630 Br&ves communica t ions - Kurze Mitteiiungen EXPERIENTIA X 1 X/] 2

D i e d u r c h a n i m a l i s c h e M u c o p r o t e i n e v e r u r s a c h t e W a c h s t u m s h e m m u n ~

In den le tz ten Jah ren wurde ein umfangre iches Tat- sachenmater ia l fiber die biologische Bedeu tung der Muco- pro te ine im menschl ichen Organismus gesammel t , Es ergibt sich, dass eine an t i enzymat i sche Wi rkung eine Haupt ro l le zu spielen scheint . Von einigen Auto ren 1,* wurde die Tryps in inh ib i t ion mi t Hilfe des Ovomucoids best~itigt, z .B. aus dem Eiereiweiss der En te , oder mi t Mucopro te inf rak t ionen C-2 und C-3 nach GOA a. Vom klinisehen S t a n d p u n k t aus ist wiehtig, dass die soge- n a n n t e Mucoprotease des Magensaf tes die Peps inak t iv i t / i t sehr s ta rk h e m m t , 6fters bis zum Nul twer t a, Auch die K a t a l a s e h e m m u n g wurde nachgewiesen: ABRIGNANI und MUTOLO s' 6 fanden, dass das Ovomucoid nach dem Kochen - oder das F i l t r a t der EiweissI6sung yon Eiern nach d e m Erh i t zen - auf die Ka ta lase s t a rk h e m m e n d wirkt , ob- wohl das im ~Vasser gel6ste reine Ovomuco id vo l l kommen inakt iv erscheint . Auch die hepar inoide , an t ikoagu la t ive \Virkung der Mucoprote ine ~ und der Hi rngangl ios ide s in vitro kann wahrscheinl ich d u t c h einen Einf iuss auf Blut - enzyme erkl/irt werden. Dasselbe scheint fiir (tie Beein- f lussung der Leukocy tenmig ra t ion zu gel ten s, i0

mm

~oo F

8O 7O

B0 50

'°tl p 11 1 1 2 50 1011 111

2 2 2 ~ 2 2 2 2 2 2 10 10 10 10 10 50 50 50 100

Ill mill 100 90 80 70 6O 50 40 30 20 10 0

100 10 10 - - 10 10 10 10 10 l0 10

Liingen der keimenden Samen yon Lupinus Mbus bei Kontroll- gruppen (leere S~iulen) und bei Testen (schraffiert). Obere Quer- l inie-nach dem Versuch, untere = vor dem Versuch. Abszissen- Standarddeviationswerte. Unter den S~ulen steht die Nummer des Pr~iparats (entspricht der Bezeichnung in der Tabelle), und die benutzte Konzentration in rag%. Bei den mit * bezeichneten Ver- suchen betreffen Kontrolle wie Test je 16 Samen, in allen tibrigen

Versuchen je 8 Samen.

Die ge fundenen Ta t s achen lassen an eine W i r k u n g der Mucopro te ine aui das G e s a m t w a c h s t u m eines t ier ischen sowie pf lanzl ichen Organ i smus denken . "vVir pr i i f ten des- ha lb die ~,Virkung versch iedener animal ischer Mucopro- te ine auf die K e i mu n g der Sumen von Lup inus albus L., H a d m e r s l e b e n n , sowie auch auf W a c h s t u m und Meta- morphose der K a u l q u a p p e n yon Rana lempo~'aria.

