ENANTIOMERTISZTA KIRÁLIS VEGYÜLETEK ELŐÁLLÍTÁSA …

BUDAPESTI MŰSZAKI ÉS GAZDASÁGTUDOMÁNYI EGYETEM

VEGYÉSZMÉRNÖKI ÉS BIOMÉRNÖKI KAR

OLÁH GYÖRGY DOKTORI ISKOLA

ENANTIOMERTISZTA KIRÁLIS VEGYÜLETEK ELŐÁLLÍTÁSA

FOLYTONOS ÜZEMŰ KEMOENZIMATIKUS RENDSZEREKKEL

Tézisfüzet

Szerző: Oláh Márk

Témavezető: Dr. Hornyánszky Gábor

Konzulens: Prof. Dr. Poppe László

Szerves Kémia és Technológia Tanszék

2018

2 ENANTIOMERTISZTA KIRÁLIS VEGYÜLETEK ELŐÁLLÍTÁSA


1. Bevezetés

A 21. század technológiai újításai teljesen új ipari szegmenseket hoztak létre, amelyek a

mikroprocesszorokra, fejlett telekommunikációra, biotechnológiára vagy éppen a nanotechnológiára

alapulnak. Ezek a forradalmi megoldások számos lehetőséget nyújtanak, hogy az eddig egymástól távol

álló tudományos területek kapcsolódhassanak össze és hozzanak létre eddig nem alkalmazott

megoldásokat. Ennek köszönhetően a szerves kémia is folyamatos fejlődés alatt van az olyan vegyületek

esetén is, ahol az előállított termék kiralitása kitüntetett fontossággal bír. Ez jól látszik abból is, hogy a

mezőgazdaság, az élelmiszeripar és a gyógyszeripar is optikailag minél tisztább vegyületek előállítására

törekszik, ami gazdasági, fiziológiai és környezetvédelmi szempontból is kiemelt fontosságú. Hogy az új

elvárásoknak meg tudjunk felelni számos kémiai módszer áll rendelkezésünkre úgy, mint az aszimmetrikus

szintézis technikák, rezolválások és a frakcionált kristályosítások. [1] Fontos megjegyezni, hogy az ilyen

reakciókban alkalmazott legtöbb sztereoszelektív kémiai katalizátor párját megtaláljuk a szintetikusan

alkalmazható enzimek között is, például oxidoreduktázok, transzferázok, hidrolázok vagy a liázok

formájában. [2] A biotechnológiai módszerek, az újfajta enzimaktivitások és az új alkalmazási lehetőségek

nagymértékű fejlődésével a biokatalízis szintetikus szerves kémiai alkalmazása is jelentősen kiszélesedett.

[3] Ezen reakciók folyamatos üzemű implementációjával egy könnyen szabályozható (hőmérséklet,

térfogatáram, reakcióidő, katalizátortöltet) és nagy kihozatalú technológiát kaphatunk végeredményül.

PhD disszertációm királis vegyületek enantiomertiszta formában történő előállítását tűzte ki célul

kemoenzimatikus katalizátorokat alkalmazva folyamatos, áramlásos üzemű rendszerekben. E fő cél

megvalósítása négy egységből tevődik össze:

1. növelni a primer aminok lipáz-katalizált kinetikus rezolválásának produktivitását úgy, hogy

javítjuk az alkalmazott acilezőszerek aktivitását és szelektivitását,

2. előállítani egy magas aktivitású és stabilitású rögzített enzimkészítményt a Candida antarctica B

lipázból, hogy kinetikus rezolválásokat szakaszos és folyamatos üzemű bioreaktorokban

alkalmazhassuk rögzített formában,

3. előállítani egy hordozóra rögzített, elemi palládium tartalmú katalizátort, ami folyamatos üzemben

alkalmazható primer aminok hatékony racemizálására,

4. kialakítani egy új technológiát az enzimkatalizált kinetikus rezolválás és a palládium alapú

racemizáció megfelelő kombinációjával primer aminok folyamatos üzemű dinamikus

rezolválásának megvalósítására.

2. Irodalmi áttekintés

Az enantiomertiszta aminok és származékaik fontos építőelemei a gyógyszereknek és más ipari

termékeknek. Ezen felül a királis amin-származékok enantiomertiszta formában történő előállítása során a

sztereocentrum kialakításához királis katalizátorokat vagy enzimeket, túlnyomó részben lipázokat

alkalmaznak. [4] A katalitikus folyamatoknak köszönhetően nem szükséges a segédanyagokat nagy

feleslegben alkalmazni, ezáltal csökkenthetők a melléktermékek képződése is.

Az enzimkatalizált kinetikus rezolválások kulcslépésében, ami az enantiomer-szelektivitást

meghatározza a legnagyobb hátrány, hogy maximum 50% elméleti termelés érhető el a kívánt

enantiomerre. [5] A dinamikus kinetikus rezolválás (DKR) során az enantiomerszelektív lépés és egy in

situ racemizációs folyamat összekapcsolása történik, ami segít túllépni ezen az elméleti határértéken és

lehetővé tesz akár 100% termelést is racém elegyből kiindulva. [6] Az enantiomer-szelektivitást

[1] Q. Xu, H. Zhou, X. Geng, P. Chen, Tetrahedron 2009, 65, 2232–2238.

[2] Y. Ni, J.-H. Xu, Biotechnol. Adv. 2012, 30, 1279–1288; H. Mallin, M. Höhne, U. T. Bornscheuer, J. Biotechnol. 2014, 191,

32–37; M. Schober, K. Faber, Trends Biotechnol. 2013, 31, 468–478.

[3] H. Kohls, F. Steffen-Munsberg, M. Höhne, Curr. Opin. Chem. Biol. 2014, 19, 180–192. [4] M. Höhne, U. T. Bornscheuer, ChemCatChem. 2009, 1, 42–51.

[5] K. Faber, Biotransformations in organic chemistry, 6th ed., Springer, Berlin, 2011.

[6] O. Verho, J.-E. Bäckvall J. Am. Chem. Soc. 2015, 137, 3996–4009.


