vi

The EFFECT of BLACK SOYBEAN MILK on LIVER to RECOVERY HISTOPATHOLOGY in RAT (Rattus norvegicus) WITH HIGH FAT DIET

Noer Laili 1), Epy Muhammad Luqman 2), Bambang Sektiari Lukismanto 3)

1)Mahasiswa, 2)Departeman Embriologi, 3)Departemen KliikFakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

ABSTRACT

The aims of this study was to find out the potency of black soybean to decrease liver damaged in rat with fat diet. This experiment used 16 samples of rat with high fat diet in a month, as the same condition with some people who can’t stopped to eat high fat diet. And then, the samples was classification in two group, each 8 samples. P0 as control of the sample hypercholesterolemia was treated by aquadest and high fat diet, P1 as second group treated with black soybean milk and high fat diet. This held in 21 days. Liver was taken in the end of this session and held section all samples. After that, result showed P0 not significan difference with P1. It’s a causes by high cholesterol condition not to held for long time. And while there are tendency happened because by cholin which found on lesitin function to assist the hepar by countinue take the network fat consisted by the phospolipid, so that there are no neutral fat which piled up in cell liver.

Key word : soybean, liver, histopathology, high fat, diet.

Surabaya, 07 Oktober 2009

Mahasiswa: Menyetujui Menyetujui Dosen Pembimbing I Dosen Pembimbing II

(Noer Laili) (Epy M.L., M.Si.,Drh.) (Prof. Dr. Bambang S.L., Drh, DEA)NIM.060513473 NIP.132 062 698 NIP.131 837 004

Menyetujui Menyetujui MenyetujuiDosen Terkait I Dosen Terkait II Dosen Terkait III

(Setiawati Sigit, drh, M.S.) (Arimbi, drh, M.Kes.) (Dr. Ngakan Made R.W., drh, M.S.)NIP.130 808 955 NIP.131 623 056 NIP. 130 687 557

vii

The EFFECT of BLACK SOYBEAN MILK on LIVER to RECOVERY HISTOPATHOLOGY in RAT (Rattus norvegicus) WITH HIGH FAT DIET

Noer Laili 1), Epy Muhammad Luqman 2), Bambang Sektiari Lukismanto 3)

1)Mahasiswa, 2)Departeman Embriologi, 3)Departemen KliikFakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga

ABSTRACT

The aims of this study was to find out the potency of black soybean to decrease liver damaged in rat with fat diet. This experiment used 16 samples of rat with high fat diet in a month, as the same condition with some people who can’t stopped to eat high fat diet. And then, the samples was classification in two group, each 8 samples. P0 as control of the sample hypercholesterolemia was treated by aquadest and high fat diet, P1 as second group treated with black soybean milk and high fat diet. This held in 21 days. Liver was taken in the end of this session and held section all samples. After that, result showed P0 not significan difference with P1. It’s a couses by high cholesterol condition not to held for long time. And while there are tendency happened because by cholin which found on lesitin function to assist the hepar by countinue take the network fat consisted by the phospolipid, so that there are no neutral fat which piled up in cell liver.

Key word : soybean, liver, histopathology, high fat, diet.

----------------------------------------PENDAHULUAN

Pakan dan nutrisi merupakan hal yang penting bagi kesehatan. Rekomendasi zat

nutrisi pada pakan biasanya dibuat indeks berdasarkan produktivitas, seperti pertumbuhan

badan, produksi susu, dan telur. Suplementasi lemak merupakan suatu metode yang

paling sesuai untuk memenuhi kebutuhan energi yang tinggi pada pakan unggas

(Saerang, 2003). Setiap produk pangan pasti memiliki kandungan lemak, baik itu berasal

dari bahan baku itu sendiri (misal. daging olahan) maupun berasal dari bahan tambahan

lainnya seperti minyak goreng, margarin dan bahan lainnya yang ditambahkan ketika

proses pemasakan (Mayes, 2000 dalam Anggarini, 2009). Umumnya dengan

mengkonsumsi makanan dengan kandungan lemak yang tinggi dapat mengakibatkan

berbagai penyakit misalnya kegemukan, jantung koroner, dan stroke (Saerang, 2003).

viii

Kolesterol merupakan salah satu komponen lemak, kolesterol dalam darah

terdapat bentuk kompleks dengan protein yang disebut lipoprotein. Peningkatan

lipoprotein (lipoproteinemia) dalam darah dapat meningkatkan kadar kolesterol atau

kolesterolemia (Mayes, 1995 dalam Utami, 1999). Kolesterol yang tinggi dapat merusak

hepar, berupa degenerasi, nekrosis (piknotis, karyolisis, karioreksis, nekrosis), kongesti,

dan pada keadaan melanjut dapat menyebabkan sirosis hepatik dan penyakit hepar

menahun, sebab di dalam tubuh kolesterol disintesis terutama didalam hepar dan usus

halus (Price dan Wilson, 1984 dalam Utami, 1999).