Als Test wurde b e n u t z t : (a) Mucopro te in des menschl i - chen P lasmas , isoliert nach WEIMER et al. Z2 in Konzen- t r a t i onen 10, 50 und 100 m g % in 0 ,9prozent iger Koch- salzl6sung, das vor d e m Be n u t z e n speziell d u r c h kom- p le t t e Dialyse gegen dest i l l ier tes \Vasser gere inigt wurde ; (b) Mucopro te in des mensch l i chcn P lasmas , isoliert nach derse lben Methode und in dense lben K o n z e n t r a t i o n e n , aber im urspr i ingl iehen Zus taud ; (c) Mucopro te in des R inde rp l a smas 13 (isoliert nach derse lben Methode) ; (d) Mucopro te in des mensch l ichen Plasmas , das kurz vorher zum Sieden g e b r a c h t wurde (vgl. die obenerw/ ihn ten Be- funde fiber die An t ika t a l a sewi rkung des Ovomuco ids nach der Ande rung der molekularen Konf igura t ion durch das E rh i t zen ) ; (e) Mucoprote ine des menseh l i chen H a r n s (isoliert nach ANDERSON und MACLAGAN)14; (;f) zur Kon- trolle wurde auch die mucopro te in - und mucopolysa- char idhal t ige , die sogenann te A s t r u p - F r a k t i o n des Harns beniitzt~S,16; (g) m i t Rf icks icht auf die Angaben fiber die w a e h s t u m s h e m m e n d e V¢irkung des Serums~7,zs, w a r d e n auch u n b e h a n d e l t c Sera yon K i n d e r n in l p rozen t ige r Shive-LSsung ve rwende t .

Die "Wachs tumshemmung der ke imenden S a m e n von Lup inus albus wird nach Io lgendem Ver fah ren nachge- wiesen: Die Samen dcr wcissen Lupine werden 2 h mi t f l iessendem Le i tungswasse r gewaschen, in Pe t r i scha len mi t in Le i tungswasse r (24°C, chlorfrei) ange [euch te t en F i l t e rpap ie rs t i i cken aufgelegt und 24 h in Dunke lhe i t im T h e r m o s t a t bei 24°C aufbewahr t . Dann werden die Samen in Pe t r i scha len m i t auf 24 ° C t e m p e r i e r t e m Le i tungswasse r ausgewaschen. N i c h t k e i me n d e S a m e n wurden jeweils aus- gesehieden. K e i me n d e S a m e n werden in den Schalen noch wei tere 24 h belassen und nachhe r werden sie in die ~)ffnungen der w)l ls t~ndig mi t \Vasser geffill ten Reagenz- gl~ser yon 10 ml I n h a l t i iber t ragen. Naeh 24 h bei 24°C

I H. LINEWEAVER and C. V. MURAV, J. biol. Chem. 171, 565 (L947). 2 p. K. VUAYARAGHAVAN und R. B. S. NARASINGA, Indian J. reed.

ires. 4e, ":~71~ (1954}. a j . GoA, Acta chem. seand. 1.t, 1790 (1960}. 4 j. SCHMXD, Schweiz. reed. Wschr. 8l, 770 (1951).

F. ABRZGNA~Z und V. MUTOLO, Exper. 10, 470 (1954). V. MUTOLO und F. A~RmNANI, Boll. Soc. ital. Biol, sperim. 30,379 ( ! 954).

7 E. A. GREENSPAN, Science 114, 395 (1951), 8 K. KORSAN-BERGSTEN and L. SVENNERHOLM, Acta chem. scand.

9, 1046 (1955). 9 R. MEIER, B. SCHAR und F, KRADOLFER, Exper. 13, 180 (1955).

10 M. LEDVINA, Physiol. Bohemoslov., im Druck. n Wit danken der Forschungsstclle ftir Getreidezfichtung in Had-

mersleben (Deutschland) ffir Lupinus albus Sorte Neutra, arts der Ernte 1961.

12 H. E. WEIMER, J. ~V. MEre. und R. J. WINZLER J* biol. Chem. ZSS, 56l (1950).

la Wir m6chten Herrn Ing. V. CHMELAf~ (Med. Fak., Hradec Kr~lov~) ffir die liebenswfirdige (~beflassung yon Rindermucoprotein besterLs danken.

1t A. J. ANDERSON und N. F. MACLAC, AN, Biochem. J. 59, 638 (1955). is, p. ASTRUP, Acta pharmacol, toxicol. 3, 165 (1947). 15 A. J. BOLLET, M. W. SERAYDARIAN und W. F. S1~PsoN, J. dim

Invest. 36, 13~8 (1957). lr F. R6NmKE, Dan. reed. Bull. 6, t98 (1959). za j. ~i2KOVA-PisAfiOVICOV.&, M. ULRVCHOV.k und L. RrZ21~KA,

~eskosl. Pediatrie 14, 387 (1961).