FOLYTONOS ÜZEMŰ KEMOENZIMATIKUS RENDSZEREKKEL 3

meghatározó enzimatikus lépésben a biokatalizátorokat többnyire rögzített formában alkalmazzák, ezáltal

növelve azok állandóságát és biztosítva újra felhasználhatóságukat. Ezzel ellentétben a racemizációs lépés

során gyakori a homogén katalízis, vagyis a jellemzően átmeneti fém katalizátorok (Ru, Ir) oldat fázisban

vannak valamilyen komplexként, így visszaforgatásuk nem, vagy csak nehezen kivitelezhető. Az első

kemoenzimatikus DKR Schimossek és Reetz nevéhez fűződik 1996-ból, [1] amit számos irodalmi példa

követett. Az amin DKR rendszerek fejlesztése azóta is folyamatosan zajlik kiemelten olyan megoldások

keresésével, amelyek folyamatos üzemű technológiává alakíthatók. Általánosságban elmondható, hogy az

aminok racemizációja jóval nehezebben kivitelezhető és erélyesebb körülményeket is igényel, mint az

alkoholok hasonló reakciója. [2]

Az amin DKR rendszer könnyebben kezelhetővé tehető, illetve a termék tisztítása is jelentősen

egyszerűbb, ha a racemizációs katalizátort is rögzített, heterogén formában alkalmazzuk. Ilyenek

jellemzően a Pd, Ni és Co tartalmú katalizátorok, ahol a hordozó sav-bázis tulajdonsága is nagy mértékben

befolyásolja a katalitikus aktivitást. Aminok esetén a bázikus karakterű szilárd hordozók alkalmazás

bizonyult előnyösnek a savas felszínűekkel szemben. [3] További fontos szempont a folyamatos üzemben

történő töltött ágyas alkalmazás esetén, hogy a hordozó kellő mechanikai és hőstabilitással, magas fajlagos

felülettel és megfelelő szemcsemérettel rendelkezzen. Azonban nem szabad túl kicsi szemcséket sem

választani, mert ekkor felléphet a kihordás veszélye, illetve túl nagy nyomásesés alakulhat ki a rendszeren.

Mint az jól ismert, az aminok redox racemizációja imin intermedieren keresztül zajlik. [4] Ezáltal a

fémkatalizált racemizáció során egyéb melléktermékek, iminek, szekunder aminok, szénhidrogének és

ketonok keletkezhetnek. [5] Az elemi hidrogén gáz mellett az ammónium-formiát alkalmazása is hatékony,

könnyen kezelhető hidrogénforrásnak adódott iminek redukcióját magába foglaló reakciókba (DKR,

reduktív aminálás). [6, 7]

3. Kísérleti rész

3.1. Anyagok és módszerek

A nem saját úton előállított vegyületeket, oldószereket, enzimeket és szilárd hordozókat a következő

cégektől szereztük be: Sigma Aldrich (Saint Louis, MO, USA), Alfa Aesar Europe (Karlsruhe,

Németország), Merck (Darmstadt, Németország), c-LEcta (Leipzig, Németország), Materium Innovations

(Granby, Kanada), SynBiocat Ltd. (Budapest, Magyarország), Grace (Columbia, Maryland, USA) és

további feldolgozás nélkül alkalmaztuk.

A VRK Kieselgel 60 F254 (Merck) lapokon futtattuk. A foltokat UV fényben azonosítottuk (Vilber

Lourmat VL-6.LC, 254 nm) vagy 5%-os etanolos foszformolibdén oldatot, majd kiégetést alkalmazva

hívtuk elő. A hordozók, katalizátorok és rögzített enzimek morfológiáját JEOL JSM-5500LV típusú

pásztázó elektronmikroszkóppal vizsgáltuk (SEM), a fémtartalmukat csatolt energiadiszperzív rendszerrel

határoztuk (EDS). A jobb képalkotás érdeképen a részecskéket arany nanofilm réteggel vontuk be. A

vegyületek optikai forgatóképességét Perkin–Elmer 241 polariméterrel végeztük a nátrium D-vonalán. Az

elemanalízist (CNH) egy vario MICRO cube CNHS elemanalizátorral (Elementar, Langenselbold,

Németország) végeztük. Az NMR spektrumokat CDCl3, DMSO-d6 vagy CD3OD oldószerekben egy Bruker

DRX-300 és egy DRX-500 spektrométerrel vettük fel, 300 vagy 500 MHz a 1H-hoz, míg 75 vagy 125 MHz

frekvenciát alkalmaztunk 13C-hoz. A jelek ppm-ben vannak megadva a δ skálán. A mintákat (20 µl) a

kinetikus rezolválásból, racemizációból és dinamikus kinetikus rezolválásból etanollal hígítottuk (1000 µl)

(szükségszerűen ecetsav-andhidriddel kezeltük, hogy az elreagálatlan kiindulási anyagot detektálható

származékká alakítsuk) és párhuzamosan két GC-vel vizsgáltuk különböző kolonnákon: Agilent 5890 GC,

[1] M. T. Reetz, K. Schimossek, Chimia Int. J. Chem. 1996, 50, 668–669.

[2] N. J. Turner, M. D. Truppo, in: Chiral Amine Synthesis (Ed.: T. C. Nugent), Wiley-VCH, Weinheim, 2010, pp 431–478.

[3] A. N. Parvulescu, P. A. Jacobs, D. E. De Vos, Appl. Catal. A: Gen. 2009, 368, 9–16.

[4] Y. Kim, J. Park, M.-J. Kim, ChemCatChem. 2011, 3, 271–277.

[5] A. S. de Miranda, L. S. M. Miranda, R. O. M. A. de Souza, Biotechnol. Adv. 2015, 33, 372–393.

[6] A. S. de Miranda, R. O. M. A. de Souza, L. S. M. Miranda, RSC Adv. 2014, 4, 13620–13625;

[7] P. Falus, Z. Boros, G. Hornyánszky, J. Nagy, F. Darvas, L. Ürge, L. Poppe, Tetrahedron Lett. 2011, 52, 1310–1312.



Hydrodex β-TBDAc kolonna (Macherey-Nagel; 25 m × 0,25 mm × 0,25 µm, heptakisz-(2,3-di-O-acetil-6-

O-t-butil-dimetilszilil)-β-ciklodextrin); Agilent 4890 GC, Hydrodex β-6 TBDM kolonna (Macherey-Nagel;

25 m × 0,25 mm × 0,25 µm, heptakisz-(2,3-di-O-metil-6-O-t-butil-dimetilszilil)-β-ciklodextrin)

[beállítások mindkét GC-hez: FID (250 °C), injektor (250 °C), H2 (12 psi, split arány: 1:50].

A konverziót (c) és az enantiomerfelesleget (ee) a GC mérések alapján számítottuk. A konverziót a

következő képlettel számoltuk c= eeS×(eeS+eeP)-1, ahol az eeS a szubsztrát ee-je, míg az eeP a termék ee-je.

A folyamatos üzemű specifikus aktivitást (rflow) a rflow = P × v/mB egyenlettel számoltuk, ahol P (mol ml−1)

a termék moláris koncentrációja, v [ml perc−1] a térfogatáram és mB [g] az alkalmazott katalizátor tömege.

