� ����3 "!��,�"� ��"�-��� �!,�#�0 ������!" ��E��" �� 3� 4 3 ���-� !���� !$ �-� ��%� !�����!� ��E��" �� B>@3 �-� B>@ 'A< +�"�+�, ��!+!���� ��<3 +�,���,� ,!"�"� ����� $!� ������ ��"��� �� 3 ����<� �!,�#�0 ������!"��E��" �� ���!4� �"�� ��� �-� ���� ��!" !$ ���"� �����!"�

=����� <$ �������!,*�"�� �� %& �%������!" �" ���)B5 D ���"���"� ����)�*��� �,�"���%& �%������!" 4�� �"�� �� 4��- � �� �(*�*�������!, �"� ��A �� >*-���!%�, ��+!%�$�" #�03 !� 4��- � �� �(*�*�������!, #2B�0�#�0 D�� -� �%������!" ������" �" �!!�� #,�"� ��0�#20 � >*���*!,� ����,�"� ���+�"���� �"� ��!4" �" �-� �"�� ���� +����+#,�"� ��0�# 0 � ,!��� �%�+�"���!" !$ �-� ����,�"� �-!4" �" #20�#�0 %& �%������!" �" � �!!� #,�"� �0 �$��� � �@ - �"�� ��!"��,, �+���� 4��� ��/�" �"��� � ;�!��� �" � +� �!� !���

�� ,-. ��)���� 4*� ����� ���� / �@(

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 4: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

�%������!" ,���,�� 9"��� �-��� ����� !"����!"�3 �-� C�

������ ��!+!��� � ������ 4�� �2!�� $!�� ��+�� -��-�� �-�"

�-�� !$ �-� 'A< ��!+!���� �-��� 4��� �!+� �������!"�

�+!"� ��$$���"� ���"���"� ,�"�� �" �-��� ����!"��� �!

��$$���"� �"�� �� !" �"�����!"�� =-����� �-� 5 D ���"*

� ����� �" ,�"�� � �"� �� !�,� 2� ���� ��� �" �,�"�� �������

4��- ��> "� �������!,3 � -��-�� �"�� �� !" �"�����!" #��

�! ) "�0 4�� ��E����� �! ���� � 5 D ���"� �����!" �" ,�"�� )3

�� �"� �(� ������-�,���3 �" �,, ������ ,�"�� �-� �����+

�������� �! 2� ��������� �� ����!%�+���,� A �� �������!,�

��*�) � �*��� �� �� ,-. ���� / �� ����)��

�! �"��������� �-� �"�� ��!" /�"��� �3 �*4��/*!,� ����,�"��

4��� ���"�$����� �! � +����+ !"���"�"� � �� �(*�*�������!,3 �"� �,����� $!� �����"� ����!��� �-��� �"��*

��"��"� ,�"�� #,�"�� �3 �( �"� ��0 4��� ������3 �"� ��+�,��

����,�� 4��� !2���"��� ����� A �-!4� ����,�� !2���"��

$�!+ ,�"� �(� <�+�,�� �! 4�,� ����3 �-� �"������� ���"���"�

�,�"�� #��+� � -0 -�� �"���� ��2,� %& ���"� ���� ,���,�

�"��� �-� ����� !"����!"�� �-� %& ���"� ���� 4��

���� ��2,� �$��� � '� +�" �����+�"�3 �"� ��� -�� � ,���,

��+�,�� �! �-�� !$ �'#(%& 2��4��" @ �"� �� -� �-� -��-���

���"� ���� ,���, 4�� $!�"� �� ��!�"� �> - �$��� �"�� ��!"3

4-�" �-� � ������ !$ �-� �"�� �2,� �����+ 4�� ����!%�*

+���,� )�>*$!,� �-�� !$ �-� 'A< ��!+!��� #����!%�+���,�

>�'* �"� 7��*$!,� -��-�� �-�" �-� 'A< ��!+!��� $!� ,�"�� �

�"� ��3 ����� ����,�0� �$��� �-�� ���/3 �-� %& ���"� ����

,���, ������,,� �� ,�"���

�� ,-. ���� / ��� �� �**�� �� ��4�� �� *����������

�� ��� �� *����

�"� ��,��2,� -�+� �,*�"�� �2,� �����+ �-!�,� -��� "!

�!%� "!� "!"*��� �: �-���!,!�� �, �$$� �� !" �-� -!��� =�

-��� ���$�,,� $!,,!4�� +!�� ��!4�- �"� ����,!�+�"�

������ #�% ��� �+2��!��"����0 !$ :�� ���)B5 D

����)�*��� ���"���"� ,�"�� #�3 ��3 �@3 �( �"� ��0 �" �-�

�����" � #�� �� �������!,0 �"� �2��" � !$ �-� �"�� ��3 �"�

��� "!� !2����� �"� ������"� +!��-!,!�� �, !� �-���!*

,!�� �, �,������!"� �" �-��� ,�"��� <�+�,��,�3 �������!,*

�"�� �� �%������!" !$ � "�+2�� !$ !�-�� ������ ��"��

4�� $!�"� �! -��� "! ������"� "!"*��� �: !� �������

�-���!,!�� �, �$$� �� #K� 8�!3 L�*=� ���3 5� �����3 ��

1�""!3 <� �!,,�� �"� ��*�� �-��3 �"��2,��-�� ����,��0�

�� �-� +!,� �,�� ,���,3 4� �%�+�"�� �-� �%������!" !$

+&�5�3 � ��$�"�� ����!"��*��,���� ��"� 4-� - 4��

�� �"�,� �-!4" �! 2� �"�� �� 2� ��%�+��-��!"� #��%0 �"

�!+� 55*���"�$!�+�� ����)�*��� �,�"�� #J�"� � ��3

�7770� =�,�*����3 C� #���)B5 D3 ,�"�� � �"� �(0 �"� 55

#���(���*�� 3 ,�"� '��� �!��+� �"� �-��3 �77(0 �,�"��3

���+�"���� �"� ��!4" �" �-� �2��" � !$ �"�� ��� $!�

� 4��/�3 4��� ���"�$����� !"�! +���� ����,�+�"��� 4��-

!� 4��-!�� �������!, !� ��%3 �"� �,����� $!� �" ������!"�,

>) -� =-����� ��% �"�� �� +&�5� �%������!" �" �-� 55

�,�"�� 2�� "!� �" 4�,�*���� !� C� �,�"��3 �������!, -�� "!

