Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos … · 2018-02-06 · 01-06-2016 1 Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos para el

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Experiencia en la Validación de Métodos Serológicos Cualitativos para el

Laboratorio Clínico

TM Alan Oyarce F.Instituto de Salud Pública de Chile

CONFIRMACIÓN SEROLÓGICADE LA ENFERMEDAD DE CHAGAS

DECRETO N°158 NOTIFICACIÓN DE ENFERMEDADES TRANSMISIBLES

DE DECLARACIÓN OBLIGATORIA

ELISAINMUNOFLUORESCENCIA WESTERN BLOT

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++

+ +( - ) ( + )

PRUEBA CONFIRMACION

Personas libres de la condición en estudio

(falsos positivos del tamizaje)

Personas confirmadas de padecer el factor de riesgo

UNIVERSO

+( - ) ( + )

POBLACIONAPARENTEMENTE SANA

PRUEBA TAMIZAJE

PacientesEnfermos

VP

PacientesSanos

0.0 3.00.50.2 0.8

FP – Falso Positivo, FN – Falso Negativo, VN –Verdadero Negativo, VP – Verdadero Positivo,

Punto de corteDiagnóstico

Rango Indeterminado

FN FP

VN

N° individuos

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3

0

10

20

30

40

50

60%

Coeficiente de Variación en ELISA IgG Chagas ISP 2010-2015

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Diagnóstico inicial año 2010

• Sistema de gestión de calidad no implementado1

• Metodologías sin control interno adecuado2

• Procedimientos no estandarizados3

• Equipamiento en distinto estado de mantención 4

• Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia5

• Métodos no validados/verificados6

• Ausencia de CCE adecuado7

• Inexistencia de cartas control8

• Metodologías no acreditadas9

CLIENTES

CLIENTES

PROCESOS ESTRATÉGICOS Y DE MEJORAPROCESOS OPERATIVOS

Gestión de reclamos

Satisfacción del cliente

Políticas y objetivos

Asesoríajurídica

Revisión por la dirección

Gestión de indicadores

No conformidades

Auditorias internas

Acciones preventivas

Acciones correctivas

Etapa Post examenEtapa de examen

Gestión Clientes

Gestión Documental RRHH Compras Gestión

EquiposPlanta física Gestión

InformaciónSeguridad

Bioseguridad

PROCESOS DE APOYO

Etapa Pre examen

1. IMPLEMENTACIÓN DE UN SGC EN EL LABORATORIO

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5

Material de control interno de elaboración propia

2.- INCORPORACIÓN DE UN CONTROL DE CALIDAD INTERNO

Incorporación de un material de control comercial

Limitada disponibilidad de material de control comercial en serología

3.- ESTANDARIZAR DOCUMENTOS

Que? Quién? Como? Donde? Cuando?

DISTRIBUCIÓN ELABORACIÓN DIFUSIÓN

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6

Calificación deEquipamiento

Proceso documentado por el cual se verifica la correcta instalación y operación de un equipo.

4.- GESTIÓN DEL EQUIPAMIENTO DEL LABORATORIO

Entrenamiento y evaluación de la competencia del

personal

5.- GESTIÓN DEL PERSONAL

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Adquisición de un Kit comercial

Fabricante: Diseña metodologíaConfirmación, mediantela aportación deevidencia objetiva, deque se han cumplido losrequisitos para unautilización o aplicaciónespecífica prevista.

Validación

Laboratorio: Implementa metodología

Confirmación, mediantela aportación deevidencia objetiva, deque se han cumplido losrequisitos especificados.

Verificación

7.- VALIDACIÓN/VERIFICACIÓN DE MÉTODO

NCh-ISO 15189:2013

NCh-ISO 15189:2013

ETAPAS EN LA VALIDACIÓN / VERIFICACIÓN DE MÉTODOS

A.- Definir parámetros de desempeño a evaluar

B.- Definir los Requisitos de calidad a evaluar

C.- Seleccionar los experimentos apropiados para evaluar

D.- Realizar los protocolos escogidos (recopilación de datos)

E.- Análisis estadístico de los datos

F.- Comparar mi valor obtenido con los requisitos de calidad definidos

G.- Evaluar la aceptabilidad del método en base a su desempeño.

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METODOS

CUANTITATIVOS CUALITATIVOS

PARAMETRO DE DESEMPEÑO

VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN

PRECISION

VERACIDAD

LINEALIDAD

INTEFERENCIAS

LIMITE INFERIOR

INTERVALOS REFERENCIA

PRECISION

VERACIDAD

LINEALIDAD

LIMITE INFERIOR

INTERVALOS REFERENCIA PRECISION

ESPECIFICIDAD

TASA FALSOS POSITIVOS

TASA FALSOS NEGATIVOS

SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD



PRECISION

ESPECIFICIDAD



SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

?

?

?

?

?

REQUISITO

?

?

?

?

?