Protein nabati dapat menurunkan kadar kolesterol darah pada hewan yang diberi

diet tinggi lemak (Prabowo, 1994). Menurut Priyardiyanti (1999), produk-produk kedelai

dapat menurunkan kadar kolesterol total dan kolesterol Low Density Lipoprotein (LDL)

darah tikus putih penderita hiperkolesterolemia. Kedelai hitam mengandung isoflavon

dan anthocyanin yang berfungsi sebagai antioksidan bagi tubuh (Takahashi et al., 2005).

Kandungan isoflavon dari protein kedelai dapat juga menurunkan kolesterol (Setchell and

Cassidy, 1999). Kulit dari kedelai hitam merupakan sumber pigmen anthocyanin seperti

cyanidin-3-glucoside dan delphinidin-3-glucoside. Anthocyanin ini dipercaya dapat

menurunkan kadar kolesterol. Kandungan anthocyanin pada kedelai hitam jauh lebih

banyak dibanding kedelai kuning karena warna hitam pada kulitnya (Choung, 2001

dalam Marsi, 2009).

Kedelai juga mengandung asam lemak tak jenuh ganda yang berfungsi

menguraikan lemak (Astawan, 2009). Salah satu bahan penting dalam lemak kedelai

adalah lesitin. Lesitin adalah nutrisi alami yang terdapat pada bermacam – macam

makanan dan suplemen. Lesitin berperan penting dalam biologi manusia. Lesitin yang

ix

diberikan secara peroral dapat meningkatkan kadar kolin dalam plasma, sehingga dapat

dikatakan lesitin adalah sumber penting bagi kolin (Jhonson and Mukler, 2001). Dalam

mengurangi kerusakan sel hepar, lesitin berfungsi sebagai antioksidan. Lesitin dapat

mencegah atau mengurangi terjadinya proses peroksidase lipid. Jika peroksidase lipid

dapat dicegah atau dikurangi, maka kerusakan dan kematian sel dapat dicegah atau

berkurang (Lestari, 2006).

Pada bulan April 1998, untuk pertamakalinya the US Food & Nutrition Board

(FNB) merekomendasikan bahwa kolin dipertimbangkan sebagai sebuah nutrisi esensial

dan ditentukan Dietary Reference Intake (DRI) levelnya. Hal ini berdasarkan bukti bahwa

kolin dibutuhkan untuk fungsi normal liver manusia. Lesitin (fosfatidilkolin) penyusun

utama kolin dalam bahan pangan, nampaknya berperan dalam menurunkan resiko

penyakit kardiovaskuler (Hartoyo, 2003). Penelitian serupa dengan menggunakan kedelai

hitam sebagai susu dan diberikan rentang waktu singkat belum dilakukan, namun telah

terdapat penelitian pendukung yang menggunakan bahan kedelai, baik kedelai kuning

maupun kedelia hitam. Berdasarkan uraian bahwa kedelai hitam mengandung bahan-

bahan bermanfaat lebih besar dibanding kedelai kuning, maka dirasa perlu untuk meneliti

mengenai efek perbaikan susu kedelai hitam dalam memperbaiki sel hepar dengan

pemberian diet tinggi lemak.

METODE PENELITIAN

Penelitian ini dilakukan di Laboratorium Biokimia Fakultas Kedokteran

Universitas Airlangga, kemudian dilanjutkan dengan pemeriksaan histopatologi di

Departemen Patologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan Universitas Airlangga,

Surabaya. Penelitian dilaksanakan dari bulan Mei sampai Juni 2009.

x

Alat yang digunakan adalah kandang tikus berupa kotak plastik dan tutup

kandang tikus yang terbuat dari anyaman kawat, botol tempat minum tikus, timbangan,

sonde, spuit 5ml, tabung penampung darah, gunting bedah, kapas, object glass dan cover

glass. Bahan yang digunakan dalam penelitian ini menggunakan 16 ekor tikus putih

(Rattus norvegicus) strain Wistar jantan berumur 3 bulan dengan berat badan ± 200 g,

diet tinggi lemak, air minum dari PDAM tanpa dimasak, susu kedelai hitam, alkohol

70%, dan eter. Penelitian ini menggunakan lemak yang beraal dari lemak babi sebagai

bahan campuran dalam diet tinggi lemak. Berdasarkan Widodo (1994), penggunaan

lemak babi 1,83 kg dalam 10 kg pakan dapat meningkatkan kolesterol dalam darah.

