第2 部 CTD の概要）非臨床試験の概要文及び概要 …...PEG-IFNα-2b Section 2.6.2/3 Pharmacology Written and Tabulated Summary 1 略語一覧表略語名称 BVDV

ペグインターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）

第 2 部　CTD の概要

（6）非臨床試験の概要文及び概要表

薬理試験の ② 概要文及び ③ 概要表

シェリング・プラウ株式会社

PEG-IFNα-2bSection 2.6.2/3 Pharmacology Written and Tabulated Summary

i

目　次（1 of 2）

略語一覧表. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12.6.2 薬理試験の概要文. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1 まとめ . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.1 効力を裏付ける試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.1.1 抗ウイルス作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.1.2 In vivo における腫瘍増殖抑制作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.1.3 PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の類似性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.1.4 抗ウイルス作用の機序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2

2.6.2.1.2 副次的薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2.6.2.1.3 安全性薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2.6.2.1.4 薬力学的薬物相互作用試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3

2.6.2.2 効力を裏付ける試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.6.2.2.1 抗ウイルス作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4

2.6.2.2.1.1 HCV サブゲノムレプリコンに対する作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 5

2.6.2.2.1.2 BVDV に対する作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 6

2.6.2.2.1.2.1 PEG-IFNα-2b 単独作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 62.6.2.2.1.2.2 リバビリン単独作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 72.6.2.2.1.2.3 PEG-IFNα-2b とリバビリンの併用作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 8

2.6.2.2.2 In vivo における腫瘍増殖抑制作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 9

2.6.2.2.3 PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の類似性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

2.6.2.2.3.1 構造の類似性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 11

2.6.2.2.3.2 生物活性の類似性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 12

2.6.2.2.3.2.1 抗ウイルス作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 122.6.2.2.3.2.2 腫瘍細胞増殖抑制作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 13

2.6.2.2.4 抗ウイルス作用の機序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

2.6.2.2.4.1 Ⅰ型 IFN 受容体結合 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 14

2.6.2.2.4.1.1 Ⅰ型 IFN 受容体に対する親和性. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 142.6.2.2.4.1.2 PEG-IFNα-2b の細胞内への取込み及び細胞外への排出 . . . . . . . . . . 16

2.6.2.2.4.2 IFN 誘導遺伝子の発現増強作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 18

2.6.2.2.4.3 宿主免疫機能増強作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 19

2.6.2.2.4.3.1 MHC クラスⅠ抗原発現増強作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 192.6.2.2.4.3.2 NK 活性増強作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 202.6.2.2.4.3.3 LAK 活性増強作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

2.6.2.3 副次的薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 21

2.6.2.4 安全性薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

2.6.2.4.1 中枢神経系に及ぼす影響 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

2.6.2.4.1.1 一般症状に及ぼす影響（Irwin の多次元観察法）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

2.6.2.4.1.1.1 ラット（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22


ii

目　次（2 of 2）

2.6.2.4.1.1.2 カニクイザル（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 222.6.2.4.1.1.3 ラット（GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 22

2.6.2.4.1.2 自発運動（GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.1.3 体温 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.1.3.1 カニクイザル（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 232.6.2.4.1.3.2 カニクイザル（GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.2 心血管系に及ぼす影響（血圧，心拍数及び心電図） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.2.1 ラット（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.2.2 カニクイザル（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 23

2.6.2.4.2.3 カニクイザル（GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

2.6.2.4.3 呼吸系に及ぼす影響（GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

2.6.2.4.4 腎 / 泌尿器系に及ぼす影響（非 GLP 試験）. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 24

2.6.2.4.5 胃腸管系に及ぼす影響（非 GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

2.6.2.4.6 細胞増殖に対する作用（非 GLP 試験） . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

2.6.2.5 薬力学的薬物相互作用試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 25

2.6.2.6 考察及び結論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

2.6.2.6.1 効力を裏付ける試験の考察及び結論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

2.6.2.6.1.1 抗ウイルス作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

2.6.2.6.1.2 In vivo における腫瘍増殖抑制作用 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 26

2.6.2.6.1.3 PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の類似性 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

2.6.2.6.1.4 抗ウイルス作用の機序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 27

2.6.2.6.1.4.1 PEG-IFNα-2b の抗ウイルス作用の機序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 272.6.2.6.1.4.2 リバビリンの抗ウイルス作用の機序 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29

2.6.2.6.2 安全性薬理試験の考察及び結論 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 32

2.6.2.7 図表 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

2.6.2.8 参考文献一覧 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 33

2.6.3 薬理試験概要表. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 362.6.3.1 薬理試験一覧表 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 36

2.6.3.2 効力を裏付ける試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37

2.6.3.3 副次的薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 38

2.6.3.4 安全性薬理試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 39

2.6.3.5 薬力学的薬物相互作用試験 . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 40


1

略語一覧表

略　語名　称

BVDV ウシウイルス性下痢症ウイルス（bovine viral diarrhea virus）CD 円二色性（circular dichroism）

CT 一定の PCR 産物量になるサイクル数（threshold cycle number）EMCV 脳心筋炎ウイルス（encephalomyocarditis virus）GAPDH グリセルアルデヒド -3- リン酸脱水素酵素（glyceraldehyde-3-phosphate

dehydrogenase）HCV C 型肝炎ウイルス（hepatitis C virus）IFI IFNγ-inducible geneIFN インターフェロン（interferon）IFNα-2b インターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）［Interferon Alfa-2b (Genetical

Recombination)］IL インターロイキン（interleukin）IMPDH イノシン一リン酸脱水素酵素（inosine monophosphate dehydrogenase）ISG IFN stimulated geneISRE IFN stimulated response elementIU 国際単位（international unit）LAK リンホカイン活性化キラー（lymphokine activated killer）LDH 乳酸脱水素酵素（lactate dehydrogenase）MALDI-MS マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法（matrix-assisted

laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry）MHC 主要組織適合抗原複合体（major histocompatibility complex）MTS テトラゾリウム化合物（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-

