ISSN: 2538-5887; Pathobiology Research. 2020;23(1):1-9

C I T A T I O N L I N K S

Copyright© 2020, TMU Press. This open-access article is published under the terms of the Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License which permits Share (copy and redistribute the material in any medium or format) and Adapt (remix, transform, and build upon the material) under the Attribution-NonCommercial terms.

Comparison of Conventional and Molecular Methods in Identification of Candida Species Isolated from Oropharyngeal Candidiasis

[1] Oropharyngeal candidiasis in head and neck cancer patients ... [2] Oropharyngealcandidiasis caused by non-albicans yeast in ... [3] Oropharyngeal candidosis relativefrequency in ... [4] Epidemiology of oropharyngeal Candidacolonization and infection in ...[5] Comparison between four usual methods of identification ... [6] Molecular techniquesfor pathogen identification and fungus ... [7] Performance comparison of phenotypic andmolecular methods ... [8] Identification, typing, antifungal resistance profile ... [9] Molecular typing of Candida albicans isolates ... [10] Molecular analysis of fungal populations inpatients with ... [11] Morphological and molecular identification of filamentous ... [12]Oropharyngeal candidiasis: A review of its ... [13] Rapid identification of Candida albicans by filamentation ... [14] Efficacy of API 20C and ID 32C systems for identification ... [15]Characterization of a cDNA clone, encoding a 70 kDa heat shock ... [16] The identificationand differentiation of the Candida ... [17] Multilocus sequence typing of Candida tropicalisshows ... [18] The neighbor-joining method: A new method ... [19] Oropharyngeal candidiasis in head and neck cancer patients ... [20] Isolation and molecular identification of Candida ... [21] Evaluation of the Albicans IDR plate method ...[22] Comparison of Albicans ID2 agar plate with ...[23] Susceptibility of clinical Candida species ...[24] Oropharyngeal candidiasis in HIV/AIDS patients ...[25] Epidemiology of Candida kefyr in patients ...[26] Epidemiologyof Candida kefyr in patients ...[27] Evaluation of the new chromogenic medium ...[28]Evaluation of a reformulated ...[29] Application of CHROMagar Candida for rapid screening ... [30] Molecular identification of veterinary yeast ...[31] Epidemiology, antifungalsusceptibility, and pathogenicity ...

Aims Candida species are normal flora in the human body and are the main cause of hospital infections in people with underlying disease. The purpose of the present study was comparison of the conventional and molecular laboratory methods in identifying different species of Candida to find the optimal method.Materials & Methods 60 Candida isolates were obtained from oropharyngeal candidiasis patients and recognized using laboratory routine methods including germ tube production, culture on CHROMagar medium, API 20 C AUX kit and molecular ITS sequencing method. The concordances between the methods compared to the molecular method were measured by the kappa coefficient using SPSS 16.0 software.Findings Out of 60 Candida isolates, 10 isolates (16.6%) in germ tube formation test, 8 isolates (13.33%) in the API test, and 9 isolates (15%) in the culture on CHROMagar medium have different results in comparison to the ITS sequencing method. Germ tube (k= 0.90) and culture on CHROMagar medium methods (k= 0.66) showed the highest and the lowest agreement with the molecular method in the identification of Candida albicans species respectively.Conclusion The results showed that conventional methods alone cannot diagnose all Candida species and molecular methods such as ITS sequencing can be used to confirm the identification.

A B S T R A C TA R T I C L E I N F O

Article TypeOriginal Research

AuthorsJahanshiri Z.*1 PhD,Razzaghi-Abyaneh M.1 PhD

Keywords Candida; Molecular Technique; Conventional Methods; Identification

*CorrespondenceAddress: Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, EnghlabStreet, Tehran, Iran. Postal Code: 1316943551.Phone: +98 (21) 64112125 Fax: +98 (21) 64112804z_jahanshiri@pasteur.ac.ir

1Department of Mycology, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran

Article HistoryReceived: September 03, 2019 Accepted: May 14, 2020 ePublished: June 22, 2020

How to cite this articleJahanshiri Z, Razzaghi-Abyaneh M. Comparison of Conventional and Molecular Methods in Identification of Candida Species Isolated from Or-opharyngeal Candidiasis. Pathobio-logy Research. 2020;23(1):1-9.

https://link.springer.com/article/10.1007/s00520-011-1154-4https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0360301603004152https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3303519/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC85839/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26422150/https://imafungus.biomedcentral.com/articles/10.5598/imafungus.2011.02.02.09https://bmcinfectdis.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-2334-12-230https://www.hindawi.com/journals/bmri/2014/931372/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24213190/https://journals.plos.org/plosone/article/file?type=printable&id=10.1371/journal.pone.0101156https://b2n.ir/171546https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0149291898800337https://jamanetwork.com/journals/jamapediatrics/article-abstract/499410https://jcm.asm.org/content/36/11/3396.shorthttps://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0378111999004758https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4830116/https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S1567134816303173https://academic.oup.com/mbe/article/4/4/406/1029664https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1156523317303402https://www.microbiologyresearch.org/content/journal/jmm/10.1099/jmm.0.05315-0https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/j.1439-0507.1993.tb00731.xhttps://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0732889301003467https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3330181/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6386505/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/24622105/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC88012/https://europepmc.org/article/med/16954270https://jcm.asm.org/content/39/5/2015.shorthttps://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC228730/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/20392917/https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/23303503/https://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/68002175https://www.ncbi.nlm.nih.gov/mesh/68025202http://Not in MeSHhttp://Not in MeSH

ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ انهیاب یرزاق یمهدو ی ر یزهرا جهانش ۲

۱۳۹۸ ناتسمز ، ۱، شماره ۲۳دوره شناسی زیستیهای آسیبپژوهش

های متداول و روش مولکولی در مقایسه روشجداشده از ی های کاندیداتشخیص گونه

های اوروفارنژیال کاندیدیازیسنمونه

PhD *یر یزهرا جهانش رانیتهران، ا ران،یپاستور ا تویانست ،یگروه قارچ شناس

PhD انهیاب یرزاق یمهدرانیتهران، ا ران،یپاستور ا تویانست ،یگروه قارچ شناس

چکيدههای فلور نرمال بدن انسان و عامل بیشترین عفونت های کاندیداگونه اهداف:

با توجه به اهمیت تشخیص صحیح .هستندبیمارستانی در افراد دارای زمینه در با روش مولکولی رایجهای هدف مقایسه روشآنها، مطالعه حاضر با