Hewan Percobaan tikus putih (Rattus norvegicus) strain Wistar jantan sebanyak

16 ekor dibagi dalam 2 kelompok perlakuan. Masing-masing kelompok diperoleh dengan

cara pengacakan menggunakan bilangan acak. Masing – masing perlakuan terdiri dari 8

ulangan. Perlakuan yang dibuat adalah sebagai berikut :

P0 : Pakan tinggi lemak dan diberi aquadest.

P1 : Pakan tinggi lemak dan diberi sari kedelai hitam.

Dosis yang digunakan tersebut berlandaskan pada penelitian sebelumnya dengan

mengambil hasil yang terbaik dari hasil penelitian tersebut. Dosis sari kedelai yang

diberikan 1,5 ml (Nangoi, 1994) yang diberikan secara per oral dengan menggunakan

sonde. Susu kedelai yang diberikan sebagai perlakuan dibuat dengan perbandingan

kedelai hitam : air sebesar 1 : 3 (Aini, 2003). Dalam penelitian ini, terdapat empat tahap,

yaitu tahap adaptasi, tahap induksi, tahap perlakuan dengan susu kedelai hitam, dan tahap

pemeriksaan histopatologi hepar.

xi

Tahap awal penelitian ini dilakukan tahap adaptasi. Pada tahap ini tikus di

adaptasikan dengan situasi lingkungan penelitian yang baru selama satu minggu dengan

diberi pakan standar. Tahap kedua dilakukan penginduksian. Pada tahap induksi ini,

diberikan pakan tinggi lemak, selama 28 hari secara ad libitum. Pakan tinggi lemak yang

digunakan dalam penelitian ini menggunakan minyak babi sebanyak 1,83 kg dalam 10 kg

bahan pakan. Pemberian pakan dilakukan selama 28 hari agar metabolisme dalam tubuh

hewan coba dapat sesuai dengan yang diadaptasikan. Selanjutnya dilakukan tahap

perlakuan selama 28 hari, kemudian pada kelompok P1 dilakukan pemberian susu kedelai

hitam, kelompok P0 tetap diberikan dengan pakan tinggi lemak dan ditambah aquadest

dengan menggunakan sonde sesuai dosis yang telah ditentukan. Tahap perlakuan ini

berlangsung selama 21 hari (Nangoi, 1994). Setelah mendapatkan perlakuan selama 21

hari, maka pada hari ke-51 tikus-tikus tersebut dianasthesi dengan eter dan diambil

heparnya untuk kemudian diperiksa secara histopatologi. Pemeriksaan histopatologi

dilakukan pada hari ke-52 di Departemen Patologi Veteriner Fakultas Kedokteran Hewan

Universitas Airlangga Surabaya (lampiran 5). Pengamatan secara mikroskopis preparat

histopatologis hepar tikus putih jantan pada penelitian ini menggunakan mikroskop

cahaya dengan pembesaran 100x sampai 1000x. Pengamatan tersebut dilakukan melalui

5 lapang pandang yang berbeda, dari tiap preparat histopatologi hati tikus putih jantan

kemudian dilakukan penilaian berupa skoring berdasarkan tingkat kerusakan gambaran

histopatologi sel hepar tikus putih jantan (Hidayat, 2008).

Hasil pemeriksaan histopatologi hepar yang diperoleh akan diberikan penilaian

sesuai dengan tingkat kerusakannya. Analisis data dilakukan dengan Uji Mann Whitney

atau Uji U karena dalam penelitian ini terdapat dua perlakuan dengan menggunakan satu

xii

dosis saja serta subjek yang berbeda. Kedua perlakuan tersebut menggunakan dosis yang

sama.

HASIL DAN PEMBAHASAN

Setelah dilakukan pemeriksaan preparat histopatologi hati tikus putih yang

diberikan diet tinggi lemak dan diterapi dengan susu kedelai hitam, diperoleh data hasil

pengamatan yang berupa gambaran degenerasi, kongesti, dan nekrosis. Hasil pengamatan

secara mikroskopis pada preparat histopatologi hati tikus putih didapatkan dengan

pengamatan melalui lima lapangan pandang yang berbeda pada tiap preparat

histopatologi.