(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium, inner salt）MTT テトラゾリウム化合物（3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium

bromide）NK ナチュラルキラー（natural killer）2’,5’-OAS 2’,5’- オリゴアデニル酸合成酵素（2’,5’-oligoadenylate synthetase）PEG メトキシポリエチレングリコール（methoxypolyethylene glycol）PEG-IFNα-2b ペグインターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）［Peginterferon Alfa-2b

(Genetical Recombination)］PGE2 プロスタグランジン E2（prostaglandin E2）

PKR 二本鎖 RNA 依存性プロテインキナーゼ（double-stranded RNA-dependent protein kinase）

RdRp RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ（RNA-dependent RNA polymerase）RT-PCR 逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（reverse transcription polymerase chain reaction）STAT signal transducers and activators of transcriptionTCA トリクロロ酢酸（trichloroacetic acid）

PEG-IFNα-2bSection 2.6.2 Pharmacology Written Summary

2

2.6.2 薬理試験の概要文

2.6.2.1 まとめ

2.6.2.1.1 効力を裏付ける試験

ペグインターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）［PEG-IFNα-2b］の効力を裏付ける試験と

して，抗ウイルス作用，in vivo における腫瘍増殖抑制作用，インターフェロンアルファ -2b（遺伝

子組換え）［IFNα-2b］との類似性及び抗ウイルス作用の機序を以下のとおり検討した．

2.6.2.1.1.1 抗ウイルス作用

PEG-IFNα-2b の C 型肝炎ウイルス（HCV）に対する抗ウイルス作用については in vitro 及び in

vivo における HCV 感染系を用いて評価すべきであるが，in vitro 感染細胞培養系では HCV の感染

及び複製効率が低いこと，in vivo ではチンパンジーで HCV の増殖が確認されているが，肝炎は一

過性で軽症であること 1），並びに IFNα の生物活性には種特異性が認められ 2），異種動物では中和

抗体の産生が予想されることから，抗 HCV 作用を in vitro 及び in vivo で評価することが出来なかっ

た．そのため，細胞内で自己複製可能な HCV サブゲノムレプリコンを導入したヒト肝細胞癌由来

細胞を用いて，PEG-IFNα-2b の抗ウイルス作用を in vitro にて評価した．また，HCV の代替ウイル

スとして HCV の近縁ウイルスであるウシウイルス性下痢症ウイルス（BVDV）を用いた in vitro 抗

ウイルス作用の試験を実施した．その結果，PEG-IFNα-2b は HCV サブゲノムレプリコンの複製を

阻害し，その時の IC50 値は 28 pg/mL（蛋白質量に基づく，以下同様）であった．また，PEG-IFNα-

2b は BVDV による細胞傷害を抑制し，その時の IC50 値は 130 pg/mL であり，さらに，リバビリン

と併用することによりその作用が相加的に増強した．

2.6.2.1.1.2 In vivo における腫瘍増殖抑制作用

IFNα-2b 感受性であるヒト腎癌由来細胞を中和抗体の産生のみられないヌードマウスに皮下移

植した腫瘍モデルを用いて，PEG-IFNα-2b の in vivo における生物活性を評価した．その結果，PEG-

IFNα-2b は皮下への反復投与により腫瘍増殖抑制作用を示し，腫瘍の退縮及び消失が認められた．

2.6.2.1.1.3 PEG-IFNα-2bと IFNα-2bの類似性

PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の構造及び生物活性の類似性を検討した．その結果，PEG-IFNα-2b の

蛋白質部分と IFNα-2b の一次構造及び高次構造の類似性が示された．また，Ⅰ型インターフェロ

ン（IFN）の主要な生物活性である抗ウイルス作用及び腫瘍細胞増殖抑制作用の濃度作用曲線はい

ずれも PEG-IFNα-2b と IFNα-2b で近似していた．なお，PEG-IFNα-2b の抗ウイルス作用におけ

る比活性（蛋白質量あたりの活性）は IFNα-2b の約 28% であった．

2.6.2.1.1.4 抗ウイルス作用の機序

PEG-IFNα-2b は IFNα-2b が結合するⅠ型 IFN 受容体に対して親和性を示し（Ki 値 = 7.78 × 10-11

M），その親和性は IFNα-2b の約 16% であった．また，PEG-IFNα-2b は IFNα-2b と同様に IFN 誘

導遺伝子の発現を増強した．さらに，抗ウイルス作用に関与する宿主免疫機能である，主要組織適

合抗原複合体（MHC）クラスⅠ抗原の発現，ナチュラルキラー（NK）活性及びリンホカイン活性

化キラー（LAK）活性に対して，PEG-IFNα-2b は IFNα-2b と同様に増強作用を示した．


3

2.6.2.1.2 副次的薬理試験

該当する試験を実施しなかった．

2.6.2.1.3 安全性薬理試験

PEG-IFNα-2b を皮下投与した時の中枢神経系，心血管系，腎 / 泌尿器系及び胃腸管系に対する作

用を，ラット及びカニクイザルを用いて非 GLP 試験として検討した．さらに，安全性薬理試験ガイ

ドラインに従い，コアバッテリー試験である中枢神経系，心血管系及び呼吸系について GLP に準拠

して検討した．また，PEG-IFNα-2b の細胞増殖に対する作用を非 GLP 試験として検討した．その

結果，カニクイザルにおいて 0.9 mg/kg の皮下投与により下痢がみられ（非 GLP 試験），0.9 mg/kg

（非 GLP 試験），0.034 及び 0.332 mg/kg（GLP 試験）の皮下投与により 0.3 ～約 3.7 ℃の体温上昇が

認められた．また，ラットにおいて 4.0 mg/kg の皮下投与により 40 回 / 分の心拍数の減少がみられた

のに対し（非 GLP 試験），カニクイザルにおいて 0.9 mg/kg（非 GLP 試験），0.034 及び 0.332 mg/kg

（GLP 試験）の皮下投与により 27 ～約 90 回 / 分の心拍数の増加が認められ，0.034 及び 0.332 mg/kg

の皮下投与により心拍数の増加に伴うと考えられる 50 ～ 70 msec の QT 間隔の短縮が認められた

（GLP 試験）．その他の試験項目には作用は認められなかった．

2.6.2.1.4 薬力学的薬物相互作用試験



4

2.6.2.2 効力を裏付ける試験

2.6.2.2.1 抗ウイルス作用〔4.2.1.1.1〕

In vitro の抗ウイルス作用として，ヒト肝細胞癌由来細胞内で自己複製可能な C 型肝炎ウイルス

（HCV）サブゲノムレプリコンの複製に対するペグインターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）

