النباتية األنسجة زراعة

البروتوبالست ) دمج ( Methods of protoplast fusionطرقالصوديوم ) بنترات (:Sodium Nitrate Treatmentالمعاملة

بنترات البروتوبالست معاملة أن حيث البروتوبالست لدمج استخدمت طريقة أول هذه

يساعد وبالتالي البروتوبالست سطح على السالبة الشحنة تقليل إلى يؤدي الصوديوم

. ببعضها تالمسها علىصوديوم نترات على يحتوي مناسب إسموزي ضغط ذو محلول في البروتوبالست توضع

5بتركيز حرارة % ،5 درجة على مائي حمام في الدورق يوضع خمس 35ثم لمدة مئوية

حمام في أخرى مرة وتحضن البروتوبالست فوق من المحلول يزال ذلك بعد دقائق،

حرارة درجة على لمدة 30مائي مئوية مغذية 30درجة بيئة ذلك بعد تضاف ثم دقيقة

بتركيز الصوديوم نترات على 0تحتوي 1، % يغسل بعدها زمنية لفترة ساكنة وتترك

مغذية . بيئة في ويزرع البروتوبالستتكون إندماج لها يحدث التي البروتوبالست نسبة أن إال الطريقة هذه سهولة من بالرغم

(.giles 1974قليلة )

الهيدروجين أيون من مرتفع لتركيز التعرضوجود في مرتفع فيه الهيدروجين أيون تركيز يكون بمحلول البروتوبالست معاملة أن وجد

يعامل الطريقة هذه وفي البروتوبالست، إندماج نسبة زيادة إلى يؤدي الكالسيوم أيون

( الكالسيوم كلوريد على يحتوي محلول في أيون( NaClالبروتوبالست وتركيز ومانيتول

10هيدروجين حرارة ،5 لمدة 37على مئوية تجمع 15-10درجة يحدث أنه وجد وقد دقيقة،

إلى الفترة هذه وإطالة للبروتوبالست بين 30-25وتالصق إندماج حدوث إلى تؤدي دقيقة

إلى المعاملة فترة زيادة أما ، – 45البروتوبالست إنحالل 60 إلى يؤدي دقيقة

)37(

النباتية األنسجة زراعة

جسدي هجين على الحصول الطريقة هذه إستخدام بواسطة أمكن ولقد البروتوبالست

البروتوبالست ) إندماج (.Melchers &labib 1974من

: جليكول إثيلين بولي إستخدامالطريقة هذه وفي البروتوبالست، إلندماج وإستخداما شيوعا األكثر الطريقة هذه تعتبر

إلى 1يضاف بروتوبالست على تحتوي التي المغذية البيئة من بولي 1مل محلول من مل

بتركيز جليكول حتى% 56إيثيلين ساكنة تترك وبعدها ثواني خمس لمدة األنبوبة وترج

لوحظ وقد ، مغذية بيئة إلى وتنقل البروتوبالست تغسل القاع، في البروتوبالست يتجمع

البولي إزالة وعند ، البالزمي الغشاء ويتالصق معا يتجمع البروتوبالست أن المعاملة من

الطبيعي لشكلها وتعود تجمعها تفقد المتالصقة البروتوبالست معظم فإن جليكول إيثيلين

. بعد فيما معا تندمج وهذه متالصقة تبقى البروتوبالست بعض أن غيرخالل وليس جليكول إيثيلين البولي محلول تركيز تخفيف عند يبدأ اإلندماج أن لوحظ وقد

أن حيث ببطئ المحلول تخفيف يتم أن يراعى فإنه لهذا البروتوبالست تجمع مرحلة

اإلندماج نسبة من وتقلل البروتوبالست حيوية فقدان إلى تؤدي العملية هذه في السرعة

(Kao & michayluk 1974.)