Setelah dilakukan analisis data dengan uji Mann-Whitney untuk mengetahui

perbedaan degenerasi antar kelompok perlakuan, diperoleh harga signifikansi sebesar

0,316 maka harga tersebut lebih besar dari harga α dengan tingkat kepercayaan 5%

(p≤0,05), sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan

antara kontrol dan perlakuan (Tabel 4.1). Perubahan kerusakan histopatologi hati yang

mengalami degenerasi melemak dapat di lihat pada gambar 4.1.

Table 4.1 Rerata Rank dan Standart Deviasi Perubahan Degenerasi Hepar Tikus Putih

Perlakuan Rata-rata rank dan simpangan baku(X ± SD)

P0 9,6 ± 1,9P1 7,3 ± 1,2

Setelah dilakukan analisis data dengan uji Mann-Whitney untuk mengetahui

perbedaan kongesti antar kelompok perlakuan, diperoleh harga signifikansi sebesar 0,139

maka harga tersebut lebih besar dari harga α dengan tingkat kepercayaan 5% (p≤0,05),

sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara

xiii

kontrol dan perlakuan (Tabel 4.2). Perubahan kerusakan histopatologi hati yang

mengalami kongesti dapat di lihat pada gambar 4.2.

Table 4.2 Rerata Rank dan Standart Deviasi Perubahan Kongesti Hepar Tikus Putih

Perlakuan Rata-rata rank dan simpangan baku(X ± SD)

P0 10,2 ± 1,8P1 6,7 ± 1,3

Setelah dilakukan analisis data dengan uji Mann-Whitney untuk mengetahui

perbedaan nekrosis antar kelompok perlakuan, diperoleh harga signifikansi sebesar 0,525

maka harga tersebut lebih besar dari harga α dengan tingkat kepercayaan 5% (p≤0,05),

sehingga dapat disimpulkan bahwa tidak terdapat perbedaan yang signifikan antara

kontrol dan perlakuan (Tabel 4.3). Perubahan kerusakan histopatologi hati yang

mengalami nekrosis dapat di lihat pada gambar 4.3.

Table 4.3 Rerata Rank dan Standart Deviasi Perubahan Nekrosis Hepar Tikus Putih

Perlakuan Rata-rata rank dan simpangan baku(X ± SD)

P0 9,2 ± 1,7

P1 7,7 ± 1,6

xiv

.

Gambar 4.1 Histopatologi Organ Hati yang Mengalami Degenerasi Melemakdengan perbesaran 400x.

Keterangan : Gambar tersebut dengan pewarnaan HE. Terdapat gambaran perubahan sel hepatosit dengan sitoplasma membengkak dan terdapat vakuola yang menunjukkan degenerasi sel.

Gambar 4.2 Histopatologi Organ Hati yang Mengalami Kongesti vena dengan pembesaran 400x.

Ketrangan : Gambar tersebut dengan pewarnaan HE. Terdapat gambaran perubahan vena sentralis yang terisi oleh eritrosit.

xv

Gambar 4.3 Histopatologi Organ Hati yang Mengalami Nekrosis dan pembesaran 1000x.

Keterangan : Gambar tersebut dengan pewarnaan HE. Terdapat gambaran perubahan inti sel mengalami karyolisis.

Setelah dilakukan penelitian mengenai potensi susu kedelai hitam (Glicyne soja)

pada gambaran histopatologi hepar dapat diketahui susu kedelai hitam tidak memberikan

pengaruh terhadap perbaikan organ hepar yang mengalami kerusakan karena diet tinggi

lemak.

Ganong (2001) menyatakan bahwa kedelai mengandung fitosterol yang

mengurangi absorbsi kolesterol, mungkin melalui kompetisi dengan kolesterol untuk

esterifikasi dengan asam lemak. Protein yang terdapat pada kedelai dapat meningkatkan

sekresi dan sintesis asam empedu yang berasal dari kolesterol dan tidak diabsorbsi

kembali melalui sirkulasi enterohepatik akan keluar bersama feses yang merupakan satu

dari mekanisme utama yang bertanggung jawab terhadap pengaturan homeostasis

kolesterol (Supriyanto, 2004).

Hal itu didukung oleh hasil penelitian yang dilakukan oleh Wahyu (2009), yang

menunjukkan adanya penurunan total kolesterol yang nyata pada kelompok perlakuan

yang diberi susu kedelai hitam bila dibandingkan dengan kontrol. Pernyataan ini

xvi

didukung pula oleh hasil penelitian yang dilakukan Marsi (2009) yang menyatakan

bahwa susu kedelai hitam menurunkan kadar LDL, dan Enggar (2009) menyatakan

bahwa susu kedelai hitam menurunkan kadar TG.