［PEG-IFNα-2b］の阻害作用を検討した．また，HCV の近縁ウイルスであるウシウイルス性下痢症

ウイルス（BVDV）に対する PEG-IFNα-2b の単独又はリバビリンとの併用時の抗ウイルス作用を

検討した．

下記に HCV，HCV サブゲノムレプリコン及び BVDV の遺伝子構造を示した．

NS5BC E1 E2 p7 NS2 NS3 NS4B NS5ANS4A 3’5’

NS5BNS3 NS4B NS5ANS4A 3’5’ NeoEMCV

IRES

非構造蛋白質領域非翻訳領域構造蛋白質領域非翻訳領域

翻訳開始プロテアーゼ /ヘリカーゼ活性

RdRp 活性

HCV サブゲノムレプリコン

HCV

↑ ↑

↑

IRES

C：コア蛋白質領域，E：エンベロープ蛋白質領域，EMCV：脳心筋炎ウイルス，

IRES：翻訳開始領域 /internal ribosome entry site，Neo：ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子，

Npro：非構造蛋白質領域，NS：非構造蛋白質領域，RdRp：RNA 依存性 RNA ポリメラーゼ

HCV サブゲノムレプリコンは，HCV ゲノムの構造蛋白質領域［コア蛋白質領域（C）の一部を除

く］及び非構造蛋白質領域の NS2 を，ネオマイシンホスホトランスフェラーゼ遺伝子（Neo，レプ

リコン遺伝子が導入された細胞を選択するためのマーカー遺伝子）及び脳心筋炎ウイルス（EMCV）

の翻訳開始領域（IRES）で置換した一本鎖プラス鎖 RNA である．HCV サブゲノムレプリコンをエ

レクトロポーレーションにより，ヒト肝細胞癌由来細胞株 Huh7 細胞に導入し，G418（Neo 遺伝子

産物により失活するアミノグリコシド系抗生物質であり，細胞毒性を示す）で HCV サブゲノムレプ

リコンが導入された細胞を選択し，細胞株を樹立した 3）．

BVDV は，HCV と同じフラビウイルス科に属し，HCV と同様に一本鎖プラス鎖 RNA ウイルスで

あり，類似した遺伝子構造を有する 4）．

C

NS5BC E0 E1 NS2 NS3 NS4B NS5ANS4A 3’5’

BVDV

Npro E2

プロテアーゼ /ヘリカーゼ活性

↑

RdRp 活性↑

p7


5

2.6.2.2.1.1 HCV サブゲノムレプリコンに対する作用

ヒト肝細胞癌由来細胞内での HCV サブゲノムレプリコンの複製に対する PEG-IFNα-2b の作用

を検討した．

方法

HCV サブゲノムレプリコンを導入したヒト肝細胞癌由来細胞株 Huh7 細胞を PEG-IFNα-2b（0.1

～ 27700 IU/mL) と共に 72 時間培養した．細胞溶解液中の HCV サブゲノムレプリコン RNA 及び内

部標準であるグリセルアルデヒド -3- リン酸脱水素酵素（GAPDH）の mRNA を定量的リアルタイ

ム逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（RT-PCR）法により増幅し，各 RNA 量を一定の PCR 産物量に達