.انجام شد منظور یافتن روش بهینهبهکاندیدا مختلف های ص گونهیتشخبیماران مبتال به اوروفارنژیال ی جداشده ازکاندیدا ایزوله ۶۰: هامواد و روششامل تولید جرم تیوب، کشت روی رایجهای با استفاده از روش کاندیدیازیس

ITS روش مولکولیو AUXC20API ه از کیتمحیط کروم آگار، استفادsequencing میزان توافق (ضریب .شناسایی شدندkهای رایج در ) بین روش

محاسبه شد. 16.0SPSSافزار مقایسه با روش مولکولی با استفاده از نرم) در تست جرم %۶/۱۶ایزوله ( ۱۰، مطالعهکاندیدای مورد ایزوله ۶۰از ها:یافته

) در تست کشت روی %۱۵ایزوله ( ۹و API) در تست %۳۳/۱۳ایزوله ( ۸تیوب، ITSمحیط کروم آگار دارای تشخیص متفاوت در مقایسه با روش مولکولی

sequencing .۹۰/۰روش جرم تیوب بیشترین ( بودند =k و کشت روی کروم (ه ) توافق را در مقایسه با روش مولکولی در شناسایی گونk= ۶۶/۰آگار کمترین (

نشان داد. کاندیدا آلبیکنستنهایی قادر به تشخیص بههای معمولی نتایج نشان داد که روش :گیرینتیجه

، sequencingITSمانند مولکولی هایو روش یستندهای کاندیدا نهمه گونه قطعی به کار برده شوند.برای تشخیص توانند می

معمولی، شناساییروش مولکولی، روشهای کاندیدا، ها: کلیدواژه

۱۲/۰۶/۱۳۹۸ تاريخ دريافت: ۵۲/۰۲/۱۳۹۹ تاريخ پذيرش:

z_jahanshiri@pasteur.ac.irنويسنده مسئول: *

مقدمه قارچیهای ترین عامل ایجاد عفونتهای کاندیدا مهمگونه

دارند وطور شایع در فلور دهانی وجود ههستند. آنها ب بیمارستانیتحت شرایط خاص فیزیولوژیکی و پاتولوژیکی ممکن است از

د. امروزه نحالت کامنسال به حالت پاتوژن تغییر وضعیت بدهعلت افزایش تعداد بیماران ایمونوساپرس، دیابت، تشدید هب

هایی مثل ایدز، استفاده گسترده از ابزارهای پزشکی در عفونتقص نمغزی و قلبی، ابتثداخل بدن بیمار مانند حضور کاتترهای

درمانی و رفتن سد مخاطی حاصل از جراحی، شیمیایمنی یا ازبینهای جراحی مهاجم و استفاده از رادیوتراپی، تکنیک

الطیف طوالنی مدت، شیوع کاندیدیازیس های وسیعبیوتیکآنتی,1]استطلب رو به افزایش عنوان یک عفونت فرصتهب 2].

کاندیدیازیس، یک اختالل شایع در بیماران با سرطان اوروفارنژیال

سر و گردن است که در طول رادیوتراپی ایجاد و با یک مرحله شود. این عارضه معموالً پس کلونیزاسیون مخاط دهانی شروع میشود و ممکن است باعث ایجاد از رادیوگرافی سر و گردن ایجاد می

شود. این اختالل در بیماری سیستمیک در افراد دارای بدخیمی شود و ممکن است به صورت عفونت دردناکی ظاهر میبیماران به آن فراوانی کند. سیستمیک بیماری ایجاد و یابد انتشار ازوفاگوس

.,3][4است شده زده تخمین مختلف هایگروه در %۵۰ میزان به تقریباً شناسایی مخمرهای عامل این عارضه در سطح گونه در انتخاب داروی ضدقارچ مناسب و جلوگیری از ایجاد عفونت شدید الزم و

در شخیص جنس کاندیدا تهای مختلفی برای روشضروری است. تست تولید توان به آنها میاز جمله اند کهمعرفی شدهسطح گونه

های جذب قند و تست جرم تیوب، تست تولید کالمیدوکونیدیا،د، نشوکیت انجام می صورت دستی یا با استفاده ازنیتروژن که به

اشاره های مولکولی سنجی و روشهای کشت بر پایه رنگمحیط .[5]کرداند، هایی بودههای بررسی معمولی همواره دارای چالشروش

صورت کمپلکس وجود توانند بهزا میهای بیماریچراکه قارچباشند و یا اینکه در نمونه کلینیکی خیلی کم باشند و داشته

های معمولی مشکل باشد. به عالوه جداسازی آنها با روشهایی که اجزای خاص برای های غیر قابل کشت و قارچقارچ

عنوان چالش کنند هم بهشناسایی روی محیط کشت تولید نمی .[6]اندهای شناسایی معمولی باقی ماندهدیگر در روش

ID32Cو 2ID20C ،VitekAPIهای فنوتیپی از جمله تستصورت تجاری وجود دارند. ولی های کاندیدا بهبرای تشخیص گونه

روز زمان ۲تا ۱ها هم هزینه باالیی دارند و هم حداقل این تست .[7]آمدن نتیجه آنها مورد نیاز استدستبرای بهر جمعیت های مولکولی امکان تجزیه و تحلیل ساختاروشهای ایزولههای بالینی کاندیدا، دریافت ارتباط پیچیده بین ایزوله

های قارچی را فراهم بالینی و محیطی و ارتباط ژنتیکی ایزولههای مولکولی زیادی برای های اخیر روشدر سال .[8]کنندمی

توان از آن جمله می اند کهههای کاندیدا معرفی شدتشخیص گونه در توالی تعیین ،(sequencingITS (ITS ژن توالی تعیینبه ایضربه میدان ژلی الکتروفورز ،(MLST)ژنی ناحیه چند

(PFGE)، DNA تصادفی تکثیریافته ریخت چند (RAPD)، تکراری توالی و (LH‐PCR) ناهمگون پلیمراز ایزنجیره واکنش

.[10,9]اشاره کرد (Microsatellites) ژنی خارج خصوصبههای معمولی و براساس مخمری با استفاده از روش هایگونه

شوند. با این مورفولوژی و مشخصات فیزیولوژیک شناسایی میهای کاندیدا های مولکولی برای تعیین هویت گونهوجود، روش

های مورفولوژیک قادر به شناسایی گونه خصوصًا زمانی که روشزهای معمولی . شناسایی بر پایه آنالی[11]نباشند کاربرد دارند

ها ممکن است ماکروسکوپی و میکروسکوپی و خصوصیات قارچتحت تاثیر محیط و شرایطی که قارچ قرار دارد تغییر کند، در