A termelés kiszámítása az izolált termékekből történt a racém kiindulási anyagmennyiségre számítva. Az

E értéket a szubsztrát-koncentráció és a termék ee-je (eeP) alapján az E= ln[1−c(1+eeP)]/ln[1−c(1−eeP)]

képlettel számoltuk. Az E érték kísérleti paraméterekre való érzékenysége miatt tartományokban adtuk meg

ezt a mutatót: a 100–200 közöttiek >100, a 200–500 közöttiek >200 és az 500 felettiek »200 értékekkel

jellemeztük.

3.2. Általános kísérleti módszerek

Szakaszos üzemű kinetikus rezolválások: Egy zárható menetes kisüvegbe bemértük az oldószert, a

rögzített enzimet, a megfelelő racém szubsztrátot (aminok, alkoholok) és az acilezőszert. A

reakcióelegyeket különböző hőmérsékleten rázattuk és VRK-val, illetve GC-vel követtük folyamatos

mintavételezéssel (0,5, 0,1, 1, 2, 3, 4, 6, 8, 24 óra), majd a reakcióelegyeket feldolgoztuk és a termékeket

karakterizáltuk.

Folyamatos üzemű reakciók (kinetikus rezolválás, racemizáció, dinamikus kinetikus rezolválás): A

töltött ágyas rendszereket úgy állítottuk elő, hogy a katalizátorokat vákuumban töltöttük be az acélmentes

oszlopokba (PTFE belső bevonat, belső átmérő: 4 mm, teljes hossz: 70 mm, töltő hossz: 65 mm, belső

térfogat: 0,816 ml) a ThalesNano Inc. töltési protokolljának megfelelően. Az oszlopokat ezüst (Sterlitech

Silver Membrane, Sigma-Aldrich, Z623237, pórusméret: 0,45 µm, ezüsttartalom: 99.97%) és PTFE

(Whatman® Sigma-Aldrich, WHA10411311, pórusméret: 0,45 µm) szűrőkkel zártuk le. A szűrőket tartó

záróelemek PTFE-ből készültek. A reakcióelegyeket fecskendőpumpákkal (Chemyx) áramoltattuk és egy

HPLC kolonnatermosztáttal melegítettük a töltött oszlopokat. Használat előtt az oszlopokat átmostuk a

tiszta oldószerrel (200 µl perc-1, 30 perc). Új reakcióparaméter beállítása után (hőmérséklet, szubsztrát-

koncentráció, térfogatáram) 10 percenként vettünk mintákat a stacioner állapot beálltáig. A levett mintákat

VRK és GC módszerekkel vizsgáltuk. A kísérletsorozatok végén az oszlopokat átmostuk tiszta oldószerrel

(200 µl perc-1, 30 perc), majd hűtőben 4 °C alatt tároltuk.

4. Eredmények

4.1. 2-Alkoxiacetátok alkalmazása, mint acilezőszerek királis aminok kinetikus rezolválásában

1. Ábra. Alkoxiecetsavak és etil- illetve izopropil-észtereinek szintézise



Célunk volt, hogy az ipari relevanciájú lipáz-katalízissel előállított, optikailag aktív aminok

produktivitását növeljük, amit az alkoxi-csoporttal aktivált acilezőszerek fejlesztésén keresztül akartunk

elérni. Ennek érdekében az izopropil-2-etoxiacetátot, (1. ábra) mint új acilezőszert hasonlítottuk össze a

már eddig is alkalmazott 2-metoxiacetátokkal, illetve nem aktivált ecetsav-észtekkel az 1-feniletilamin rac-

3a enzimkatalizált N-acilezésében Candida antarctica B lipáz enzimet (CaLB) alkalmazva (2. ábra).

2. Ábra. Az 1-feniletlamin rac-3a kinetikus rezolválása különböző acilezőszerekkel 2(A-C)(a,b), többféle rögzített Candida

antarctica B lipázzal szakaszos és folyamatos üzemben

1. Táblázat. 2Ab, 2Bb, 2Cb izopropil-észterek biokatalitikus aktivitásának összehasonlítása a

rac-3a kinetikus rezolválásában CaLB G250P rögzített enzimmel, szakaszos és folyamatos

üzemben

No. Mód Acilezőszer Konv.

(%)

ee(R)-4a(A-C)

(%)

r

(µmol perc–1 g–1)

1 Szakaszos 2Ab 2,8 99,8 29

2 Folyamatos 2Ab 2,8 99,9 63

3 Szakaszos 2Bb 19,8 >99,9 205

4 Folyamatos 2Bb 19,2 99,7 407

5 Szakaszos 2Cb 33,8 >99,9 350

6 Folyamatos 2Cb 31,9 >99,9 703

Az acilezőszerek hatékonysága szakaszosan rázatott lombikban, folyamatos üzemben áramlásos

reaktorban hasonlítottuk össze a CaLB G250P enzim esetén (1. táblázat). Mivel a termék keletkezése nem

lineárisan változik a konverzióval, [1] ezért nagy figyelmet fordítottunk arra, hogy hasonló konverzió

értékek mellett végezzük a produktivitás értékek (specifikus aktivitás, r) összehasonlítását. Az

összehasonlítás során bebizonyosodott, hogy az áramlásos reaktorokban végzett kísérletek ugyanolyan

paraméterek mellett mintegy kétszer nagyobb produktivitást mutattak a rázatott lombikos kísérletekhez

képest.

Az izopropil-2-etoxiacetát 2Cb bizonyult messze a leghatékonyabb acilezőszernek a rögzített CaLB

enzim esetén. 0,6 ekvivalens acilezőszert alkalmazva 2,22 kg l-1 óra-1 produktivitással állítottuk elő racém

aminból rac-3a szelektíven a termék (R)-amidot (R)-4aC (ee= 99.8%) 40 °C-on folymatos üzemű töltött

oszlopos rendszeren.

4.1.1. Lipázok adszorpciós rögzítése hidrofób szilikagélre különböző táptalajokban fermentált

Pseudozyma aphidis-ből

A legtöbb racém amin kinetikus rezolválását szerves oldószerben és CaLB enzimmel - mint a

legszélesebb körben elterjedt hidrolázzal - valósítják meg. [2] Ez vezetett minket ahhoz, hogy a

[1] Cs. Csajági, G. Szatzker, E. R. Tőke, L. Ürge, F. Darvas, L. Poppe, Tetrahedron: Asymmetry 2008, 19, 237–246.

[2] V. Gotor-Fernández, E. Busto, V. Gotor, Adv. Synth. Catal. 2006, 348, 797–812.



potenciálisan jó szelektivitással bíró Pseudozyma aphidis (PaL) lipáz enzimet, mint biokatalizátort

vizsgáljuk meg aminok rezolválásában.