�$$� �� !" +&�5� �%������!" �" �,, �,�"�� ������ # ����� @0�

�!�� �-�� �-� ,!4 ,���, !$ �%������!" !$ +&�5� �" �!+�

4�,�*���� �"� C� �,�"�� �����+�2,� ����,��� $�!+ �

��"���, ������ ����!"�� #���� ����"� ���"�$����"� �,�"��03

�"� �-�� F2���,H �%������!" !�,� ��� - !"������2,�

-��-�� ,���,� �$ �-� ����,�"�� 4��� "!� ���$�,,� -�"�,��

#���� "!� �-!4"0� �-� �2!�� ����,�� ������� �-�� � ������!"

!$ �-� C� �����+ �" ���"���"� ����)�*��� �,�"�� -�� "!

���� ��2,� "!"*��� �: �$$� �� !" �,�"� ��!4�- �"� ����,*

!�+�"�3 !� !" +&�5� �%������!"�

=����� 6$ �%������!" !$ �-� %& ���!���� ��"� �"��� �-� !"��!, !$ �-�C� �����+�#�0 �"�� ��!" !$ %& ���"� ���� ,���,� �" ��$$���"� ���"���"� ,�"��� ���)B5 D ���"���"� �,�"�� #��3 -����!6��!�� �����0 4��� ���+�"���� �"� �,����� �" �-� �2��" � #,�"�� �3 ����,�+�"��� 4��- '� +� ,B�

-���!+� �"0 !� �����" � #,�"�� 0 !$ �"�� ��� #� �� �(*�*�������!, �"���A �� >*-���!%�, ��+!%�$�"3 '� +� ,B� -���!+� �"0 $!� � 4��/�� ��!���!" !$ ����,�"�� ��!4" �" �-� �2��" � !$ �-� �"�� ��� 4������"�$����� !"�! �" �"�� ���� +����+ #� �� �(*�*�������!, �"� ��A �� >*-���!%�, ��+!%�$�"3 '� +� ,B� -���!+� �"03 �"� �" �2���� $!� �@ - #,�"��20� �!��, ��� #�� ��0 4�� �"�,�6�� 2� �!��-��" 2,!� -�2����6���!" ���"�� %& �� �� � ��!2�� ���"���"� ,�"� "�+2��� ��� ����" �� �-� �!��#20 ��� ������!" !$ �-� C� �����+� ���)B5 D ���"���"� �,�"�� #,�"�� ��"� �(� �>3 -!+!6��!�� �����0 4��� ���+�"���� �"� ��!4" �" �-��2��" � !� �����" � !$ � �� �������!, $!� ' 4��/�� ��"�� �3 ����,�"����!4" !" �-� "!"*�"�� ���� +����+ 4��� ���"�$����� !"�! �-� �"�� ����+����+ �"� �,����� $!� �@ -� ��"�� 23 ����,�"�� ���+�"���� �"� ��!4"!" �-� �"�� ���� +����+ $!� ' 4��/�� ��"�� 3 ����,�"�� ���+�"���� �"���!4" !" �-� �"�� ���� +����+ $!� ' 4��/� 4��� �,����� �" �-� $���-,��������� �"�� ���� +����+ $!� �@ -� �!��, ��� #A ��0 4�� �"�,�6�� 2��!��-��" 2,!� -�2����6���!" ���"� � %& �� �"� �" � ��" ��"!+� $���+�"� �� ��!2��� �-� 2,!� �-!4" $!� �-� %& ��!2� 4�� �%�!��� $!�) - #,�"� �0 !� � - #,�"� �(0�

�@) $����� 1�� �� �,�

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 5: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

&��������

���� 4� ���!�� �-� ����,!�+�"� !$ � "�4 -�+� �,*

�"�� �2,� �%������!" �����+ $!� ��� �" ���"���"� �,�"���

� �����,�� -��� ����6���!" !$ �-� C� �����+ �" ���"���"�

����)�*��� �,�"�� ��+!"������� �-�� �-�� �����+ �� ���-�,�

����,���� �"� -��-,� �"�� �2,� 4��-!�� �"� ���� ��2,�

�!%� ���� �" ������!" �! %&3 �-� C� �����+ -�� 2��" ����

$!� �%������!" !$ � "�+2�� !$ ��"�� �" ���"���"�

����)�*��� �"� �!2� ! �,�"��� �+!"� �-� ���"���"�

,�"�� �%�+�"�� 2� �!��-��" 2,!� �"�,���� #!��� A�� ,�"��03

+!�� �-�" (AM �-!4�� � -��- ���"���"� �%������!" ,���,

��!" �"�� ��!"3 4-����� "!"� �-!4�� ���� ��2,� 2� /*

��!�"� #K� 8�!3 L�*=� ���3 5� �����3 �� 1�""!3 <� �!,,��

�"� ��*�� �-��3 �"��2,��-�� ����,��0� �-� C� �����+ -��

�,�! 2��" �� ���$�,,� ���� �" ���2,� ���"�$!�+�� �!2� !

1N� �,,� #8�! � ��3 ����0�

�� �"�,�3 �"!�-�� ��*2���� �"�� �2,� �����+ 4��

���!���� 2� 1�� � � �� #����0� �-� -�+��� ���"�� �����!�

��*� 4�� +��� 2� �"�����"� �-� ���"�� ������!" �!+��" !$

�-� +��6� ���"� �����!" $� �!� � �"�! �-� ���"�� ������!"