15. XII. 1963 631 Brevi eomunieazioni - Brief Repor ts

H e m m u n g des Waehst t ln is der Samen yon Lupinus albus 1.. (HadmerMebener Stamn~)

No. Prliparat Konzen- Zahl der tration Salnen

in dea Testserien

Zahl der l )urchschni t t - Signif ikanz des Unterschiedes zwischen denl Te~;t~;crien l ieher Zuwaehs : tZuwachs des Keiines bei der l~,ontrolle lind

i n %~ ~ s b e i n l Versuch: t -Wer t ( i n K l a l i i i l l e r n : I h l t e r s o h i e d z w i s e h e n d e n S t a i i d a r d -

a b w e i c h u n g e n Fli.0~)

Menseh 1 Mucoprotein d e s B l u t p l a s m a s l U m g % 16 2 9 1 , 9 7 ± P.i,711 ll,7`2; P~--o,iID (I,10) ) i (hath \VEL~IER; NHi*-frei ) 50 nlg% 8 1 75,18]L '25,1i5 2,:l J; P ( 0 lff~ (I,53)

100 rag% 8 I 7'2,1t11 ~ '29,47 '2,6a; P%o,tt5 (2,661 '2 Mueoprotein des l t l u tp l a smas Ill Illg~.~ 5{~ 7 NG,N;] ~ He,Ill `2,'21 ; P<~O,t}5 (I,ON)

(naeh WEIMEn) 5tj n lg% ~24 :l Io~,19 ~ 17,7l 11,51; P]>o,{I5 (1,o3) Io0 rag% 16 '2 96,1)l ! '27,11 0,.16; 1'~>o,o5 (I,53) lo ing% 16 '2 ~.~1,71 ± I;t,t;8 b0,74; 1~,O,115 (2,53) gekoeht

,3 Serum des Kindes ! % 16 2 85,56 t "{0,5:1 1,33; P~It,05 (I,51) 4 Mucoprotein des Harns lo nig% 16 '2 50,tit; + I I,NO N,.lo; P({t ,OIII (1,'2;I) 5 Harnf rak t ion l laeh ASTRUP Ill IIIg{7o 16 7 91"1,6t1-~ '20,19 ti,'2:1; P ) O , I i 5 (I,39)

R ind 6 M u c o p r o t e i n d e s B l u t p l a s n m s I l i m g % '24 1{ 90 ,17] `27,9S I)19; P/~>O,lhrj (l,.l:l)

a Durchschnittlicher Zuwachs bei den Kontrollen 100%, b Nur in diesem Fall besteht zwischen den Standardabweichungen des Zuwach~es .% (Kontrolle) m,d ~2 ('l'e~t) ein siguifikanter l'ntersehied (F = '2,53 2> kritischer Wert 1;~_ 0,05 = '2,13). Ein modifiziertes Verfahren zur Errechnung des t-Wertes wurde hier ben(itzt:

- - - 1 / "~ "~ t = X l Xo ) v 1 t l [ P l ) I - V t t ,~p. , ) w e "~d := S12 -~- "~ V 1 , Vo , Vl : I l l I , i ' 2 = II 2 I . Sd v1 + V2 , p n l 112 i n I + n,~