A Pseudozyma aphidis bazídiumos gombát különböző összetételű táptalajokban expresszálták, amelyek

eltérő minőségben és mennyiségben tartalmazták az elengedhetetlen C, N és P forrásokat, valamint egyéb

szervetlen ionokat (összesen 9-féle összetétel). A fermentációk után a reakciólegyeket lecentrifugáltuk,

majd a sejtmentes felülúszókat két részre osztottuk és oktil- illetve fenil-csoporttal módosított szilikagélt

adtunk hozzá, hogy adszorpciósan rögzítsük a PaL-t.

A legjobb eredményeket az egylépéses rögzítéssel előállított fenil-szilikára rögzített, Lip1 számú

közegből származó biokatalizátorral értük el az 1-feniletilamin rac-3a szakaszos üzemű kinetikus

rezolválásában (ee(R)-4aC= 99.7%, E »200, c= 8.3%).

2. Táblázat. Az adszorpciósan rögzített PaL biokatalizátorok aktivitása a rac-3a

szakaszos üzemű kinetikus rezolválásában, izopropil-2-etoxiacetátot 2Cb

alkalmazva acilezőszerként

No. Módosított

Dv250 szilikaa

Táptalaj cb

(%)

ee(R)-4aCb

(%)

Eb

(-)

1 Oktil M6 4,4 89,9 20

2 Oktil Lip1 4,9 99,6 »200

3 Fenil M6 4,2 98,5 >100

4 Fenil Lip1 8,3 99,7 »200 a) Reakció körülmények: rac-3a (20 µl, 0,154 M), izopropil-2-etoxiacetát 2Cb

(2,0 ekv., 46 µL, 0,308 M) vízmentes toluol (1m0 ml), enzimkészítmény (20,0

mg), reakcióidő 2 óra, hőmérséklet 30 °C. b) Mintavétel közvetlenül a

reakcióelegyből, GC mérés alapján.

4.1.2. Izopropil-2-etoxiacetát 2Cb alkalmazása acilezőszerként az 1-feniletilamin kinetikus

rezolválásában terner szol-gél rendszerek összetételének optimalizálásához

Négy különböző organoszilánt választottunk ki (tetraetoxiszilán: TEOS, fenil-trietoxiszilán: PTEOS,

dimetil-dietoxiszilán: DMDEOS, n-oktil-trietoxiszilán: OTEOS), hogy ezekkel összesen háromféle

kombinációban, 14 különböző összetételű terner szol-gél rendszerben rögzítsünk a CaLB enzimet: TOP-

1-14: TEOS/OTEOS/PTEOS, TDP-1-14: TEOS/DMDEOS/PTEOS, TDO-1-14:

TEOS/DMDEOS/OTEOS.

A TDP-1-14 terner szol-gél rendszerekbe rögzített CaLB biokatalizátorokat az 1-feniletilamin rac-3a

szakaszos üzemű kinetikus rezolválásban hasonlítottuk össze izopropil-2-etoxiacetát 2Cb alkalmazva

acilezőszerként. Az összehasonlítás után a leghatékonyabbnak adódott TDP-10 összetételt választottuk ki

(rb (R)-4aC= 155 µmol perc–1 g–1, ee(R)-4aC= 99,9%) további folyamatos üzemű tesztekhez.

3. Táblázat. Space-time yield és specifikus enzimaktivitás értékek

a TDP-10 szol-gél mátrixba rögzített CaLB biokatalizátorral az 5

napos folyamatos üzemű 1-feniletimamin rac-3a kinetikus

rezolválásában Szubsztrát Biokatalizátor Ys

a

(kg l-1 óra-1)

UEb

(kg g-1 nap-1)

rac-3a TOP-10 CaLB 1,01 0,51 a) Space-time yield (Ys). b) Specifikus enzimaktivitás (UE).

Space-time yield és specifikus enzimaktivitás értékekkel jellemeztük a folyamatos üzemű 5 napos

kísérletet, ahol a TDP-10 mátrixba rögzített CaLB enzim kitűnő katalitikus értékeket mutatott, hiszen a

produktivitás a kísérlet végére sem romlott le. 1 gram natív enzimre számítva 5 nap alatt a TDP-10

rendszerrel 3,33 kg (R)-4aC termék állítható elő ee= 99,8%-os tisztasággal (konverzió 28%, térfogatáram

0,6 ml perc-1) (3. táblázat).



4.2. Candida antarctica B lipáz enzim kovalens rögzítése

3. Ábra. M540 szférikus, mezopórusos szilikagél epoxi-funkcionalizálása, majd CaLB enzim kovalens rögzítése a módosított

hordozók felszínére

A felületi amin-csoportok segítségével hat különböző oldallánccal (eltérő hosszúság és hidrofóbicitás)

rendelkező biszepoxi-vegyülettel módosítottuk a M540 szférikus szilikagél felszínét (M540-A-F). Az így

kapott hordozókra és három referencia készítményre (egy kereskedelmi kovalens, egy módosítatlan M540

szilika, egy glutáraldehides módosítás) szobahőmérsékleten rögzítettük a CaLB enzimet foszfátpufferes

oldatából (100 mM, pH 7,5) (3. ábra) Annak érdekében, hogy a későbbi vizsgálatoknál meg tudjuk

különböztetni mely enzimek rögzültek kovalensen és melyek pusztán adszorpciósan, az előállított

biokatalizátorok felét felületaktív anyaggal kezeltük. A készítmények biokatalitikus aktivitását az 1-

feniletanol 5 szakaszos és folyamatos üzemű kinetikus rezolválásában hasonlítottuk össze. Az eredmények

kiértékelése alapján az M540-F-CaLB, poli-etilén-glikol oldallánccal módosított hordozó adódott

legjobbnak közepes hidrofobicitású és nagyfokú rugalmassággal rendelkező oldalláncának köszönhetően.

Az M540-F-CaLB biokatalizátor alkalmazhatóságát 5 királis amin rac-3a-e izopropil-2-etoxiacetát 2Cb

acilezőszerrel végrehajtott szakaszos és folyamatos üzemű kinetikus rezolválásban terjesztettük ki 60 °C-

on. A termék 2-etoxiacetamidokat (R)-4a-eC magas termeléssel (≥42%) és kiváló enantiomertisztasággal

(ee(R)-4a-eC ≥98.3%) tudtuk izolálni a folyamatos üzemű kísérletekből.