Penurunan yang terjadi dikarenakan kandungan PUFA dalam lemak kedelai

mempunyai kemampuan menurunkan kadar LDL karena dapat meningkatkan jumlah

reseptor LDL dan menurunkan sekresi VLDL dari hepar. Penurunan kadar LDL dan

VLDL juga akan menurunkan TG (Stipanuk, 2000).

Susu kedelai hitam berkhasiat dalam mencegah dan memperbaiki kerusakan sel-

sel hepar. Keadaan tinggi kolesterol dalam darah terjadi ketika LDL meningkat dalam

darah, disebabkan karena pembentukan VLDL yang meningkat secara total didalam

hepar karena konsumsi diet tinggi lemak (Riyanto, 2002 dalam Enggar, 2009).

Perubahan yang tampak pada preparat hepar yang menonjol adalah kongesti dan

degenerasi. Berlebihannya kolesterol yang masuk kedalam tubuh berpengaruh toksik

pada aliran darah dan menimbulkan gejala anoksia. Secara mikroskopis terjadi kongesti

vena sentralis. Hal tersebut mangakibatkan penghambatan aliran darah yang

menyebabkan zat-zat makanan dan oksigen yang masuk kedalam jaringan menjadi

berkurang dan sel akan kekurangan makanan dan mengalami berbagai perubahan seluler.

Perubahan sel mulai dari sitoplasma hingga inti sel hepar (Clark dan Clark, 1975 dalam

Utami 1999).

Degenerasi melemak merupakan penimbunan abnormal lemak dalam sel

parenkim hepar. Secara histopatologi terdapat penampakan vakuola lemak (degenerasi

melemak) atau air (hidrofik) dalam sel, baik kecil maupun besar. Dalam beberapa sel, inti

dipertahankan walaupun ada yang tergeser ke pinggir sitoplasma vakuola lemak (Robbins

xvii

dan Kumar, 1992). Lemak yang diangkut ke hepar berasal dari dua sumber yaitu dari

jaringan lemak yang dilepas dalam bentuk FFA dan dari makanan yang dilepas dalam

bentuk kilomikron (terdiri dari TG dan fosfolipid protein). Lemak tersebut dalam hati

mengalami esterifikasi. Pada tahap selanjutnya berubah menjadi trigliserida dan

mengakibatkan penimbunan pada sel-sel hepar (Mc Gavin, 2007). Kerusakan sel atau

jaringan yang merupakan kelanjutan dari degenerasi sel adalah nekrosis sel yang sifatnya

irreversible sebab nekrosis pada sel hati adalah rusaknya susunan enzim dari sel

(Darmawan dan Hermawan, 1998).

Kerusakan hepar yang terjadi disebabkan karena pemberian diet tinggi lemak

yang berasal dari lemak babi. Lemak babi merupakan salah satu sumber asam lemak

jenuh (Sugito, 2003 dalam Anggarini, 2009). Asam lemak jenuh seperti yang dapat

ditemukan dalam minyak babi, akan meningkatkan kadar total kolesterol dan kadar

kolesterol LDL, akan tetapi secara individual memiliki luas efek yang berbeda (Mikkila,

2008 dalam Anggarini, 2009). Peningkatan LDL akibat diet tinggi lemak tersebut diikuti

oleh penurunan jumlah reseptor LDL (Woolet et al., 1983 dalam Priyardiyanti, 1999).

Dalam penelitian ini ada kecenderungan susu kedelai hitam memperbaiki

sel-sel hepar, namun secara statistik dengan uji Mann-Whitney belum menunjukkan data

yang signifikan. Pada penelitian yang dilakukan Indahwati (2000), pemberian produk

kedelai selama 16 minggu mampu menurunkan kadar kolesterol dalam darah. Efek

hipokolesterolemik pada kedelai bekerja menurunkan konversi FFA dengan cara

menghambat lipolisis dari jaringan adiposa melalui regulasi HMG KoA reduktase dan

menghambat sintesis VLDL (Linder, 1992). Kecenderungan penurunan kerusakan yang

terjadi pada hewan percobaan dengan perlakuan susu kedelai hitam menunjukkan bahwa

xviii

kedelai hitam bersifat hipokolesterolemik. Apabila keadaan tinggi kolesterol dalam darah

dihilangkan, maka kadar kolesterol dalam hepar akan berkurang. Kolin yang merupakan

bahan aktif yang terkandung dalam kedelai termasuk dalam bahan litotrop. Kolin tersebut

berfungsi membantu hepar secara kontinyu mengambil lemak jaringan yang terdiri dari

phospolipid, sehingga tidak ada lemak netral yang tertimbun dalam sel hepar (infiltrasi

lemak). Selain itu juga membantu hepar dalam mensintesis enzim Lecithin Cholesterol

Acil Transferase (LCAT) yang berfungsi untuk esterifikasi kolesterol (Utami, 1999).