s ind die S a m e n zum T e s t e n berei t . Die IAinge der Ke ime vo r d e m T e s t e n b e t r u g in e inze lnen Serien d u r c h s c h n i t t - t ich 28,2-54,0 m m ; die Durehschni t t s l~ tngen de r Ke ime in de r Kon t ro l l r e ihe u n d in de r Versuchs re ihe w a r e n jedoch a m A n f a n g des Versuchs i m m e r genau gleich lang. Das V~'asser in den Reagenzgl / i sern wurde d u r c h SHIVES fliis- s igen N~ihrboden e r se t z t (10,4 ml O,5M Ca(NO3) 2, 30 ml O,5M MgSO 4 und 36 ml 0,5M KH2PO 4 in 1 l redest i l - t i e r t em Wasser ) . Die in dieser LOsung be lassenen S a m e n d i e n t e n als Kont ro l le , wt ihrend zur SmvE-LOsung in den t ibr igen Reagenzgl / i se rn die gepr t i f t en S u b s t a n z e n beige- fi igt wurden , u n d zwar in so lcher Menge, dass ihre endgti l - t ige K o n z e n t r a t i o n die in de r Tabe l l e u n d F igu r angegebe- n e n Vqerte er re iehte . Die Zahl der Reagenzgl~tser bei den K o n t r o l l e n war g runds i i t z l i eh gleich der Zah l der Reagenz- gl~iser m i t den Tes t l6sungen . J ede Ver suchs re ihe en th i e l t 8 K o n t r o l l e n u n d 8 Reagenzgl~iser m i t d e r T e s t s u b s t a n z (bei 2 Ser ien a u s n a h m s w e i s e je 16 S a m e n - s iehe Figur) . Mi t R t i cks ich t au f die ung le iche L~inge de r Ke ime vo r dem A n f a n g des Ver suchs (vgl. Figur) war es n6t ig, die Resul- t a t e so zu modif iz ieren, dass die Durchschni t t s l 'Xnge der K e i m e in jeder e inze lnen K o n t r o l l r e i h e (in 8 Reagenz- glXsern) zu E n d e des Versuchs fiir 100% geha l t en wurde ; d a n a c h w u r d e n die ind iv idue l l en Ergebn isse in de r Kon t ro l l - u n d Versuehs re ihe auf G r u n d dieses Wer t e s u m g e r e c h n e t . S igni f ikanz de r U n t e r s ch i ede zwi- sehen d e m Zuwachsen de r Ke ime bei e iner Kon- t rol le u n d denen des Versuchs w u r d e n m i t Hilfe des t -Tes ts e r rechne t , i n de r F i g u r wird j edoch jede em- zelne Tes tser ie a b g e t r e n n t in a b s o l u t e n A n g a b e n in m m eingere ih t .

Aus de r Tabel le geh t he rvor , dass das gere in ig te Mucopro t e in des m e n s c h l i c h e n B l u t p l a s m a s die Kei- m u n g der S a m e n schon in der K o n z e n t r a t i o n yon 10 m g % um - - 5 , 0 3 % h e m m t . Die H e m m u n g ist s t a t i s t i s eh n i c h t ges icher t , abe r in h 6 h e r e n b e n u t z - t en M u c o p r o t e i n k o n z e n t r a t i o n e n is t die H e m m u n g gr6sser ( - -24 ,82% u n d - 2 7 , 7 0 % ) u n d s t a t i s t i s ch s igni f ikant .