4. Ábra. Racém aminok rac-3a-e kinezikus rezolválása M540-F-CaLB biokatalizátorral szakaszos és folyamatos üzemben,

rázatott lombikban és töltött ágyas mikroreaktorban



4. Táblázat. M540-F-CaLB biokatalitikus aktivitása racém aminok

rac-3a-e szakaszosb és folyamatosc üzemű kinetikus rezolválásban

(konverzió ~50%)

No. Szubszt.a r

(µmol perc–1 g–1)d

Term. (R)-4(a-e)C

(%)e

ee(R)- 4(a-e)C

(%)d,e

1 rac-3ab 83 48 99,8

2 rac-3ac 163 48 99,8

3 rac-3bb 123 47 99,2

4 rac-3bc 163 48 99,1

5 rac-3cb 88 47 98,7

6 rac-3cc 154 47 98,6

7 rac-3db 88 42 96,5

8 rac-3dc 154 42 98,3

9 rac-3eb 87 46 96,5

10 rac-3ec 153 45 99,0 a) Reakció körülmény: rac-3a-e (0,646 M), izopropil-2-etoxiacetát 2Cb (0,6 ekv.:

0,388 M) vízmentes toluol, 60 °C. b) Szakaszos KR: 350 rpm, M540-F-CaLB 50,0

mg). c) Folyamatos KR: térfogatáram 0,10 ml perc-1; töltet: M540-F-CaLB 209,0

mg. d) GC alapján. e) Az izolált termékek alapján (R)-4(a-e)C.

4.3. (S)-1-Feniletilamin folyamatos üzemű racemizációja

5. Ábra. (S)-1-Feniletilamin (S)-3a folyamatos üzemű racemizációja rögzített Pd-katalizátorral ammónium-formiát 7a

hidrogénforrás jelenlétében

5. Táblázat. (S)-1-Feniletilamin (S)-3a rögzített Pd-

katalizátorokkal megvalósított racemizációja töltött ágyas

reaktorban ammónium-formiát 7a jelenlétében

No. Pd-kat.a T (°C) ee(S)-3a

(%)b

szel(R,S)-3a

(%)b,c

1 Pd/AMP 60 2 98

2 Pd/AMP 90 <1 9

3 Pd/AMP 120 n.d. <5

4 Pd/AEAP 60 36 95

5 Pd/AEAP 90 2 74

6 Pd/AEAP 120 n.d. <5

7 Pd/Al(O)OH 60 57 99

8 Pd/Al(O)OH 90 4 98

9 Pd/Al(O)OH 120 n.d. <5

10 Pd/BaSO4 60 1 68

11 Pd/BaSO4 90 n.d. <5

12 Pd/BaSO4 120 n.d. <5

13 Pd/BaCO3 60 6 66

14 Pd/BaCO3 90 13 41

15 Pd/BaCO3 120 n.d. <5

16 10% Pd/C 60 >99 13

17 10% Pd/C 90 >99 2

18 10% Pd/C 120 n.d. <5 a) Katalizátor (mg): Pd/AMP 246; Pd/AEAP 260; Pd/Al(O)OH 142;

Pd/BaSO4 922; Pd/BaCO3 766; 10% Pd/C 248; körülmény: (S)-3a (83

mM), ammónium-formiát 7a (1,0 ekv., 83 mM), vízmentes 2-metil-2-

butanol, térfogatáram 20 µl perc-1. b) GC alapján. Nem meghatározott

(n.d.) a szel(R,S)-3a<5% reakcióknál. c) Szel(R,S)-3a (%)= (R,S)-3a

mennyisége / a reakcióelegyben detektált összes anyag mennyisége ×

100.



Korábbi irodalmi eredményekre alapozva kiválasztottunk hat különböző elemi palládium (Pd0) tartalmú

katalizátort, a kereskedelmi 10% Pd/C-t és további öt, szintetikusan előállított katalizátort, Pd/BaSO4,

Pd/BaCO3, Pd/Al(O)OH, Pd/AMP és Pd/AEAP [(3-aminopropil- és 3-(2-aminoetilamino)propil

csoportokkal módosított szilika hordozókra (AMP és AEAP) rögzített Pd].

A folyamatos üzemű racemizációs kísérletekhez a hat Pd-katalizátort oszlopokba töltöttük, majd az

(S)-1-feniletilamin (S)-3a és ammónium-formiát 7a, mint oldott hidrogén-forrás elegyét áramoltattuk át a

töltött oszlopokon 60 °C, 90 °C és 120 °C-on (5. ábra). Az enantiomerösszetételt (ee(S)-3a) és a szelektivitást

(szel(R,S)-3a) alkalmaztuk a folyamat hatékonyságának jellemzésére. A leghatékonyabb katalizátornak a

Pd/AMP adódott, hiszen majdnem racém elegyet (ee(S)-3a= 2%) kaptunk már 60 °C-on kiváló szelektivitás

mellett (szel(R,S)-3a= 98%) (5. táblázat, 1. sor).

4.4. 1-Feniletilamin folyamatos üzemű dinamikus kinetikus rezolválása

6. Ábra. A racém 1-feniletilamin rac-3a két töltött ágyas oszloppal megvalósított dinamikus kinetikus rezolválása

Hogy összeállítsunk egy folyamatos üzemű dinamikus kinetikus rezolválást (DKR), az 1-feniletilamin

rac-3a, az izopropil-2-etoxiacetát 2Cb aceilezősszer és a kovalensen rögzítetett CaLB enzim által

megvalósított kinetikus rezolválást (KR), valamint a Pd/AMP katalizátor és ammónium-formiát 7a oldott

hidrogénforrást tartalmazó racemizáló lépést kombináltuk egy kétoszlopos, töltött ágyas rendszerben (6.

ábra).

6. Táblázat. Az 1-feniletilamin rac-3a folyamatos üzemű kemoenzimatikus DKR rendszere kovalensen

rögzített CaLB enzimmel és Pd/AMP racemizáló katalizátorral No.a Térf. áram

(µl perc-1)

B oszlop

(CaLB-Pd/AMP)

[mg-mg]

Acilezőszer

2Cbb (mM)

[ekv.]

H2-forrásc

(mM) [ekv.] cd

(%)

Term.

(%)

ee(R)-4aC

(%)d

ee(S)-4a

(%)d

1 20-20 22-201 180 [2,0] 7a (45) [0,5] 60e 56 99,9 8,2

2 10-10 22-201 180 [2,0] 7a (45) [0,5] 67e 64 99,9 7,9

3 5-5 120-120 180 [2,0] 7a (54) [0,6] >99e 91 99,6 -

4 5-5 120-120 180 [2,0] 7b (54) [0,6] >99 90 97,5 -

5 5-5 120-120 180 [2,0] 7b (27) [0,3] 80 75 97,7 24,7

6 5-5 120-120 135 [1,5] 7b (54) [0,6] >99 90 98,4 -

7 5-5 120-120 108 [1,2] 7b (54) [0,6] >99 91 98,3 - a) Körülmények: töltettömeg: A oszlop, M540-F-CaLB (209 mg); hőmérséklet: 60 °C. b) A oldat: rac-3a (90 mM) és

izopropil-2-etoxiacetát 2Cb, mint acilezőszer vízmentes 2-metil-2-butanolban. c) B oldat: hidrogénforrás 7a vagy 7b

[mennyiség rac-3a-ra vonatkoztatva] vízmentes 2-metil-2-butanolban. d) GC alapján. e) 2-Etoxiacetamid képződés

volt megfigyelhető.