FUENTE

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Ref. Validación de métodosanalíticos no cuantitativos. RevistaMexicana de CienciasFarmacéuticas, vol. 41, núm. 2,abril-junio, 2010, pp. 15-24

Recommendations for theBioanalytical Method Validation ofLigand-binding Assays to SupportPharmacokinetic Assessments ofMacromolecules. PharmaceuticalResearch, Vol. 20, No. 11, November2003 (© 2003)


PRECISIÓN INTRAENSAYO

ESPECIFICIDAD



SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

20%

95%

5%

5%

95%

REQUISITO

Recommendations for the Bioanalytical Method Validation of Ligand-binding Assays to Support

Pharmacokinetic Assessments of Macromolecules. Pharmaceutical Research, Vol. 20, No. 11, November

2003 (© 2003)

Ref. Validación de métodos analíticos no cuantitativos.Revista Mexicana de Ciencias Farmacéuticas, vol. 41, núm. 2, abril-junio, 2010, pp. 15-24

FUENTE

PRECISION INTERMEDIA 20%

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• Existen guías claramente definidas para validar métodos cuantitativos

• Las guías CLSI no son la única alternativa



MÉTODOS CUALITATIVOS


VERIFICACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD



SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD

CLSI EP5

CLSI EP12

CLSI EP12

CLSI EP12

CLSI EP12

GUÍA GUÍA

CLSI EP15

CLSI EP12

CLSI EP12

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1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo.

2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida.

3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia

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Selección del Panel de desempeño

- Uso de paneles de desempeño comerciales.- Paneles conformados con muestras de tercera opinión (intercomparación o control de calidad externo).- Paneles de muestras confirmadas con método de referencia o por más de una metodología.


Calculo tamaño mínimo de muestras

Muestras positivas {S (1- S) C2} / X2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96)2/(0.1)2

Muestras Negativas {E (1- E) C2} / X2 = (0.95 (1-0.95)*(1.96)2/(0.1)2

S= Sensibilidad E= EspecificidadC= Intervalo de confianza estimado (1.96 para un 95% de confianza)X= % error permitido (habitualmente 5-20%).


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• Cantidad de material control necesario: ideal 2 a 6.• El material de control debe ser lo más semejante a una muestra de rutina• Procesar cada material de control por duplicado, dos veces al día durante 20

días y de acuerdo a las recomendaciones del fabricante• Total de 80 determinaciones por nivel procesado.

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DIA20


SUEROS NEGATIVOS

SUEROS POSITIVOS

Cut offDEBIL

MEDIO

FUERTE


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Precisión en condiciones de repetibilidad

PrecisiónIntermedia

EP-5


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16


0,00

10,00

20,00

30,00

40,00

50,00

60,00

% CV

VALIDACIÓN

Elaboración CCI

Entrenamiento personal

Gestión de Equipos

Implementac ión SGC

VERIFICACIÓN

CCE

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METODOS

CUANTITATIVOS CUALITATIVOS


VALIDACIÓN VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN

PRECISION

VERACIDAD

LINEALIDAD

INTEFERENCIAS

LIMITE INFERIOR

INTERVALOS REFERENCIA

PRECISION

VERACIDAD

LINEALIDAD

LIMITE INFERIOR

INTERVALOS REFERENCIA PRECISION

ESPECIFICIDAD



SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD



PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD

VERIFICACIÓN

?

?

?

REQUISITO

?

?

?

FUENTE

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PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD

VERIFICACIÓN

99,3%

Sr 0,07 ; St 0,3

100%

REQUISITO

?

?

?

FUENTE

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MÉTODOS CUALITATIVOS


VERIFICACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD



SENSIBILIDAD

VALIDACIÓN

PRECISION

ESPECIFICIDAD

SENSIBILIDAD

CLSI EP5

CLSI EP12

CLSI EP12

CLSI EP12

CLSI EP12

GUÍA GUÍA

CLSI EP15

CLSI EP12

CLSI EP12


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1.- Procesar un panel de desempeño tal como lo establece el inserto o instructivo de trabajo.

2.- Incluir siempre el control interno en cada corrida.

3.- Analizar los datos obtenidos y comparar con el valor de referencia

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- Seleccionar materiales con valores en el rango de interés clínico o cercanos a las concentraciones usadas por el fabricante para establecer las especificaciones de precisión. - 2 niveles al menos (+ fuerte, + débil) que imiten la matriz de la muestra del paciente.- Analizar cada muestra tres veces al día durante 5 días siguiendo exactamente los pasos del inserto o del instructivo de trabajo.- Siempre incluir el control interno en cada corrida.


SUEROS NEGATIVOS

SUEROS POSITIVOS

Cut offDEBIL

FUERTE

DIA 1

R1

R2

R3 R3

DIA 2

R1

R2

DIA 3

R1

R2

R3

DIA 4

R1

R2

R3

DIA 5

R1

R2

R3

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25

0

10

20

30

40

50

60

%

VALIDACIÓN

Elaboración CCI

Entrenamiento personal

Gestión de Equipos

Implementación SGC

VERIFICACIÓN

CCE

VERIFICACIÓN VERIFICACIÓN

VERIFICACIÓN

CCE

CCE CCECCE CCE

CCI comercial

Auditoria internaAuditoria interna

Auditoria interna Auditoria interna

Auditoria interna

ACREDITACION ISO 15189

Estado al año 2016

• Sistema de gestión de calidad no implementado1

• Metodologías sin control interno adecuado2

• Procedimientos no estandarizados3

• Equipamiento en distinto estado de mantención4

• Personal sin entrenamiento /evaluación de competencia5

• Métodos no validados/verificados6

• Ausencia de CCE adecuado7

• Inexistencia de cartas control8

• Metodologías no acreditadas9

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