1)as m i t Hilfe de r Or ig ina lvor sch r i f t w m WEIMER et al. ra gewonnene Mucopro t e in des mensch l i chen P l a s m a s h c m m t in der K o n z e n t r a t i o n 10 mg~/o (tie K e i m u n g de r S a m e n s t a t i s t i s ch b e d e u t s a m u m 13,1°/o . Bei h 6 h e r e n M u c o p r o t e i n k o n z e n t r a t i o n e n wurde j edoch ke ine H e m - m u n g m e h r tes tges te l l t . E ine Erk l i i rung daf t i r k a n n in R e s t e n yon A m m o n i u m s u l f a t , die in den P r t t pa r a t en n a e h der I so la t ion b le iben , gesehen werden. A m m o n i u m - sulfat , se lbs t in h 6 h e r e n K o n z e n t r a t i o n e n , v e r u r s a e h t da- gegen eine V~ 'aehs tumsbesch teun igung de r Keime. In e inem wei te ren B l i n d v e r s u e h mi t drei v e r s c h i e d e n e n Kon- z e n t r a t i o n e n yon A m m o n i u m s u l f a t , (lie d e m G e h a l t an A m m o n i a m s u l f a t in den 10-, 50- und 100-mgprozent igen Mucopro t e in l6 sungen e n t s p r e c h e n , w u r d e n folgende W e r t e der W a c h s t u m s i n h i b i t i o n b e s t i m m t : + 15,8; +27,1 und 20 ,4% (der Zuwaehs bei e iner Kon t ro l l g ruppe ohne Am- m o n i u m s u l f a t war gleich 100%) Die h6chs t e A k t i v a t i o n d u t c h A m m o n i u m s u l f a t in der 50-mg-prozen t igen Muco- p ro t e in l6 sung k o n n t e also die H e m m u n g s w i r k u n g de r Mucop ro t e ine vol l s t i ind ig mask ie ren , l )er A k t i v a t i o n s - ef fekt des s t i ck s to f fha l t i gen Salzes in der 10mgprozen- t igen M u c o p r o t e i n l 6 s u n g war j edoch noch n i e h t wesen t - lich. l )as wird d u r c h die T a t s a e h e un te r s t f i t z t , dass die H e m m u n g s w i r k u n g des Mueopro te ins des R i n d e r b l u t - p l a smas , das auch nach WEIMER isoliert , j edoch speziell ge re in ig t und yon NH4+-Ionen wfl ls t / indig be f re i t wurde , ~thnliche W e r t e wie bei der obenerw~ihnten Mucopro te in - 16sung aus H u m a n b l u t aufweis.

E ine abso lu t deu t l i che H e m m u n g (bis zu de r H~ilfte des Ausgangswer tes ) k o n n t e m a n bei t t a r n m u c o p r o t e i n fests te l len. Dagenen e rgab die m u e o p r o t e i n - und muco- l~ ) lysacchar idha l t ige AsTRUPS-Harnfrakt ion , die mi t Hilfe e iner Pr / i z ip i t a t ion mi t B e n z i d i n h y d r o c h l o r i d iso- l iert worden war ~6, kein s t a t i s t i s ch ges icher tes Ergebnis .

Das R e s u l t a t m i t e inem K i n d e r s e r u m best~it igte n u r die bere i t s zur Verf / igung s t e h e n d e n L i t e r a t u r a n g a b e n ~, 1~.

Es zeigte sich, class m a n die Ergebn i s se d u t c h wei tere Versuehe s t i i t zen muss , und zwar d u r e h T e s t e n de r Hem- m u n g des \ V a c h s t u m s und de r M e t a m o r p h o s e bei Kaul-

632 Br6ves communications - Kurze Mitteilungen EXPERIENTIA XIX/12

q u a p p e n yon Rana temporaria ~6. Die Versuche , de ren E r - gebnisse a n a n d e r e r Stelle ve r6 f fen t l i ch t werden , ze ig ten eine D u r c h s c h n i t t s h e m m u n g de r Vv 'achs tumsgeschwindig- ke i t de r Tiere be im p l a s m a t i s c h e n M u c o p r o t e i n yon - -61 ,7%, be im Se rum yon - - 5 5 , 3 % ; sic i s t in b e i d e n F~illen deu t l i ch s igni f ikant .

Die Ergebn isse be ider Vorg/ inge bes t / i t igen also die- selbe Ta t sache , dass Mucopro te ine an ima l i s che r H e r k u n f t das W a c h s t u m von biologischen I n d i v i d u e n h e m m e n k6nnen .

Summary . A n t i - g r o w t h a c t i v i t y i)f a n i m a l m u c o p r o - t e ins o n g e r m i n a t i n g seeds of Lup inus albus was t e s t e d ; t h e i n h i b i t i o n w i t h p l a s m a m u c o p r o t e i n was s t a t i s t i c a l l y s igni f icant . T h e i n h i b i t i o n w i t h u r ine m u c o p r o t e i n ac- co rd ing t o ANDERSON was t h e m o s t effective.

M. LEDVINA and J. VELTRUSK~

Zentrallaboratorium des Krankenhauses O,~nz in Gottwaldov (Tschechoslovakei), 29. Oktober 1962.