Így elsőként valósítottuk meg az 1-feniletilamin teljesen folyamatos üzemű kemoenzimatikus DKR-jét,

ahol az első oszlop tisztán enzimes katalizátort, míg a második oszlop egy kevert katalizátorelegyet

(enzimes + Pd) tartalmazott. A termék (R)-amidot (R)-4aC magas termeléssel (91%) és kitűnő

enantiomerfelesleg étékkel (ee(R)-4aC= 99.6%) állítva elő (6. táblázat, 3. sor).



4.5. Alkoxiacetátok további optimálása, mint acilezőszerek királis primer aminok kinetikus

rezolválásban

7. Ábra. Alkoxiecetsavak 2D,E és azok izopropil-észtereinek 2(D,E)b előállítása

Hogy tovább növeljük a királis primer aminok kinetikus rezolválásának termelékenységét, korábbi

eredményeik kiterjesztését tűztük ki célul. Ennek érdekében az 1-feniletilamin rac-3a mellett 8 további

amin (±)-4-fenilbután-2-amin rac-3b, (±)-1-metoxipropán-2-amin rac-3d, (±)-heptán-2-amin rac-3e,

(±)-1-(4-nitrofenil)etán-1-amin rac-3f, (±)-1-(4-klórfenil)etán-1-amin rac-3g, (±)-1-(4-brómfenil)etán-1-

amin rac-3h, (±)-1-fenilpropán-1-amin rac-3i, (±)-1-(3,4-dimetoxifenil)etán-1-amin rac-3j kinetikus

rezolválást vizsgáltuk kovalensen rögzített CaLB enzimmel (CaLB-CV-T2-150) további két alkoxiecetsav

izopropil-észterét használva acilezőszerként 2(B-E)b [izopropil-2-propoxi- (2Db) és 2-butoxiacetát (2Eb)]

az eddig is ismert izopropil-2-metoxi- (2Bb) és 2-etoxiacetát (2Cb) mellett szakaszos és folyamatos üzemű

reaktorokban.

8 Ábra. Racém aminok rac-3a,b,d-j szakaszos kinetikus rezolválása izopropil-2-alkoxiacetátok 2(B-E)b, mint acilezőszerek

alkalmazásával rögzített CaLB enzimmel



7. Táblázat. Optimált reakciókörülmények racém aminok rac-3a,b,d,e izopropil-2-

propoxiacetát 2Db acilezőszerrel történő folyamatos üzemű kinetikus

rezolválásához

Szubszt.a T [°C] ν [µl perc-1]

c [%]

Term.(R)-4(a,b,d,e)D [%]

ee(R)-4(a,b,d,e)D [%]

E [-]

rac-3a 60 50 46 45 99.7 »200 rac-3b 30 100 49 49 99.2 »200 rac-3c 40 50 48 46 99.1 »200 rac-3d 60 200 47 43 99.9 »200

a) Körülmények: rac-3a,b,d,e 0,63 M, 2Db 0,38 M (0,6 ekv.), oszloptöltet: CaLB-CV-T2-150

(216 mg).

Miután a 30 – 60 °C hőmérséklettartományban megállapítottuk az egyes szubsztrátok hőmérsékleti

optimumát a leghatékonyabbnak adódott izopropil-2-propoxiacetát 2Db acilezőszerrel, beállítottuk az

alkalmazott térfogatáramok 50–200 µl perc-1 tartományban, hogy elérjük az elméleti 50% közeli konverziót

(c ≥46%). Így jó termeléssel (≥43%) és kitűnő enantioszelektivitással állítottuk elő a termék (R)-amidokat

(ee(R)-4(a,b,d,e)D ≥99.1%) (7. táblázat).

8. Táblázat. Racém aminok rac-3f-j szakaszos üzemű kinetikus

rezolválása izopropil-2-etoxiacetáttal 2Db szakaszos üzembena

Szubszt. a c [%]

Term.(R)-4(f-j)D [%]

ee(R)-4(f-j)D [%]

E [-]

rac-3f 42,3 40 99,9 »200 rac-3g 47,8 46 99,9 »200 rac-3h 22,2 19 99,8 »200 rac-3i 22,6 19 99,8 »200 rac-3j 24,9 24 99,8 »200

a) Körülmények: rac-3f-j (0,778 M), 2Db (0,778 M, 1,0 ekv.), CaLB-

CV-T2-150 (15,0 mg), vízmentes toluol (1,0 ml), reakcióidő: 8 óra,

reakcióhőmérséklet: 30 °C, rázatás: 750 rpm.

Öt további amin rac-3f-j kinetikus rezolválását valósítottuk meg szakaszos üzemben annak érdekében,

hogy kiterjesszük az izopropil-2-propoxiacetát 2Db acilezőszer alkalmazhatóságát. Az új szubsztrátok az

(±)-1-feniletilamin rac-3a helyettesített származékai voltak. A termék (R)-amidokat (R)-4f-jC jó

termeléssel (19% ≤termelés≤ 46%) és kitűnő enantioszelektivitással sikerült izolálni (≥99.8%) (8. táblázat).

5. Tézisek

1. Megállapítottuk, hogy az alkoxi-ecetsavak észterek közül az iparban eddig általánosan használt etil-2-

metoxiacetáthoz képest, az általunk előállított izopropil-2-etoxiacetát kétszer olyan hatékony acilezőszer

az 1-feniletilamin kinetikus rezolválásában. Megvizsgáltuk az új acilezőszer alkalmazhatóságát a

szubsztrát kinetikus rezolválásán keresztül eltérő koncentrációkban, számos hőmérsékleten, különböző

módon rögzített Candida antarctica B lipáz enzimkészítmények alkalmazásával szakaszos és

folyamatos üzemű bioreaktorokban. [II]

2. Egylépéses adszorpciós módszerrel szelektíven rögzítettük felületmódosított szilikagélekre (oktil- és

fenil-csoporttal módosított) a Pseudozyma aphidis Lipáz B enzimet különböző összetételű tápközegeiből

fermentált lipáz keverékből (Lipáz A+B). A legnagyobb szelektivitású hordozón rögzített Pseudozyma

aphidis Lipáz B biokatalizátorral kiterjesztettük az izopropil-2-etoxiacetát alkalmazhatóságát az 1-

feniletilamin kinetikus rezolválásában. [I]

