DeborahSpaine AULA AN LISE SEMINAL parte1 · Espermograma é um exame que avalia o potencial de fertilidade do indivíduo e um resultado anormal não significa infertilidade masculina

Universidade Federal de São Paulo Escola Paulista de Medicina Setor Integrado de Reprodução Humana

ANÁLISE SEMINAL

Dra.Deborah M.Spaine2010

Espermograma é um exame que avalia o potencial de fertilidade do indivíduo e um resultado anormal não significa infertilidade masculina.

Composição do sêmen� Vesículas seminais

� 60% do volume do sêmen

� semenogelina,lactoferrina e fibronectina: coagulação

� frutose: fonte de energia

� prostaglandinas:13 tipos (transporte, muco)

� bicarbonato de sódio, ácido ascórbico, potássio(pH alcalino)

Bexiga

Vesícula Seminal

Próstata

Ducto Ejaculador

Uretra

Composição do sêmen� Próstata

� 30-35% do volume do sêmen� pH: 6,5� enzimas proteolíticas: fibrinolisina, proteases,

fibrinogenase, e aminopeptidase: liquefação� zinco: bacteriostático� espermina e espermidina: odor� citrato: quelantes metais iônicos� fosfatase ácida: hidrólise ésteres orgânicos

Composição do sêmen

� Glândulas bulbo-uretrais ou de Cowper

� galactose, galactosamina, ácido siálico, ácido galacturônico, metilpentose

� Glândulas uretrais ou de Littré

Composição do sêmen

Elementos figurados

� Espermatozóides

� Células redondas

� células exfoliação do epitélio germinativo (espermátides / espermatócitos)

� leucócitos

ESPERMATOGÊNESE� Espermatogônia- células germinativas imaturas- multiplicação por mitose: testículo fetal

- início da meiose: param na prófase I- prófase I: espermatócito primário- nascimento: espermatogônias e

espermatócitos 1ários.

- retomada divisão: puberdade

ESPERMATOGÊNESE

� MEIOSE

• células haplóides por divisão reducional

• variação genética por troca segmentos entre cromossomos homólogos

• separação aleatória dos cromossomos maternos/paternos

CÉLULA DE SERTOLIMANUTENÇÃO DA ESPERMATOGÊNESE

� suporte físico

� barreira hemato-testicular

� secreções: - lactato- transferrina- ativina- inibina

� fagocitose do excesso citoplasma

ESPERMIOGÊNESE

� Diferenciação morfológica:

espermátide redonda

espermátide alongada

espermatozóide maduro

ESPERMIAÇÃO

Liberação de espermatozóides maduros

na luz do túbulo seminífero

PRODUÇÃO

início da espermatogênese

liberação de espermatozóides maduros

na luz do túbulo

70 ± 4 dias

rete testis

corpo do epidídimo

cauda do epidídimo

cabeça do epidídimo

� ARMAZENAMENTO

� TRANSPORTE

� CONCENTRAÇÃO

� MATURAÇÃO

EPIDÍDIMO

Modo de colheita

� preferencialmente: masturbação

� coito interrompido: não recomendado

� perda da porção inicial

� contato com secreção vaginal: pH, bactérias

� motivos religiosos / incapacidade: preservativo

especial atóxico

� impotência psicossomática ou médica: eletro-

ejaculação ou vibroestimulação

A colheita adequada da amostra é fator determinante para eficácia da realização da análise e confiabilidade dos resultados.

Orientação para colheita

� período de abstinência sexual: entre 2 e 7 dias

� médio: 3 dias (repleção glândulas)

� número de amostras: geralmente 2

Orientação para colheita

� local de colheita: próximo ao laboratório

� ambiente silencioso, isolado, sem movimento

� agradável, limpo, com banheiro anexo

� transporte para laboratório:

� temperatura 36ºC ( não <20 ºC e >37 ºC )

� máximo 60 minutos

� frasco de colheita: sempre fornecido pelo lab.

� polipropileno

� 5cm de diâmetro e 7cm de altura

Vantagens de colheita no laboratório

� não perda de material durante transporte

� sem variação de temperatura: choque

� observar presença de coagulação

� determinar tempo de liquefação exato

ASPECTOS MACROSCÓPICOS

• coagulação

• tempo de liquefação

•coloração / aspecto

• viscosidade

• volume


� Coagulação

� proteínas das vesículas seminais

� presente / ausente

� resultado anormal: obstrução dos ductos ejaculatórios, ausência congênita das vesículas ou disfunção.


� Tempo de Liquefação

� enzimas da próstata

� antígeno específico da próstata (PSA)

� tempo: máximo até 60 minutos

� tempo médio: 30 minutos

� resultado anormal: anormalidade na produção de enzimas

ASPECTOS MACROSCÓPICOS� Tempo de Liquefação

� homogeneização contínua

� liquefação > 60 minutos:� tratamento mecânico: uso seringa e agulha18 ou 19 gauge� tratamento químico: bromelina

� tratamentos podem afetar motilidade e

morfologia spm. e bioquímica plasma seminal

ASPECTOS MACROSCÓPICOS� Viscosidade

� pipeta sorológica 5mL

� normal: gotejar ou filamento < 2cm

� resultado anormal: viscosidade aumentada

� pode interferir na motilidade,concentração, pesquisa Ac, bioquímica

� relação entre viscosidade e fertilidade: desconhecida

ASPECTOS MACROSCÓPICOS� Coloração

� branco ou acinzentada� amarelada� avermelhada (hemospermia )

� Aspecto

� homogêneo� opalescente� transparente

ASPECTOS MACROSCÓPICOS� Volume

� pipeta sorológica de 5mL� pesagem

� frasco coletor pré-pesado� pesagem do frasco com a amostra� densidade sêmen é 1g/mL(1,043-1,102)