�!+��" !$ �-� -�+�" ��� �-� ������ ��"�� 4��� !"��!,,��

2� � 'A< +�"�+�, ��!+!��� $���� �! +�,���,� !���� !$ �"

����!��"*����!"���� �,�+�"�� �" ���2,� ���"�$!�+�� +��6�

1,� / ��%� �" <4��� #1�<0 �,,�3 ��*� !�,� � ������ �-�

�%������!" !$ � ,� �$����� ���!���� ��"� �" �" �������!,*

����"��"� $��-�!" #�� �! �> ��� ��,����� ,��-� �"���0

4��-!�� ���� ��2,� 2� /��!�"� �%������!"� 9��"� �-��

�"�� �2,� �����+3 1�� � � �� #����0 !����%������� �"

1�< �,,� �4! ���"� �����!" $� �!�� ��� #� $���!" $� �!�

2��4��" �� �"� �0 �"� D3 4-� - ��� �-!��-� �! 2� �"�!,���

�" �-� ;��!"!�� 2�!��"�-��� ���-4��3 �"� ���"��:�� �

,���� "�+2�� !$ �!4"�����+ ������ ��"��� �-� ��B�

�����+3 -!4����3 -�� "!� 2��" ������ �" ���"���"� �,�"���

�" ������!"3 �-� ������ ��!+!��� ����"��- #$!� �%�+�,�3

��,����� �! �-� 'A< ��!+!���0 �� "!� /"!4"�

�-� C� �����+ ����!"�� �! � 4��� ��"�� !$ �"�� ��

!" �"�����!"� #$�!+ ) "� �! A �� �������!,03 �"� �-�

������ ��!+!��� ����"��- �" ��� - � ,���, ��+�,�� �! �-�� !$

� 'A< ��!+!��� �� � ��,�����,� ,!4 �"�� �� !" �"�����!"

#��� ��0� �!��!���3 ���"� �����!" !$ ������ ��"�� �" 2�

�����,� ���"�� !" 2� �������!, #�" '� +�"03 �"� �" ��� -

=����� 5$ !��B����!"�� !$ �-� C��"�� �2,� �����+ �! �*�������!,��4!*4��/*!,� ���)B5 D ���"���"� �,�"��#,�"� �(� �>3 -!+!6��!�� �����0 ��!4" �"�-� �2��" � !$ �-� �"�� �� 4��� ���"�$�����!"�! +���� !"���"�"� ����!�� !" �"�����!"� !$ �(*�*�������!, �� �"�� ����#�!� !$ �� - ,�"�03 �"� �,����� $!� �@ -��!��, ��� #A �� �� - ,�"�0 �������� $�!+�"������� #,�"� �0 !� �������!,*������� �,�"��4�� �"�,�6�� 2� �!��-��" 2,!� -�2����6���!"���"� � %& �� �� � ��!2�� ����������� $�!+ �4! �"����"��"� ,�"�� !$�'#(%& #'A<*� �"� 'A<*� !" �-� ,�$� ������A3 -!+!6��!��� J!�� � ��3 �77)0 �"� 4�,�*���� �,�"�� #�!,*� !" �-� ���-� ����0 4����" ,���� �� !"��!,�� �-� 2,!� 4�� ����!2��4��- �" � ��" ��"!+� �� $���+�"�� �-�%& ���"� ���� ,���, 4�� "!�+�,�6�� �! �-��!$ � ��"� �-� ������� � ������ !$ �-� �4!�'#(%& ,�"�� 4�� ��� �� ���M3 �"� �-�� ������ !$ �� - ��+�,� ��,����� �! �-�� +��"��,�� 4�� ����" �" �-� -���!���+�

�� ,-. ��)���� 4*� ����� ���� / �@7

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 6: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

���-�$!,� -��-�� �-�" �-�� !$ � 'A< ��!+!��� 4��-�" �> - !$

�"�� ��!"� �-��� ��!������� �,,!4 ���"���"�� �! 2�

�%������� �� �-� ������� ,���, �"� ����!� 2� ��!���,�

��?����"� �������!, !" �"�����!"� �"� �" �2���!" ��+��

�-� ����"����� !$ �-� C� �����+ ��� �����+�2,� �����2*

���� �! ������, $� �!��� ����3 2� ���� �� 2�"�� �! �������!,

4��- � ���� -��- �$:"��� #���A "�� ���,,��* -��"!4 �"�

��"��3 �77703 �-� C� -�+��� ���"�� �����!� �" 2�

� ������� 2� � ��,�����,� ,!4 �"�� �� !" �"�����!"�

<� !"�3 �-� 1 !$ ��%� �!�� "!� ����+2,� ���� ����,,�

�-!�� !$ �"� /"!4" ��/���!�� $� �!�� #I����,*1� --���

� ��3 �77�03 �-�� ���� �"� �-� �!���2�,����� �-�� C� +��

2�"� �! �"�!��"!�� �,�"� ��� �,�+�"��� �-���3 �� +�"*

��!"�� 2�$!�� �-� 1 �"� �-� ��+���6���!" �!+��" !$

��%� ��� �-��� �,,� ������2,� #��/� � ��3 �7)�03 4-� -

�,,!4� �-� ��%� 1 �! 2� ���-�,� ����,���� 2� �-�

����,��!�� ��E��" �� $���� �! �� 4��-!�� !+��!+���"�

��� 2�"��"� �$:"���� �-�� ��!����� �� ��!2�2,� �-� +!��

���� �, $� �!� $!� 2!�- ,!4 2���, �%������!" �"� -��-

�"�� �2�,��� !$ �-� �����+�

�" ������!" �! �-�� !$ ��%�3 4� -��� �,�! ������ �4! !�-��

1� �" �-� !���� !$ ����,!��"� -�+� �,*�"�� �2,�

�%������!" �����+� �" �,�"��� �-� 1 !$ �-� �����

���"� �����!" $� �!� D9�' #��� 6�/ �"� 1��"�����3 �77�0

4�� ���� $!� �-� !"���� ��!" � D� #O D�@� �O ��0

=����� 7$ �"�� ��!" ��+�* !���� !$ �-� C������+��4!*4��/*!,� ���)B5 D ���"���"� �,�"��#,�"� �(� �>3 -!+!6��!�� �����0 ��!4" �"�-� �2��" � !$ �-� �"�� �� 4��� ���"�$�����!"�! � +����+ !"���"�"� � �� �(*�*�������!,3 �"� �,����� $!� �����"� ����!���� �"�� ���� �2!�� �� - ,�"�� =�,�*����#�!,*�0 �,�"�� 4��� -�������� �� �-� 7@ -��+� �!�"�� �� �� �!��, ��� 4�� ,!���� �"�� - ,�"�� <�� ,���"� �! ����� > $!� !�-���� -"� �, �����,��

=����� ,$ �%������!" !$ �-� +&�5� ��"� �" 4�,�*���� �"� ���"���"� �,�"����4!*4��/*!,� 4�,�*���� #�!,*�03 ���)B5 D #C�*�3 ,�"� �� C�*�(3 ,�"� �(��,, �>3 -!+!6��!�� �����0 �"� 55 #55*�� 3 ,�"� '��� �(3 -!+!6��!�������� �!��+� �"� �-��3 �77(0 �,�"�� 4��� ��!4" �" �-� �2��" � !$�"�� ���� <���,�"�� 4��� �-�" ���"�$����� !"�! � +����+ 4��-!���"�� ��� #,�"�� �03 4��- �� �� ��% #,�"�� 20 !� �� �� �(*�*�������!, #,�"�� 03 �"� �" �2���� $!� >) -� ��� #�� �� �� - ,�"�0 4�� �������� �"��"�,�6�� 2� �!��-��" 2,!� -�2����6���!" ���"� � +&�5� �� #�<� ,!"�'( ���( !2���"�� $�!+ �-� ����)�*��� 1�!,!�� �, ���!�� �� ��"���0 �"��" � ��" ��"!+� �� $���+�"� �� ��!2��� �"�� ��!" !$ �-� ���"���"� 2��������!, �" �-� C� ,�"�� 4�� !":�+�� 2� ����!2�"� �-� 2,!� 4��- �%& ���

�(� $����� 1�� �� �,�

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 7: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

� �����!�3 4-� - 4�� $!�"� �! 2� 4��/,� � ���� �" ���"�*

��"� ����)�*��� �,�"�� #D� <���,-!$�� �"� ��*�� �-��3

�"��2,��-�� ����,��0� �" � �� !"� ����+��3 4� ���� �-�

2� �����, ,� �!�� �������!� #�� �0 1 #�������� �B@>3

�" ,���"� �-� ,�"/�� !� -�"�� ��E��" �O ���2���-3 �7()�

��4�� � ��3 �77@03 4-� - �� �,�! 4�,, ��������� $�!+ ���

����,��!�� �"� !,��!+���6���!" �!+��"�3 �! ���,� � �-�

5��> 1 �" 55� �-� ���"�� ������"� � ������ !$ �-�

����,��"� -�+��� � �����!� �53 -!4����3 �������� �! 2�

������,���� �" ���"���"� ����)�*��� �,�"�� #K� 8�! �"�

��*�� �-��3 �"��2,��-�� ����,��0� �� -�� 2��" /"!4" �-��

4-�" � 1 �� $���� �! � -����!,!�!�� ��E��" �3 ��� ��*

2�"��"� � ������ +�� 2� ���"�: �"�,� �,�����3 ����"��"� !"

�-� !"��%� �"� �!����!" !$ �-� $���� ��E��" ��� ���!" !$

������, "!"*2� �����, ��!���"� �! �-� 1 !$ ��%�3 $!�

�%�+�,�3 ������,� �"-�2��� �-� 2�"��"� !$ �-��� -�2���

��!���"� �! �-� ��%� !�����!� #5!,�+�� �"� 1��"�3 �77�0�

I" �-� !�-�� -�"�3 4-����� ������, ��%�*-�< � #-�+�"

-��� �-! / ���"� �����!" $� �!� �0 $���!" ��!���"� 2!�"� �!

�-� ������ �� 4��- ���� -��- �$:"��� 2!�- �� ����� �"�

�� ���� #8�! � ��3 �77>� 8�! � ��3 �77A03 $���"� �-� ��%�

��E��" � �! �����" �!����!"� !$ �-� ��+� $� �!� !+*

�,���,� �2!,��-�� ��*2�"��"� � ������ ������,��� !$ �-�

�����" � !� �2��" � !$ �-� ��+���6���!" �!+��" !$ ��%�

#K� 8�! �"� �� !�,,+�3 �"��2,��-�� ����,��0� �-��

��E��" � !"��%� �"� �!����!"*����"��"� �$$� � +��

�,�! 2� ���,� �2,� �! �-� D9�' �"� �� � 1�� �" ������!"

!+�,� ���!" �� �-�� !$� �!�� �"�G!� �!��*���"�,���!"�,

+!��: ���!"� +�� 2� ��E����� $!� �-� ���"�� ������"�

� ������ !$ � -�+��� $� �!�3 �� �� �"�,� ��+!"������� $!�

D9�' ����,$ #���"� �"� 1��"�����3 ����0� �� �� �"�������"� �!

"!�� �-�� �-� ����� � ,�"� �������!� #����03 4-� - �+�,!��

� ����,��!�� +� -�"��+ ��+�,�� �! �-�� !$ �� �3 2�"�� �! ���

!�����!� �" �-� �2��" � !$ ����,��!�� +!,� �,�� #����� �*

,�"�03 2�� ����! ����� $�!+ �-� ������ �� !" ���! ����!"

4��- ����� � ,�"�� � ����*������� -�+��� $� �!�3 �5

#����*5�*D�@03 4-� - �� ���� ����,,� ��+�,�� �! �53

������� �! 2� ���-�,� ����,���� 2� �-� ��?!�"�"� 5� +!����

#1!-"�� � ��3 �7770� �-� ��$$���"� ����,��!�� ��!������� !$

�5 �"� �5 �����"� ������!"�, �%�+�,�� !$ ��E��" �

!"��%� �"� �!����!" �$$� ��� �� 4�,, �,�! 2� �"�������"� �!