するまでのサイクル数（CT）として求め，両者の差（⊿ CT）を算出した．各試験を 2 又は 3 well

で 5 回実施し，その 5 試験の平均値より IC50 値及び IC90 値を算出した．

成績

結果を図 2.6.2-1 に示した．PEG-IFNα-2b は HCV サブゲノムレプリコンの複製を阻害し，その時

の IC50 値及び IC90 値はそれぞれ 2 IU/mL（28 pg/mL，蛋白質量に基づく，以下同様）及び 20 IU/mL

（280 pg/mL）であった．

図 2.6.2-1 HCV サブゲノムレプリコンに対する PEG-IFNα-2b の抗ウイルス作用

5 試験のうち 1 試験の結果を示す．

各点は平均値を示す．

4.2.1.1.1，Fig. 1 を変更して示した．

-5

0

5

10

0.1 1 10 100 1000 10000 100000

⊿C

T

PEG-IFNα-2b （IU/mL）


6

2.6.2.2.1.2 BVDV に対する作用

BVDV 感染細胞培養系を用いて，PEG-IFNα-2b 及びリバビリンの単独及び併用時の抗ウイルス

作用を検討した．

2.6.2.2.1.2.1 PEG-IFNα-2b 単独作用

方法

ウシ腎細胞由来 MDBK 細胞を 8 × 103 細胞 /well で 96 well プレートに播種後，24 時間培養し，プ

レートに付着させた．細胞を洗浄後，PEG-IFNα-2b（0.025 ～ 100 IU/mL）を加えて 2 時間前培養

した．上清を捨て，BVDV の NADL 株（BVDV から分離した細胞変性作用を有する株）を感染さ

せ 2 時間培養した．上清を捨て，前培養時と同濃度の PEG-IFNα-2b を加えて 48 時間培養した．細

胞を洗浄し，MTS（テトラゾリウム化合物）試薬を加え，生細胞のミトコンドリアでの還元による

ホルマザン生成物量を 490 nm の吸光度にて測定した．吸光度の値は，ウイルス感染による細胞傷

害から逃れた細胞の割合を示す．また，ウイルス感染細胞のウイルスによる細胞傷害を 50% 抑制

するのに必要な被験薬物濃度（IC50 値）を算出した．

成績

結果を図 2.6.2-2 に示した．PEG-IFNα-2b は BVDV による MDBK 細胞の傷害を抑制し，BVDV

に対して抗ウイルス作用を有することが示された．細胞傷害に対する抑制作用の IC50 値は 9 IU/mL

（130 pg/mL）であった．

図 2.6.2-2 BVDV に対する PEG-IFNα-2b の抗ウイルス作用

各点は 6 well の平均値 ± S.E. を示す．


0

0.5

1

1.5

0.01 0.1 1 10 100

吸光度

PEG-IFNα-2b （IU/mL）


7

2.6.2.2.1.2.2 リバビリン単独作用

方法

2.6.2.2.1.2.1 に記載した BVDV 感染 MDBK 細胞培養系で，0.15 ～ 20 μM のリバビリンを作用さ

せた．なお，BVDV 感染前 2 時間は被験薬物非存在下で培養した．

成績

結果を図 2.6.2-3 に示した．リバビリンは BVDV に対して抗ウイルス作用を示し，その時の IC50

値は 10μM（2.4 μg/mL）であった．

図 2.6.2-3 BVDV に対するリバビリンの抗ウイルス作用

各点は 3 well の平均値 ± S.E. を示す．


0.25

0.5

0.75

1

0.1 1 10 100

吸光

度

リバビリン（μM）


8

2.6.2.2.1.2.3 PEG-IFNα-2b とリバビリンの併用作用

方法

2.6.2.2.1.2.1 に記載した BVDV 感染 MDBK 細胞培養系で，0.025 ～ 100 IU/mL の PEG-IFNα-2b 及

び 0.15 ～ 20 μM のリバビリンを併用にて作用させた．なお，BVDV 感染前 2 時間は PEG-IFNα-

2b のみ添加し前培養した．また，PEG-IFNα-2b とリバビリンを併用した時の作用が相加的（単独

作用の和）か，相乗的（単独作用の和よりも強く作用）かを検討するために，SAS の回帰プロセ

ジャを用いて以下の式により解析した．なお，計算には単独で細胞増殖抑制作用のみられなかった

濃度範囲である PEG-IFNα-2b の 100 IU/mL 以下，及びリバビリンの 1.25μM 以下の値を用いた．

E（y） = α + β1d1 + β2d2 + γd1d2

y：抗ウイルス作用（吸光度），d1：PEG-IFNα-2b 濃度（IU/mL）の対数値，d2：リバビリン濃

度（μM）の対数値，γ：交互作用係数（両薬物の併用作用が γ= 0：相加的，γ> 0：相乗

的，γ< 0：拮抗的であることを示す．）

成績

結果を図 2.6.2-4 に示した．PEG-IFNα-2b とリバビリンを併用した場合には，リバビリン単独処

理の場合（）と比較してリバビリンの濃度吸光度曲線が低濃度側にシフトし，さらに，吸光度

の最大値が増加した．また，この時の交互作用係数 γは 0.0098（p = 0.11）であったことから，両

薬物を併用した場合の作用は相加的であった．

これらのことから，PEG-IFNα-2b とリバビリンの併用により抗ウイルス作用は相加的に増強す

ることが示された．

図 2.6.2-4 PEG-IFNα-2b 及びリバビリンを併用した場合の BVDV に対する抗ウイルス作用

各点は 3 well（0，1.25 及び 2.5μM のリバビリンでは 6 well）の平均値 ± S.E. を示す．


0

0.2

0.4

0.6

0.8

1

1.2

1.4

1.6

0 0.15 0.3 0.6 1.25 2.5 5 10 20

吸光度

00.0250.10.41.566.2525100

PEG-IFNα-2b（IU/mL）

リバビリン（μM）


9

2.6.2.2.2 In vivo における腫瘍増殖抑制作用〔4.2.1.1.6〕

IFNα-2b 感受性であるヒト腎癌由来細胞株 A-498 細胞 5）を中和抗体の産生のみられないヌード

マウスに移植した腫瘍モデルを用いて，PEG-IFNα-2b の in vivo における生物活性を IFNα-2b と比

較した．

方法

6 週齢の雌性ヌードマウスに 5 × 106 個のヒト腎癌由来細胞株 A-498 細胞を皮下移植し（Day 1），

腫瘍体積が約 50 mm3 になった時点で各群 10 例に無作為に割り付けた（Day 8）．Day 8 から Day 39

まで，0.1 mL の生理食塩液（対照）に溶解した PEG-IFNα-2b（週 1 回，皮下），IFNα-2b（週 3 回，

皮下）又はシクロホスファミド（5 日毎，腹腔内）を反復投与した．Day 8，15，22，28，34 及び

39 に腫瘍体積［（長径 × 短経 × 高さ）× π/6 mm3］を測定した．

結果

結果を図 2.6.2-5 及び図 2.6.2-6 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は，いずれも 3600 IU/ マ

