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Mtodo UV optimizado (IFCC) para la determinacin deCreatina Kinasa (CK) en suero o plasma

AA

PRECAUCIONESLos reactivos son para uso diagnstico "in vitro".Utilizar los reactivos guardando las precauciones habitualesde trabajo en el laboratorio de anlisis clnicos.Todos los reactivos y las muestras deben descartarse deacuerdo a la normativa local vigente.

ESTABILIDAD E INSTRUCCIONES DEALMACENAMIENTOReactivos Provistos: son estables en refrigerador (2-10oC)hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja.Una vez abiertos, no deben permanecer fuera del refrigeradorpor perodos prolongados. Evitar contaminaciones.Reactivo nico (premezclado): estable 20 das en refrigera-dor (2-10oC) a partir de la fecha de su preparacin.

INDICIOS DE INESTABILIDAD O DETERIORO DE LOSREACTIVOSCuando el espectrofotmetro ha sido llevado a cero con aguadestilada, lecturas de absorbancia del Reactivo nico > 0,800 D.O.(a 340 nm) son indicio de deterioro del mismo.

MUESTRASuero o plasma heparinizadoa) Recoleccin: se debe obtener de la manera usual.b) Aditivos: en caso de emplear plasma, debe usarse hepa-rina como anticoagulante.c) Sustancias interferentes conocidas: no interfieren bili-rrubina hasta 390 mg/l (39 mg/dl), triglicridos hasta 12,5 g/l(1250 mg/dl) ni hemoglobina hasta 0,15 g/dl (150 mg/dl).Referirse a la bibliografa de Young para los efectos de lasdrogas en el presente mtodo.d) Estabilidad e instrucciones de almacenamiento: lamuestra debe ser preferentemente fresca. Puede conservar-se hasta 1 semana en refrigerador (2-10oC).

MATERIAL REQUERIDO (no provisto)- Espectrofotmetro.- Micropipetas y pipetas para medir los volmenes indicados.- Bao de agua a la temperatura indicada en el procedimiento.- Cronmetro.

CONDICIONES DE REACCION(Aumento de absorbancia)- Longitud de onda: 340 nm (Hg 334 366).- Temperatura de reaccin: 25, 30 37oC. Ver los VALORES

DE REFERENCIA correspondientes a cada temperatura.

SIGNIFICACION CLINICALa creatina kinasa (CK) es una enzima intracelular localizadaen mayor proporcin en msculos cardaco y esqueltico ytambin en cerebro. Un aumento en la actividad srica, espor lo tanto indicio de lesin celular.En el caso del infarto agudo de miocardio (IAM), la actividadsrica de CK comienza a aumentar entre 2 y 6 horas des-pus de producido el episodio y alcanza un mximo despusde 18 a 24 horas. Los picos alcanzados pueden llegar a ser20 veces el lmite superior normal, razn por la cual es quizsla prueba ms sensible para el diagnstico de IAM.

FUNDAMENTOS DEL METODOBasado en el siguiente esquema reaccionante:

creatina kinasacreatina fosfato + ADP > creatina + ATP

hexoquinasaATP + glucosa > ADP + glucosa-6-P

G-6-PDHglucosa-6-P + NADP+ > gluconato-6-P + NADPH + H+

En la reaccin interviene la N-acetilcistena (NAC) como acti-vador de la creatina kinasa, recomendado por la I.F.C.C.

REACTIVOS PROVISTOSA. Reactivo A: solucin de buffer imidazol.B. Reactivo B: solucin de componentes conteniendo crea-tina fosfato y componentes reactivos en cantidades suficien-tes para las siguientes concentraciones finales:

imidazol ................................................. 100 mmol/l; pH 6,7creatina fosfato ..................................................... 30 mmol/lADP ....................................................................... 2 mmol/lglucosa ................................................................. 20 mmol/lNADP .................................................................... 2 mmol/lhexoquinasa ........................................................ 2500 U/lglucosa-6-fosfato deshidrogenasa (G-6-PDH) ...... 2000 U/lacetato de magnesio ............................................ 10 mmol/lAMP ...................................................................... 5 mmol/ldi-(adenosina-5') pentafosfato ................................ 10 umol/lN-acetilcistena ..................................................... 20 mmol/l

INSTRUCCIONES PARA SU USOReactivos Provistos: listos para usar. Estos pueden usar-se separados o como Reactivo nico, mezclando 5 partesde Reactivo A con 1 parte de Reactivo B (ej.: 5 ml Reactivo A+ 1 ml Reactivo B).

CK-NACLINEA LIQUIDA

CCCCC

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- Tiempo de reaccin: vara de acuerdo al procedimiento se-leccionado.

PROCEDIMIENTO

TECNICA CON REACTIVO UNICOLlevar el aparato a cero con agua destilada.

A) 30 - 37oCEn una cubeta mantenida a 30-37oC, colocar:

Reactivo nico 1 ml

Preincubar 3-4 minutos. Luego agregar:

Muestra 40 ul

Mezclar inmediatamente y esperar 3 minutos. Ajustar laabsorbancia a una lectura de referencia disparando si-multneamente el cronmetro. Registrar la absorbancialuego de 1, 2 y 3 minutos de la primera lectura. Deter-minar la diferencia promedio de absorbancia/min (A/min), restando cada lectura de la anterior y promedian-do los valores. Utilizar este promedio para los clculos.