�����+�"� �� 4-� - ,���, �-� �5 � ������ 4�� ����,����

#���� ��+���6���!"3 "� ,��� ,! �,�6���!"3 ��*2�"��"� �"�G

!� ���"� �����!" !+����" �03 4-� - +�� ��!���� �"��,�*

�2,� ,��� $!� �-� $����� ����,!�+�"� !$ -�+� �,*

�"�� �2,� �����+� �" �,�"��� �" ��"���,3 � -����!,!�!��

1 4��- � -��- ��*2�"��"� �$:"��� �"� ���-� ����,���!"

�� ���� +�� "!� �����" �-��� -��� ������� � �" �,�"� �,,��

�" ���"���"� ����)�*��� �,�"��3 �-� C� �����+ ��� "!�

������ �! 2� �!%� �! �-� -!�� "!� �! � ������ �-� +&�5�

��"�� �!4����3 �%������!" !$ � ���"���"�3 !"��!,,�� 2�

���-�� �" �"�� �2,� !� � ���!"� !"��������� ��!+!��� #�� -

�� �-� 'A< ��!+!���03 +�� -��� �$$� �� !" �-� �%������!"

!$ �"�!��"!�� ��"�� �" ������!" �! �-� �%�� ��� �-���!*

,!�� �, �$$� ��� �!��!���3 �"��!�� �"� � $!����" ��

����� �,������!"� �" �-� -!�� ��"!+� 4-� - +�� -��� �

��2���"���, �+�� � !" �,�"� ��!4�- �"� ����,!�+�"��

�-���$!�� �-� C� �����+ +�� �,�! -��� �"������� �$$� ��

!" �-� -!�� �,�"�� "!� �����,�� 2� !�� �������3 �"� +��

�$$� � �%������!" !$ �"�!��"!�� ��"�� !�-�� �-�" +&�5��

�" 55*���"�$!�+�� �,�"��3 ��%*����"��"� +&�5� �%����*

��!" �" �!+� �,�"�� 4�� ��������� �! 2� ����� 2�

2�"��"� !$ �-� -�+��� ���"� �����!" $� �!� �! ���*�,�+�"��

�" �,�"� ��"!+� !� � "!"*��� �: ���"�� ������"� � ������

!$ �-� D�@ ��E��" � #J�"� � ��3 �7770� �� ������� �-�� �-�

�� !"� �!���2�,��� �" 2� �% ,���� 2� ���� �-� C� $���!"

$� �!�3 4-� - �,�! !"���"� �-� ��+� D�@ ��E��" � �� �"

553 ��� "!� �,� �� �"� +&�5� �%������!"�

=-����� �-� C� �����+ �� ���-�,� ����,���� �"� -��-,�

�"�� �2,� �" ����)�*��� �"� �!2� ! ���"���"� �,�"��3

�-� �����+ +�� "!� $�" ��!" �� 4�,, �" ��� ��� 4��- � -��-

,���, !$ �-��!����!��"�3 $!� �%�+�,� �!�2��"� �!"?������

�-��!����!��"� ��� /"!4" �! 2� ����!��"� �,,� �"� ���� �"

�,�"� �,,�3 2�� �-� $��� $!�+3 4-� - �" 2� !"������ $�!+

�-� !"?������ $!�+ �" �� �!,��3 �� � ���� #�����4�� 2�

J��6�� �"� C�3 �77(0� �� 4�,, 2� �"�������"� �! �����+�"� �$

�-� C� �����+ �" 2� ����,���� �" ��� ��� 4��- � -��-��

�-��!����!��" !" �"�����!" #���� �!�2��"0� �,�-!��- 4�

-��� "!� ��� ������ �-� C� �����+ �" +!"! !��3 �-�

� �����!� ������� �! 2� �!��"���,,� ���$�, �" +!"! !�� ��

��*� �" 2� ���-�,� !"��!,,�� �"� -��-,� �"�� �2,� �"

+��6� 1�< �����"��!" �,,� #1�� � � ��3 ����0� �"

������!"�, !" ��" �� �-�� �-� C� �����+ �� �"�����2,�

$!� :�,� ���,� ���!"� 2� ���� !$ �-� -�+� �, "����� !$ �-�

�"�� ���� �!4����3 �� �-!�,� 2� �!���2,� �! ���,� � �-� ��

����,��!�� ��E��" � 4��- �-�� !$ �" �"�� � ����!�� "� ,���

�� ���!�3 �-�� ��"����"� �-� �����+ �"��� �-� !"��!, !$ �"

�"�� �� ���3 �� �� �-� ��� 4��- �-� 55� �����+ �� �"�,�

����,!��� 2� �����"�6 � �� #�7770�

��������� � ��������

��/�) �������������

�-� ���� #+�"� 2��" "� ,���� �������0 �"� .���� $���+�"� !$���(��� #�!��+� �"� �-��3 �77(03 4-� - !"���"� ��E��" ���" !��"� �-� D�@ ���"�� ������!" �!+��" �"� � �!���!" !$ �-�����,��!�� ����!" !$ �-� ��� �,� ! !��� !�� �� ���!�3 4�� ,������ �!�-� ,/�� #������,,� ��������0 �"� .���� �������� ����G(7 #8�! � ��3 �77>0� �-� ����,��"� !"���� �3 ����3 !"���"� �-� ��*E��" �� �" !��"� �-� �� 2�"��"� �!+��" !$ ��%� #���������B)(0 $���� �" $��+� �! D�@ #>�'B>(70*5�� �-� %� ��E��" � �"���� 4�� ���,� �� 4��- � D��*��"������ �� $���+�"� �" !��"��-� ��2!%�*���+�"�, ����!" !$ -�+�" ����!��" �� ���!� #����*���� �)�BA7A� 5���"� � ��3 �7)@0 �! ���,� ����� � -�+�" �<� ,!"� #� �@'�(��3 � ����!" "�+2�� ����A��@� ������ -5�"��� �3 �" �3 ��"����,,�3 ��3 9<�0 4�� ���� �� �-� ��+�,���$!� D�� ��� ��!"�� �" �%��� ��!,�"� ������� 4�� �"��!�� �� �" �-�?�" ��!"� !$ �-� $���!" ��!���" #C* �"� *�0� �-� ,-. -�+��� ��"��3 ��,����� $�!+ ���� 2� ,/�� !� 0������ #2,�"���0 �"� .����#2,�"���03 4�� �,� �� �"��� �-� !"��!, !$ �-� %��52� ��!+!���

�� ,-. ��)���� 4*� ����� ���� / �(�

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 8: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

#�-� #/��G.��'@�� �������� ���5��7� �� �!�� ��-��� � ��3 �7770 �!��"����� ���' �"� ���> #4��- �" ,/�� ���� 2��4��" %��52� ��),-.03 ����� ����,�� �-� %��52�(,-. $���+�"� #�������� 4��-#� )''(� �"� .����0 �"� �-� .���� #������,,� ��������0G 6��#2,�"���0 $���+�"� !$ ���(��� # !"���"�"� � �!���!" !$ �-� %���E��" �3 �-� ���# .2 �!,�#�0 ������!" ��E��" � �"� � �!���!" !$�-� -���!+� �" ���"� �����!" �"�� !� 0�0 4�� ,������ �"�! �-�#/��G���*�������� �1,��< ���� �� �!� �! ��"����� ���A �"����A*C3 ����� ����,�� �-� ������ ��!+!��� �� �!� ���@3 4-� - !"���"� ���-� !���� !$ �-� � 4 !�����!� ��E��" � $���� �! �-�B>@ 'A< +�"�+�, ��!+!���3 4�� +��� 2� �"�����"� �-� 0������G,��� #2,�"���0 $���+�"� !$ ���%�*��� #8�! � ��3 �77A0 �"�! �-�0������G���� #2,�"���0 �������� �@5 �� �!� #L� =�"� �"� ��*���-��3 �"��2,��-�� ����,��0� �-� 0������ ���� !$ ���@ 4�� !"*������ �! �" #*�� ���� �! ���,� ���@*<�-� �-� ���( �� �!� 4�� !"���� ��� 2� �"�����"� �-� #*�� $���+�"� !$ ���(��� # !"���"*�"� � �!���!" !$ D�@3 5� �"� �-� -���!+� �" ���"� �����!" �"��0�"�! �-� #*�� ���� !$ ���@*<�- �" �" !���"����!" �� - �-�� �-� ����!,�#�0 ������!" ��E��" � !$ �-� -���!+� �" ���"� �����!" �"��$� �� �-� � 4 !�����!� # ����� �0� �! !"���� � ���)3 �-�#� )''(�G!��� #������,,� ��������0 $���+�"� !$ ���A #�-� %��52�(,-. ���"� �����!" �"�� �"� �-� A� -�,$ !$ �-� 0� ���"� �����!"�"��0 �"� �-� !���G,��� $���+�"� !$ ���( #�-� '� -�,$ !$ �-� �D����"� �����!" �"�� �"� �-� � 4 578 ������ ��!+!���0 4��� !*,������ �"�! �-� #� )''(�G,���*�������� ������ #D� <���,-!$�� �"���*�� �-��3 �"��2,��-�� ����,��03 � ���������� !$ �D8D���#��?��/��4� 6 � ��3 �77>0� �-� ���)B5 D ���!���� !"���� � 4��+��� 2� �"�����"� �" ,���G#* � $���+�"� !$ �C*5 D #J!�� � ��3�77)0 �"�! �-� ��+� ����� !$ ���)�

��� /�� ����� ���"�� ���)������ ��) *���

��������/�����

�-� �!,�+2�� � !���� !$ ����)�*��� ������� 4�� ���� �" �,,�%����+�"�� �% ��� $!� �-� 'A<B5 D ,�"��3 4-� - ��� �" �-���"��2��� 2� /��!�"� #J!�� � ��3 �77)0� D,�"�� 4��� ��!4"�"��� !"��"�!�� 4-��� ,��-� �� ���� !" �!,�� � +����+ #� � �<��,��3 'M �� �!��3 ��)M ����0 ����,�+�"��� 4��- ����!�������"��2�!�� � �"� �"�� ���� ���"�$!�+���!" !$ ����)�*��� �,�"��4�� ������ !�� 2� �� ��+ �":,�����!" #1� -�!,� � ��3 �77'0����"�$!�+���!" !$ �!2� ! �,�"�� 4�� �!"� �� ��� ��2�� �����*!��,� #J�"/�, � ��3 �7770��� -����!6��!�� ����� 4��� ���� �" �"����, � ���"� # ������ �

�"� '�0� <��������!" �"�,���� �"�� ���� �-�� +!�� ���"���"� ,�"��3 �" ,���"� ,�"�� �3 ��3 �( �"� ��3 !"���"�� ��"�,� �*���"�����!"�� �-��� ,�"�� 4��� ��,$��3 �"� -!+!6��!�� �' !� �>����� 4��� ���� �" �%����+�"�� ��� ��2�� �" ������ '#20 �"� >B@� ��"� ) ��!2�2,� !"���"�� �4! �*�� �"�����!"��

9� /���� ��) ��)������

>*-���!%�, ��+!%�$�" �"� �(*�*�������!, 4��� ��� -���� $�!+������ - 1�! -�+� �,� �"���"���!"�, #���� /3 ��3 9<�03 �"���%�+��-��!"� $�!+ <��+� #<�� �!���3 �I3 9<�0� �-� -�+� �,�4��� �������� �� �3 > �"� �� +� ��! / �!,���!"� �" ��+��-�,��,$!%��� #�<I03 �"� ��!��� �� B���� �" �+�,, �,�E�!��� �<I�,!"� -�� "! �$$� �� !" ���"���"� �%������!" #���� "!� �-!4"0��-�+� �, �����+�"�� 4��� ������ !�� 2� ���� �,� ���+�"���"������ !" � +����+ ����,�+�"��� 4��- �"�� ���3 !� ���"�$����"�����,�"�� $�!+ � "!"*�"�� ���� !"�! �" �"�� ���� +����+�

�! *� *������� ��) !���� �� ������� �������

�!��, ��� 4�� �������� 4��- �-� D,�"� ��� D��� J�� #L����"3�,�" ��3 ��3 9<�03 $!,,!4�"� �-� +�"�$� ����H� �"���� ��!"��

�!��-��" 2,!���"� �"�,���� 4�� ������ !�� ���"� ���"������! ������ #<�+2�!!/ � ��3 �7)70� !� E��"�������� �"�,����3�-� 2,!�� 4��� � �""�� 4��- � D-!��-!��+��� � �""��3 �"� �-����� 4��� !,,� ��� ���"� �+���L��"� #�!,� �,�� �"�+� �3<�""���,�3 ��3 9<�0� <�� ,���"� �! ����� > $!� $���-�� �����,��

�>��%����������

=� 4!�,� ,�/� �! �-�"/ �-� ����)�*��� 1�!,!�� �, ���!�� ����"��� $!� ��!����"� ��� =� ��� �����$�, �! �� <� �!,,��3 ��J�"/�,3 <� �!�- �"� <��� <�%� $!� ���� �,,� �����"� �-� +�"�� �����"� $!� �-��� ���$�, !++�"���

.�#������

��� � � /$ �� !�� � �$� $ #�77(0 � �,� ! !��� !��*+����������"� �����!"�, �"�� ��!" �����+ �" ���"���"� �,�"��� ��� $:++3 @�AB@���

?������� �$� ������ �$ �� *��������� 0$ #�77'0 ;� *���� ������� ���/*+������� ��"� ���"�$�� 2� �":,�����!" !$ ���,� ����)�*��� ������� �,�"��� 9: �: ��): #��: ����� ��� #��: 6+,3��7>B��77�

?��#��� *$�$� .��� '$ �� !�� � �$� $ #�77�0 ������*��� �: �%������!" $�!+ ��� 'A< �"-�" �� ��2�!+��"� �" ���,������� !$ �,�"� ����,!�+�"�� .��3 $: 23 �@((B�@)>�

?������ "$� '��>� 3$� .������ @$� ������ @$ �� 0 �A� !$ #�7770���"� �����!"�, � �����!� �5 +������� ��%�+��-��!"�*�"�� �2,� �"� ����� � ,�"�*�"� ������2,� ��"� �%������!"� ���$: +23 )(B7A�

?���� �$� =��>����� B$� 0 �� �� !$� !� �� � B$� .���� ?$ ��?�%��� ?$ #����0 �%������!" ��!:,�"� !$ �-� +��6� ;��!"!�����-4�� ��"�� !"��!,,�� 2� �������!,*�"�� �2,� ���"� �����!"$� �!�� ��� �"� D� ��� 9 3 +<3 @AB)��

! ���>� @$�$� 0����� ��� �$�$� ������ 3$ � ��� #�77)0 �" ��-�"!,�"�� �2,� ��"� �4�� - $!� �,�"�� ���� �! +�"���,��� ��2!"+���2!,��+� !���� ���� ��: +,3 �((B�)��

& ������� @$�$� @0���� &$�$� & ������ �$�$ �� *������� !$@$#�7)A0 �� ��E��" � !$ �-� -����� ��+�,�% ����� ���� ���"� 4-!�� ��!�� � �� ����!"��2,� $!� ���"� �����!"�,� ������!" !$ �++������ ���,� ��!+!����� !�� ��)� � �: +63()@AB()(7�

�� ��� .$@$ #�7))0 �-� ����!�� �"� �-��!�� -!�+!"� �� ���!������$�+�,�� #�� �� 3 <513 ))7B)7A�

= � � ���� *$�$ #�7()0 <�E��" � !$ �-� ��; ��"�� !���� 3 <C53(@AB(@7�

0 �A� !$ #�77(0 �-�+� �, !"��!, !$ ��"� �%������!"� ��: � �:��� �����: ��� ��: ���: 5D3 )7B��)�

0 �A� !$ �� '��>� 3$ #�77)0 D�!+!���� �-�� ����!"� �! -�+� �,�"�� ���� �� �): ��� #��: 63 'A�B'A)�

0 �A� !$� =�������� !$ �� ����������� .$ #�77�0 <���"��"���������!" �"� -!+!��"�!�� ��*��������!" 2� ����� � ,�"� !$� +!��:�� ���'A< ��!+!��� �" �"�� � ���"���"� �!2� !�,�"��� ��� $: <3 '7(B>�>�

0������� �$�$ �� ?����� .$ #�77�0 ���� ��!���" �!+��"� �"-�2���� 2�"��"� 2� ��%�� ��: 9 ���: +<3 '��@B'��>�

0������ 0$'$� 0��� � *$� � ���9���� @$� ? >��� �$� ���� E$ ��"����� �$ #�7)@0 <�E��" � �"� �%������!" !$ -�+�" ����!��"�� ���!� !+�,�+�"���� ��� #�� �� 3 <6+3 ��A�B��A>�

F��>��%�A� *$� "� �� �$ �� @ ��� � *$ #�77>0 �-� �+�,,3�������,� �D8D $�+�,� !$ ������� ���/ 2�"��� �� �!�� $!� �,�"����"�$!�+���!"� ��� ��: ���: <73 7)7B77>�

����� /$� B� % � /$ �� B� % � $ #�7)�0 �� ,�!���� ��E��" � !$�-� � 4 ��"� !$ .: ���� 9 3 <63 @)7B@7(�

�(� $����� 1�� �� �,�

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('

Page 9: An Estrogen Receptor-based Transactivator XVE

� ��� $'$ �� ?� ������� @$!$ #����0 �-� ����,��!� !$ �-� �������!,�"� ���,�6���!" ���-4�� �� ��$$���"���,,� �-!��-!��,���� �"����!"�� �! �-� E��,��� !$ �-� "���!��" �!�� �� ��: 9 ���:<13 )7�B)77�

3������ =$� / > ���� @$� =������ .$� !�� � �$ $ �� B�� � :$ #�7770� 5*2!% +!��$ #5����5�5��0 �����+�� !"$��� -��-*,���, !"��������� �%������!" �" �� !� �"� +!"! !� �,�"��� ��� $: +D3>>'B>>)�

: ��� $0$� = ��� E$ �� "����� :$?$ #�7770 � �,� ! !��� !��*�"�� �2,� ���"� �����!" �����+ ����� ������ ��!4�- ��$� �� �" ����)�*��� �"� �"�� �� ��$�"��*��,���� ��"��� ��� $: <13��(B�''�

:���� ?$� "�����#��� *$ �� !�� � �$� $ #�77)0 � 5 D*+!��� ��,�"$���!" ��!���" ,�2�,� �,�"� � ��" :,�+�"�� �� ���� �"� �����,�6���-� � ��" ��!�/�,��!" �" ��!4�"� �!,,�" ��2��� ��� $: +,3 '7'B>���

:��>��� /$� ���� �$�$� !� �� E$"$ �� !�� � �$� $ #�7770 �"�� �2,���!��"��"�, ���"�$����� �� � -��-*�$: ��" � +��/�� $!� �,�"����"�$!�+���!"� !��: ���� ����: +C3 7�@B7�7�

:��A��� @$"$ �� ��� �$ #�77(0 ������ �-��!����!��"�� ���: � �:!���: +C3 'A'B')��

'�%��� @$� !� ��� 0$� ������ �$!$� :������ @$�$� * �� $!$�"��� ���� @$�$� ?���� �� .$0$ �� '�� *$ #�77@0 ������,���� ���� !$ �-� ,� �!�� !���!" �������!� �"� ��� !+�,�%��4��- �� �"� �"�� ��� #�� �� 3 <C+3 ��>(B��A>�

@ �A >� �$�$ �� ?� ������� @$!$ #�77�0 �"�,���� !$ !"����������"� "!"�"�� �2,� +�����!"� !$ �-� D9�' ���"� �����!"�,� �����!�� ��: 9 ���: ++3 �@�7B�@�7�

@ �����A� �$� " �>�� !$� ��� !$�$� /������� �$ �� ������ 3$#�7770 � ���!"� ��!"��� �"�� �2,� ���"� �����!" �" ���"���"� �!2� ! �,�"��� ��� $: +23 7(B��@�

@�>�� /$� ���� � E$� :����� =$ �� � > A % � �$ #�7)�0 I���"�6���!"!$ �-� 4 ��"� !$ .��� ������ ��� �"� "� ,�!���� ��E��" � !$�-� ����,��!�� ����!"� !��: ��)� � �: 23 A�7BA>'�

@�������=� ���%� �$ �� ������ 8$ #�7770 ����"�*2�"��"� �!+��"!$ ����!��" �� ���!��� 9���: 3*��: ���� ����: +13 AA�BAA@�

B������?������� *$� *����� &$� "�� ��� @$ �� 0� �����"�� ���@$ #�77�0 ��!,���!" �"� -��� ����6���!" !$ � 4 +���"��������!�� 4��- �"-�" �� �� 2�"��"� �$:"���� $: ��: ���:<<73 @�7B@���

" �����>� �$� =������ �$=$ �� @ �� ���� /$ #�7)70� �� ����9�����< ���������� �����: �!,� <���"� ���2!�3 �NO �!,�<���"� ���2!� ��2!���!�� D�����

/�� � '$� ������ �$� ?���� !$� / ����� &$� �������� �$� "����� �$ ��!� ����� *$ #�7)70 �-� -�+�" ����!��" �� ���!� -�� �4!�"����"��"� "!"� ��� ���"� �����!"�, � ������!" $�" ��!"��9 3 723 >((B>)(�

/� �� @$�$ �� BG@ ����� ?$�$ #�77>0 �!,� �,�� +� -�"��+� !$� ��!" !$ ����!��G�-��!�� �� ���!� �����$�+�,� +�+2���� ���:� �: ����� /: ,63 >A�B>)@�

�������� �$�$� 0����� "$� ���� �$.$ �� !� ����� *$ #�7))0 �-�-!�+!"�*2�"��"� �!+��"� !$ �-� ����!��" �"� �,� ! !��� !���� ���!�� !"���" �" �"�� �2,� ���"� �����!" � ������!" $�" ��!"�9 3 753 �77B��(�

����� ��� *$� 0������ @$� ������ �$� ?�F ��� $ �� 0 �A� !$#�77>0 � -�+��� ���"�� �����!� �,,!4� ����� � ,�"�*����!"������"� �%������!" �" 4-!,� �,�"��� ��� $: 73 AA7BA@7�

���� �$ �� !�� � �$� $ #����0 �-�+� �,*�"�� �2,� �����+� $!�����,���� �%������!" !$ �,�"� ��"��� 9���: 3*��: ���� ����: ++3�>@B�A��

���� �$� ? ���� .$� & ��� 0$ �� �������� .$ #�77>0 � ������!" !$ �-���*2�"��"� �2�,��� !$ -�+�" -��� �-! / ���"� �����!" $� �!� �+�� �"�!,�� �-� ���"����!" $�!+ �" �"���+!,� �,�� �! �"�"���+!,� �,�� ����,�*����"��� !�,��* !�, ���� ����� ��: 9 ���: +53 (AA(B(A@)�

���� �$� .������� &$ �� �������� .$ #�77A0 ��,���,� ,����� !$����,���!" !$ -�+�" -��� �-! / ���"� �����!" $� �!� ����: 9 ���: +73 >'�7B>''��

���� �$� ���� �$��$� �����A % � �$� ��� E$� :���� ?$ �� !�� � �$� $ #����0 JI���5��3 �" ����)�*��� �"�!*�3>*�*�,� �"���3,! �,�6�� �! �-� �,, �,��� 2� �!,���6�� �������"� �"� �� ����"���,$!� ��!/�"����� ��� 9 3 +<3 ��'(B��A��

�� ,-. ��)���� 4*� ����� ���� / �('

� 1,� /4�,, < ��" � ���3 �� ��� $������ #����03 <5� �@AB�('