ウス / 週以上の投与により腫瘍の増殖抑制作用を示した．PEG-IFNα-2b では，36000 及び 360000

IU/ マウス / 週の用量において腫瘍の退縮がみられ，Day 39 にはそれぞれ 5 例及び 9 例で腫瘍の消

失が認められた．また，Day 39 における PEG-IFNα-2b の 3600 IU/ マウス / 週の投与群と IFNα-2b

の 36000 IU/ マウス / 週の投与群での腫瘍増殖抑制の程度は，ほぼ同等（p = 0.097，t 検定）であった．

図 2.6.2-5 ヌードマウスにおけるヒト腎癌由来細胞株A-498細胞の増殖に対する

抑制作用の時間依存性

各点は，腫瘍体積（mm3）の平均値を示す（n = 10）．**：p < 0.01 で Day 39 の対照群に比して有意差あり（Dunnett 検定）．

a：p = 0.0147 で Day 39 の IFNα-2b 3600 IU/ マウス / 週投与群に比して有意差あり（t 検定）．

b：p = 0.0006 で Day 39 の IFNα-2b 36000 IU/ マウス / 週投与群に比して有意差あり（t 検定）．

c：p = 0.0035 で Day 39 の IFNα-2b 360000 IU/ マウス / 週投与群に比して有意差あり（t 検定）．

0

50

100

150

200

250

300

350

400

450

500

5 10 15 20 25 30 35 40 （日）

腫瘍

体積（

mm

3 ）

対照

IFNα-2b（週3回，3600 IU/マウス/週，皮下）



PEG-IFNα-2b（週1回，3600 IU/マウス/週，皮下）



シクロホスファミド（5日毎，100 mg/kg，腹腔内）

＊＊, c

＊＊

＊＊

＊＊

＊＊, a

＊＊, b

＊＊

対照

IFNα-2b（週 3 回，3600 IU/ マウス / 週，皮下）



PEG-IFNα-2b（週 1 回，3600 IU/ マウス / 週，皮下）



シクロホスファミド（5 日毎，100 mg/kg，腹腔内）


10

図 2.6.2-6 ヌードマウスに皮下移植したヒト腎癌由来細胞株A-498細胞のDay 39における各腫瘍体積

各点及び横線は，それぞれ Day 39 における腫瘍体積（mm3）の個体別の値及び平均値を示す

（n = 10）．

0

250

500

750

1000

Day

39に

おけ

る腫

瘍体

積（

mm

3 ）

対照 3600 36000 360000 3600 36000 360000 100

IFNα-2b（週3回，IU/マウス/週，皮下）

PEG-IFNα-2b（週1回，IU/マウス/週，皮下）

シクロホスファミド（5日毎，mg/kg，腹腔内）


11

2.6.2.2.3 PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の類似性

PEG-IFNα-2b はインターフェロンアルファ -2b（遺伝子組換え）［IFNα-2b］に平均分子量約

12,000 のメトキシポリエチレングリコール（PEG）を共有結合により 1 分子修飾した誘導体である．

IFNα-2b への PEG の修飾により IFNα-2b 部分の構造及び生物活性が影響を受けるか否かを，PEG-

IFNα-2b と IFNα-2b の類似性を検討することにより調べた．

その結果，PEG-IFNα-2b の蛋白質部分と IFNα-2b の一次構造及び高次構造の類似性が示された．

また，PEG-IFNα-2b は IFNα-2b の有する生物活性を保持していることが示されたが，その比活性

（蛋白質量あたりの活性）は IFNα-2b と比較して低値であった．

2.6.2.2.3.1 構造の類似性

PEG-IFNα-2b の蛋白質部分と IFNα-2b の構造の類似性については「2.3 品質に関する概括資料」

の項に記載したが，その要約を以下に示した．

マトリックス支援レーザー脱離イオン化飛行時間型質量分析法（MALDI-MS）のスペクトルで

は，PEG-IFNα-2b と IFNα-2b の質量の差が PEG の平均分子量約 12,000 に相当していた．また，

ペプチド分析及びペプチドマッピングの結果から，PEG-IFNα-2b の蛋白質部分のアミノ酸配列及

びジスルフィド結合位置が維持されていると考えられた（ 2.3.S.1* 参照）．

また，円二色性（CD）スペクトルを測定したところ，PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b の CD スペク

トルには，遠紫外部（208/219 nm）及び近紫外部（284/292 nm）に吸収極小を示す類似したスペク

トルが得られたことから，PEG-IFNα-2b では蛋白質部分の高次構造が維持されていると考えられ

た（ 2.3.S.1* 参照）．

＊；新薬承認情報提供時に置き換えた


12

2.6.2.2.3.2 生物活性の類似性

Ⅰ型インターフェロン（IFN）の主要な生物活性である抗ウイルス作用及び腫瘍細胞増殖抑制作

用について，PEG-IFNα-2b の濃度作用曲線を IFNα-2b と比較した．

2.6.2.2.3.2.1 抗ウイルス作用〔4.2.1.1.2〕

EMCV 感染細胞培養系における PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b の抗ウイルス作用の濃度依存性を

検討した．また，両薬物の比活性（IU/mg 蛋白質）を求めた．

方法

PEG-IFNα-2b 又は IFNα-2b を 96 well プレートに加え，ヒト包皮線維芽細胞由来細胞株 FS-71 細

胞を播種し，4 時間以上培養後に EMCV を感染させ，16 ～ 21 時間培養した．上清を捨て，MTT

（テトラゾリウム化合物）試薬を加え，3 時間以上培養後，生細胞のミトコンドリアでの還元によ

るホルマザン生成物量を 570 nm の吸光度にて測定した．細胞傷害から逃れた細胞の割合（%）を

算出し，被験薬物の抗ウイルス作用を評価した．

また，濃度作用曲線及び蛋白質濃度から比活性を求めた（2.3.S.4 参照）．

成績

濃度依存性の結果を図 2.6.2-7 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は抗ウイルス作用を示し，

それらの濃度作用曲線は近似していた．

また，抗ウイルス作用における PEG-IFNα-2b の比活性は，IFNα-2b の約 28% であり（ 2.3.S.3*

参照），IFNα-2b への PEG の修飾により比活性が低下した．

図 2.6.2-7 PEG-IFNα-2b及びIFNα-2bのEMCVに対する抗ウイルス作用（濃度依存性）

各点は 8 well の平均値 ± S.D. を示す．

4.2.1.1.2，FIG. 4 を変更して示した．

0

20

40

60

80

100

0.07 0.15 0.29 0.59 1.17 2.34 4.69 9.38 18.75 37.50 75.00

細胞傷

害から

逃れ

た細胞

の割合

（%） PEG-IFNα-2b

IFNα-2b

濃度（IU/mL）

＊；新薬承認情報提供時に置き換えた


13

2.6.2.2.3.2.2 腫瘍細胞増殖抑制作用〔4.2.1.1.3〕

IFNα-2b は，腎癌，慢性骨髄性白血病，多発性骨髄腫に対して抗腫瘍作用を有し，in vitro にお

いて各種ヒト腫瘍由来細胞の増殖を抑制する 6）．PEG-IFNα-2b のヒト腫瘍由来細胞に対する増殖

抑制作用の濃度作用曲線を IFNα-2b と比較した．

方法

PEG-IFNα-2b 又は IFNα-2b の 2 倍段階希釈液を 96 well プレートに加え，ヒトバーキットリン

パ腫由来細胞株 Daudi 細胞を播種し，72 時間培養した．MTT 試薬を加えて培養後，生細胞のミト

コンドリアでの還元によるホルマザン生成物量を 570 nm の吸光度にて測定した．吸光度の値は生

細胞数の割合を示す．

成績

結果を図 2.6.2-8 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は腫瘍細胞増殖抑制作用を示し，それ