)38(

النباتية األنسجة زراعة

الجسدي ) (Somatic Hybridizationالتهجينعلى وراثيا المتباين البروتوبالست مقدرة على الجسدية الهجن إنتاج نظرية تتركز

نحصل وحتى المختلفة، التطويرية بالمراحل مرورا كامل نبات إلى وتطورها معا اإلندماج

: بخطوتين المرور من البد الجسدي الهجين علىالبروتوبالست .1 إندماجتكون .2 إلى تقود التي التطورية المراحل في الدخول على المندمج البروتوبالست حث

. جسدي هجين

الجسدي الهجين إنتاج

: جسدي هجين تكون فشل أسباب1.. البروتوبالست أنوية إندماج في الفشلالدورات .2 ذات البروتوبالست من إثنين بين لإلندماج نتيجة الكروموسومات فقدان

المختلفة الخلوية

)39(

النباتية األنسجة زراعة

بين .3 الكروموسومي التضاعف في الزمني لإلختالف نتيجة الكروموسومات فقدان

. البروتوبالست نواتي

: إلى الجسدي الهجين لتكون النظري األساس ويرجعأو الفسيولوجية الوظائف بعض في لخلل نتيجة النمو يمكنه ال المنفصل البروتوبالست أن

الهجين يستمر وبهذا الالزمة العوامل تكتمل البروتوبالست إندماج عند ولكن الكيميائية،

بعكس النمو على مقدرتها على الناتجة الهجن إختيار عملية تعتمد وعموما النمو، في

المقدرة هذه لها ليس التي األخرى الخالياسوى آلخر نبات من وراثية صفة لنقل طريقة هناك تكن لم السبعينات بداية حتى

العالم ) إستطاع حتى الجنسي دمج( Powerالتهجين عملية أول إجراء من بحثي فريق مع

في المحاولة هذه فشل من وبالرغم والشوفان الذرة بروتوبالست بين بروتوبالستي

وإستخدامها التقنية هذه تطوير بداية بمثابة كانت أنها إال الدمج بعد نبات على الحصول

. للنبات الوراثي التحسين فيإستطاع ) ذلك باستعمال( Carlsonبعد هجين نبات أول على الحصول آخرون مع بالتعاون

بروتوبالست ) بين (.Nicotiana langsdorffiiو( )Nicotiana glaucaالدمج

عام على 1978في الحصول وتم األجناس بين الموجود التوافق عدم على التغلب أمكن

سمي ) .Pomatoهجين البطاطسوالطماطم( هما مختلفين جنسين تهجين من ناتج

مستحيلة تكون قد والتي البروتوبالست دمج تقنية مميزات

: العادية بالطرقال .1 قد والتي آلخر نبات من بيولوجي أو بيئي إجهاد كمقاومة هامة صفات نقل إمكانية

الجنسي بالتهجين تتحقق أن .يمكن

)40(

Nicotiana glaucaNicotiana langsdorffii

النباتية األنسجة زراعة

ذلك .2 صعوبة حالة في الكروموسومي العدد رباعية نباتات على الحصول إمكانية

. الكولشسين باستخدامأعضاء .3 ذات نباتات من أو الذكري العقم صفة تحمل نبات من هجن على الحصول

. التكوين تامة غير جنسيةوهي .4 طويلة مدة بعد الجنسي النضج إلى تصل والتي بالغة غير نباتات بين التهجين

. النبات تربية في هامة نقطةأما .5 النسل إلى فقط األم سيتوبالزم نقل يتم أنه الجنسي اإلكثار في المعروف من

نقل بذلك فيمكن النسل، إلى األبوين كال سيتوبالزم نقل يتم البروتوبالست دمج في

كالمقاومة اللقاح لحبوب المكون النبات سيتوبالزم في توجد قد التي الصفات بعض

مثال باإلشعاع األبوين أحد نواة إستبعاد يتم حيث الذكر العقم أو المبيدات لبعض

( الحالة هذه في التاتج هجين( Cybridويسمى على الحصول يمكن آخر بمعنى ،

إجراء إلى الحاجة دون واحدة خطوة في – 8سيتوبالزمي التلقيح 12 من دورة

الرجعي.

)41(