� valor de referência: ≥ 1,5 mL

� valores abaixo do normal: HIPOSPERMIA

� ausência de ejaculado: ASPERMIA

VOLUME < 0,5mL

� perda durante coleta

� ejaculação retrógrada

� obstrução ducto ejaculatório

� ausência congênita bilateral dos vasos

deferentes

� hipogonadismo hipogonadotrófico

ASPECTOS MICROSCÓPICOS•exame a fresco

•motilidade

• concentração

•contagem total

•vitalidade

• morfologia

•concentração de células redondas

•concentração de neutrófilos

ASPECTOS MICROSCÓPICOSEXAME A FRESCO

� lâmina / lamínula:10µL e lamínula 22x22mm

oferece profundidade de 20µm

� microscópio contraste de fase 100x / 37ºC

� agregação:

� spm.imóveis x spm.imóveis

� spm.móveis x muco ou x cel. ou x debris

� aglutinação: spm.móveis x spm.móveis

� presença de cel. epiteliais e cel.redondas

ASPECTOS MICROSCÓPICOSMOTILIDADE

� análise: câmaras ou lâmina / lamínula

� ideal: microscópio contraste de fase 400x

� temperatura ideal: ~37ºC (“warm stage”)

� leitura de 200 espermatozóides: média em %

� diferença de leituras < 10%

Câmara de motilidade

Grau de motilidade� OMS, 1999� grau a: motilidade progressiva rápida� grau b: motilidade progressiva lenta ou rápida não-direcional� grau c: motilidade não-progressiva

� grau d: imóvel

� OMS, 2010� motilidade progressiva(MP)� motilidade não-progressiva(MNP)� imóveis

motilidadetotal

ASPECTOS MICROSCÓPICOS

MOTILIDADE

� valores de referência� motilidade total (MP + MNP) >40%� motilidade progressiva (MP) > 32%

� ASTENOZOOSPERMIA


Concentração de espermatozóides

� OMS, 1999 � hemocitômetro� diluição com solução diluente ou água

(1:2, 5, 10, 20, 50, 100 )� contagem: câmara de Neubauer improved� aumento de 400x� contagem: 25, 10 ou 5 quadrantes



� OMS, 2010 � hemocitômetro� diluição com solução diluente ou água

(1:2, 5, 20 )� contagem: câmara de Neubauer improved

� quadrantes 4, 5 e 6( central e laterais)

� aumento de 400x

Câmara de Neubauer improved

CONCENTRAÇÃO� Azoospermia: por definição, ocorre quando

nenhum espermatozóide é encontrado no

sedimento, obtido após centrifugação do

fluido seminal, em pelo menos duas

amostras. (15minutos à 3000g- OMS,1999)



� CRIPTOZOOSPERMIA OU AZOOPSERMIA

� nenhum spm.observado entre lam/lamínula

� análise do sedimento dependente da:

� tempo e velocidade de centrifugação (3000g/15minutos não é adequada)

� como o sedimento é analisado (10 minutos por lâmina)

� motilidade pode ser prejudicada


CONCENTRAÇÃO DE ESPERMATOZÓIDES

� fatores de correção para câmara

� valor de referência: ≥ 15,0 x106 spm./mL

� valor abaixo do normal: OLIGOZOOSPERMIA


CONTAGEM DE ESPERMATOZÓIDES

� contagem total de espermatozóides =

concentração x volume da amostra

� valor de referência: ≥ 39,0 x 106 spm/ ejaculado


Concentração de células redondas

� câmara Neubauer improved

� diluição com solução fisiológica (1:10 )

� valor de referência:< 5,0x106 células redondas

por mL


CONCENTRAÇÃO DE NEUTRÓFILOS

� diferenciação dos leucócitos: infecção no trato genital

� método histoquímico: benzidina-cianosina

� método imunocitoquímico: Ac monoclonal

� neutrófilos >1,0x106/ mL:LEUCOCITOSPERMIA


VITALIDADE� rotineiramente em todas as amostras

� especialmente quando % spm. imóveis >40%

� coloração vital: eosina-nigrosina ou eosina 5% ou teste hiposmótico

� células não coradas: vivas

� células coradas rosa: mortas

� valor de referência: ≥ 58% de spm. vivos

� valores abaixo do normal: NECROZOOSPERMIA


MORFOLOGIA

� difícil sem coloração

� métodos de coloração: Papanicolaou modificado,

Shorr, Diff-Quick

� spm. normal: critério estrito (Kruger,1986)

OMS (2010)

CONCENTRAÇÃO DE ESPERMATOZÓIDES < 1x10 6 /mL

2 lâminas para eosina

Centrifugar todo volume seminal6000g - 10 minutos

2 lâminas para morfologia

Sempre realizar 2 lâminas para totalizar 100 célula s

MORFOLOGIA

Classificação pelo critério estrito

� Forma normal� oval� segmento cefálico: 5-6µm comprimento,

2,5-3,5 µm largura� acrossomo: 40-70% do segmento cefálico� peça intermediária normal� cauda: 45 µm comprimento


MORFOLOGIA

� Defeitos de segmento cefálico:� macrocéfalo� microcéfalo� fusiforme� piriforme� bicéfalo� acéfalo� amorfo


MORFOLOGIA

� Defeitos de peça intermediária:� espessa / fina� gota citoplasmática� quebrada

� Defeitos de cauda:� curta� enrolada� múltipla


MORFOLOGIA

� Diferença entre Critério Estrito e OMS:

� todas as formas “borderline” são consideradas anormais pelo critério estrito

� Valores de referência:� critério estrito: ≥14% ovais normais� OMS: ≥30% ovais normais� valores abaixo normal: TERATOZOOSPERMIA

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