らの濃度作用曲線は近似していた．

図 2.6.2-8 PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b の腫瘍細胞増殖抑制作用

各点は 2 well の平均値を示す．

4.2.1.1.3，Figure 2 を変更して示した．

-0.020.000.020.040.060.080.100.120.140.160.180.20

11 10 9 8 7 6 5 4 3 2 1

希釈率（2ｎ）

吸光度

PEG-IFNα-2b

IFNα-2b


14

2.6.2.2.4 抗ウイルス作用の機序

PEG-IFNα-2b の HCV に対する抗ウイルス作用の機序として，Ⅰ型 IFN について既に明らかにさ

れているⅠ型 IFN 受容体への結合及びその後の IFN 誘導遺伝子の発現増強作用，並びに抗ウイルス

作用に寄与している宿主免疫機能増強作用を検討した．

2.6.2.2.4.1 Ⅰ型 IFN 受容体結合

Ⅰ型 IFN の生物活性の発現には，細胞膜に存在するⅠ型 IFN 受容体に結合する過程が必要であ

る 7,8）．また，Ⅰ型 IFN はⅠ型 IFN 受容体に結合後，IFN- 受容体結合物として細胞内に移行し，分

解を受けた後，細胞外に排出されることが確認されている 9）．PEG-IFNα-2b のⅠ型 IFN 受容体に

対する親和性を検討し，さらに受容体結合後の動態を検討した．

2.6.2.2.4.1.1 Ⅰ型 IFN 受容体に対する親和性〔4.2.1.1.4〕

IFNα-2b 感受性細胞を用いて，Ⅰ型 IFN 受容体への 125I-IFNα-2b の結合に対する PEG-IFNα-2b

の阻害作用を IFNα-2b と比較した．

方法

ヒト羊膜由来細胞株 FL-N 細胞を PEG-IFNα-2b（1.654 × 10-12 ～ 1.654 × 10-9 M）又は IFNα-2b

（1 × 10-12 ～ 1 × 10-9 M）存在下で 125I-IFNα-2b（0.84 × 10-9 又は 0.85 × 10-9 M）と共に 4 ℃で 4 時

間培養後，細胞膜に結合した放射能をガンマーカウンターにて測定した．得られた IC50 値を用い

て，次式より Ki 値を算出した．

成績

結果を図 2.6.2-9 及び表 2.6.2-1 に示した．PEG-IFNα-2b は 125I-IFNα-2b のⅠ型 IFN 受容体への

結合を阻害した．PEG-IFNα-2b の Ki 値は，7.78 × 10-11 M であり，PEG-IFNα-2b のⅠ型 IFN 受容

体に対する親和性は IFNα-2b（Ki 値 = 1.23 × 10-11 M）の約 16% であった．

これらのことから，PEG-IFNα-2b は IFNα-2b と同様にⅠ型 IFN 受容体に結合することが示され，

IFNα-2bへのPEGの修飾により，IFNα-2bのⅠ型IFN受容体への親和性が低下することが示された．

Ki = IC50 /（ 1 +125I-IFNα-2b 濃度

）Kd

Kd 値：4.45 × 10-10 M


15

図 2.6.2-9 Ⅰ型 IFN受容体への 125I-IFNα-2b結合に対するPEG-IFNα-2b及び

IFNα-2b の阻害作用

各点は 3 実験の平均値 ± S.D. を示す．

表 2.6.2-1 Ⅰ型 IFN 受容体への 125I-IFNα-2b 結合に対する PEG-IFNα-2b及び IFNα-2b の阻害作用における IC50 値及び Ki 値

IC50 値及び Ki 値は，3 実験の平均値 ± S.D. を示す．

4.2.1.1.4，Table 2 ～ 4 をまとめて示した．

薬　物 IC50 値（× 10-11 M） Ki 値（× 10-11 M）Ki 値の 95% 信頼限界

（× 10-11 M）

PEG-IFNα-2b 22.6 ± 1.63 7.78 ± 0.586 6.32 - 9.24

IFNα-2b 3.56 ± 0.969 1.23 ± 0.333 0.403 - 2.06

0

20

40

60

80

100

-13 -12 -11 -10 -9 -8

濃度［log （M）］

125 I-

IFNα

-2b 結合

率（ %

）PEG-IFNα-2b

IFNα-2b


16

2.6.2.2.4.1.2 PEG-IFNα-2b の細胞内への取込み及び細胞外への排出〔4.2.1.1.5〕

IFNα-2b 感受性細胞を用いて，PEG-IFNα-2b の結合，細胞内への取込み及び分解 / 排出過程を

IFNα-2b と比較した．

方法

結合及び細胞内への取込み：FL-N 細胞を 125I-PEG-IFNα-2b（1.88 × 10-9 M）又は 125I-IFNα-2b

（0.86 × 10-9 M）と共に 37 ℃で培養し，細胞膜結合放射能及び細胞内放射能をガンマーカウンター

にて経時的に測定した．

細胞内への取込み及び分解 / 排出：FL-N 細胞を 125I-PEG-IFNα-2b（1.77 × 10-9 M）又は 125I-IFNα-

2b（0.77 × 10-9 M）と共に 4 ℃で 4 時間培養し，各 125I 標識被験薬物を細胞膜に結合させた．細胞

を洗浄後，37 ℃で培養を開始し，細胞膜結合放射能，細胞内放射能及び培養上清中のトリクロロ

酢酸（TCA）可溶画分の放射能（細胞外排出放射能）をガンマーカウンターにて経時的に測定した．

成績

結合及び細胞内への取込み：結果を図 2.6.2-10 に示した．125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b