Susu kedelai hitam tidak memberikan efek yang signifikan antara kontrol dan

perlakuan dikarenakan pemberian perlakuan susu kedelai hitam yang belum berlangsung

cukup lama, sehingga kejadian kerusakan yang terjadi pada hepar belum mampu

dihilangkan meskipun kadar kolesterol dalam darah turun. Penyebab yang lain dapat

terjadi karena bahan aktif dalam susu kedelai hitam yang digunakan sebagai perlakuan

relatif belum mencukupi kebutuhan dalam memperbaiki kerusakan yang terjadi pada

hepar.

KESIMPULAN DAN SARAN

Berdasarkan hasil penelitian dan setelah dilakukan analisis data dengan uji Mann-

Whitney, didapatkan hasil bahwa gambaran histopatologi hepar tikus putih yang diberi

perlakuan susu kedelai hitam tidak memberikan pengaruh yang signifikan bila

dibandingkan dengan gambaran histopatologi hepar tikus putih yang tidak diberi

perlakuan susu kedelai hitam. Saran yang dapat penulis uraikan adalah :

1. Dilakukan penelitian lanjutan mengenai kadar lesitin pada susu kedelai hitam

(analisis proksimat).

xix

2. Diperlukan penelitian dengan tenggang waktu yang lebih lama untuk mengetahui

seberapa besar bahan aktif yang ada dalam susu kedelai hitam mampu mengurangi

kerusakan-kerusakan yang terjadi.

DAFTAR PUSTAKA

Aini, YN., Suranto., Ratna, S. 2003. Pembuatan Kefir Susu Kedelai (Glycine max (L.) Merr) denagn Variasi Kadar Susu Skim dan Inokulum. Biosmart vol.5, no. 2: 89 –93.

Amrin, T. 2007. Susu Kedelai. Penebar Swadaya. Jakarta. 1-5.

Anggarini, G. 2009. Pengaruh Extra Virgin Olive Oil Terhadap Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Putih Jantan (Rattus norvegicus) Hiperkolesterolemia. Skripsi. FKH, UA.

Astawan, M. 2009. Sehat dengan Hidangan Kacang dan Biji – bijian. Penebar Swadaya. Jakarta.

Baum, J.A., Teng. H., Edrman, J.W. Jr., Weigel, R.M., Klein B.P., Persky, V.W., Freels, S. Surya, P., Bakhit, R.M., Ramos, E., Shay, N.F., Potter, S.M. 1998. Long-term Intake of Soy Protein Improves Blood Lipid Profiles and Increase Mononuclear Cell Low-Density Lipoprotein Reseptor Messenger RNA in Hypercholesterolemic, Postmonopousal Women. Am. J. Clin. Nutr. 68, 545-551.

Brody, P.K. 1994. Metabolic Control and Disease. W.B. Saunders Company. Phyladelphia. Lndon, Toronto. 394-441.

Brown, M.S. and J.L. Goldstein. 1991. Drugs Used in the Treatment of Hiperlipoproteinemia; Pharmacological Basis of Therapeutics. 8th edition. New York: Mc.Graw Hill Book.

Corwin, E.J. 2000. Buku Saku Patofisiologi. Alih Bahasa Brahma Pandit. EGC. Penerbit Buku Kedokteran Jakarta.

Darmawan, S. 1994. Patologi. Fakultas Kedokteran Bagian Patologi Anatomi Universitas Indonesia. Jakarta.

Darmawan, S dan Hermawan, S. 1998. Patologi. Fakultas Kedokteran Bagian Patologi Anatomi Universitas Indonesia. Jakarta. 229-254.

Dellman, H. D. dan E. M. Brown. 1992. Histologi Veterinar. Diterjemahkan oleh Hartono R. Edisi 2. Penerbit Universitas Indonesia. 413-428.

xx

Enggar, P. 2009. Potensi Sari Kedelai Hitam terhadap Kadar Trigliserida Tikus (Rattus norvegicus) dengan Diet Tinggi Lemak. Skripsi. FKH,UA.

