DETERMINACIN DE SALMONELLA El procedimiento para detectar
Salmonella en los alimentos consiste basicamente en cinco
pasos:
1.- Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es
enriquecida en un medio nutritivo noselectivo, que permite
restaurar las clulas de Salmonella daadas a una condicin fisiolgica
estable. 2.- Enriquecimiento selectivo, empleado con el propsito de
incrementar las poblaciones de Salmonella e inhibir otros
organismos presentes en la muestra. 3.- Seleccin en medios slidos,
en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el
crecimiento de otros gneros diferentes a Salmonella y permite el
reconocimiento visual de colonias sospechosas. 4.- Identificacin
bioqumica, este paso permite la identificacin gnerica de los
cultivos de Salmonella y la eliminacin de cultivos sospechosos
falsos. 5.- Serotipificacin, es una tcnica serolgica que permite la
identificacin especfica de un cultivo.
(Salmonella) MATERIAL:
Agar para Salmonella y Shigella (SS) Horno para esterilizar
Autoclave con termmetro Balanza granataria Licuadora Mechero
Bunsen
PREPARACIN:
1.- Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada
estril y calentar a ebullicin hasta disolucin completa. Ajustar el
pH. No esterilizar en autoclave. 2.- Enfriar a 50 C y distribuir en
cajas de petri estriles en condiciones aspticas. El aspecto del
medio fundido es claro y de color rosado. (Nota: Los siguientes
mtodos se basan en el anlisis de 25g de la muestra analtica,
carnes)
PROCEDIMIENTO:
1.-Una vez ya desinfectado y esterilizado el lugar donde se va a
trabajar, pesar 25 g de la muestra en un vaso estril de licuadora y
adicionar 225 ml del medio de preenrequecimiento estril y licuar
durante un minuto. 2.- Despus se ajusta el pH. Luego se incuban.
3.- Se deja reposar por 60 minutos. 4.- Transferir 1ml a un tubo
con 10 ml de caldo selenito cisteina. 5.- Incubar 24 hrs a 35 C.
6.- Estriar en Agar XLD (agar xilosa lisina desoxicolato) y en SS
(Agar Salmonella). Incubar 24 hrs a 35 C. 7.- Examinar las placas
para detectar la presencia de Salmonella . Agar XLD: colonias rosas
o rojas que pueden ser transparentes con o sin centro negro. En
algunos casos las colonias pueden aparecer completamente negras.
Agar SS: colonias translcidas, ocasionalmente opacas. Algunas
colonias dan centro negro. Las colonias fermentadoras de la lactosa
son rojas.
8.- Seleccionar al menos dos colonias tpicas de cada medio
selectivo, que se encuentren bien aisladas. Tocar levemente el
centro de cada colonia e inocular dos tubos, uno con agar triple
azcar hierro (TSI) y otro con agar hierro lisina (LIA), por estra
en la superficie inclinada y por puncin en el fondo.
9.- Observar el crecimiento en los tubos y considerar
presuntivamente positivas para Salmonella las colonias que den las
siguientes reacciones: Agar TSI, en el fondo del tubo se observa
vire del indicador debido a la fermentacin de la glucosa; en la
superficie del medio se observa un color rojo ms intenso que el
medio original debido a la no fermentacin de la lactosa ni de la
sacarosa. En la mayora de los casos se observa coloracin negra a lo
largo de la puncin debido a la produccin de cido sulfihdrico. Agar
LIA, se observa intensificacin del color prpura en todo el tubo por
la descarboxilacin de la lisina. Considerar negativos aquellos
cultivos que produzcan claramente color amarillo en el fondo del
agar. La mayora de las cepas de Salmonella producen cido
sulfihdrico en este medio con ennegrecimiento a lo largo de la
puncin. 10.- Retener todos los cultivos que muestren las reacciones
caractersticas de Salmonella en los medios TSI y LIA para las
pruebas adicionales. 11.- Los cultivos con TSI que no parecen de
Salmonella pero que presentan reacciones en LIA tpicos, deben
trabajarse como cultivos presuntivos positivos, ya que en estos
casos, el medio LIA permitir detectar S. arizonae y cepas atpicas
de Salmonella que utilicen lactosa o sacarosa. Descartar solamente
los cultivos que muestren reacciones atpicas en ambos medios.
Bibliografa:
http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/114ssa14.html
http://catarina.udlap.mx/u_dl_a/tales/documentos/lcf/morales_a_gm/capitulo10.pdf