شود. های مولکولی مشاهده نمیصورتی که این تغییرات در روش

۳ سیازیدیکاند الیاوروفارنژ یهاجداشده از نمونه یدایکاند یهاگونه صیدر تشخ یمتداول و روش مولکول یهاروش سهیمقا ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

Pathobiology Research                                                                                                                                                             Volume 23, Issue 1, Winter 2020

DNA ریبوزومال(rDNA) یک هدف مناسب در مطالعاتها و مخمرها یشتر قارچها است که در شناسایی بفیلوژنیک قارچ

.[11]شوداز این روش استفاده میدر سطح جنس برای قارچیتشخیص سریع و صحیح عوامل

های مناسب مدیریت نظارت و کنترل بیماری و انتخاب استراتژی .[12]استدرمان و جلوگیری از تشدید بیماری الزم و ضروری

های نهبا توجه به نیاز موجود به شناسایی سریع و صحیح گوتنها برای مطالعات اپیدمیولوژیکی، بلکه برای انتخاب کاندیدا نهومیر مناسب و کاهش میزان مرگ داروهای ضدقارچیدرمان با

ناشی از این مخمرها، انتخاب روش تشخیصی مناسب از بین دلیل اهمیت تشخیص ه. باستهای موجود بسیار مهم روشظور مقایسه روش مولکولی منههای کاندیدایی این مطالعه بگونه

های این مخمر انجام موجود برای تشخیص گونه رایجهای با روش شده است.

هامواد و روش های کلینیکیایزولهکاندیدیازیس در اوروفارنژیالهای ایزوله کاندیدا از نمونه ۶۰تعداد بیمار مبتال به سرطان سر و گردن از انستیتو کانسر بیمارستان ۵۴

ها روی محیط سابورو دکستروز آگار نمونه خمینی گرفته شد.امام کشت داده شدند. برای شناسایی C۲۸°ساعت در ۴۸مدت ه ب

های استاندارد مورد استفاده قرار گرفت.ها تکنیکایزوله تست تولید جرم تیوب

حاوی ی لیتر میلی۵/۰منظور انجام تست جرم تیوب، در یک لوله هبسرم انسانی سوسپانسیون سلولی با استفاده از یک کلنی از هر

ساعت ۳مدت هب C۳۷°ها در دمای . سپس ایزولهشدایزوله تهیه پس از گذشت زمان انکوباسیون، از محتویات هر .[13]انکوبه شدندها الم تهیه شد و از نظر تولید جرم تیوب زیر کدام از لوله .ندپ بررسی شدومیکروسک

آگارکشت روی محیط کروم های مختلف کاندیدا از این تست استفاده برای تشخیص گونه

آگار ها روی محیط کروم هر کدام از ایزوله .شودمی)CHROMagar Company(کشت داده شدند و برای ؛ فرانسه

انکوبه شدند. نتیجه با توجه به رنگ C۳۵°ساعت در دمای ۴۸ شود.تولیدشده توسط هر ایزوله بررسی می

AUXC20APIاستفاده از کیت تست جذب قندی باهای مختلف کاندیدا از روش جذب قندی برای تشخیص گونه

. با استفاده از دستورالعمل شرکت سازنده، شداستفاده فارلند استاندارد مک ۲سوسپانسیون سلولی استاندارد با غلظت

قطره از این سوسپانسیون داخل هر کدام از ۵ و تهیه شدموجود در کیت ریخته و پس از Cهای محیط آمپول

ویات آمپول، سوسپانسیون حاضر به هر کدام از تشدن محیکنواختها، در دمای پس از گذاشتن پوشش چاهک وها تلقیح چاهک

°C۳۰ ساعت انکوباسیون ۲۴از ها پس . خوانش چاهکشدانکوبه

سایت نالین موجود در وبآافزار و با استفاده از نرمشد انجامbioMerieux 14]شدندهای کاندیدا شناسایی گونه].

ITS مولکولی روش از استفاده با هاایزوله هویت تعیینsequencing

DNAجداسازی مدت ه ها روی محیط سابورو دکستروز آگار کشت داده و بایزولهژنومیک با DNAدرجه انکوبه شدند. C۳۰°ساعت در دمای ۴۸

الکل از هر کدام از میلآایزو -کلروفرم - استفاده از روش فنلهای جداشده تا زمان استفاده در دمای DNA .[15]ها جدا شدایزوله°C۲۰ - .نگهداری شدند

PCRانجام واکنش و با با استفاده از مسترمیکس شرکت سیناکلون PCRواکنش

ITSاستفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن (InternalTranscribed Space region) میکرولیتر انجام ۵۰در حجم

‐5ꞌF‐صورت ه ترتیب بهبرفت و برگشت یپرایمرها توالیشد. TCCGTAGGTGAACCTGCGG‐3ꞌ (ITS1) وR‐ 5ꞌ‐TCCTCCGCTTATTGATATGC‐3ꞌ(ITS4) .است

C۹۵°: استبه این ترتیب PCRبرنامه زمانی و دمایی واکنش ه ب C۵۵°ثانیه، ۳۰مدت ه ب C۹۵°سیکل شامل ۳۰دقیقه، ۱۰برای

ه ب C۷۲°ثانیه و دمای نهایی ۱۰۰مدت ه ب C۷۲°ثانیه، ۳۰مدت بر روی ژل، PCRپس از مشاهده محصول .[16]دقیقه ۱۰مدت

ها با توالی ارسال و نمونههر نمونه برای تعیین PCRمحصوالت ؛ DNA )Bioneer توالی آنالیز کاربردی هایبیوسیستم استفاده از

با استفاده از های حاصلتوالیتعیین توالی شدند. کره جنوبی)های با ژن BLASTnنالین آافزار بررسی و با نرم MEGA6 رافزانرم

.[18,17]ندمقایسه شد NCBI موجود در سایت آنالیز آماری

کاندیدا آلبیکنسهای مختلف در تشخیص وجود توافق بین روشمورد (K)و کاندیدای غیر آلبیکنس، توسط تعیین ضریب کاپا

های دیگر با روش مولکولی بررسی قرار گرفت و در این آنالیز روش :[5]مقایسه شدند. آزمون توافق کاپا به شرح زیر تفسیر شد

k برابر با صفر: ضعیف؛k ۲۱/۰-۴۱/۰: کم؛ ۲۱/۰صفر تا برابر با =k :-۱: قابل توجه؛ k= ۶۱/۰- ۸۰/۰: متوسط؛ k= ۴۱/۰-۶۰/۰قابل قبول؛