Eschleman, M.M. 1991. Introductory Nutrition and Diet Therapy 2nd ed. J.b. Lippincott Company, pp 111-114.

Ganong, W.F. 2001. Review of Medical Physiology 11th ed. New York. McGraw-Hill pp. 290 – 172.

Guyton, A.T. 1994. Buku Ajar Fisiologi Kedokteran (Terjemahan). Bagian III, edisi 7.

Hartoyo, A. 2003. Lesitin Tidak Hanya Penting Untuk Proses Pangan Tapi Juga Untuk Kesehatan. Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian, Bogor.

Hidajat, O.O. 1985. Morfologi tanaman Kedelai. Dalam : Kedelai. S. Somaatmadja, Ismanudji, M. Sumarno, S.M. Manurung, S.O. Yuswadi (Ed.). Badan Penelitian dan Pengembangan Pertanian. Pusat Pengembangan Tanaman Pangan. Bogor. 73.

Hidayat, N. 2008. Gambaran Histopatologi Hati Mencit Jnatan Akibat Lama Pemberian Ekstrak Rimpang Temu Ireng (Curcuma aeruginosa). Skripsi. FKH. UA.

Johnson, D.W. and D.J. Mukler. 2001. Lechitin’s Therapeutic Effects. Countinuing Education Module. Centra Soya Lecithin Group, 2-6.

Junqueira, L.C dan Carneiro, J. 1998. Histologi Dasar. Terjemahan: Adji Dharma. Penerbit BukuKedokteran EGC. Jakarta. oleh Hartono R. Edisi 2. Penerbit Universitas Indonesia. 413-428

Ketaren, S. 1986. Minyak dan Lemak Pangan. Ed I. Penerbit UI Press. Jakarta. 6,84.

Koswara, S. 1992. Teknologi Pengembangan Kedelai Menjadikan Makanan Bermutu. Pustaka Sinar Harapan, Jakarta.

Krisno, Agus. 2002. Dasar-dasar Ilmu Gizi. Universitas Muhammadiyah Malang. Malang.

Kusumawati, D. 2004. bersahabat dengan Hewan Coba. Gajahmada University Press. Yogyakarta.

Lehninger, L.L. 1993. Dasar – dasar Biokimia. Edisi I. Alih Bahasa : Meggy Thenawidjaja. Erlangga. Jakarta. 283-367.

Linder, M. C. 1992. Biokimia Nutrisi dan Metabolisme. Penerjemah Parakhasi, A dan Amwila, A. Y. Universitas Indonesia. Jakarta.

Lestari, D. 2004. Efek Protektif Lesitin Terhadap Hepatotoksisitas Akibat Induksi Karbon Tetraklorida Pada Tikus Putih (Rattus noevegicus). Thesis. Program Pasca Sarjana. Universitas Airlangga. Surabaya.

xxi

Marsi, T.A. 2009. Perbandingan Potensi Sari Kedelai Kuning dan Hitam terhadap Penurunan kadar LDL Tikus Putih. Skripsi. FKH, UA.

Mayes, P.A. 1995. Lipid In: R.K. Murray, D.K. Garner, P.A. Mayyes dan V.W.Rodwell (Ed.). Harper’s Biochemistry. 22th ed. Printice Hall International Inc. New Jersey. USA. 316,555.

Mc Gavin, M. D, and James F. Z. 2007. Pathologic Basic of Veterinary Disease. 4th

edition. Mosby, Inc. St Louis, Missouri. 3-22, 38-43, 393-407.

Montgomery, R., R.L. Dryer., T.W. Conway., dan A.A. Spector. 1993. Biokimia Suatu Pendekatan Berorientasi Kasus (Terjemahan). Gadjah Mada University Press. Yogyakarta. 687-776, 890-950.

Murray, R.K., Daryl K.G., Peter A.M., and Victor W.R. 2003. Harper’s Biochemistry, 25th ed. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta.

Nangoi, L. 1994. Pengaruh Suplementasi Susu Kedelai Terhadap Profil Lipid Serum Tikus Putih dengan Pakan Tinggi Lemak. Thesis. Program Pasca Sarjana. Universitas Airlangga.

Prabowo, G. I. 1994. Pengaruh Substitusi Tempe Kedelai dalam Diet Terhadap Profil Lipid Serum Tikus dengan Keadaan Hiperkolesterolemia. Thesis. Program Pasca Sarjana. Universitas Airlangga.

Priyardiyanti. 1999. Studi Perbandingan Efek pemberian Beberapa Produk Olahan Kedelai Terhadap Kadar Kolesterol Total dan Kolesterol – LDL Darah Tikus Putih (Rattus norvegicus) dengan Keadaan Hiperkolesterolemia. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga.