Extrahepatic 7~-Hydroxylation of Dehydroepiandrosterone

In a n u m b e r of p a p e r s dea l ing w i t h t he in vitro ca t a - bo l i sm of s te ro id h o r m o n e s , t h e t i ssue loca l iza t ion of t h e me tabo l i c a c t i v i t y ha s b e e n s t ud i ed p r e d o m i n a n t l y in t he l iver a n d t he k idneys . Severa l au tho r s , however , h a v e d r a w n the i r a t t e n t i o n also to o t h e r o rgans : BROWN et al. t i nves t i ga t ed t he in vitro m e t a b o l i s m of cor t isol in va r ious r a t organs and found the m a t a b o l i c a c t i v i t y to be p re sen t no t on ly in the ad rena l s a n d t he l iver, b u t also in t he p i t u i t a ry , t h e g a s t r o i n t e s t i n a l t r ac t , t h e k idneys , a n d t h e spleen. The e x t r a h e p a t i c c a t a b o l i s m of s te ro id h o r m o n e s invo lv ing t h e ac t ion of dehyd r ogenas e s and A4-hydro - genases is dea l t w i t h in severa l s tud ies wh ich are d e v o t e d a lmos t exclus ive ly to cor t icoids 2-4, occas ionMly also to p roges te rone 5. I n a d d i t i o n to endocr ine organs , t he e x t r a - hepa t i c c a t a b o l i s m was fol lowed in t he lungs, t he k idneys , a n d t he blood. The e x t r a h e p a t i c e n z y m a t i c h y d r o x y l a t i o n of s te ro ids in vitro has n o t ye t been s u b j e c t e d to inves t i - ga t ion .

Studies on t he in vitro m e t a b o l i s m of 3fl-hydroxy-~J 5- andros ten -17-one ( d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e - DHA) 6-9 h a v e as ye t dea l t w i th me tabo l i c a c t i v i t y of t he l iver only. Our prev ious e x p e r i m e n t s conce rned w i th t he p r o b l e m of the o rgan specif ic i ty of the l iver in t h e e n z y m a t i c h y d r o x y t a t i o n of d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e in vitro re- vealed some degree of t h e 7 ~ - h y d r o x y l a t i n g a c t i v i t y to be p re sen t also in severa l o t h e r organs . I t is for t h i s r e a s o n t h a t we focused our a t t e n t i o n o n t h e e x t r a h e p a t i c t r a n s - f o rma t ion of D H A in vitro.

Female r a t s of t he W i s t a r s t ra in , we igh ing 100 to 170 g, were used for e x p e r i m e n t a t i o n . 2 g of f resh t i ssue was homogenized in 25 ml of a K r e b s - R i n g e r p h o s p h a t e buf fe r solut ion. The h o m o g e n a t e w i t h glucose a d d e d (0.05%) was s u b s e q u e n t l y t r an s f e r r ed to a so lu t ion of 2 m g of d e h y d r o e p i a n d r o s t e r o n e in 1 ml of t r i e t hy l ene glycol. T h e mix tu re s were i n c u b a t e d a t 38°C in a n oxygen a t m o s p h e r e over a per iod of 1 h. 7 ~ - H y d r o x y l a t i o n was also inves t i - ga ted in t r is-buffer , p H 7.6, t he yields be ing s o m e w h a t lower. E x t r a c t i o n of the i n c u b a t i o n m i x t u r e w i t h e t h y l ace ta te , pur i f i ca t ion of t he e x t r a c t us ing c h r o m a t o g r a p h y on a t h i n layer of a lumina , p a p e r p a r t i t i o n c h r o m a t o - g r a p h y in t he B u s h B5 sys tem, a n d e v a l u a t i o n of t h e c h r o m a t o g r a m s a f t e r de t ec t ion w i t h t he a n t i m o n y t r i - chlor ide r eagen t were all pe r fo rmed as desc r ibed else- where ~0