۸۱/۰ =kعالی : برای این آنالیز استفاده شد. 16.0SPSSافزار آماری از نرم

هایافتهنشان داده ۱شده در جدول گیریبیمار نمونه ۵۴اطالعات مربوط به

سال ۶۳طور متوسط سال و به ۹۳تا ۱۵شده است. سن بیماران از های کاندیدا را توزیع گونه ۲است و بیشتر آنها مرد هستند. جدول دهد.در بیماران در ارتباط با جنس نشان می

sequencingITSروش مولکولی های کاندیدا از برای حصول اطمینان و تایید نتایج شناسایی گونه

ITSتست مولکولی sequencing نتیجه ۱استفاده شد. شکل

 ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ انهیاب یرزاق یمهدو ی ر یزهرا جهانش ۴

۱۳۹۸ ناتسمز ، ۱، شماره ۲۳دوره شناسی زیستیهای آسیبپژوهش

روی ژل چند گونه کاندیدا را برای نمونه، PCRالکتروفورز محصول ITS ژنی قطعه توالی از اینمونه ۲در شکل دهد.آگارز نشان می

کاندیدا آورده شده است. درنشان داد ITS1‐4تایج تست مولکولی با استفاده از پرایمرهای ن

کاندیدا آلبیکنسها کل ایزوله ) در بین%۳/۵۳ایزوله ( ۳۲که ۹، کاندیدا تروپیکالیس) %۶۶/۲۱ایزوله ( ۱۳دنبال آن ه . ببودند

۱و کاندیدا کفیر) %۵ایزوله ( ۳، کاندیدا گالبراتا) %۱۵ایزوله (کاندیدا ایزوله شناسایی شد. کاندیدا دابلینینسیس) %۶۶/۱ایزوله (

کاندیدا آلبیکنسعنوان در روش تولید جرم تیوب به دابلینینسیسروی محیط کروم آگار پس از کاندیدا دابلینینسیس شناسایی شد.

ساعت، کلنی سبزرنگ ایجاد کرد و تست جرم تیوب آن مثبت ۴۸ساعت روی محیط کورن میل آگار در ۴۸بود. این ایزوله پس از

کاذب منشعب و تولید بالستوکونیدی فراوان، هایف C۳۵°دمای هایف حقیقی کرد، ولی تولید کالمیدوکونیدی مشاهده نشد.

با استفاده از پرایمرهای کاندیدا دابلینینسیستشخیص مولکولی 4‐ITS1 19]تایید شد, ایزوله ۲کلینیکی هایایزولهدر بین .[20 ).۳(شکل بود جنس پیکیا) متعلق به ۳۳/۳%(

تیوب، کشت روی محیط کروم نتایج حاصل از روش تولید جرم API آگار و کیت قندی 20CAUX با روش مولکولی مقایسه

از کاندیدای غیر آلبیکنس کاندیدا آلبیکنسمنظور افتراق شدند. به ایزوله ۳۳از تست جرم تیوب استفاده شد. براساس این روش

عنوان ) به%۴۵( ایزوله ۲۷و کاندیدا آلبیکنسعنوان ) به۵۵%(کاندیدا های شناسایی شدند. تعداد ایزوله آلبیکنس غیر یکاندیدا

در این روش، یک ایزوله بیشتر از روش مولکولی بود. در آلبیکنس ها در دو روش تولید جرم تیوب و روش مقایسه جز به جزء ایزوله) در تست تولید جرم %۶۶/۱۱ایزوله ( ۷، ۳مولکولی براساس جدول

عنوان غیر ) به%۶۶/۶ایزوله ( ۴و کاندیدا آلبیکنسعنوان تیوب به ۷آلبیکنس شناسایی شدند، در صورتی که روش مولکولی این

ایزوله را غیر آلبیکنس شناسایی کرد.کاندیدا ) %۶۶/۵۶( ایزوله ۳۴در روش کشت روی کروم آگار

ایزوله ۵ ،کاندیدا تروپیکالیس) %۶۶/۲۶( ایزوله ۱۶، آلبیکنس) غیر قابل تشخیص %۵( ایزوله ۳و کاندیدا گالبراتا) ۵۵/۸%(

) در مقایسه با روش %۱۵ایزوله ( ۹گزارش شد. در این روش ) %۵( ۳) و ۳مولکولی تشخیص متفاوت نشان دادند (جدول

ای که تولید کلنی سفید کرده بودند، در روش مولکولی ایزوله و جنس پیکیا تشخیص داده شدند. کاندیدا گالبراتا

کاندیدا آلبیکنسایزوله AUX ،۳۰C20APIاستفاده از کیت با شناسایی شدند. در مقایسه نتایج حاصل از این روش با روش

) دارای تشخیص متفاوت بودند.%۳۳/۱۳ایزوله ( ۸مولکولی، آنالیز آماری ضریب کاپا را در مقایسه با روش مولکولی برای روش

و روش کیت ۶۶/۰، روش کشت روی کروم آگار ۹۰/۰جرم تیوب API20CAUX ۴نشان داد (جدول ۸۶/۰برابر با.(

شده اطالعات مربوط به سن، جنس و نوع سرطان در بیماران مطالعه) ۱جدول نفر) ۵۴(

(درصد)فراوانی اطالعات بیماران نوع سرطان

SCC ۸) ۸۲/۱۴( صورت SCC ۳) ۵۶/۵( سینوس BCC ۱) ۸۵/۱( صورت SCC ۱۴) ۹۲/۲۵( زبان SCC ۶) ۱۱/۱۱( لب SCC ۳) ۵۵/۵( کام

۵) ۲۶/۹( سرطان مسیر تنفسیSCC ۴) ۴۱/۷( گلو

۱) ۸۵/۱( لنفوم سر ۱) ۸۵/۱( سرطان پاراتیروئید ۲) ۷۱/۳( سرطان تیروئید ۵) ۲۶/۹( سرطان الرنژ

۱) ۸۵/۱( مالنومای چشم سن۳۰-۱۵ )۲۶/۹ (۵ ۴۵-۳۰ )۲۶/۹ (۵ ۶۰-۴۵ )۳۳/۳۳ (۱۸ ۷۵-۶۰ )۱۹/۳۵ (۱۹ ۹۰-۷۵ )۱۱/۱۱ (۶

۱) ۸۵/۱( ۹۰بیشتر از جنس ۳۹) ۲۲/۷۲( مرد ۱۵) ۷۸/۲۷( زن

:BCC کارسینومای سلول بازال؛:SCC کارسینومای سلول اسکواموس

درصد ،های مخمری در ارتباط با جنس (اعداد داخل پرانتزتوزیع گونه )۲جدول هستند.) تعداد زن مرد گونه