の細胞膜結合放射能量はいずれも速やかに増加した後，減少した．また，膜結合量の減少に伴っ

て，細胞内放射能量は増加した．その後，125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b の細胞内放射能量

はいずれも減少したが，125I-PEG-IFNα-2b では細胞内放射能の滞留時間は 125I-IFNα-2b と比較し

て長かった．

細胞内への取込み及び分解 / 排出：結果を図 2.6.2-11 に示した．細胞内への取込みの起こらない

4 ℃で培養することにより，あらかじめ細胞膜に結合させた 125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b

について，37 ℃での細胞内への取込み及び排出を経時的に検討した．その結果，125I-PEG-IFNα-2b

及び 125I-IFNα-2b の膜結合放射能量はいずれも経時的に減少し，その時の 125I-PEG-IFNα-2b の減

少は 125I-IFNα-2b よりも遅延する傾向が認められた．また，膜結合放射能量の減少に伴い，細胞

内放射能量は増加し，プラトーに達した後に減少した．さらに，分解後の細胞外への排出を示す上

清中 TCA 可溶画分の放射能量は 125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b で，37 ℃で培養開始後，そ

れぞれ 120 分及び 30 分より認められ，経時的に増加した．

以上のことから，PEG-IFNα-2b は IFNα-2b と同様にⅠ型 IFN 受容体に結合後，細胞内に取り込

まれ，酸可溶性の低分子に分解され，細胞外に排出されることが示された．また，125I-PEG-IFNα-

2b では 125I-IFNα-2b と比較して，細胞内への取込み及び分解 / 排出がいずれも遅延する傾向を示

した．


17

図 2.6.2-10 125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b の FL-N 細胞への結合及び取込み


図 2.6.2-11 125I-PEG-IFNα-2b 及び 125I-IFNα-2b の FL-N 細胞への取込み及び分解 / 排出


0

100

200

300

400

500

600

700

800

900

0 60 120 180 240 300時間（分）

放射

能量

（cp

m）

SCH 54031（膜結合画分）

IFNα-2b（膜結合画分）

SCH 54031（細胞内画分）

IFNα-2b（細胞内画分）

125I-PEG-IFNα-2b（膜結合画分）125I-IFNα-2b（膜結合画分）125I-PEG-IFNα-2b（細胞内画分）125I-IFNα-2b（細胞内画分）

0

100

200

300

400

500

600

0 60 120 180 240 300 360時間（分）

放射能

量（

cpm）

SCH 54031（膜結合画分）

IFNα-2b（膜結合画分）

SCH 54031（細胞内画分）

IFNα-2b（細胞内画分）

SCH 54031（上清中TCA可溶画分）

IFNα-2b（上清中TCA可溶画分）

125I-PEG-IFNα-2b（膜結合画分）125I-IFNα-2b（膜結合画分）125I-PEG-IFNα-2b（細胞内画分）125I-IFNα-2b（細胞内画分）125I-PEG-IFNα-2b（上清中TCA可溶画分）125I-IFNα-2b（上清中 TCA 可溶画分）


18

2.6.2.2.4.2 IFN 誘導遺伝子の発現増強作用〔4.2.1.1.2〕

Ⅰ型 IFN がⅠ型 IFN 受容体に結合することにより，細胞質に存在する STAT（signal transducers

and activators of transcription）がリン酸化される．リン酸化された STAT は p48 と複合体を形成し，

核内に移行後，ISRE（IFN stimulated response element）に結合することにより，各種 IFN 誘導遺伝

子の転写が誘導され，生物活性が発現することが報告されている 7,10）．PEG-IFNα-2b の各種 IFN 誘

導遺伝子の発現増強作用を IFNα-2b と比較した．

方法

ヒト T 細胞白血病由来細胞株 Molt-4 細胞を 200 IU/mL の PEG-IFNα-2b 又は IFNα-2b と共に 24

時間培養し，RNA を単離した．定量的リアルタイム RT-PCR 法により，2’,5’- オリゴアデニル酸合

成酵素（2’,5’-OAS），二本鎖 RNA 依存性プロテインキナーゼ（PKR），IFNγ-inducible gene-16（IFI-

16），IFN stimulated gene-15（ISG-15）及び ISG-54 の RNA 量を定量し，被験薬物非処理時の RNA

量に対する比を求めた．

成績

結果を表 2.6.2-2 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は各 IFN 誘導遺伝子の発現を増強し，

同一力価（IU/mL）では両薬物の増強作用には差はみられなかった．

表 2.6.2-2 PEG-IFNα-2b及び IFNα-2bのMolt-4細胞における IFN誘導遺伝子の発現増強作用

1）：4 実験の被験薬物非処理 Molt-4 細胞に対する RNA 量の増加比の平均値 ± S.D. を示す．2）：定量的リアルタイム RT-PCR 法が定量精度として 2 倍の差の識別能を有することから，信頼区間の下限及び上限をそれぞ