3. Sikeresen használtuk fel az izopropil-2-etoxiacetát acilezőszert az 1-feniletilamin kinetikus

rezolválásban a Candida antarctica B lipáz enzim terner szol-gél rendszerbe történő rögzítésére

alkalmazott szilán prekurzor-elegy összetételének optimalizálása során a biokatalizátor

hatékonyságának és szelektivitásának jellemzésére. Igazoltuk az optimálizált összetételben rögzített

enzimkészítmény robusztusságát folytonos, áramlásos bioreaktorban 5 napos, megszakítás nélküli

üzemeltetéssel. [III]



4. Sikeresen módosítottuk egy szférikus, mezopórusos szilikagél felszíni amino csoportjait hatféle

biszepoxi vegyületet alkalmazva, majd az így nyert epoxi-hordozókra egylépésben, kovalens módon

rögzítettük a Candida antarctica B lipáz enzimet. Megállapítottuk, hogy a legaktívabb készítmény

jelentősen hatékonyabb, mint a referenciaként vizsgált kereskedelmi mezopórusos epoxi hordozóra

rögzített Candida antarctica B lipáz készítmény. Megvizsgáltuk a készítmények újrahasználhatóságát

visszaforgatással, illetve folyamatos üzemű (24 órás) kísérletekkel különböző hőmérsékleteken.

Megállapítottuk, hogy az általunk kifejlesztett készítmény 10-szeri visszaforgatást követően jelentősen

nagyobb aktivitást őrzött meg, mint a referencia készítmény. Bizonyítottuk, hogy a készítményünk

folyamatos körülmények között 60 °C-ig 24 órán keresztül megőrzi az aktivitását. [IV]

5. Sikeresen valósítottuk meg az (S)-1-feniletilamin folyamatos, áramlásos rendszerben történő

racemizálását szilárd hordozókra rögzített elemi Pd segítségével, ammónium-formiátot alkalmazva

oldott H2-forrásként. Elsőként valósítottuk meg a racém 1-feniletilamin teljesen folyamatos üzemű

dinamikus kinetikus rezolválását a legaktívabb és legszelektívebb, 3-aminopropil-csoportokkal

módosított szilikagélen rögzített palládium (Pd/AMP) racemizáló katalizátor, kovalensen rögzített

Candida antarctica B lipáz enzimkészítmény és izopropil-2-etoxiacetát acilezőszer felhasználásával.

[nem publikált eredmények]

6. Megvizsgáltuk a 2-metoxi- és 2-etoxiecetsav észterek, mint 2-alkoxiecetsav észter típusú acilezőszerek

alkalmazhatósága mellett a 2-propoxi- és 2-butoxiecetsav izopropil-észterek felhasználhatóságát és

megállapítottuk, hogy az izopropil-2-propoxiacetát még nagyobb produktivitással képes aminok

kinetikus rezolválására, mint a korábban alkalmazott izopropil-2-etoxiacetát. Igazoltuk az új acilezőszer

alkalmazhatóságát négy királis amin esetén szakaszos és folyamatos üzemben, míg öt további aminnál

szakaszos rendszerben. Az új acilezőszer alkalmazásával végzett rezolválásokkal a keletkező amidok

kitűnő enantiomertisztasággal nyerhetők. [V]

5. Alkalmazási lehetőség

Az izopropil-2-propoxiacetát acilezőszerrel megvalósított enzimkatalizált kinetikus rezolválások magas

szelektivitás és produktivitást mutattak az izolált termékekre nézve 9 amin esetében is. Ezáltal

kijelenthetjük, hogy a módszer könnyen kiterjeszthető további racém aminok enantiomereinek

elválasztásához lipáz enzim segítségével szakaszos és folyamatos üzemű bioreaktorokban.

Az általunk kidolgozott egylépéses kovalens rögzítési mód a Candida antarctica B lipáz enzimre

könnyen megvalósítható egyéb enzimek immobilizálására is, hiszen a hordozó fizikai paraméteri jó

alkalmazhatóságot biztosítanak erre. A rögzítése technológia nem igényel egyéb hozzáadott segédanyagt,

illetve semmilyen utókezelést. Az így kapott rögzített enzimek kitűnő mechanikai és hőstabilitással

rendelkeznek folyamatos üzemű rendszerekben.

Az oldott hidrogén forrás alkalmazására és a bázikus felszínű hordozóra rögzített palládium katalizátorra

alapuló racemizáló rendszerünk az eddigi eredményeket figyelembe véve feltételezhetően kiterjeszthető

lesz további primer aminokra is. Ezáltal a kinetikus rezolválás után az elreagálatlan enantiomert

visszaforgatjuk racém eleggyé, így az elméleti termelést 50%-ról 100%-ra emelhetjük.

Az általunk kidolgozott folyamatos üzemű dinamikus kinetikus rezolválásra alkalmas rendszer

lehetőséget biztosít a katalizátortöltet, a térfogatáram és a hőmérséklet egyszerű szabályozására. Ezáltal

egy új reakció optimum megtalálása további szubsztrátokra egyszerűen kivitelezhető, hogy a kiindulási

racém elegyet enantiomertiszta formában izolálhassuk a reakcióelegyből.



6. Publikációk

6.1. A disszertáció alapjául szolgáló folyóiratcikkek

I. Z. Boros, E. Abaháziová, M. Oláh, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, L. Poppe ”Novel hydrophobic silica gels

as carriers for lipases - Separation of lipase A and lipase B from Candida antarctica” Chimica

Oggi/Chemistry Today 2012, 30, 26–29.

IF 0.539, I: 4, szerzői részarány: 20%

II. M. Oláh, Z. Boros, G. Hornyánszky, L. Poppe ”Isopropyl 2-ethoxyacetate — an efficient acylating

agent for lipase-catalyzed kinetic resolution of amines in batch and continuous-flow modes”

Tetrahedron 2016, 72, 7249–7255.


III. D. Weiser, F. Nagy, G. Bánóczi, M. Oláh, A. Farkas, A. Szilágyi, K. László, Á. Gellért, G. Marosi,

S. Kemény, L. Poppe “Immobilization engineering – How to design advanced sol-gel system for

biocatalysis?” Green Chemistry 2017, 19, 3927–3937.