۳۲ ۸) ۲۵( ۲۴) ۷۵( آلبیکنسکاندیدا ۱۳ ۶) ۲/۴۶( ۷) ۸/۵۳( کاندیدا تروپیکالیس

۹ ۲) ۲/۲۲( ۷) ۸/۷۷( کاندیدا گالبراتا ۳ - ۳) ۱۰۰( کاندیدا کفیر

۱ - ۱) ۱۰۰( کاندیدا دابلینینسیس ۲ - ۲) ۱۰۰( پیکیا

۶۰) ۱۰۰( ۱۶) ۶۷/۲۶( ۴۴) ۳۳/۷۳( تعداد کل

تعدادی از ITS1‐4حاصل از پرایمرهای PCRالکتروفورز محصول )۱شکل جفت باز)، ۴۷۰مربوط به پیکیا ( ۱ستون ؛Ladderدر کنار های جدا شدهایزوله، ۳ های، ستونجفت باز)۵۵۰( کاندیدا آلبیکنس ۱۱و ۱۰، ۸، ۶، ۵، ۲ هایستون کاندیدا گالبراتا مربوط به ۹ستون و جفت باز)۷۰۰(ر کاندیدا کفی ۷و ۴ جفت باز) است.۹۰۰(

۵ سیازیدیکاند الیاوروفارنژ یهاجداشده از نمونه یدایکاند یهاگونه صیدر تشخ یمتداول و روش مولکول یهاروش سهیمقا ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

Pathobiology Research                                                                                                                                                             Volume 23, Issue 1, Winter 2020

در کاندیدا ITSای از توالی قطعه ژنی نمونه )۲شکل

کاندیدا استاندارد سوش با مقایسه در کاندیدیازیس اوروفارنژیال هاینمونه از جداشده کاندیدای هایایزوله در ITS ژن توالی تعیین از حاصل فیلوژنی درخت )۳شکل

.است شده رسم MEGA6 افزارنرم از استفاده با و neighbor‐joining روش با که ،ATCC10231 آلبیکنس

 ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ انهیاب یرزاق یمهدو ی ر یزهرا جهانش ۶

۱۳۹۸ ناتسمز ، ۱، شماره ۲۳دوره شناسی زیستیهای آسیبپژوهش

، کروم آگار و جرم تیوبAUXC20API، تست جذب قندی با استفاده از کیت sequencingITSروش ۴ایزوله کاندیدایی با ۲۰جزییات مربوط به شناسایی )۳جدول

ITSروش مولکولی شماره ایزولهsequencing

تست جذب قندی با استفاده از کیت API20CAUX

جرم تیوب کروم آگارتشخیص اولیه براساس تولید

جرم تیوب غیر آلبیکنس - ک. گالبراتاک. کفیرک. کفیر ۲آلبیکنسک. + ک. آلبیکنسک. لوزیتانیاک. آلبیکنس ۳ غیر آلبیکنس -ک. آلبیکنسک. آلبیکنسک. آلبیکنس۱۳ک. آلبیکنس + ک. تروپیکالیسک. کفیرک. کفیر۲۰ غیر آلبیکنس - کلنی سفیدک. گالبراتا ک. گالبراتا۲۲ غیر آلبیکنس - ک. گالبراتاک. کفیرک. کفیر۲۵ آلبیکنسغیر - کلنی سفید ک. نوروژینسیسک. گالبراتا۳۵ غیر آلبیکنس -ک. گالبراتاپ. ویکرهامیک. گالبراتا۳۶ غیر آلبیکنس -ک. تروپیکالیس ک. تروپیکالیسک. آلبیکنس۳۷ غیر آلبیکنس - کلنی سفیدک. کفیرج. پیکیا۴۰ک. آلبیکنس +ک. تروپیکالیسک. تروپیکالیسک. گالبراتا۴۴ ک. آلبیکنس + آلبیکنسک. ک. تروپیکالیسک. تروپیکالیس۴۶ غیر آلبیکنس - ک. آلبیکنسک. آلبیکنسک. آلبیکنس۴۷ک. آلبیکنس + ک. آلبیکنسک. تروپیکالیسک. تروپیکالیس۴۹ غیر آلبیکنس - ک. آلبیکنسک. آلبیکنسک. آلبیکنس۵۱ ک. آلبیکنس + ک. آلبیکنسک. آلبیکنسک. دابلینینسیس۵۳ غیر آلبیکنس -ک. گالبراتاگالبراتاک. ک. گالبراتا۵۴ک. آلبیکنس + ک. تروپیکالیسک. تروپیکالیسک. تروپیکالیس۵۷ غیر آلبیکنس -ک. گالبراتاک. گالبراتاج. پیکیا۵۸ک. آلبیکنس +ک. تروپیکالیس ک. تروپیکالیسک. تروپیکالیس۵۹

پروتوتکا) کاندیدا؛ ج: جنس؛ پ:(ک:

)۶۰های کاندیدا (تعداد کل: در شناسایی گونه ITSها در توافق بین سه روش رایج در مقایسه با روش تعیین توالی ژن تعداد ایزوله )۴جدول جرم تیوب کروم آگار کیت جذب قندی گونه

۳۳ ۳۴ ۳۰ کاندیدا آلبیکنس - ۱۶ ۱۲ کاندیدا تروپیکالیس

- ۵ ۱۱ کاندیدا گالبراتا - ۲ - ایکاندیدا کروزه - - ۴ کاندیدا کفیر

- - - کاندیدا دابلینینسیس - - ۱ کاندیدا لوزیتانیا

- - ۱ کاندیدا نوروژینسیس - - - جنس پیکیا - - ۱ ویکرهامی پروتوتکا ۲۷ ۳ - های دیگرگونه بود. ۸۶/۰ و ۶۶/۰ ،۹۰/۰ به ترتیب AUXC20API آگار و کیت کروم روی تیوب، کشت جرم هایروش برای مولکولی روش با مقایسه در کاپا ضریب

بحث اوروفارنژیالایزوله جداشده از بیماران مبتال به ۶۰در میان

کاندیدا ، براساس روش مولکولی، در این مطالعه کاندیدیازیسدنبال ه بیشترین شیوع را داشته است که ب %۳۳/۵۳با آلبیکنس

که این رددر مقام دوم قرار دا %۶۶/۲۱با کاندیدا تروپیکالیسآن دلیل . به[5]بودشده در گذشته ها منطبق بر مطالعات انجامیافته