れ各増加比の平均値の 1/2 及び 2 倍とした．

4.2.1.1.2，TABLE 2 に各遺伝子の機能を追加した．

IFN 誘導遺伝子

機能PEG-IFNα-2b IFNα-2b

RNA 量の増加 1）信頼区間 2） RNA 量の増加 1）信頼区間 2）

2’,5’-OAS ウイルス mRNA の分解 77.4 ± 1.3 38.7 - 154.8 59.7 ± 1.7 29.8 - 119.4

PKR ウイルス蛋白質合成阻害 3.3 ± 1.1 1.6 - 6.6 2.6 ± 1.3 1.3 - 5.2

IFI-16 細胞増殖抑制 2.6 ± 1.1 1.3 - 5.2 2.2 ± 1.5 1.1 - 4.4

ISG-15 NK 細胞増殖，LAK 活性増強 44.7 ± 8.1 22.3 - 89.4 33.8 ± 8.8 16.9 - 67.6

ISG-54 不明 19.0 ± 1.6 9.5 - 38.0 14.5 ± 1.8 7.2 - 29.0


19

2.6.2.2.4.3 宿主免疫機能増強作用〔4.2.1.1.2〕

C 型慢性肝炎に対するⅠ型 IFN の抗ウイルス作用の機序として，宿主免疫機能を介したウイルス

感染細胞の排除が知られている 11）．In vitro において，主要組織適合抗原複合体（MHC）クラスⅠ

抗原の発現，ナチュラルキラー（NK）活性及びリンホカイン活性化キラー（LAK）活性に及ぼす

PEG-IFNα-2b の影響を検討した．

2.6.2.2.4.3.1 MHC クラスⅠ抗原発現増強作用

Ⅰ型 IFN はウイルス感染細胞上における MHC クラスⅠ抗原の発現を誘導することにより，細胞

傷害性 T 細胞の抗原認識能を高めることが知られている 11）．そこで，PEG-IFNα-2b の MHC クラ

スⅠ抗原発現増強作用を IFNα-2b と比較した．

方法

Molt-4 細胞を 10 ～ 2600 IU/mL の PEG-IFNα-2b 又は IFNα-2b と共に 2 日間培養した．細胞を洗

浄後，MHC クラスⅠ抗原の発現をヒト白血球抗原（HLA）-A，B，C に対するモノクローナル抗体

を用いてフローサイトメトリーにより測定した．発現量の増加を被験薬物非処理細胞に対する蛍光

強度の比で表した．

成績

結果を図 2.6.2-12 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は MHC クラスⅠ抗原の発現を増強し，

両薬物の濃度作用曲線は近似していた．

図 2.6.2-12 PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b の Molt-4 細胞における MHC クラスⅠ

抗原発現増強作用

各点は 3 実験の平均値 ± S.E. を示す．

0

1

2

3

4

0 10 20 40 81 162 325 650 1300 2600

MH

Cクラ

スI抗

原発

現

（薬物

処理

/非処

理の

蛍光

強度

の比

）

PEG-IFNα-2b

IFNα-2b

濃度（IU/mL）


20

2.6.2.2.4.3.2 NK 活性増強作用

NK 細胞はウイルス感染細胞の排除に関与し，IFNα-2b がその活性を増強することが知られてい

る 12）．PEG-IFNα-2b の NK 活性増強作用を IFNα-2b と比較した．

方法

ヒト末梢血単核細胞（E）を 1300 IU/mL の PEG-IFNα-2b 又は IFNα-2b と共に 16 時間培養した．

細胞を洗浄後，標的細胞（T）であるヒト慢性骨髄性白血病由来細胞株 K562 細胞（E/T 比 = 25:1 及

び 50:1）と共に培養した．上清を回収し，傷害された細胞から遊離した乳酸脱水素酵素（LDH）量

を測定し，細胞傷害活性（NK 活性）を算出した．

成績

結果を図 2.6.2-13 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は NK 活性を増強し，同一力価では両

薬物の増強作用に有意差は認められなかった．

図 2.6.2-13 PEG-IFNα-2b及びIFNα-2bのヒト末梢血単核細胞のNK活性増強作用

各値は 6 例の平均値 ± S.E. を示す．

*：p < 0.05 で被験薬物非処理（対照）群に比して有意差あり（t 検定）．

NS：p > 0.05 で IFNα-2b 群に比して有意差なし（t 検定）．


0

10

20

30

40

25 : 1 50 : 1

細胞

傷害

活性

（%）

対照

PEG-IFNα-2b （1300 IU/mL）IFNα-2b （1300 IU/mL）

＊＊

＊＊

NS

NS

E/T 比


21

2.6.2.2.4.3.3 LAK 活性増強作用

インターロイキン 2（IL-2）により細胞傷害活性が誘導される LAK 細胞もウイルス感染細胞の排

除に関与し，Ⅰ型 IFN がその活性を増強することが知られている 13,14）．PEG-IFNα-2b の LAK 活性

増強作用を IFNα-2b と比較した．

方法

ヒト末梢血単核細胞（E）を 4 U/mL の遺伝子組換え型ヒト IL-2 存在下，1300 IU/mL の PEG-IFNα-

2b 又は IFNα-2b と共に 3 日間培養した．細胞を洗浄後，標的細胞（T）である Daudi 細胞（E/T 比

= 25:1 及び 50:1）と共に培養した．上清を回収し，傷害された細胞から遊離した LDH 量を測定し，

細胞傷害活性（LAK 活性）を算出した．

成績

結果を図 2.6.2-14 に示した．PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b は LAK 活性を増強し，同一力価では

両薬物の増強作用に有意差は認められなかった．

図 2.6.2-14 PEG-IFNα-2b 及び IFNα-2b のヒト末梢血単核細胞の LAK 活性増強作用

各値は 5 例の平均値 ± S.E. を示す．

*：p < 0.05 で IL-2 単独処理群に比して有意差あり（t 検定）．

NS：p > 0.05 で IL-2 + IFNα-2b 群に比して有意差なし（t 検定）．


2.6.2.3 副次的薬理試験


0

20

40

60

80

100

25 : 1 50 : 1

細胞

傷害活

性（

%）

IL-2IL-2 + PEG-IFNα-2b （1300 IU/mL）IL-2 + IFNα-2b （1300 IU/mL）

＊

＊

＊＊

NS

NS

E/T 比

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第2 部 CTD の概要 ）非臨床試験の概要文及び概要 …...PEG-IFNα-2b Section 2.6.2/3 Pharmacology Written and Tabulated Summary 1 略語一覧表 略 語 名 称 BVDV

第2 部 CTD の概要）非臨床試験の概要文及び概要 …...PEG-IFNα-2b Section 2.6.2/3 Pharmacology Written and Tabulated Summary 1 略語一覧表略語名称 BVDV