B) 25oCSeguir el procedimiento indicado en A), pero emplean-do 80 ul de Muestra y esperando 4 minutos luego delagregado de la misma.

CALCULO DE LOS RESULTADOSCK (U/I) = A/min x factorEn cada caso deber emplearse el factor de clculo corres-pondiente, como se indica en la siguiente tabla:

Temperatura30-37oC 25oC

Long. onda

340 nm 4.127 2.142334 nm 4.207 2.183366 nm 7.429 3.856

METODO DE CONTROL DE CALIDADProcesar 2 niveles de un material de control de calidad(Standatrol S-E 2 niveles) con actividades conocidas decreatina kinasa, con cada determinacin.

VALORES DE REFERENCIATemperatura 25oC 30oC 37oC(*)

Varones hasta 80 U/l hasta 130 U/l hasta 195 U/lMujeres hasta 70 U/l hasta 110 U/l hasta 170 U/l(*)CalculadosSe recomienda que cada laboratorio establezca sus propiosvalores de referencia.

CONVERSION DE UNIDADES AL SISTEMA SICreatina kinasa (U/l) x 0,017 = Creatina kinasa (ukat/l)

LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTOVer Sustancias interferentes conocidas en MUESTRA.

PERFORMANCEa) Reproducibilidad: se aplic el protocolo EP15-A del CLSI.Se analizaron dos niveles de actividad, cada uno por cuadru-plicado durante 5 das. Con los datos obtenidos, se calcula-ron la precisin intraensayo y total.

Precisin intraensayo (n = 20)

Nivel D.S. C.V.162 U/l 1,08 U/l 0,66 %362 U/l 1,61 U/l 0,44 %

Precisin total (n = 20)

Nivel D.S. C.V.163 U/l 4,10 U/l 2,51 %356 U/l 6,72 U/l 1,89 %

b) Linealidad: normalmente, la reaccin es lineal hasta unA/min de 0,130 D.O. (aproximadamente 550 U/l). Para valo-res superiores diluir la muestra 1/2 1/5 con solucin fisiol-gica y repetir la determinacin respetando las mismas condi-ciones de ensayo y multiplicando los resultados por la dilu-cin efectuada. En analizadores automticos puede obser-varse una linelidad de hasta 1800 U/l.c) Sensibilidad analtica: depende del fotmetro empleadoy de la longitud de onda. En espectrofotmetros a 340 nmcon cubetas de caras paralelas de 1 cm de espesor, para unA/min de 0,001 el mnimo cambio de actividad detectableser 8 U/l.

PARAMETROS PARA ANALIZADORES AUTOMATICOSPara las instrucciones de programacin consulte el manualdel usuario del analizador en uso.

PRESENTACION120 ml: 5 x 20 ml Reactivo A

1 x 20 ml Reactivo B(Cd. 1271360)

120 ml: 5 x 20 ml Reactivo A1 x 20 ml Reactivo B

(Cd. 1009331)

120 ml: 5 x 20 ml Reactivo A1 x 20 ml Reactivo B

(Cd. 1009251)

240 ml: 4 x 50 ml Reactivo A2 x 20 ml Reactivo B

(Cd. 1009609)

BIBLIOGRAFIA- D.G.K.C. - Z. Klin. Chem. 10:281 (1972).- S.S.C.C. - Scand. J. Clin. Lab. Invest. 33:291 (1974).- I.F.C.C. - Clinica Chimica Acta 105:147 F (1980).- I.F.C.C. - Ann. Biol. Clin. 44/4:419 (1986).- Young, D.S. - "Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests",

AACC Press, 5th ed., 2000.- Stein, W. - Med. Welt. 36:572 (1985).- Szasz, G.; Busch, E.W. - 3rd European Congress of Clinical

Chemistry, Brighton, England, 3-8 June, 1979.

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2000 Rosario - Argentina

MMMMM Wiener Laboratorios S.A.I.C.Riobamba 29442000 - Rosario - Argentinahttp://www.wiener-lab.com.arDir. Tc.: Viviana E. CtolaBioqumicaProducto Autorizado A.N.M.A.T.Cert. N: 4967/04

UR120830

Wiener lab.

SIMBOLOSLos siguientes smbolos se utilizan en todos los kits de reac-tivos para diagnstico de Wiener lab.

CCCCCEste producto cumple con los requerimientos previs-tos por la Directiva Europea 98/79 CE de productossanitarios para el diagnstico "in vitro"

PPPPP Representante autorizado en la Comunidad Europea

VVVVV Uso diagnstico "in vitro"

XXXXX Contenido suficiente para ensayos

HHHHH Fecha de caducidad

lllll Lmite de temperatura (conservar a)

No congelar

FFFFF Riesgo biolgico

Volumen despus de la reconstitucin

Contenido Cont.ggggg Nmero de lote

MMMMM Elaborado por:

NocivoXn

Corrosivo / Castico

IrritanteXi

iiiii Consultar instrucciones de uso

CalibradorCalibr.

Controlbbbbb

bbbbb Control Positivo

ccccc Control Negativo

hhhhh Nmero de catlogo

G

- NCCLS document "Evaluation of the Linearity of QuantitativeAnalytical Methods", EP6-P, (1986).

- CLSI: Clinical and Laboratory Standards Institute (ex-NCCLS)- Protocols EP 15A, 2001 / EP 17A, 2004.