اینکه مطالعه حاضر فقط روی بیماران مبتال به سرطان سر و گردن های کاندیدای جداشده و نوع سرطان انجام شد، ارتباطی بین گونه

ایزوله کاندیدا را با ۸۵ای مکاران در مطالعهو ه بیتاریافت نشد. های معمولی و مولکولی مورد بررسی قرار دادند. در شناسایی روش

ایزوله ۸، کاندیدا آلبیکنس) %۱/۸۱ایزوله ( ۶۹به روش مولکولی،

۱و کاندیدا تروپیکالیس) %۷ایزوله ( ۶، کاندیدا گالبراتا) ۴/۹%(

کاندیدا های در بین ایزوله. [8]) پیکیا گزارش شد%۱ایزوله (نمونه ۱۳) با تست جرم تیوب، %۱/۲۱نمونه ( ۱۸، آلبیکنس

API) با روش %۲/۱۵نمونه ( ۱۳) با تست کروم آگار و ۲/۱۵%(تشخیص متفاوت نشان دادند. در مطالعه آنها در بررسی با تست

و کاندیدا آلبیکنس) %۹/۷۲ایزوله ( ۶۲کروم آگار و جرم تیوب، ) %۱/۱) کاندیدای غیر آلبیکنس و یک ایزوله (%۲۵ایزوله ( ۲۲) روی کروم آگار %۹٫۴ایزوله ( ۸عنوان نامشخص شناسایی شد. به

) در روش %۹/۱۲ایزوله ( ۱۱نتایج متفاوت از جرم تیوب داشت.

۷ سیازیدیکاند الیاوروفارنژ یهاجداشده از نمونه یدایکاند یهاگونه صیدر تشخ یمتداول و روش مولکول یهاروش سهیمقا ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

Pathobiology Research                                                                                                                                                             Volume 23, Issue 1, Winter 2020

API بین %۳/۲ایزوله ( ۲با جرم تیوب هماهنگ نبود. نتایج ( .[8]اختالف داشت APIر و های جرم تیوب با کروم آگاتست

کشت روی و های تولید جرم تیوبمطالعات نشان دادند که روشقادر به شناسایی %۹۷/۲۶و %۶۶/۶۹محیط کروم آگار به ترتیب در مطالعه حاضر مشخص شد که .[5]کاندیدا در سطح گونه نیستند

۱۰) در روش کشت روی محیط کروم آگار و %۶۶/۱۱ایزوله ( ۷تشخیص API) در تست جذب قندی با کیت %۶۶/۱۶(ایزوله

). ۳اند (جدول متفاوتی در مقایسه با تست جرم تیوب داشتههای کروم آگار و تست جذب قندی همچنین در بین نتایج تست

ایزوله) نتایج متفاوت را نشان ۱۰ها (ایزوله API ،۶۶/۱۶%کیت گ کردند ایزوله تولید کلنی سفید رن ۳که در این میان د نداد

کاندیدا عنوان بهایزوله که در روش مولکولی یک .)۳(جدول تولید در روش دارای نتیجه مثبت شد،شناسایی دابلینینسیس کاندیدا آلبیکنسروی محیط کروم آگار با بود وجرم تیوب

کاندیدا آن را نیز APIو تست جذب قندی شباهت داشت ).۳شناسایی کرد (جدول آلبیکنس

شده شناسایی کاندیدا آلبیکنسدر مطالعه حاضر بین نتایج تعیین )، کشت روی کروم آگار %۵۵های جرم تیوب (توسط روش

شباهت AUXC20API) و تست جذب قندی با کیت ۶۶/۵۶%(و همکاران شباهت بین سوزاوجود داشت. در مطالعه دیگری نیز

. آنها گزارش [5]درا نشان دادن کاندیدا آلبیکنساین سه روش برای از غیر آلبیکنس، در بین آلبیکنس کاندیداکردند که برای شناسایی

های معمولی، روش جرم تیوب بیشترین حساسیت را دارد. روشها دلیل سرعت و سادگی در آزمایشگاههتست تولید جرم تیوب ب

کاندیداهای عنوان استاندارد طالیی برای تشخیص گونهبهولی باید در .[5]شودلبیکنس در نظر گرفته میاز غیر آ لبیکنسآ

ها قادر به تولید جرم کاندیدا آلبیکنس %۱۰تا ۵نظر داشت که کاندیدا دیگری مثل هایاز طرفی گونه .[21]تیوب نیستندقادر به تولید ساختارهای هم دابلینینسیس کاندیداو تروپیکالیس

و همکاران نشان دادند که در تشخیص احمد. [22]مشابهی هستندهای جرم تیوب و جذب قندی آنها هایی که بین نتایج روشایزوله

اختالف وجود دارد، روش مولکولی در تایید تشخیص در اولویت و کاندیدا آلبیکنسهای توان گونهراحتی میاست و با این روش به .[7]را تشخیص داد کاندیدا دابلینینسیس

. [23]یکی از عوامل ایجاد عفونت در انسان است رکاندیدا کفیهای به تعداد کم از نمونه کاندیدا کفیراند که مطالعات نشان داده

. همچنین آنها یکی از [24]کاندیدیازیس تنفسی جدا شده استعوامل ایجاد بیماری تهاجمی در افراد دارای بدخیمی خونی

پیکیا شناسایی شدند ایزوله از جنس ۲. در این مطالعه [25]هستند. [8]اندهای کاندیدیازیس در انسان گزارش شدهکه قبالً از نمونه

اند که جنس پیکیا قادر به ایجاد بیماری در مطالعات نشان داده. در این مطالعه یک [26]های کاندیدا استانسان بدون حضور گونه

های شناسایی شد که قبالً از نمونه کاندیدا دابلینینسیسمورد .[8]کاندیدیازیس جدا شده بود

ها همه ایزوله ITSهای ها، ژنمنظور تایید تشخیص ایزولههبایزوله ۲۰. نتایج نشان داد که در مورد توالی شدندتعیین طوریهب داشت،شده وجود روش انجام ۴ی در تشخیص از تاختالفا

) در %۳۳/۱۳ایزوله ( ۸) در تست جرم تیوب، %۶/۱۶ایزوله ( ۱۰که ) در تست کشت روی محیط کروم آگار %۱۵ایزوله ( ۹و APIست ت

ITSدارای تشخیص متفاوت در مقایسه با روش مولکولی sequencing با روش کروم آگار قابل %۵ایزوله ( ۳و ندبود (

شناسایی نبودند. جزییات مقایسه بین چهار روش تولید جرم و روش مولکولی در APIتیوب، کشت روی کروم آگار، کیت