Rusdiana. 2004. Metabolisme Asam Lemak. Digitized by USU digital library.

Robbins, S. L. dan Kumar, V.1992. Buku Ajar Patologi 1. Edisi 4. Alih bahasa : Staf pengajar Laboratorium Patologi Anatomik Fakultas Kedokteran Universitas Airlangga. Surabaya. Penerbit buku Kedokteran EGC, Jakarta.1-66.

Russet, J. C. 2002. Lecithin and Equine Ulcers. Specially Products Research Notes.

Saerang, J.L.P. 2003. Efek pakan dengan penambahan berbagai minyak terhadap produksi dan kualitas telur. Pengantar Falsafah Sains (PPS702). Program Pascasarjana/S3. Institut Pertanian Bogor.

Sardi, B. 2003. Choosing Natural Agents for Cholesterol Control. pp 9.

Setchell K.D.R. and Cassidy, A. 1999. Dietary Isoflavones : Boilogical Effects and Relevans to Human health. J. Nutr. 129: 758S-767S.

xxii

Silalahi, J., Tampobolon, S.D.R. 2002. Asam Lemak Trans dalam Makanan dan Pengaruhnya terhadap Kesehatan. Jurnal Teknologi dan Industri Pangan, Vol.XIII, No.2.

Sitopoe, M. 1993. Kolesterol Fobia. PT. Gramedia Pustaka Utama. Jakarta.

Smaolin. A and M.B., Grosvenor. 1997. Nutrition : Science and Application, 2nd edition. Sounders College Publishing.

Stipanuk, M.H. 2000. Biochemical and Physiological Aspects of Human Nutrition. Sounders Company. 306, 315, 333, 918.

Supriyanto. 2004. Pengaruh Pemberian Ekstrak Kedelai terhadap Kadar Kolesterol Total, LDL, HDL dan Rasio LDL/HDl Darah Tikus Putih Jantan yang Mengalami Hiperkolesterolemia. Thesis. Program Pasca Sarjana. Universitas Airlangga. Surabaya.

Takahashi, R.; Kiyose, C.; Momiyama, Y.; Ohsuzu, F.; Kondo, K. 2005. Antioxidant Activities of Black and Yellow Soybeans Againts Low Density Lipoprotein Oxidation. J. Agric Foof Chem. 53, 4578-82.

Utami, W.S. 1999. Gambaran Histopatologi Hepar Tikus Putih (Rattus norvegicus galur wistar) Penderita Hiperkolesterolemia Setelah Pemberian Diet Produk-Produk Kedelai. Skripsi. Fakultas Kedokteran Hewan., Universitas Airlangga.

Van Steenis, H.B. and P.A. Flecknel. 1992. Experimental and Surgical Technique in The Rat. Academic Press. Harcout Brace Jovanovich Publisher. London., San Diego., New York., Boston., Sidney., Toronto., Tokyo.

Wahyu, Y. 2009. Pengaruh Kedelai Hitam dan Kedelai Kuning terhadap Kadar Kolesterol Total Tikus Putih (Rattus norvegicus). Skripsi. FKH, UA.

Wahyuni, S.R. 2002. Buku Ajar Ptologi Klinik. Fakultas Kedokteran Hewan. Universitas Airlangga. Surabaya.

Widjaja, E dan Utomo, B.N. 2007. Pengaruh Pemberian Solid terhadap Kandungan Kolesterol, Asam Lemak dan Vitamin A pada Ayam Broiler. Balai Penelitian dan Pengkajian Teknologi Pertanian Kalimantan Tengah, Jl. G. Obos Km 5, Palangkaraya, Kalimantan Tengah. JITV Vol. 12 No. 1 Th. 2007.

Widodo, F.Y. 1994. Studi Perbandingan antara Pengaruh Diet Minyak Kedelai dan Minyak Kelapa Sawit terhadap Profil Lipid Darah Tikus dengan Diet Tinggi Lemak. Thesis. Program Pasca Sarjana. Universitas Airlangga. Surabaya.

Wiyatna, M.F.; Warsono I.U.; dan Parakkasi A. 2009. Pengaruh tepung cangkang rajungan (portunus pelagicus) sebagai sumber kitin dalam ransum terhadap kandungan lemak feses dan efisiensi pakan tikus putih (rattus norvegiccus) strain wistar. Pascasarjana IPB. Fakultas Peternakan Institut Pertanian Bogor.