IV. M. Oláh, S. Suba, Z. Boros, P. Kovács, M. Gosselin, C. Gaudreault, G. Hornyánszky ”Lipase B from

Candida antarctica Immobilized on Epoxy-functionalized Hollow Silica Microspheres – Efficient

Biocatalysts for Enantiomer Selective Acylation of Alcohols and Amines” Periodica Polytechnica

Chemical Engineering 2018, közlésre elfogadva

IF: 0.557, I: 0, szerzői részarány: 70%

V. M. Oláh, D. Kovács, G. Katona, G. Hornyánszky, L. Poppe ”Optimization of 2-alkoxyacetates as

acylating agent for enzymatic kinetic resolution of chiral amines” Tetrahedron 2018, online elérhető

https://doi.org/10.1016/j.tet.2018.05.032

IF: 2.651, I: 0, szerzői részarány: 60%

6.2. Egyéb publikációk

A dolgozat alapját nem képező egyéb folyóiratcikkek:

1. Z. Boros, P. Falus, M. Márkus, D. Weiser, M. Oláh, G. Hornyánszky, J. Nagy, L. Poppe ”How the mode

of Candida antarctica lipase B immobilization - affects the continuous-flow kinetic resolution of

racemic amines at various temperatures” Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic 2013, 85–86,

119–125.


2. N. A. Dima, A. Filip, L. Cs. Bencze, M. Oláh, P. Sátorhelyi, B. G. Vértessy, L. Poppe, Cs. Paizs

”Expression and purification of recombinant phenylalanine ammonia-lyase from Petroselinum crispum”

Studia Universitas Babes-Bolyai, Seria Chemia 2016, 62, 21–34.


Szóbeli előadások:

1. M. Oláh, Sz. Suba, A. Földi, E. Illés, E. Bell, D. Weiser, Á. Tantos, P. Tompa, Z. Boros, P. Sátorhelyi,

B. Erdélyi, G. Hornyánszky, L. Poppe: Biotechnológia a szerves kémiában: downstreamtől a

biokatalízisig, Oláh György PhD Konferencia, 2016 február 11, Budapest

2. Z. Boros, M. Oláh, E. Abaházi, L. Nagy-Győr, P. Falus, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, K. Kovács,

D. Weiser, B. G. Vértessy, L. Poppe: Immobilized enzymes for biotransformations in continuous-flow

systems, COST CM1303 „SysBiocat” Kick-off Workshop, 2014 április 10-11, Madrid, Spanyolország

3. Z. Boros, E. Abaháziová, M. Oláh, L. Nagy-Győr, P. Falus, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, Gy.

Szakács, L. Poppe, MKE Vegyészkonferencia, 2013 június 26-28, Hajdúszoboszló, Magyarország

4. Z. Boros, E. Abaháziová, L. Nagy-Győr, M. Oláh, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, L. Poppe, XVIII. Nemzetközi

Vegyészkonferencia, 2012 november 22-25, Félixfürdő, Románia

https://doi.org/10.1016/j.tet.2018.05.032



5. G. Hornyánszky, Z. Boros, P. Csuka, P. Falus, M. Márkus, D. Weiser, M. Oláh, J. Nagy, L. Poppe,

XVIII. Nemzetközi Vegyészkonferencia, 2012 november 22-25, Félixfürdő, Románia

Poszter prezentációk:

1. M. Oláh, E. Bell, D. Weiser, Á. Tantos, P. Tompa, Z. Boros, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, G. Hornyánszky,

L. Poppe, Mágneses szilika-nanorészecskék alkalmazása fehérjetisztításban, Oláh György PhD

Konferencia, 2016 február 11, Budapest, Magyarország

2. M. Oláh, Z. Boros, E. Bell, G. Hornyánszky, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, B. G. Vértessy, L. Poppe: Novel

silica- and polymer-based carriers for protein separations with immobilized metal ion affinity

chromatography, COST CM1303 “SysBiocat” Training School, 2014 május 28 – június 1, Certosa di

Pontignano, Olaszország

3. Z. Boros, P. Falus, D. Weiser, M. Oláh, E. Abaházi, L. Nagy-Győr. V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi,

L. Poppe: Advanced continuous-flow bioreactor systems for kinetic and dynamic kinetic resolutions,

COST CM1303 “SysBiocat” Training School, 2014 május 28 – június 1, Certosa di Pontignano,

Olaszország

4. M. Oláh, Z. Boros, L. Poppe: Novel immobilized lipases by covalent binding on surface-modified

macroporous silica gels with bis-epoxides, COST CM1303 „SysBiocat” Kick-off Workshop, 2014

április 10-11, Madrid, Spanyolország

5. Z. Boros, E. Abaházi, M. Oláh, L. Nagy-Győr, P. Falus, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, K. Kovács.,

D. Weiser, B. G. Vértessy, L. Poppe: Immobilized enzymes for biotransformations in continuous-flow

systems, 4th Conferences on Frontiers in Organic Synthesis Technology, 2013 október 16-18,

Budapest, Magyarország

6. P. Falus, Z. Boros, M. Oláh, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, P. Kovács, Gy. Szakács, J. Nagy, L.

Poppe: Preparation and kinetic resolution of indole-containing heterocyclic secunder alcohols in batch

and continous-flow systems, Biotrans, 11th International Symposium on Biocatalysis, 2013 július 21-

25, Manchester, Egyesült Királyság

7. Z. Boros, E. Abaháziová, M. Oláh, L. Nagy-Győr, P. Falus, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, L.

Poppe, Biotrans, 11th International Symposium on Biocatalysis, 2013 július 21-25, Manchester,

Egyesült Királyság


Poppe: Indolvázat tartalmazó heterociklusos szekunder alkoholok előállítása, és lipáz katalizált

kinetikus rezolválása szakaszos és folyamatos reaktorokban, MKE Vegyészkonferencia, 2013 június

26-28, Hajdúszoboszló, Magyarország

9. M. Oláh, Z. Boros, V. Bódai, P. Sátorhelyi, B. Erdélyi, L. Poppe: Pseudozyma aphidis lipáz

aktivitásának vizsgálata racém aminok enzimkatalizált kinetikus rezolválásában, MKE

Vegyészkonferencia, 2013 June 26-28, Hajdúszoboszló


Poppe: MKE Vegyészkonferencia, 2013 június 26-28, Hajdúszoboszló, Magyarország

11. Z. Boros, P. Falus, D. Weiser, K. Kovács, G. Hellner, M. Márkus, E. Abaháziová, M. Oláh, B. G.

Vértessy, L. Poppe: Silica-based enzyme immobilization methods for lipase-catalyzed kinetic

resolutions of racemic amines and alcohols in continuous-flow bioreactors, biocat2012 – 6th

International Congress on Biocatalysis, 2012 szeptember 2-6, Hamburg, Németország

Documents

ENANTIOMERTISZTA KIRÁLIS VEGYÜLETEK ELŐÁLLÍTÁSA …