جنسنمونه از نشان داده شده است. در این مطالعه دو ۳جدول کاندیدا عنوان یکی را به آگار کرومکه تست شدندشناسایی پیکیاهای ی گونهفدیگری را ناشناخته معرفی کرد. از طر و گالبراتا

کاندیدا تروپیکالیسو گالبراتا کاندیداعنوان را هم به کاندیدا کفیردر مطالعه حاضر میزان ضریب کاپا در ). ۳شناخته بود (جدول

های تولید جرم برای روش کاندیدا آلبیکنسهای تشخیص گونهدر مقایسه با روش APIتیوب، کشت روی کروم آگار و کیت

محاسبه شد. در مطالعه ۸۶/۰و ۶۶/۰، ۹۰/۰مولکولی به ترتیب اعالم شده ۹۰/۰دیگر هم این ضریب برای روش جرم تیوب

.[5]استکه ی است عنوان یک روشروش کشت روی محیط کروم آگار به

کاندیدا آلبیکنس، شناسایی و های مخلوطقادر به تشخیص کشتولی است، نیز کاندیدا گالبراتاهای گونه وکاندیدا تروپیکالیس

کمتر با روش کاندیدا تروپیکالیسدلیل حساسیت کمتر در مورد هبAPI 5]‐[29داردانطباق, . این روش در مطالعه حاضر کمترین 27

توافق را با روش مولکولی نشان داد.های برای تعیین هویت گونه توالیهای بر پایه تعیین روش

. استعنوان روش صحیح و سریع مطرح کاندیدا انجام شده و بهو توالی دارای کارآیی بیشتر عالوه تعیین هویت براساس تعیین هب

های غیر قابل و قادر به تشخیص گونههای فنوتیپی ز روشموثرتر او درصد باالی صحت را در های رایج است تشخیص با روش .[31,30]کندتشخیص فراهم می

گیرینتیجهترین روش برای شناسایی قطعی مطالعه حاضر نشان داد که دقیق

های کاندیدا روش مولکولی است. با توجه به اینکه زمان مورد گونهنیاز برای انجام روش مولکولی نسبت به روش کشت روی محیط

کمتر است، و نیز AUXC20APIکروم آگار و استفاده از کیت تواند مولکولی، این روش می با درنظرگرفتن دقت بیشتر در روش

عنوان روش اصلی تعیین هویت قارچی در آزمایشگاه مورد بهعنوان توان از روش مولکولی بهاستفاده قرار بگیرد. همچنین می

های رایج مورد شک یک روش تاییدی در جایی که نتایج روشرغم خطاهای موجود در بین علی است استفاده کرد. با این حال،

های کاندیدا، باز هم این ی معمولی تشخیصی گونههاتکنیکهای تشخیصی استفاده صورت روتین در آزمایشگاهها بهروش

 ـــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ انهیاب یرزاق یمهدو ی ر یزهرا جهانش ۸

۱۳۹۸ ناتسمز ، ۱، شماره ۲۳دوره شناسی زیستیهای آسیبپژوهش

ها برای های روشگاهی از مزایا و محدودیتآ بنابراین شوند.میتشخیص سریع و درست منظوربهانتخاب بهترین روش ترکیبی

.استهای کاندیدا ضروری گونه

شناسی بدین وسیله از زحمات کلیه پرسنل بخش قارچتشکر و قدردانی: انستیتو پاستور تهران که در انجام این پروژه یاری کردند تشکر و قدردانی

شود.می ایران پاستور انستیتو اخالق کمیته تایید با مطالعه ایناخالقی: تاییدیه

.شد انجام IR.PII.REC.1394.59 اخالقی کد با .تعارض منافعی وجود نداردگونه هیچتعارض منافع:

(نویسنده اول)، نگارنده مقدمه/ زهرا جهانشیری سهم نویسندگان:ابیانه رزاقی مهدی )؛%٨٠پژوهشگر اصلی/تحلیلگر آماری/نگارنده بحث (

)%٢٠شناس/پژوهشگر کمکی ((نویسنده دوم)، روش پاستور انستیتو مصوب ۸۷۰ شماره طرح محل از مالی منابعمنابع مالی:

.شد تامین ایران

منابع

1‐ Bensadoun RJ, Patton LL, Lalla RV, Epstein JB.Oropharyngeal candidiasis in head and neck cancerpatients treated with radiation: Update 2011. SupportCareCancer.2011;19(6):737‐44.2‐ Dahiya MC, Redding SW, Dahiya RS, Eng TY,Kirkpatrick WR, Coco BJ, et al. Oropharyngealcandidiasis caused by non‐albicans yeast in patientsreceivingexternalbeamradiotherapyforhead‐and‐neckcancer.IntJRadiatOncolBiolPhys.2003;57(1):79‐83.3‐SuryawanshiH,GanvirSM,HazareyVK,WanjareVS.Oropharyngeal candidosis relative frequency inradiotherapy patient for head and neck cancer. J OralMaxillofacPathol.2012;16(1):31‐7.4‐ReddingSW,ZellarsRC,KirkpatrickWR,McAteeRK,Caceres MA, Fothergill AW, et al. Epidemiology oforopharyngeal Candidacolonization and infection inpatientsreceivingradiationforheadandneckcancer. JClinMicrobiol.1999;37(12):3896‐900.5‐SouzaMN,OrtizSO,MelloMM,OliveiraFD,SeveroLC,GoebelCS.Comparisonbetween fourusualmethodsofidentificationofCandidaspecies.RevistadoInstitutodeMedicinaTropicaldeSãoPaulo.2015;57(4):281‐7.6‐ Tsui CK, Woodhall J, Chen W, Lévesque CA, Lau A,Schoen CD, et al. Molecular techniques for pathogenidentificationandfungusdetection intheenvironment.IMAFungus.2011;2(2):177‐89.7‐AhmadS,KhanZ,AsadzadehM,TheyyathelA,ChandyR. Performance comparison of phenotypic andmolecularmethods for detectionand differentiation ofCandidaalbicansand Candida dubliniensis.BMC InfectDis.2012;12(1):230.8‐ Bitar I, Khalaf RA, Harastani H, Tokajian S.Identification, typing, antifungal resistance profile, andbiofilm formation of Candida albicans isolates fromLebanese hospital patients. BioMed Res Int.2014;2014:931372.9‐ Bonfim‐Mendonça PD, Fiorini A, Shinobu‐MesquitaCS, Baeza LC, Fernandez MA, Svidzinski TI. Moleculartyping of Candida albicans isolates from hospitalizedpatients. Revista do Instituto de Medicina Tropical deSãoPaulo.2013;55(6):385‐91.10‐ Ieda S, Moriyama M, Takashita T, Maehara T,Imabayashi Y, Shinozaki S, et al.Molecular analysis of