The lung, the liver, t he kidney, t he spleen, t he hea r t , ¢he blood, t he muscle, and t he adrenal , respec t ive ly , were t es ted for t he i r h y d r o x y l a t i n g ac t iv i ty . The resu l t s were r e p e a t e d l y pos i t ive w i t h all o rgans e x a m i n e d e x c e p t for t h e adrenals , where a def in i te h y d r o x y l a t i n g a c t i v i t y was found on ly in one case. W h e n c o m p a r i n g t h e 7c~-hydroxyl- s t i n g ac t iv i t ies , cons iderable q u a n t i t a t i v e di f ferences be- tween ind iv idua l organs, as well as v a r y i n g resu l t s f rom

i n d i v i d u a l expe r imen t s , were found, p e r h a p s owing to a lack of c o m p l e t e l y a d e q u a t e h o m o g e n e i t y of t he biological m a t e r i a l used in t he p r e sen t s tudy . The resu l t s are s h o w n in Tab le I.

To o b t a i n more t h o r o u g h i n f o r m a t i o n r e g a r d i n g t h e p rope r t i e s of t he e x t r a h e p a t i c 7c~-hydroxylat ing sys t em, t he resu l t s o b t a i n e d for t he lungs were c o m p a r e d w i t h those for t h e liver. Because of t he poss ib i l i ty of a species d e p e n d e n c e of t h e a c t i v i t y of 7c~-hydroxylase 11, 7~-hydro- x y l a t i o n of D H A was i n v e s t i g a t e d also in the lungs a n d t he l ivers of r a b b i t s a n d calves, u s ing iden t i ca l me thods . D u r i n g t he i n c u b a t i o n , 7 x - h y d r o x y - d e h y d r o e p i a n d r o s t e r - one (Te -OH-DHA) was p r o d u c e d in all cases; yie lds f rom calf a n d r a t t i ssues were closely paral le l , whe reas those f rom r a b b i t t i ssues were r educed to a b o u t one h a l l

~Vhen us ing t h i n - l a y e r c h r o m a t o g r a p h y on a l u m i n a a n d p a p e r p a r t i t i o n c h r o m a t o g r a p h y , t he c h r o m a t o g r a p h i c p rope r t i e s of t he s u b s t a n c e o b t a i n e d b y i n c u b a t i n g 300 ml

"faMe I. Organ dependence of the in vitro 7~-hydroxylation of DHA in female rats. 2 g of tissue were incubated with 2 mg of DHA

Tissue Range of yields 7~-OH-DttA/1 mg of DHA

[zg

Liver 4 .0 - 30.0 Lung 2 .0- 34.0 Kidney 3 .0 - 78.0 Spleen 5.0 -150.0 Heart 2 ,5- 16.0 Blood 2.0 - 3.5 Muscle 4 .5 - 13.5 Adrenal a 0 .0 - 13.0

a 100 mg of adrenal tissue were incubated with 0.5 mg of DHA.

' J. H. U. BRow~, A. ANSO~, and J. JAco~s, Amer. J. Physiol. 190, 259 (1957). c. DE CouRcY, J. biol. Chem. 229, 935 (1957).

a T. F. DOUGHERTY, D. L. BERLXNER, and M. L. BERLfNER, Meta- bolism I0, 966 (1961).

a E. L. RONGONE, Arch. Biochcm. Biophys. 98, 292 (1962). '~ W. G. WIEST, J. biol. Chem. 238, 94 (1963). 6 j , j . SCHNEIDER and H. L. MasoN, J. biol. Chem. 172, 771 (1948). 7 F. U~GAR, A. M. MILLER, and R. I. DORFMAN, J. biol. Chem. 206,

597 (1954). s E. J. KLEMPIEr% K. D. VOI~T, and J. ThrUM, Acta endocrinol. 36,

498 (1961). 9 A. COL£S, Biochem. J. 82, 390 (1962}. I0 L. STkRKA and J. K/~TTOVk, Bioehim. biophys. Aeta 56, 76 (1962). ll J, J, SCHNEIDER, Arch. Biochem. Biophys. 98, 249 (1960).