fungal populations in patients with oral candidiasisusing internal transcribed spacer region. PLoS One.2014;9(6):e101156.11‐ Pinto FC, Lima DB, Agustini BC, Dallagassa CB,ShimabukuroMF, ChimelliM, et al.Morphological andmolecular identification of filamentous fungi isolatedfrom cosmetic powders. Braz Arch Biol Technol.2012;55(6):897‐901.12‐ Epstein JB, Polsky B. Oropharyngeal candidiasis: Areview of its clinical spectrum and current therapies.ClinTher.1998;20(1):40‐57.13‐ Taschdjian CL, Burchall JJ, Kozinn PJ. Rapididentification of Candida albicans by filamentation onserum and serum substitutes. AMA J Dis Child.1960;99(2):212‐5.14‐ Ramani R, Gromadzki S, Pincus DH, Salkin IF,ChaturvediV.EfficacyofAPI20CandID32Csystemsforidentificationofcommonandrareclinicalyeastisolates.JClinMicrobiol.1998;36(11):3396‐8.15‐Rezaie S, Ban J,MildnerM, Poitschek Ch, Brna Ch,Tschachler E. Characterization of a cDNA clone,encoding a 70 kDa heat shock protein from thedermatophyte pathogen Trichophyton rubrum. Gene.2000;241(1):27‐33.16‐ Barbedo LS, Figueiredo‐Carvalho MH, Muniz MD,Zancopé‐Oliveira RM. The identification anddifferentiation of the Candida parapsilosis complexspecies by polymerase chain reaction‐restrictionfragment length polymorphism of the internaltranscribed spacer region of the rDNA. Memórias doInstitutoOswaldoCruz.2016;111(4):267‐70.17‐ Wang Y, Shi C, Liu JY, Li WJ, Zhao Y, Xiang MJ.MultilocussequencetypingofCandidatropicalisshowsclonal cluster enrichment in azole‐resistant isolatesfrom patients in Shanghai, China. Infect Genet Evol.2016;44:418‐24.18‐ Saitou N, Nei M. The neighbor‐joining method: Anewmethod forreconstructingphylogenetic trees.MolBiolEvol.1987;4(4):406‐25.19‐JahanshiriZ,ManifarS,MoosaH,Asghari‐PaskiabiF,Mahmoodzadeh H, Shams‐Ghahfarokhi M, et al.Oropharyngeal candidiasis in head and neck cancerpatients in Iran: Species identification, antifungalsusceptibility and pathogenic characterization. JournaldeMycologieMedicale.2018;28(2):361‐6.20‐ Ahmad S, Khan Z,Mokaddas E, Khan ZU. Isolationand molecular identification of Candida dubliniensisfrom non‐human immunodeficiency virus‐infectedpatientsinKuwait.JMedMicrobiol.2004;53(7):633‐7.21‐ Lipperheide V, Andraka L, Pontón J, Quindós G.Evaluation of the Albicans IDR plate method for therapididentificationofCandidaalbicans:DieBewertungdesAlbicansIDR‐SystemszurSchnellidentifizierungvonCandidaalbicans.Mycoses.1993;36(11‐12):417‐20.22‐CárdenesCD,CarrilloAJ,AriasA,Rodrıguez‐ÁlvarezC,Torres‐LanaA,SierraA,etal.ComparisonofAlbicansID2 agar plate with the germ tube for presumptiveidentificationofCandidaalbicans.DiagnMicrobiolInfectDis.2002;42(3):181‐5.23‐BadieeP,AlborziA.SusceptibilityofclinicalCandidaspeciesisolatestoantifungalagentsbyE‐test,SouthernIran:Afiveyearstudy.IranJMicrobiol.2011;3(4):183‐8.24‐ Hosain Pour A, Salari S, Ghasemi Nejad Almani P.Oropharyngeal candidiasis in HIV/AIDS patients andnon‐HIV subjects in the Southeast of Iran. Curr MedMycol.2018;4(4):1‐6.

۹ سیازیدیکاند الیاوروفارنژ یهاجداشده از نمونه یدایکاند یهاگونه صیدر تشخ یمتداول و روش مولکول یهاروش سهیمقا ــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــــ

Pathobiology Research                                                                                                                                                             Volume 23, Issue 1, Winter 2020

25‐DufresneSF,MarrKA,SydnorE,StaabJF,KarpJE,LuK,etal.EpidemiologyofCandidakefyrinpatientswithhematologic malignancies. J Clin Microbiol.2014;52(6):1830‐7.26‐ChakrabartiA,SinghK,NarangA,SinghiS,BatraR,RaoKL,etal.OutbreakofPichiaanomalainfectioninthepediatric service of a tertiary‐care center in NorthernIndia.JClinMicrobiol.2001;39(5):1702‐6.27‐ Eraso E, Moragues MD, Villar‐Vidal M, Sahand IH,González‐GómezN,PontónJ,etal.Evaluationofthenewchromogenic medium Candida ID 2 for isolation andidentification of Candida albicans and othermedicallyimportant Candida species. J Clin Microbiol.2006;44(9):3340‐5.28‐Jabra‐RizkMA,BrennerTM,RomagnoliM,BaquiAA,MerzWG,FalklerWA,etal.Evaluationofareformulated

CHROMagarCandida.JClinMicrobiol.2001;39(5):2015‐6.29‐ Pfaller MA, Houston A, Coffmann S. Application ofCHROMagar Candida for rapid screening of clinicalspecimens for Candida albicans, Candida tropicalis,Candidakrusei,andCandida(Torulopsis)glabrata.JClinMicrobiol.1996;34(1):58‐61.30‐ Garner CD, Starr JK, McDonough PL, Altier C.Molecular identification of veterinary yeast isolates byuseof sequence‐basedanalysisof theD1/D2 regionofthe large ribosomal subunit. J Clin Microbiol.2010;48(6):2140‐6.31‐BormanAM,SzekelyA,LintonCJ,PalmerMD,BrownP, Johnson EM. Epidemiology, antifungal susceptibility,andpathogenicityofCandidaafricana isolates fromtheUnitedKingdom.JClinMicrobiol.2013;51(3):967‐72.

1537-ASB-Or-Jahanshiri(36144)-InD1537-ASB-Or-Jahanshiri(36144)-wm-TxT